МУК 4.1.3022-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение остаточных количеств эсфенвалерата в семенах и масле рапса методом газожидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.3022-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение остаточных количеств эсфенвалерата в семенах и масле рапса методом газожидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.3022-12. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3022-12
(утв. Роспотребнадзором 03.07.2012)
Примечание
Документ введен в действие с 3 июля 2012 года.
Утверждаю Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
3 июля 2012 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ИЗМЕРЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЭСФЕНВАЛЕРАТА В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3022-12
Свидетельство о метрологической аттестации от 24.02.2012 № 01.5.04.068/01.00043/2012.
Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в семенах рапса (горчицы) массовой концентрации эсфенвалерата в диапазоне концентраций 0,01 — 0,1 мг/кг, в масле — 0,02 — 0,2 мг/кг.
Название действующего вещества по ИСО: эсфенвалерат.
Название действующего вещества по ИЮПАК: (S) - \alpha\prime - \text{циано} - 3 - \text{феноксибензил} - (S) - 2 - (4 - \text{хлорфенил}) - 3 - \text{метилбутират} .
Эмпирическая формула: C_{25}H_{22}CINO_{3} .
Химически чистый препарат — бесцветное кристаллическое вещество (до 23 °C).
Температура плавления: 59,0 — 60,2 °C.
Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_{ow}logP = 6,22 (25 °C)
Растворимость: в воде при 25 °C — 0,002 мг/л; в н-гексане — 10 — 50; метаноле — 70 — 100; в ксилоле, ацетоне, хлороформе, этилацетате, DMSO, DMFA — > 600 (в г/кг при 25 °C).
Вещество относительно стабильно на свету, стабильно к гидролизу при pH 5,7 и 9 (25 °C).
Краткая токсикологическая характеристика
Класс токсичности по ВОЗ — II, ЕПА — II.
Острая пероральная токсичность (LD_{50}) для крыс 75 — 88 мг/кг.
Инсектицид широкого спектра действия (группа пиретроидов), применяется на зерновых, масличных, плодовых и других культурах.
1. Погрешность измерений
Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей +/- 25%, при доверительной вероятности 0,95.
Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.
| Диапазон измерений, массовая концентрация, мг/кг | Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), \sigma_{r} , % | Показатель промежуточной прецизионности (относительное среднеквадратическое отклонение в условиях вариации факторов «время», «оператор» в одной лаборатории), \sigma_{R\text{л}} , % | Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), \sigma_{R} , % | Показатель точности <*> (границы относительной погрешности при вероятности P = 0,95), \pm \delta , % |
| Семена от 0,01 до 0,1 вкл. | 1 | 9 | 12 | 25 |
| Масло от 0,02 до 0,1 вкл. | 1 | 9 | 12 | 25 |
| Масло от 0,1 до 0,2 вкл. | 8 | 9 | 11 | 22 |
| <*> Соответствует расширенной неопределенности U_{\text{отн}.} при коэффициенте охвата k = 2 | ||||
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20, P = 0,95) приведены в табл. 2.
Полнота определения эсфенвалерата в семенах и масле рапса
(N = 5 для каждой концентрации)
2. Метод измерений
Методика основана на извлечении эсфенвалерата из семян и масла рапса (горчицы) водно-ацетоновым раствором или ацетонитрилом с последующей очисткой перераспределением между двумя несмешивающимися жидкостями и на колонке с флорисилом. Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматографии с использованием электронозахватного детектора.
Нижний предел измерения эсфенвалерата в пробе семян 0,01 мг/кг, масла — 0,02 мг/кг, средняя полнота извлечения из семян 82,4% и из масла 77,4%.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1 Средства измерений
| Газовый хроматограф Цвет-550 М или аналогичный с ДЭЗ (ДПР) | |
| Весы аналитические ВЛА-200 | ГОСТ 24104-2001 |
| Цилиндры мерные на 100 см3 ГОСТ 1774-74Е | |
| Колбы мерные на 25, 50, 100 см3 | ГОСТ 1770-74Е |
| Пипетки на 1, 2, 5, 10 см3 | ГОСТ 29227-91 |
| Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
3.2 Реактивы
| Аналитический стандарт эсфенвалерата 99,8% | |
| Ацетон, чда | ГОСТ 2603-79 |
| Ацетонитрил, хч | ТУ 6-09-3534-87 |
| Азот газообразный в баллонах с редуктором | ТУ 6-16-40-14-88 |
| Бумажные фильтры «красная лента» | ТУ 6.091678-86 |
| Вода дистиллированная ГОСТ 6709-79 | |
| Гексан, хч | ТУ 2631-003-05807999-98 |
| Насадка для колонки: хроматон N-Super (0,125 — 0,160 мм) с 5% SE-30 или XE-60 (Чехия) | |
| Натрий серно-кислый безводный, ч, свежепрокаленный | ГОСТ 4166-76 |
| Флорисил 150 - 250\mu m (Merck, Германия), содержание воды <= 2,5% | |
| Хлороформ, чда | ТУ-2631-020-11291058-96 |
| Этиловый эфир уксусной кислоты, чда | ГОСТ 22300-76 |
| Элюент для колоночной хроматографии № 1: | |
| гексан-этилацетат (50:50 по объему) | |
| Элюент для колоночной хроматографии № 2: | |
| гексан-этилацетат (20:80 по объему) | |
| Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей. | |
3.3 Вспомогательные устройства, материалы
Примечание. Допускается применение оборудования иных производителей с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1007-76).
