---
title: "\"МУК 4.1.3002-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тиабендазола в семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3002-12"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3002-12"
---

## "МУК 4.1.3002-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тиабендазола в семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.3002-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тиабендазола в семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 19.03.2012)

> [!IMPORTANT]
> Документ [введен](#p100002) в действие с 19 марта 2012 года.


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере

<div align="right">

защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**<br>
19 марта 2012 года

<a id="p100002"></a>Дата введения:<br>
с момента утверждения

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<div align="center">

<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТИАБЕНДАЗОЛА**<br>
**В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ**<br>
**ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

</div>


<div align="right">

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**<br>
**МУК 4.1.3002-12**

</div>


<a id="p100006"></a>Свидетельство о метрологической аттестации от 16.08.2011 N 0098.12.08.11.
<a id="p100007"></a>Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения массовых концентраций тиабендазола в семенах и масле рапса в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг.
<a id="p100008"></a>(E,Z)-4-[3-(4-(хлорфенил)-3-(3,4-диметоксифенил)акрилоил]морфолин (IUPAC)

<a id="p100009"></a> ![рис. 1](https://i.bukva.ai/xk7efdMG/img_0.png) 

<a id="p100010"></a> $C_{10}H_{7}N_{3}S$ 
<a id="p100011"></a>Молекулярная масса 201,3
<a id="p100012"></a>Бесцветное кристаллическое вещество. Температура плавления 297 - 298 °C. Давление паров $4,6 \cdot 10^{- 4}\text{мПа}$ (при 25 °C). Плотность - 1,3989. Растворимость в воде при 20 °C (г/дм3): 0,16 (pH 4), 0,03 (pH 7, pH 10). Растворимость в органических растворителях при 20 °C (г/дм3): гептан < 0,01; ксилол - 0,13; метанол - 8,28; этилацетат - 1,49; ацетон - 2,43; н-октанол - 3,91. Коэффициент распределения н-октанол - вода $K_{ow}logP = 2,39$ (pH 7). Гидролитически стабилен. $pKa_{1}$ - 4,73, $pKa_{2}$ - 12,0.
<a id="p100013"></a>Краткая токсикологическая характеристика:
<a id="p100014"></a>Острая пероральная токсичность $(LD_{50})$ для крыс - 3100 мг/кг, мышей - 3600 мг/кг, для кроликов > 3800 мг/кг; острая дермальная токсичность $(LD_{50})$ для кроликов > 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность $(LC_{50})$ для крыс - > 0,5 мг/дм3 (4 ч).
<a id="p100015"></a>Область применения препарата
<a id="p100016"></a>Тиабендазол - системный фунгицид защитного и лечебного действия.


## 1. <a id="p100017"></a>Метрологические характеристики


<div align="center">

<a id="p100018"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

</div>


<a id="p100019"></a>Таблица 1

<a id="p100020"></a>Метрологические параметры


| <a id="p100021"></a>Анализируемый объект | <a id="p100022"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | <a id="p100023"></a>Показатель точности (граница относительной погрешности), $\pm \delta$ , %, P = 0,95 | <a id="p100024"></a>Стандартное отклонение повторяемости, $\sigma_{r}$ , % | <a id="p100025"></a>Предел повторяемости, r, % | <a id="p100026"></a>Предел воспроизводимости, R, % |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100027"></a>Семена рапса | <a id="p100028"></a>от 0,01 до 0,1 вкл. | <a id="p100029"></a>50 | <a id="p100030"></a>4,6 | <a id="p100031"></a>13 | <a id="p100032"></a>18 |
| <a id="p100033"></a>Масло рапса | <a id="p100034"></a>от 0,01 до 0,1 вкл. | <a id="p100035"></a>50 | <a id="p100036"></a>3,3 | <a id="p100037"></a>9 | <a id="p100038"></a>13 |


<a id="p100039"></a>Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 2.

<div align="right">

<a id="p100040"></a>Таблица 2

</div>



<table>
<colgroup><col width="13%"><col width="18%"><col width="18%"><col width="18%"><col width="18%"><col width="16%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100041"></a>Анализируемый объект</td><td colspan="5"><a id="p100042"></a>Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td><a id="p100043"></a>Предел обнаружения, мг/кг</td><td><a id="p100044"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td><a id="p100045"></a>Полнота извлечения вещества, %</td><td><a id="p100046"></a>Стандартное отклонение, S, %</td><td><a id="p100047"></a>Доверительный интервал среднего результата, +/-, %</td></tr>
<tr><td><a id="p100048"></a>Семена рапса</td><td><a id="p100049"></a>0,01</td><td><a id="p100050"></a>0,01 - 0,1</td><td><a id="p100051"></a>82,47</td><td><a id="p100052"></a>1,8</td><td><a id="p100053"></a>1,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100054"></a>Масло рапса</td><td><a id="p100055"></a>0,01</td><td><a id="p100056"></a>0,01 - 0,1</td><td><a id="p100057"></a>83,13</td><td><a id="p100058"></a>1,8</td><td><a id="p100059"></a>1,0</td></tr>
</table>



## 2. <a id="p100060"></a>Метод измерений


<a id="p100061"></a>Метод основан на определении тиабендазола с использованием капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором (ТИД) после извлечения вещества из анализируемых образцов семян и масла рапса - ацетонитрилом, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.

