МУК 4.1.3020-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение остаточных количеств мепикват хлорида в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур, семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.3020-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение остаточных количеств мепикват хлорида в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур, семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания". МУК 4.1.3020-12. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3020-12
(утв. Роспотребнадзором 03.07.2012)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 3 июля 2012 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
3 июля 2012 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ИЗМЕРЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ МЕПИКВАТ ХЛОРИДА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ
МУК 4.1.3020-12
Дата введения: с момента утверждения
Свидетельство о метрологической аттестации от 09.04.2012 № 01.5.04.072/01.00043/2012.
Настоящие методические указания устанавливают метод измерения массовой доли мепикват хлорида в воде в диапазоне 0,001 — 0,01 мг/куб. дм, в почве — 0,025 — 0,25 мг/кг, в зерне зерновых, семенах и масле рапса в диапазоне концентраций — 0,02 — 0,2 мг/кг, в зеленой массе и соломе зерновых — 0,05 — 0,5 мг/кг.
Название действующего вещества по ICO: мепикват хлорид.
Эмпирическая формула: C H ClN. 7 16
Гигроскопичные кристаллы без цвета и запаха. Температура плавления: > -11
300 °С. Давление паров при 20 °С < 1 х 10 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: К log Р = -3,55 (pH 7).
ow
Растворимость в воде при 20 °С > 50% (вес.); в органических растворителях (г/100 мл при 20 °С) — в метаноле 48,7, n-октаноле — 0,962, ацетонитриле — 0,280, дихлорметане — 0,051, ацетоне — 0,002, в толуоле, n-гептане и этилацетате — < 0,001.
Стабилен в водных растворах (30 дней при pH 3, 5, 7 и 9, 25 °С). Стабилен при воздействии солнечного света.
Краткая токсикологическая характеристика
Острая оральная токсичность (LD ) для крыс — 270 мг/кг, подкожная > 50
1160 мг/кг, не ирритант для кожи и глаз (кролики); ингаляционная токсичность (LC ) для крыс - более 2,84 мг/куб. дм воздуха (7 ч). Класс
50
токсичности по ВОЗ — III. DT в почве 11 — 40 дней при 20 °С.
50
Область применения препарата — регулятор роста растений.
1. Погрешность измерений
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Диапазон Показатель Показатель Показатель Показатель измерений, повторяемости промежуточной воспроизводимости точности <*>
массовая (относительное прецизионности (относительное (границы доля, мг/кг среднеквадратическое (относительное среднеквадратическое относительной (мг/куб. дм) отклонение среднеквадратическое отклонение погрешности
повторяемости), \sigma_{r} , отклонение в воспроизводимости), при % условиях вариации \sigma_{R} , % вероятности факторов «время», Р = 0,95), «оператор» в одной ±\delta , % лаборатории), \sigma_{R\text{л}} , %
1 2 3 4 5 Вода от 7 9 12 25
0,001 до 0,01 вкл.
Почва от 7 9 12 25 0,025 до 0,25 вкл.
Зеленая 6 8 11 24 масса от 0,05 до 0,5 вкл.
Солома от 6 8 11 24 0,05 до 0,5 вкл.
Зерно от 6 8 11 24 0,02 до 0,2 вкл.
Семена рапса 6 8 11 24 от 0,02 до 0,2 вкл.
Масло рапса 6 7 8 16 от 0,02 до 0,2 вкл.
<*> Соответствует расширенной неопределенности U при коэффициенте охвата k = 2.
отн.