При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2009 и инструкциями по эксплуатации приборов.
4.2. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004-90.
4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 мПа (150 кгс/см2) необходимо соблюдать «Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздуховодов и газопроводов под давлением» ПБ-03-576-03. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.
5. Отбор и хранение проб
Отбор проб семян и масла рапса (горчицы) - ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».
Для длительного хранения семена рапса (горчицы) подсушивают при комнатной температуре в отсутствие света. Сухие образцы могут храниться в течение года. Перед анализом пробы семян доводят до стандартной влажности и измельчают. Пробы масла рапса хранят в холодильнике при 0 — 4 °C в закрытой стеклянной таре не более 2 месяцев.
6. Подготовка к определению
6.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 1,0 см3 и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.
6.2 Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку, заполненную хроматоном N-Super (0,125 — 0,160 мм) с 5% SE-30, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа (азот) при температуре 250 °C в течение 8 — 10 ч.
6.3 Приготовление стандартного и градуировочных растворов
Берут точную навеску эсфенвалерата (50 мг), переносят в мерную колбу на 50 см3, растворяют навеску в ацетоне и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 1,0 мг/см3). Градуировочные растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 2,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя для разбавления гексан. Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 — 4 °C в течение 6 месяцев, градуировочные растворы — в течение недели.
Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют градуировочные растворы.
6.4 Построение градуировочного графика
Для построения градуировочного графика (площадь пика — концентрация эсфенвалерата в растворе) в хроматограф вводят по 1 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты (площади) пика от концентрации эсфенвалерата в градуировочном растворе (мкг/см3).
Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии:
S — площадь пика градуировочного раствора.
Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:
\frac{|C - C_{\text{к}}|}{C} \cdot 100 \leq \lambda_{\text{контр}.} , где
C — аттестованное значение массовой концентрации эсфенвалерата в градуировочном растворе;
C_{\text{к}} — результат контрольного измерения массовой концентрации эсфенвалерата в градуировочном растворе;
\lambda_{\text{контр}.} — норматив контроля градуировочного коэффициента, % ( \lambda_{\text{контр}.} = 10\% при P = 0,95).
6.5 Подготовка колонки с флорисилом для очистки экстракта
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты и вносят суспензию 4,5 г флорисила в 20 см3 смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему), дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку промывают 25 см3 этой же смеси со скоростью 1 — 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
6.6 Проверка хроматографического поведения эсфенвалерата на колонке с флорисилом
В круглодонную колбу емкостью 10 см3 отбирают 0,5 см3 стандартного раствора эсфенвалерата с концентрацией 1 мкг/см3. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 см3 элюента № 1 и вносят в колонку. Колбу обмывают еще 2 см3 элюента № 1 и также вносят в колонку. Затем промывают колонку 25 см3 гексана и элюируют эсфенвалерат 60 см3 элюента № 2 со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 см3 каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 см3 гексана и анализируют на содержание эсфенвалерата по п. 2.6.4. Фракции, содержащие эсфенвалерат, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 см3 гексана и анализируют по п. 2.6.4. Рассчитывают содержание эсфенвалерата в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.
Примечание. Профиль вымывания эсфенвалерата может меняться при использовании новой партии сорбента.
6.7 Подготовка приборов и средств измерения
Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.
