--- title: "\"МУК 4.1.3020-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение остаточных количеств мепикват хлорида в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур, семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания\"" number: "МУК 4.1.3020-12" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3020-12" --- ## "МУК 4.1.3020-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение остаточных количеств мепикват хлорида в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур, семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания" # "МУК 4.1.3020-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение остаточных количеств мепикват хлорида в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур, семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания" (утв. Роспотребнадзором 03.07.2012) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ [введен](#p100002) в действие с 3 июля 2012 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
3 июля 2012 года #### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **ИЗМЕРЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ МЕПИКВАТ ХЛОРИДА В ВОДЕ,** **ПОЧВЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР,** **СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ** **ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.3020-12**
Дата введения: с момента утверждения Свидетельство о метрологической аттестации от 09.04.2012 N 01.5.04.072/01.00043/2012. Настоящие методические указания устанавливают метод измерения массовой доли мепикват хлорида в воде в диапазоне 0,001 - 0,01 мг/куб. дм, в почве - 0,025 - 0,25 мг/кг, в зерне зерновых, семенах и масле рапса в диапазоне концентраций - 0,02 - 0,2 мг/кг, в зеленой массе и соломе зерновых - 0,05 - 0,5 мг/кг. Название действующего вещества по ICO: мепикват хлорид.
Название действующего вещества по IUPAC: 1,1-диметилпиперидин.
Структурная формула: ![рис. 1](https://i.bukva.ai/FonjCwdc/img_0.png) Эмпирическая формула: C H ClN. 7 16 Молекулярная масса: 149,7. Гигроскопичные кристаллы без цвета и запаха. Температура плавления: > -11 300 °С. Давление паров при 20 °С < 1 х 10 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: К log Р = -3,55 (pH 7). ow Растворимость в воде при 20 °С > 50% (вес.); в органических растворителях (г/100 мл при 20 °С) - в метаноле 48,7, n-октаноле - 0,962, ацетонитриле - 0,280, дихлорметане - 0,051, ацетоне - 0,002, в толуоле, n-гептане и этилацетате - < 0,001. Стабилен в водных растворах (30 дней при pH 3, 5, 7 и 9, 25 °С). Стабилен при воздействии солнечного света. Краткая токсикологическая характеристика Острая оральная токсичность (LD ) для крыс - 270 мг/кг, подкожная > 50 1160 мг/кг, не ирритант для кожи и глаз (кролики); ингаляционная токсичность (LC ) для крыс - более 2,84 мг/куб. дм воздуха (7 ч). Класс 50 токсичности по ВОЗ - III. DT в почве 11 - 40 дней при 20 °С.
50
Область применения препарата - регулятор роста растений. ## 1. Погрешность измерений При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций. Таблица 1 **МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ** Диапазон Показатель Показатель Показатель Показатель измерений, повторяемости промежуточной воспроизводимости точности [<*>](#p100033) массовая (относительное прецизионности (относительное (границы доля, мг/кг среднеквадратическое (относительное среднеквадратическое относительной (мг/куб. дм) отклонение среднеквадратическое отклонение погрешности повторяемости), $\sigma_{r}$ , отклонение в воспроизводимости), при % условиях вариации $\sigma_{R}$ , % вероятности факторов "время", Р = 0,95), "оператор" в одной $±\delta$ , % лаборатории), $\sigma_{R\text{л}}$ , % 1 2 3 4 5 Вода от 7 9 12 25 0,001 до 0,01 вкл. Почва от 7 9 12 25 0,025 до 0,25 вкл. Зеленая 6 8 11 24 масса от 0,05 до 0,5 вкл. Солома от 6 8 11 24 0,05 до 0,5 вкл. Зерно от 6 8 11 24 0,02 до 0,2 вкл. Семена рапса 6 8 11 24 от 0,02 до 0,2 вкл. Масло рапса 6 7 8 16 от 0,02 до 0,2 вкл. <*> Соответствует расширенной неопределенности U при коэффициенте охвата k = 2.
отн.