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
| Объект анализа | Предел обнаружения, мг/кг (мг/куб. дм) | Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг (мг/куб. дм) | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/- % |
|---|---|---|---|---|---|
| Вода | 0,001 | 0,001 — 0,01 | 97 | 3,6 | 3,3 |
| Почва | 0,025 | 0,025 — 0,25 | 90 | 4,9 | 4,5 |
| Зеленая масса | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 85 | 4,2 | 3,8 |
| Солома | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 83 | 4,3 | 3,9 |
| Зерно | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 94 | 4,0 | 3,6 |
| Семена рапса | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 88 | 5,2 | 4,7 |
| Масло рапса | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 90 | 4,8 | 4,4 |
2. Метод измерений
Методика основана на определении мепикват хлорида методом ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием после его извлечения из образцов органическим растворителем с последующей очисткой на патронах с оксидом алюминия. Мепикват хлорид идентифицируют по абсолютному времени удерживания. Массовую концентрацию мепикват хлорида в пробе определяют в режиме автоматической обработки данных по построенной ранее градуировочной характеристике.
Избирательность метода определения мепикват хлорида достигается сочетанием условий подготовки проб и хроматографического анализа с масс-спектрометрическим детектированием.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Хромато-масс-спектрометр Agilent Triple Quard LC/MS модель 6460 производства фирмы Agilent Technologies, состоящий из:
- высокоэффективного жидкостного хроматографа Agilent 1200;
- масс-спектрометра Agilent модели Triple Quard LC/MS 6460, оснащенного системой ионизации «электроспрей»
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104-2001
Весы технические ВЛКТ-500 ГОСТ 24104-2001
Колбы мерные на 10, 100, 1000 куб. см ГОСТ 23932-90
переменного объема от 200 до 1000 куб. мм Номер в Госреестре средств и от 1 до 5 куб. см, Финляндия измерений 36152-07
Пипетки градуированные ГОСТ 29227-91
Цилиндры мерные на 50 и 100 куб. см ГОСТ 23932-90
pH-метр универсальный ЭВ-74 ГОСТ 22261-76
Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Ацетонитрил для ВЭЖХ, сорт 1 ТУ 6-09-3534-87
Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная) ГОСТ Р 52501-2005
Изопропиловый спирт, хч ТУ 6-09-402-75
Карбонат магния (магний углекислый основной водный), ч ГОСТ 6419-78
Калия перманганат, хч ГОСТ 20490-75
Кислота муравьиная Reagent Grade, № G2453-85060 по каталогу Agilent
Кислота соляная, хч ГОСТ 3118-77
Мепикват хлорид, аналитический стандарт с содержанием д.в. 98,0% (BASF)
Метилен хлористый, хч ТУ 2631-44493179-98
Натрия гидроксид, чда ГОСТ 4328-77
Оксид алюминия для хроматографии, ч, размер частиц 100 — 200 мкм, 1-й степени активности по Брокману, нейтральный ТУ 6-09-426-75
- подвижная фаза А: вода + муравьиная кислота (1000 + 1, по объему)
- подвижная фаза Б: метанол + муравьиная кислота (1000 + 1, по объему)
Спирт метиловый, хч ГОСТ 6995-77
Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Колонка Zorbax Eclipse XDB-C18 (150 х 4,6) мм, 5 мкм
Аппарат для встряхивания ТУ 64-1-1081-73 Ванна ультразвуковая УЗВ-1.3 ГОСТ Р МЭК 60335-2-15-98
Воронки лабораторные В-75-110 ГОСТ 25336-82
Воронки делительные ВД-3-250 ГОСТ 8613-75 Гомогенизатор МРТУ 42-1505-63 Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС ГОСТ 10384-72
Колбы круглодонные на шлифах КШ10 и КШ250 29-32 ТС ГОСТ 10384-72
Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная зерновая ЛМЗ ТУ 1-01-0593-79
Насос водоструйный ГОСТ 25336-82
Патроны Диапак С (БиоХимМак СТ), 0,4 г (номер по каталогу 22.0300)
Ротационный испаритель вакуумный Buchi R-205 (Швейцария)
Стеклянные флаконы (виалы) для градуировочных и анализируемых растворов вместимостью 1,8 куб. см с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками фирмы Supelco, номер по каталогу 2-6951
Центрифуга производства фирмы Eppendorf, Германия
Шейкер Multi Reax производства фирмы Heidolph, Германия
Примечание. Допускается применение оборудования иных производителей с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Отбор и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от 21.08.79 № 2051-79), а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб»; ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) «Зерновые. Отбор проб зерна»; ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб»; ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Семена рапса хранят при комнатной температуре в полотняных мешочках, перед анализом доводят до стандартной влажности и измельчают. Растительное масло хранят в холодильнике при температуре 0 — 4 °С в герметично закрытой стеклянной таре в течение 2 месяцев. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторных мельницах.