<div align="center">

<a id="p100062"></a>Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

</div>



## 3. <a id="p100063"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы



#### <a id="p100064"></a>3.1 Средства измерений



| <a id="p100065"></a>Газовый хроматограф "Agilent Technologies", снабженный термоионным детектором с пределом детектирования по малатиону $3,7 \cdot 10^{- 13}\text{гР}/\text{с}$ , предназначенный для работы с капиллярной колонкой | <a id="p100066"></a>Номер Госреестра 15118-07 |
| --- | --- |
| <a id="p100067"></a>Весы аналитические ВЛА-200 | <a id="p100068"></a>ГОСТ 24104-01 |
| <a id="p100069"></a>Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г | <a id="p100070"></a>ГОСТ 24104-01 |
| <a id="p100071"></a>Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2 | <a id="p100072"></a>[ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |
| <a id="p100073"></a>Меры массы | <a id="p100074"></a>ГОСТ 7328-01 |
| <a id="p100075"></a>Микрошприц типа SGE-Cromatek, вместимостью 10 мм3 | <a id="p100076"></a>Номер Госреестра 39206-08 |
| <a id="p100077"></a>Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3 | <a id="p100078"></a>[ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) |
| <a id="p100079"></a>Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100 и 250 см3 | <a id="p100080"></a>[ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |


<a id="p100081"></a>*Примечание.* Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100082"></a>3.2 Реактивы




| <a id="p100083"></a>Тиабендазол, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 98,8%, аттестованное значение погрешности +/- 1,2% (НПК "Блок-1") | <a id="p100084"></a>ГСО 7720-99 |
| --- | --- |
| <a id="p100085"></a>Гелий газообразный, высокой чистоты (99,999%) в баллонах | <a id="p100086"></a>ТУ 0271-001-45905715-02 |
| <a id="p100087"></a>Ацетонитрил для хроматографии, хч | <a id="p100088"></a>ТУ 6-09-14-2167-84 |
| <a id="p100089"></a>Вода для лабораторного анализа (деионизованная, бидистиллированная) | <a id="p100090"></a>[ГОСТ Р 52501-05](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) |
| <a id="p100091"></a>н-Гексан (гексан), для ВЭЖХ | <a id="p100092"></a>ТУ 6-09-06-657-84 |
| <a id="p100093"></a>Калий углекислый (карбонат калия, поташ), хч, прокаленный | <a id="p100094"></a>[ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76) |
| <a id="p100095"></a>Кальций хлористый (хлорид кальция), хч, насыщенный водный раствор | <a id="p100096"></a>[ГОСТ 450-77](https://bukva.ai/docs/gost-450-77) |
| <a id="p100097"></a>Кислота серная концентрированная, хч | <a id="p100098"></a>ГОСТ 4204-77 |
| <a id="p100099"></a>Натрий серно-кислый (сульфат натрия) безводный, хч | <a id="p100100"></a>[ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) |
| <a id="p100101"></a>Натрий углекислый (карбонат натрия), хч | <a id="p100102"></a>ГОСТ 83-79 |
| <a id="p100103"></a>Силикагель, "Silica gel 60" для колоночной хроматографии, 60-100 меш ("Serva") |  |
| <a id="p100104"></a>Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора) | <a id="p100105"></a>ТУ 6-09-4173-85 |
| <a id="p100106"></a>Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), хч | <a id="p100107"></a>[ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) |


<a id="p100108"></a>Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих выполнения [п. 7.1](#p100158) (очистка растворителей).