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2. Таблица 2 | Объект анализа | Предел обнаружения, мг/кг (мг/куб. дм) | Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг (мг/куб. дм) | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/- % | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Вода | 0,001 | 0,001 - 0,01 | 97 | 3,6 | 3,3 | | Почва | 0,025 | 0,025 - 0,25 | 90 | 4,9 | 4,5 | | Зеленая масса | 0,05 | 0,05 - 0,5 | 85 | 4,2 | 3,8 | | Солома | 0,05 | 0,05 - 0,5 | 83 | 4,3 | 3,9 | | Зерно | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 94 | 4,0 | 3,6 | | Семена рапса | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 88 | 5,2 | 4,7 | | Масло рапса | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 90 | 4,8 | 4,4 | ## 2. Метод измерений Методика основана на определении мепикват хлорида методом ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием после его извлечения из образцов органическим растворителем с последующей очисткой на патронах с оксидом алюминия. Мепикват хлорид идентифицируют по абсолютному времени удерживания. Массовую концентрацию мепикват хлорида в пробе определяют в режиме автоматической обработки данных по построенной ранее градуировочной характеристике. Избирательность метода определения мепикват хлорида достигается сочетанием условий подготовки проб и хроматографического анализа с масс-спектрометрическим детектированием. ## 3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы ### 3.1. Средства измерений Хромато-масс-спектрометр Agilent Triple Quard LC/MS модель 6460 производства фирмы Agilent Technologies, состоящий из: - высокоэффективного жидкостного хроматографа Agilent 1200; - масс-спектрометра Agilent модели Triple Quard LC/MS 6460, оснащенного системой ионизации "электроспрей" Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104-2001 Весы технические ВЛКТ-500 ГОСТ 24104-2001 Колбы мерные на 10, 100, 1000 куб. см ГОСТ 23932-90
Микродозаторы одноканальные "BIOHIT"
переменного объема от 200 до 1000 куб. мм Номер в Госреестре средств и от 1 до 5 куб. см, Финляндия измерений 36152-07 Пипетки градуированные [ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) Цилиндры мерные на 50 и 100 куб. см ГОСТ 23932-90 pH-метр универсальный ЭВ-74 ГОСТ 22261-76 *Примечание.* Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками. ### 3.2. Реактивы Ацетонитрил для ВЭЖХ, сорт 1 ТУ 6-09-3534-87 Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная) [ГОСТ Р 52501-2005](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) Изопропиловый спирт, хч ТУ 6-09-402-75 Карбонат магния (магний углекислый основной водный), ч ГОСТ 6419-78 Калия перманганат, хч ГОСТ 20490-75 Кислота муравьиная Reagent Grade, N G2453-85060 по каталогу Agilent Кислота соляная, хч ГОСТ 3118-77 Мепикват хлорид, аналитический стандарт с содержанием д.в. 98,0% (BASF) Метилен хлористый, хч ТУ 2631-44493179-98 Натрия гидроксид, чда ГОСТ 4328-77 Оксид алюминия для хроматографии, ч, размер частиц 100 - 200 мкм, 1-й степени активности по Брокману, нейтральный ТУ 6-09-426-75
Подвижные фазы для ВЭЖХ:
- подвижная фаза А: вода + муравьиная кислота (1000 + 1, по объему) - подвижная фаза Б: метанол + муравьиная кислота (1000 + 1, по объему) Спирт метиловый, хч [ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77) *Примечание.* Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей. ### 3.3. Вспомогательные устройства и материалы Колонка Zorbax Eclipse XDB-C18 (150 х 4,6) мм, 5 мкм Аппарат для встряхивания ТУ 64-1-1081-73 Ванна ультразвуковая УЗВ-1.3 ГОСТ Р МЭК 60335-2-15-98 Воронки лабораторные В-75-110 ГОСТ 25336-82 Воронки делительные ВД-3-250 ГОСТ 8613-75 Гомогенизатор МРТУ 42-1505-63 Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС ГОСТ 10384-72 Колбы круглодонные на шлифах КШ10 и КШ250 **29-32 ТС ГОСТ 10384-72** Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная зерновая ЛМЗ ТУ 1-01-0593-79 Насос водоструйный ГОСТ 25336-82 Патроны Диапак С (БиоХимМак СТ), 0,4 г (номер по каталогу 22.0300) Ротационный испаритель вакуумный Buchi R-205 (Швейцария) Стеклянные флаконы (виалы) для градуировочных и анализируемых растворов вместимостью 1,8 куб. см с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками фирмы Supelco, номер по каталогу 2-6951 Центрифуга производства фирмы Eppendorf, Германия Шейкер Multi Reax производства фирмы Heidolph, Германия *Примечание.