5. Подготовка к проведению измерений
5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Перед началом работы проверяют чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 куб. см растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 куб. см и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.
5.2. Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку (Zorbax Eclipse XDB-C18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,6 куб. см/мин.) до стабилизации нулевой линии в течение 1 — 2 ч.
5.3. Приготовление растворов для подготовки проб
Раствор 2М HCl: в мерную колбу на 1000 куб. см вносят 197 г 36%-ной соляной кислоты, добавляют бидистиллированную воду до метки и перемешивают.
Раствор 6М HCl: в мерную колбу на 1000 куб. см вносят 605 г 36%-ной соляной кислоты, добавляют бидистиллированную воду до метки и перемешивают.
Смесь 6М HCl-MeOH (9:1): в конической колбе на 1000 куб. см вносят 900 куб. см 6М соляной кислоты и добавляют 100 куб. см метанола.
Экстрагент № 1: в колбе на 1000 куб. см смешивают 650 куб. см бидистиллированной воды, 350 куб. см метанола и 50 куб. см 2М HCl.
Элюент № 1 для очистки на патроне: в колбе на 500 куб. см смешивают 100 куб. см метанола с 400 куб. см ацетонитрила (1:4), элюента № 2 — смешивают 50 куб. см метанола с 450 куб. см ацетонитрила (1:9).
Раствор гидроксида натрия 1М: в мерную колбу на 100 куб. см помещают 4 г гидроксида натрия, растворяют в 100 куб. см дистиллированной воды, доводят водой до метки и перемешивают.
Подвижная фаза А: в мерную колбу на 1000 куб. см помещают 1000 куб. см бидистиллированной деионизованной воды, затем микродозатором вносят 1 куб. см муравьиной кислоты.
Подвижная фаза Б: в мерную колбу на 1000 куб. см помещают 1000 куб. см метилового спирта, затем микродозатором вносят 1 куб. см муравьиной кислоты.
Смесь метанола с ацетонитрилом: в колбе на 100 куб. см с помощью мерных цилиндров смешивают 20 куб. см метанола с 80 куб. см ацетонитрила (смесь 1:4) и 10 куб. см метанола с 90 куб. см ацетонитрила (смесь 1:9).
5.4. Приготовление растворов для градуировки
Основной раствор мепикват хлорида с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см.
Точную навеску мепикват хлорида массой (10 +/- 0,1) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и добавляют около 90 куб. см бидистиллированной воды. Содержимое колбы тщательно перемешивают, выдерживают 20 мин. при температуре 20 °С, после чего добавляют воду до метки. Затем 10 куб. см полученного раствора с концентрацией 100 мкг/куб. см вносят в мерную колбу на 100 куб. см и доводят до метки бидистиллированной водой — получен основной раствор с концентрацией 10 мкг/куб. см.
Градуировочные растворы с концентрациями 1,0; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 и 25,0 нг/куб. см готовят из основного раствора методом последовательного разбавления, используя подвижную фазу А.
Раствор № 1 с концентрацией мепикват хлорида 25 нг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,25 куб. см основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой А.
Раствор № 2 с концентрацией мепикват хлорида 20 нг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,2 куб. см основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой А.
Раствор № 3 с концентрацией мепикват хлорида 15 нг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,15 куб. см основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой А.
Раствор № 4 с концентрацией мепикват хлорида 10 нг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 5,0 куб. см раствора № 2 и доводят объем до метки подвижной фазой А.
Раствор № 5 с концентрацией мепикват хлорида 5 нг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 5,0 куб. см раствора № 4 и доводят объем до метки подвижной фазой А.