7. Проведение определения
7.1 Экстракция эсфенвалерата из семян рапса
Навеску измельченных на лабораторной мельнице семян массой 10 г помещают в коническую колбу на 250 см3, заливают 50 — 100 см3 смеси растворителей ацетон-вода (в соотношении 1:1) и экстрагируют эсфенвалерат в ультразвуковой ванне в течение 15 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр («красная лента»). Экстракцию повторяют дважды 30 см3 той же смеси. Объединенный фильтрат помещают в делительную воронку и переэкстрагируют эсфенвалерат гексаном трижды порциями по 30 см3. Объединенные гексановые экстракты фильтруют через слой безводного серно-кислого натрия. Полученный раствор выпаривают на ротационном испарителе при температуре бани 50 °C до полного удаления гексана. Далее проводят очистку экстрактов по п. 7.3.
7.2 Экстракция эсфенвалерата из рапсового масла
Навеску масла 10 г растворяют в 60 см3 гексана и экстрагируют эсфенвалерат 50 см3 ацетонитрила в УЗ-ванне в течение 15 мин. Полученную смесь помещают в делительную воронку объемом 250 см3. После расслоения <*> нижний ацетонитрильный слой сливают, из верхнего гексанового слоя экстрагируют эсфенвалерат ацетонитрилом еще дважды порциями по 30 см3. К объединенному ацетонитрильному экстракту добавляют воду в соотношении ацетонитрил-вода (1:4) и переэкстрагируют эсфенвалерат хлороформом трижды порциями по 30 см3. Объединенные хлороформные экстракты сушат над безводным серно-кислым натрием и выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре 50 °C. Сухой остаток растворяют в 5 см3 ацетона и помещают в морозильную камеру с температурой -18 °C на 2 ч. Охлажденный ацетоновый раствор декантируют в круглодонную колбу на 10 см3 через фильтр «красная лента», после чего фильтр промывают 2 см3 ацетона. Полученный раствор упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °C до полного удаления ацетона. Далее очистку проводят по п. 7.3.
<*> В случае образования сравнительно стойких эмульсий можно добавить несколько мл насыщенного раствора хлористого натрия или этилового спирта.
7.3 Очистка экстрактов на колонке с флорисилом
Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по пп. 7.1 и 7.2 экстрактов семян или масла, количественно переносят двумя порциями по 2 см3 смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 6.2). Промывают колонку 25 см3 гексана, элюат отбрасывают. Эсфенвалерат элюируют 60 см3 элюента № 2 (гексан-этилацетат = 2:8). Весь элюат собирают в грушевидную колбу емкостью 100 см3. Раствор выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 50 °C. Сухой остаток растворяют в 1 — 2 см3 гексана и 1 мм3 раствора вводят в хроматограф.
7.4 Условия хроматографирования
Газовый хроматограф «Цвет-550М» с ДПР (ДЭЗ).
Колонка стеклянная 1 м x 3 мм, заполненная хроматоном N-Super (0,125 — 0,160 мм) с 5% SE-30.
Температура колонки 240 °C, испарителя 250 °C, детектора 320 °C.
Скорость газа-носителя (азот) через колонку 46 см3/мин.
Время удерживания эсфенвалерата 3 мин 20 с.
Линейный диапазон детектирования 0,1 — 2 нг.
7.5 Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание эсфенвалерата в образце семян или масла (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
H_{1} — высота (площадь) пика эсфенвалерата в стандартном растворе, мм (мв·с);
H_{2} — высота (площадь) пика эсфенвалерата в анализируемой пробе, мм (мв·с);
C — концентрация эсфенвалерата в стандартном растворе, мкг/см3.
Содержание остаточных количеств эсфенвалерата в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор эсфенвалерата 2 мкг/см3, разбавляют.
8. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предел повторяемости:
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , где (1)
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
9. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
\overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:
\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0,01 мг/кг*, где «*» — 0,01 мг/кг — предел обнаружения в семенах рапса).
10. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
10.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
10.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки C_{\text{д}} должна удовлетворять условию:
\pm \Delta_{\text{л},X}( \pm \Delta_{\text{л},X}\prime) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta , где
\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} , где
\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
Результат контроля процедуры K_{\text{к}} рассчитывают по формуле:
X', X, C_{\text{д}} — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
K = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}} .
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K_{\text{к}}) с нормативом контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
10.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предел воспроизводимости (R):
X_{1} , X_{2} — результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.
11. Требования к квалификации оператора
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 10.
12. Разработчики
Цибульская И.А., Копытова Ф.И., Долженко О.В. (ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений» Россельхозакадемии (ГНУ ВИЗР), Санкт-Петербург, Пушкин).