* Допускается применение оборудования иных производителей с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. ## 4. Отбор и хранение проб Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (от 21.08.79 N 2051-79), а также в соответствии с [ГОСТ Р 51592-2000](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-51592-2000) "Вода. Общие требования к отбору проб"; [ГОСТ Р 50436-92](https://bukva.ai/docs/gost-r-50436-92) (ИСО 950-79) "Зерновые. Отбор проб зерна"; [ГОСТ 28168-89](https://bukva.ai/docs/gost-28168-89) "Почвы. Отбор проб"; [ГОСТ 10852-86](https://bukva.ai/docs/3979) "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб". Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Семена рапса хранят при комнатной температуре в полотняных мешочках, перед анализом доводят до стандартной влажности и измельчают. Растительное масло хранят в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в герметично закрытой стеклянной таре в течение 2 месяцев. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторных мельницах. ## 5. Подготовка к проведению измерений ### 5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей Перед началом работы проверяют чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 куб. см растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 куб. см и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками. ### 5.2. Кондиционирование колонки Перед началом анализа колонку (Zorbax Eclipse XDB-C18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,6 куб. см/мин.) до стабилизации нулевой линии в течение 1 - 2 ч. ### 5.3. Приготовление растворов для подготовки проб Раствор 2М HCl: в мерную колбу на 1000 куб. см вносят 197 г 36%-ной соляной кислоты, добавляют бидистиллированную воду до метки и перемешивают. Раствор 6М HCl: в мерную колбу на 1000 куб. см вносят 605 г 36%-ной соляной кислоты, добавляют бидистиллированную воду до метки и перемешивают. Смесь 6М HCl-MeOH (9:1): в конической колбе на 1000 куб. см вносят 900 куб. см 6М соляной кислоты и добавляют 100 куб. см метанола. Экстрагент N 1: в колбе на 1000 куб. см смешивают 650 куб. см бидистиллированной воды, 350 куб. см метанола и 50 куб. см 2М HCl. Элюент N 1 для очистки на патроне: в колбе на 500 куб. см смешивают 100 куб. см метанола с 400 куб. см ацетонитрила (1:4), элюента N 2 - смешивают 50 куб. см метанола с 450 куб. см ацетонитрила (1:9). Раствор гидроксида натрия 1М: в мерную колбу на 100 куб. см помещают 4 г гидроксида натрия, растворяют в 100 куб. см дистиллированной воды, доводят водой до метки и перемешивают. Подвижная фаза А: в мерную колбу на 1000 куб. см помещают 1000 куб. см бидистиллированной деионизованной воды, затем микродозатором вносят 1 куб. см муравьиной кислоты. Подвижная фаза Б: в мерную колбу на 1000 куб. см помещают 1000 куб. см метилового спирта, затем микродозатором вносят 1 куб. см муравьиной кислоты. Смесь метанола с ацетонитрилом: в колбе на 100 куб. см с помощью мерных цилиндров смешивают 20 куб. см метанола с 80 куб. см ацетонитрила (смесь 1:4) и 10 куб. см метанола с 90 куб. см ацетонитрила (смесь 1:9). ### 5.4. Приготовление растворов для градуировки Основной раствор мепикват хлорида с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см. Точную навеску мепикват хлорида массой (10 +/- 0,1) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и добавляют около 90 куб. см бидистиллированной воды. Содержимое колбы тщательно перемешивают, выдерживают 20 мин. при температуре 20 °С, после чего добавляют воду до метки. Затем 10 куб. см полученного раствора с концентрацией 100 мкг/куб. см вносят в мерную колбу на 100 куб. см и доводят до метки бидистиллированной водой - получен основной раствор с концентрацией 10 мкг/куб. см. Градуировочные растворы с концентрациями 1,0; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 и 25,0 нг/куб. см готовят из основного раствора методом последовательного разбавления, используя подвижную фазу А. Раствор N 1 с концентрацией мепикват хлорида 25 нг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,25 куб. см основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой А. Раствор N 2 с концентрацией мепикват хлорида 20 нг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,2 куб. см основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой А. Раствор N 3 с концентрацией мепикват хлорида 15 нг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,15 куб. см основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой А. Раствор N 4 с концентрацией мепикват хлорида 10 нг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 5,0 куб. см раствора N 2 и доводят объем до метки подвижной фазой А. Раствор N 5 с концентрацией мепикват хлорида 5 нг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 5,0 куб. см раствора