Раствор № 6 с концентрацией мепикват хлорида 1 нг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 1 куб. см раствора № 4 и доводят объем до метки подвижной фазой А.
Основной и градуировочные растворы можно хранить в холодильнике при температуре 0 — 4 °С в течение месяца.
Для внесения в контрольный образец при определении полноты извлечения используют основной раствор, разбавленный ацетонитрилом до нужного уровня концентраций методом последовательного разбавления. Растворы для внесения в масло готовят из основного раствора с концентрацией 100 мкг/куб. см методом последовательного разбавления по объему изопропиловым спиртом.
5.5. Построение градуировочного графика
Для каждого из градуировочных растворов регистрируют хроматограммы в условиях, указанных в п. 7, и определяют абсолютное время удерживания и
площадь пика мепикват хлорида (в усл. ед.), соответствующего MRM (114 ->
98). Одновременно в режиме автоматической обработки данных определяют
соотношение площадей пиков, соответствующих MRM (114 -> 98) и MRM (114 ->
58) (S /S ).
98 58
В режиме автоматической обработки данных строят градуировочную характеристику (площадь пика — концентрация мепикват хлорида в растворе). Для этого в хроматограф вводят по 10 куб. мм градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций).
Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента:
\frac{|\text{К}_{\text{контр}.} - \text{К }|}{\text{К}} 100 \leq \lambda_{\text{контр}.},
где \lambda_{\text{контр}.} — норматив контроля градуировочного коэффициента, %. ( \lambda_{\text{контр}.} = 10% при Р = 0,95).
5.6. Подготовка патронов с оксидом алюминия для очистки экстракта
В картридж емкостью 10 куб. см для твердофазной экстракции вносят 2,5 г оксида алюминия 2-й степени активности и уплотняют центрифугированием 10 мин. при 8000 об./мин.
Приготовление оксида алюминия 2-й степени активности: к 97 г Al O 2 3 (активность 1, влажность 0%) добавляют 3 куб. см воды и перемешивают в шейкере 2 ч при 300 rpm.
Оксид алюминия готовят в день использования и хранят в эксикаторе.
5.7. Подготовка приборов и средств измерения
Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.
6. Проведение определения
6.1. Определение мепикват хлорида в воде
Подщелачивают 25 куб. см воды 1М раствором гидроксида натрия до pH 9 и пропускают через картридж с силикагелем (Диапак С) со скоростью 3 — 4 куб. см/мин. Мепикват хлорид элюируют 5 куб. см смеси 6М HCl-MeOH (9:1). Элюат выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 5 куб. см смеси (метиловый спирт:подвижная фаза А в соотношении 1:9) и 10 куб. мм раствора вводят в жидкостный хроматограф.
6.2. Извлечение мепикват хлорида из почвы
Навеску почвы (5 +/- 0,1) г помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см и добавляют 50 куб. см дистиллированной воды. После перемешивания на аппарате для встряхивания в течение 5 мин. в почвенную вытяжку добавляют карбонат магния до получения нейтральной реакции. В полученную смесь добавляют 100 куб. см хлористого метилена и тщательно встряхивают. Затем ее выдерживают в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. и декантируют в делительную воронку на 250 куб. см через стеклянную воронку с ватным фильтром. После разделения фаз нижний слой переносят в другую делительную воронку (верхний слой отбрасывают), добавляют к нему 50 куб. см разбавленной соляной кислоты (125 куб. см кислоты и 825 куб. см воды) и энергично встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев водную фазу (верхний слой) собирают в колбу емкостью 100 куб. см. К органической фазе (оставшийся нижний слой) повторно добавляют 50 куб. см разбавленной соляной кислоты. После разделения слоев водную фазу собирают в ту же колбу, органическую фазу отбрасывают. Из объединенной водной фазы (100 куб. см) отбирают аликвоту 2 куб. см (1/50 экстракта) и упаривают ее на ротационном испарителе при температуре водяной бани 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.