#### <a id="p100109"></a>3.3 Вспомогательные устройства, материалы



| <a id="p100110"></a>Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с | <a id="p100111"></a>ТУ 64-1-2851-78 |
| --- | --- |
| <a id="p100112"></a>Баня ультразвуковая фирмы "Донау" (Швейцария) |  |
| <a id="p100113"></a>Бумажные фильтры "красная лента", обеззоленные или фильтры из хроматографической бумаги Ватман 3ММ | <a id="p100114"></a>ТУ 2642-001-05015242-07 |
| <a id="p100115"></a>Воронка Бюхнера | <a id="p100116"></a>ГОСТ 9147-80 |
| <a id="p100117"></a>Воронка делительная вместимостью 250 и 1000 см3 | <a id="p100118"></a>[ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) |
| <a id="p100119"></a>Воронки стеклянные конусные типа В-36-80 ХС и В-56-80 ХС | <a id="p100120"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100121"></a>Генератор водорода, исполнение 10.400 (СКБ, "Хроматэк", Россия) |  |
| <a id="p100122"></a>Гомогенизатор |  |
| <a id="p100123"></a>Груша резиновая | <a id="p100124"></a>ТУ 9398-05-0576-9082-03 |
| <a id="p100125"></a>Колба Бунзена | <a id="p100126"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100127"></a>Колбы конические (плоскодонные) вместимостью 250 - 300 см3 | <a id="p100128"></a>ГОСТ 23932-90 |
| <a id="p100129"></a>Колбы круглодонные на шлифе (для упаривания) вместимостью 10 и 150 см3 | <a id="p100130"></a>[ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) |
| <a id="p100131"></a>Колонка стеклянная для препаративной хроматографии, длиной 25 см, внутренним диаметром 10 - 12 мм |  |
| <a id="p100132"></a>Компрессор фирмы "JUN AIR", Дания |  |
| <a id="p100133"></a>Насос водоструйный вакуумный | <a id="p100134"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100135"></a>Стаканы химические, вместимостью 100, 250 и 600 см3 | <a id="p100136"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100137"></a>Стекловата |  |
| <a id="p100138"></a>Стеклянные палочки |  |
| <a id="p100139"></a>Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30 |  |
| <a id="p100140"></a>Ротационный вакуумный испаритель B-169 фирмы Buchi, Швейцария |  |
| <a id="p100141"></a>Установка для перегонки растворителей |  |
| <a id="p100142"></a>Устройство каталитического дожига воздуха "Zero Air Generator" фирмы Parker, Великобритания |  |
| <a id="p100143"></a>Хроматографическая колонка капиллярная DB-1701, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм |  |


<a id="p100144"></a>*Примечание.* Допускается применение оборудования иных производителей с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100145"></a>Требования безопасности


<a id="p100146"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
<a id="p100147"></a>4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе на должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.
<a id="p100148"></a>4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), необходимо соблюдать "Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением", ПБ-03-576-03. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.


## 5. <a id="p100149"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100150"></a>К выполнению измерений допускают специалиста, имеющего квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе, освоившего данную методику и подтвердившего экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по [п. 13](#p100244).
<a id="p100151"></a>К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.


## 6. <a id="p100152"></a>Условия измерений


<a id="p100153"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- <a id="p100154"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100155"></a>выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100156"></a>Подготовка к выполнению измерений


<a id="p100157"></a>Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов, растворов внесения, установление градуировочной характеристики, приготовление смесей растворителей для очистки экстрактов на колонке, подготовка колонки с силикагелем, проверка хроматографического поведения тиабендазола на ней.

#### <a id="p100158"></a>7.1 Очистка органических растворителей


##### <a id="p100159"></a>7.1.1 Ацетонитрил

<a id="p100160"></a>Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм3 ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм3 ацетонитрила 10 г карбоната калия).

<div align="center">

<a id="p100161"></a>7.1.2. н-Гексан<br>
<a id="p100162"></a>Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

</div>


##### <a id="p100163"></a>7.1.3 Этилацетат

<a id="p100164"></a>7.1.3.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%. Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см3, растворяют в бидистиллированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.
<a id="p100165"></a>7.1.3.2. Очистка растворителя. Растворитель промывают последовательно 5%-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

#### <a id="p100166"></a>7.2 Приготовление растворов для градуировки и внесения

<a id="p100167"></a>7.2.1. Исходный раствор тиабендазола для градуировки (концентрация 100 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,01 г тиабендазола, растворяют в 50 - 70 см3 этилацетата, доводят до метки этим же растворителем, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 2 месяцев.
<a id="p100168"></a>7.2.2. Раствор N 1 тиабендазола для градуировки (концентрация 5,0 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 5,0 см3 исходного раствора тиабендазола для градуировки с концентрацией 100 мкг/см3 [(п. 7.2.1)](#p100167), доводят до метки этилацетатом, тщательно перемешивают.
<a id="p100169"></a>Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
<a id="p100170"></a>7.2.3. Раствор N 2 тиабендазола для внесения (концентрация 1,0 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 1,0 см3 исходного раствора тиабендазола для внесения с концентрацией 100 мкг/см3 [(п. 7.2.1)](#p100167), доводят до метки этилацетатом, тщательно перемешивают.
<a id="p100171"></a>Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
<a id="p100172"></a>Раствор N 2 используется для приготовления проб с внесением для оценки полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено".
<a id="p100173"></a>7.2.4. Рабочие растворы N 3 - 6 тиабендазола для градуировки (концентрация 0,05 - 0,5 мкг/см3). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают по 1,0, 2,0, 5,0 и 10 см3 раствора N 1 тиабендазола с концентрацией 5,0 мкг/см3 [(п. 7.2.2)](#p100168), доводят до метки этилацетатом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 3 - 6 с концентрацией тиабендазола 0,05, 0,1, 0,25 и 0,5 мкг/см3, соответственно.
<a id="p100174"></a>Растворы хранятся в холодильнике не более 14 дней.