N 4 и доводят объем до метки подвижной фазой А. Раствор N 6 с концентрацией мепикват хлорида 1 нг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 1 куб. см раствора N 4 и доводят объем до метки подвижной фазой А. Основной и градуировочные растворы можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение месяца. Для внесения в контрольный образец при определении полноты извлечения используют основной раствор, разбавленный ацетонитрилом до нужного уровня концентраций методом последовательного разбавления. Растворы для внесения в масло готовят из основного раствора с концентрацией 100 мкг/куб. см методом последовательного разбавления по объему изопропиловым спиртом. ### 5.5. Построение градуировочного графика Для каждого из градуировочных растворов регистрируют хроматограммы в условиях, указанных в [п. 7](#p100151), и определяют абсолютное время удерживания и площадь пика мепикват хлорида (в усл. ед.), соответствующего MRM (114 -> 98). Одновременно в режиме автоматической обработки данных определяют соотношение площадей пиков, соответствующих MRM (114 -> 98) и MRM (114 -> 58) (S /S ). 98 58 В режиме автоматической обработки данных строят градуировочную характеристику (площадь пика - концентрация мепикват хлорида в растворе). Для этого в хроматограф вводят по 10 куб. мм градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента: $\frac{|\text{К}_{\text{контр}.} - \text{К }|}{\text{К}} 100 \leq \lambda_{\text{контр}.},$ где $\lambda_{\text{контр}.}$ - норматив контроля градуировочного коэффициента, %. ( $\lambda_{\text{контр}.}$ = 10% при Р = 0,95). ### 5.6. Подготовка патронов с оксидом алюминия для очистки экстракта В картридж емкостью 10 куб. см для твердофазной экстракции вносят 2,5 г оксида алюминия 2-й степени активности и уплотняют центрифугированием 10 мин. при 8000 об./мин. Приготовление оксида алюминия 2-й степени активности: к 97 г Al O 2 3 (активность 1, влажность 0%) добавляют 3 куб. см воды и перемешивают в шейкере 2 ч при 300 rpm. Оксид алюминия готовят в день использования и хранят в эксикаторе. ### 5.7. Подготовка приборов и средств измерения Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации. ## 6. Проведение определения ### 6.1. Определение мепикват хлорида в воде Подщелачивают 25 куб. см воды 1М раствором гидроксида натрия до pH 9 и пропускают через картридж с силикагелем (Диапак С) со скоростью 3 - 4 куб. см/мин. Мепикват хлорид элюируют 5 куб. см смеси 6М HCl-MeOH (9:1). Элюат выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 5 куб. см смеси (метиловый спирт:подвижная фаза А в соотношении 1:9) и 10 куб. мм раствора вводят в жидкостный хроматограф. ### 6.2. Извлечение мепикват хлорида из почвы Навеску почвы (5 +/- 0,1) г помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см и добавляют 50 куб. см дистиллированной воды. После перемешивания на аппарате для встряхивания в течение 5 мин. в почвенную вытяжку добавляют карбонат магния до получения нейтральной реакции. В полученную смесь добавляют 100 куб. см хлористого метилена и тщательно встряхивают. Затем ее выдерживают в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. и декантируют в делительную воронку на 250 куб. см через стеклянную воронку с ватным фильтром. После разделения фаз нижний слой переносят в другую делительную воронку (верхний слой отбрасывают), добавляют к нему 50 куб. см разбавленной соляной кислоты (125 куб. см кислоты и 825 куб. см воды) и энергично встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев водную фазу (верхний слой) собирают в колбу емкостью 100 куб. см. К органической фазе (оставшийся нижний слой) повторно добавляют 50 куб. см разбавленной соляной кислоты. После разделения слоев водную фазу собирают в ту же колбу, органическую фазу отбрасывают. Из объединенной водной фазы (100 куб. см) отбирают аликвоту 2 куб. см (1/50 экстракта) и упаривают ее на ротационном испарителе при температуре водяной бани 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по [п. 6.7](#p100149). ### 6.3. Извлечение мепикват хлорида из зерна Навеску измельченного зерна массой (5 +/- 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см и экстрагируют мепикват хлорид 100 куб. см экстрагента N 1 (вода - метанол - 2М HCl в соотношении 65:30:5) в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Затем в колбу добавляют 100 куб. см бидистиллированной воды и энергично встряхивают колбу в течение 1 мин. Отбирают из колбы в пробирку 10 куб. см смеси и центрифугируют 5 мин. при 4000 об./мин. Затем отбирают из пробирки 4,0 куб. см супернатанта и выпаривают до сухого