6.3. Извлечение мепикват хлорида из зерна
Навеску измельченного зерна массой (5 +/- 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см и экстрагируют мепикват хлорид 100 куб. см экстрагента № 1 (вода — метанол — 2М HCl в соотношении 65:30:5) в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Затем в колбу добавляют 100 куб. см бидистиллированной воды и энергично встряхивают колбу в течение 1 мин. Отбирают из колбы в пробирку 10 куб. см смеси и центрифугируют 5 мин. при 4000 об./мин. Затем отбирают из пробирки 4,0 куб. см супернатанта и выпаривают до сухого остатка на роторном испарителе при 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.
6.4. Извлечение мепикват хлорида из зеленой массы и соломы зерновых культур
Навеску измельченной зеленой массы или соломы массой (5 +/- 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см и экстрагируют мепикват хлорид 100 куб. см экстрагента № 1 (вода — метанол — 2М HCl в соотношении 65:30:5) в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Затем в колбу добавляют 100 куб. см бидистиллированной воды и энергично встряхивают колбу в течение 1 мин. Отбирают из колбы в пробирку 10 куб. см смеси и центрифугируют 5 мин. при 4000 об./мин. Затем отбирают из пробирки 2,5 куб. см супернатанта и выпаривают до сухого остатка на роторном испарителе при 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.
6.5. Извлечение мепикват хлорида из семян рапса
Навеску измельченных семян массой (5 +/- 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см и экстрагируют мепикват хлорид 100 куб. см экстрагента № 1 (вода — метанол — 2М HCl в соотношении 65:30:5) в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Затем в колбу добавляют 100 куб. см бидистиллированной воды и энергично встряхивают колбу в течение 1 мин. Отбирают из колбы в пробирку 10 куб. см смеси и центрифугируют 5 мин. при 4000 об./мин. Затем отбирают из пробирки 2,0 куб. см супернатанта и выпаривают до сухого остатка на роторном испарителе при 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.
6.6. Извлечение мепикват хлорида из масла рапса
Навеску масла массой (5 +/- 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см и экстрагируют мепикват хлорид 100 куб. см экстрагента № 1 (вода — метанол — 2М HCl в соотношении 65:30:5) на ультразвуковой установке в течение 10 мин. Смесь помещают в делительную воронку емкостью 250 куб. см и промывают двумя порциями хлористого метилена по 50 куб. см, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 — 3 мин. и собирая нижний водный слой. К водной фазе добавляют 100 куб. см бидистиллированной воды и энергично встряхивают в течение 1 мин. Аликвоту полученного водного экстракта 2,0 куб. см выпаривают досуха на роторном испарителе при 70 °С.
Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.
6.7. Очистка на патронах с оксидом алюминия
Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании экстрактов по пп. 6.2 - 6.6, растворяют в 1 куб. см метанола в ультразвуковой ванне в течение 0,5 мин. и добавляют 4 куб. см ацетонитрила. Полученный раствор количественно переносят в подготовленный картридж для твердофазной экстракции и дают ему впитаться. Промывают картридж 1 раз 5 куб. см смеси метанол — ацетонитрил (1:4), затем 3 раза по 5 куб. см смесью метанол — ацетонитрил (1:9). Элюат от 4 промывок собирают в грушевидную колбу емкостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см смеси метиловый спирт: подвижная фаза А (1:9, по объему) и 10 куб. мм раствора вводят в жидкостный хроматограф.
7. Условия измерений
7.1. Хроматографические условия измерений
Колонка: Zorbax Eclipse XDB-C18 (150 х 4,6) мм, 5 мкм.
Температура термостата колонки (30 +/- 1) °С.
Подвижная фаза А: вода + муравьиная кислота (1000 + 1, v/v).
Подвижная фаза Б: метанол + муравьиная кислота (1000 + 1, v/v).
Скорость потока элюента: 0,4 мл/мин.
Объем вводимой пробы 10 куб. мм.