остатка на роторном испарителе при 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по [п. 6.7](#p100149). ### 6.4. Извлечение мепикват хлорида из зеленой массы и соломы зерновых культур Навеску измельченной зеленой массы или соломы массой (5 +/- 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см и экстрагируют мепикват хлорид 100 куб. см экстрагента N 1 (вода - метанол - 2М HCl в соотношении 65:30:5) в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Затем в колбу добавляют 100 куб. см бидистиллированной воды и энергично встряхивают колбу в течение 1 мин. Отбирают из колбы в пробирку 10 куб. см смеси и центрифугируют 5 мин. при 4000 об./мин. Затем отбирают из пробирки 2,5 куб. см супернатанта и выпаривают до сухого остатка на роторном испарителе при 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по [п. 6.7](#p100149). ### 6.5. Извлечение мепикват хлорида из семян рапса Навеску измельченных семян массой (5 +/- 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см и экстрагируют мепикват хлорид 100 куб. см экстрагента N 1 (вода - метанол - 2М HCl в соотношении 65:30:5) в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Затем в колбу добавляют 100 куб. см бидистиллированной воды и энергично встряхивают колбу в течение 1 мин. Отбирают из колбы в пробирку 10 куб. см смеси и центрифугируют 5 мин. при 4000 об./мин. Затем отбирают из пробирки 2,0 куб. см супернатанта и выпаривают до сухого остатка на роторном испарителе при 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по [п. 6.7](#p100149). ### 6.6. Извлечение мепикват хлорида из масла рапса Навеску масла массой (5 +/- 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см и экстрагируют мепикват хлорид 100 куб. см экстрагента N 1 (вода - метанол - 2М HCl в соотношении 65:30:5) на ультразвуковой установке в течение 10 мин. Смесь помещают в делительную воронку емкостью 250 куб. см и промывают двумя порциями хлористого метилена по 50 куб. см, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 - 3 мин. и собирая нижний водный слой. К водной фазе добавляют 100 куб. см бидистиллированной воды и энергично встряхивают в течение 1 мин. Аликвоту полученного водного экстракта 2,0 куб. см выпаривают досуха на роторном испарителе при 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7. ### 6.7. Очистка на патронах с оксидом алюминия Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании экстрактов по [пп. 6.2](#p100138) - 6.6, растворяют в 1 куб. см метанола в ультразвуковой ванне в течение 0,5 мин. и добавляют 4 куб. см ацетонитрила. Полученный раствор количественно переносят в подготовленный картридж для твердофазной экстракции и дают ему впитаться. Промывают картридж 1 раз 5 куб. см смеси метанол - ацетонитрил (1:4), затем 3 раза по 5 куб. см смесью метанол - ацетонитрил (1:9). Элюат от 4 промывок собирают в грушевидную колбу емкостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см смеси метиловый спирт: подвижная фаза А (1:9, по объему) и 10 куб. мм раствора вводят в жидкостный хроматограф. ## 7. Условия измерений ### 7.1. Хроматографические условия измерений Колонка: Zorbax Eclipse XDB-C18 (150 х 4,6) мм, 5 мкм. Температура термостата колонки (30 +/- 1) °С. Подвижная фаза А: вода + муравьиная кислота (1000 + 1, v/v). Подвижная фаза Б: метанол + муравьиная кислота (1000 + 1, v/v). Скорость потока элюента: 0,4 мл/мин. Объем вводимой пробы 10 куб. мм. Режим элюирования: градиентный. | Время, мин. | % А | % В | | --- | --- | --- | | 0 | 100 | 0 | | 0,1 | 100 | 0 | | 4,0 | 10 | 90 | | 8,0 | 10 | 90 | | 8,1 | 100 | 0 | | 19,0 | 100 | 0 | ### 7.2. Масс-спектрометрические условия измерений | Тип ионного источника | ESI positive polarity (электроспрей) | | --- | --- | | Режим сканирования | Multiple reaction monitoring (MRM) 114 -> 98 (основной) 114 -> 58 (подтверждающий) | | Напряжение на фрагменторе, v | 135 | | Параметры работы ионного источника: | | | Gas temperature, °С | 350 | | Gas flow, л/мин. | 10 | | Nebulizer, psi | 35 | | Sheath gas temperature, °С | 350 | | Sheath gas flow, л/мин. | 10 | | Capillary, v | 3500 | | Nozzle voltage, v | 2000 | ### 7.3. Обработка результатов анализа Анализ проводят в тех же условиях, в которых проводили градуировку прибора. Каждый раствор хроматографируют не менее 2 раз (параллельные определения). Растворы анализируют непосредственно друг за другом. Мепикват хлорид идентифицируют по абсолютному времени удерживания, определенному ранее при градуировке (+/- 0,3 мин). В режиме автоматической обработки данных определяют площади пиков мепикват хлорида (в усл. ед.), соответствующих MRM (114 -> 98) и MRM (114 -> 58). Соотношение S /S не 98 58 должно отличаться от найденного при градуировке более чем на 15%. Массовую концентрацию (С , мкг/куб. см) мепикват хлорида в каждом из х анализируемых растворов определяют в режиме автоматической обработки данных по построенной ранее градуировочной характеристике. Содержание мепикват хлорида в исследуемых образцах (Х, мг/кг) вычисляют по формуле: С х V х А х 2 Х = -----------, А х Р 1 где: С - концентрация мепикват хлорида, найденная по градуировке, мкг/куб. х см; V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, куб. см; А - аликвота анализируемого экстракта (2,0 куб. см - для рапса и 1 почвы, 2,5 куб. см - для зеленой массы и соломы, 4 куб. см - для зерна); А - общий объем экстракта (200 куб. см - для рапса, зерна, зеленой 2 массы и соломы и 100 куб. см - для почвы); Р - навеска анализируемого образца, г (куб. см для воды). Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор мепикват хлорида 25 нг/куб. см, разбавляют подвижной фазой А для ВЭЖХ. ## 8. Проверка приемлемости результатов параллельных определений За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предел повторяемости: 2 х |Х - Х | х 100 1 2 ------------------- <= r, (1) (Х + Х ) 1 2 где: Х , Х - результаты параллельных определений, мг/кг; 1 2 r - значение предела повторяемости $(r = 2,8\sigma_{r})$ . При невыполнении [условия (1)](#p100191) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ. ## 9. Оформление результатов Результат анализа представляют в виде: $(\text{Х } \pm \Delta),\text{мг}/\text{кг},\text{при вероятности Р } = 0,95,$ где: Х - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг; $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг: $\Delta = \frac{\delta \cdot \text{Х}}{100} ,$ где $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %. В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,02 мг/кг <*>, где "<*>" - 0,02 мг/кг - предел обнаружения мепикват хлорида в зерне)". ## 10. Контроль качества результатов измерений Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений". 10.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. 10.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок. Величина добавки С должна удовлетворять условию: д $\text{С}_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},\text{Х}} + \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime},$ где $\pm \Delta_{\text{л},\text{Х}}$ $( \pm \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime})$ - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом: $\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta,$ где $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг: $\Delta = \frac{\delta \cdot \text{Х}}{100} ,$ где $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %. Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к К = Х' - Х - С , к д где Х', Х, С - среднее арифметическое результатов параллельных д определений (признанных приемлемыми по [п. 4](#p100094)) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг. Норматив контроля К рассчитывают по формуле: $\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},\text{Х }\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},\text{Х}}^{2}} .$ Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом к контроля (К). Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию: |К | <= К, (2) к процедуру анализа признают удовлетворительной. При невыполнении [условия (2)](#p100220) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению. 10.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости. Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предел воспроизводимости (R): 2 х |Х - Х | х 100 1 2 ------------------- <= R, (3) (Х + Х ) 1 2 где: Х , Х - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг; 1 2 R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %. ## 11. Требования безопасности 11.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф с масс-спектрометрическим детектором. 11.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленные ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90. ## 12. Требования к квалификации оператора Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием, ознакомленный с руководством по эксплуатации прибора, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по [п. 10](#p100203). ## 13. Разработчики ГНУ "Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений" Россельхозакадемии, Санкт-Петербург. ФГУП "Всероссийский научно-исследовательский институт метрологии им. Д.И. Менделеева", Санкт-Петербург. ---