Режим элюирования: градиентный.
| Время, мин. | % А | % В |
|---|---|---|
| 0 | 100 | 0 |
| 0,1 | 100 | 0 |
| 4,0 | 10 | 90 |
| 8,0 | 10 | 90 |
| 8,1 | 100 | 0 |
| 19,0 | 100 | 0 |
7.2. Масс-спектрометрические условия измерений
| Тип ионного источника | ESI positive polarity (электроспрей) |
|---|---|
| Режим сканирования | Multiple reaction monitoring (MRM) 114 -> 98 (основной) 114 -> 58 (подтверждающий) |
| Напряжение на фрагменторе, v | 135 |
| Параметры работы ионного источника: | |
| Gas temperature, °С | 350 |
| Gas flow, л/мин. | 10 |
| Nebulizer, psi | 35 |
| Sheath gas temperature, °С | 350 |
| Sheath gas flow, л/мин. | 10 |
| Capillary, v | 3500 |
| Nozzle voltage, v | 2000 |
7.3. Обработка результатов анализа
Анализ проводят в тех же условиях, в которых проводили градуировку прибора.
Каждый раствор хроматографируют не менее 2 раз (параллельные определения). Растворы анализируют непосредственно друг за другом.
Мепикват хлорид идентифицируют по абсолютному времени удерживания, определенному ранее при градуировке (+/- 0,3 мин). В режиме автоматической обработки данных определяют площади пиков мепикват хлорида (в усл. ед.), соответствующих MRM (114 -> 98) и MRM (114 -> 58). Соотношение S /S не 98 58
должно отличаться от найденного при градуировке более чем на 15%.
Массовую концентрацию (С , мкг/куб. см) мепикват хлорида в каждом из х анализируемых растворов определяют в режиме автоматической обработки данных по построенной ранее градуировочной характеристике.
Содержание мепикват хлорида в исследуемых образцах (Х, мг/кг) вычисляют по формуле:
С х V х А
х 2
где:
С - концентрация мепикват хлорида, найденная по градуировке, мкг/куб.
х
см; V — объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, куб. см; А — аликвота анализируемого экстракта (2,0 куб. см — для рапса и 1 почвы, 2,5 куб. см — для зеленой массы и соломы, 4 куб. см — для зерна); А — общий объем экстракта (200 куб. см — для рапса, зерна, зеленой 2 массы и соломы и 100 куб. см — для почвы); Р — навеска анализируемого образца, г (куб. см для воды).
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор мепикват хлорида 25 нг/куб. см, разбавляют подвижной фазой А для ВЭЖХ.
8. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предел повторяемости:
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r — значение предела повторяемости (r = 2,8\sigma_{r}) .
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
9. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
(\text{Х } \pm \Delta),\text{мг}/\text{кг},\text{при вероятности Р } = 0,95,
Х — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:
\Delta = \frac{\delta \cdot \text{Х}}{100} ,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе „менее нижней границы определения“ (например: менее 0,02 мг/кг <>, где „<>“ — 0,02 мг/кг — предел обнаружения мепикват хлорида в зерне)».
10. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
10.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
10.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки С должна удовлетворять условию: д
\text{С}_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},\text{Х}} + \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime},
где \pm \Delta_{\text{л},\text{Х}} ( \pm \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta,
где \Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:
\Delta = \frac{\delta \cdot \text{Х}}{100} ,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
К = Х' - Х - С , к д где Х', Х, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},\text{Х }\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},\text{Х}}^{2}} .
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом к контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
10.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предел воспроизводимости (R):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном
концентраций), %.
11. Требования безопасности
11.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф с масс-спектрометрическим детектором.
11.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленные ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07.
Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004-90.
12. Требования к квалификации оператора
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием, ознакомленный с руководством по эксплуатации прибора, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 10.
13. Разработчики
ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений» Россельхозакадемии, Санкт-Петербург.
ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт метрологии им. Д.И. Менделеева», Санкт-Петербург.