#### <a id="p100175"></a>7.3 Установление градуировочной характеристики

<a id="p100176"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади хроматографического пика (мВ·с) от концентрации тиабендазола в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки N 3 - 6.
<a id="p100177"></a>В инжектор хроматографа вводят 2 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.3](#p100210). Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.

#### <a id="p100178"></a>7.4 Приготовление смесей гексан-этилацетат для очистки экстрактов на колонке с силикагелем

<a id="p100179"></a>7.4.1. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 9:1). В мерную колбу вместимостью 250 см3 помещают 225 см3 гексана и 25 см3 этилацетата, перемешивают.
<a id="p100180"></a>7.4.2. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 7:3). В мерную колбу вместимостью 250 см3 помещают 175 см3 гексана и 75 см3 этилацетата, перемешивают.
<a id="p100181"></a>7.4.3. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 1:1). В мерную колбу вместимостью 250 см3 помещают 125 см3 гексана и 125 см3 этилацетата, перемешивают.

#### <a id="p100182"></a>7.5 Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстрактов

<a id="p100183"></a>Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 10 - 12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 4 г силикагеля в 30 см3 гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента, на который помещают слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают смесями гексан-этилацетат в объемном соотношении 1:1, затем - 9:1, порциями по 40 см3, скорость прохождения растворителя 1 - 2 капли в секунду. Колонка готова к работе.

#### <a id="p100184"></a>7.6 Проверка хроматографического поведения тиабендазола на колонке с силикагелем

<a id="p100185"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,5 см3 раствора для внесения N 2 тиабендазола с концентрацией 1,0 мкг/см3 в этилацетате [(п. 7.2.3)](#p100170), упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Сухой остаток растворяют в 0,5 см3 этилацетата, помещают на ультразвуковую баню на 30 с, затем добавляют 4,5 см3 гексана, выдерживая еще 30 с на ультразвуковой бане и наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.5](#p100182). Колбу обмывают дважды смесью гексан-этилацетат (9:1, по объему) порциями по 3 см3, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку - 1 - 2 капли в секунду. Промывают колонку 40 см3 смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 9:1, 40 см3 смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 7:3, затем 50 см3 смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 1:1, элюат отбрасывают.
<a id="p100186"></a>Затем колонку промывают 70 см3 этилацетата со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Фракционно (по 10 см3) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 см3 этилацетата, анализируют содержание тиабендазола по [п. 9.3](#p100210).
<a id="p100187"></a>Фракции, содержащие тиабендазол, объединяют и вновь анализируют.
<a id="p100188"></a>Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.
<a id="p100189"></a>Примечание: Проверку хроматографического поведения тиабендазола следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.


## 8. <a id="p100190"></a>Отбор и хранение проб


<a id="p100191"></a>Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТ: рапс - [10852-86](https://bukva.ai/docs/3979) "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб", [10583-76](https://bukva.ai/docs/gost-10583-76-gosstandart-sssr) "Рапс. Требования при заготовках и поставках", масло - [52062-2003](https://bukva.ai/docs/pravila-gost-r-52062-2003) "Масло растительное. Правила приемки и методы отбора проб", [Р 53457-2009](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-53457-2009) "Масло рапсовое. Технические условия", "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (от 21.08.1979 N 2051-79).
<a id="p100192"></a>Семена подсушивают в темноте до постоянного веса и хранят в тканевых мешочках в сухом, защищенном от света месте при комнатной температуре не более 6 месяцев. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °C. Перед анализом образцы семян измельчают.
<a id="p100193"></a>Пробы масла (помещенные в стеклянные флаконы) хранят в холодильнике в темноте.


## 9. <a id="p100194"></a>Выполнение определения



#### <a id="p100195"></a>9.1 Семена рапса


##### <a id="p100196"></a>9.1.1 Экстракция

<a id="p100197"></a>Пробу семян рапса массой 25 г помещают в коническую колбу на 250 - 300 см3, добавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на аппарат для встряхивания на 30 мин.
<a id="p100198"></a>Пробам дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр "красная лента". В коническую колбу с пробой вносят новую порцию ацетонитрила объемом 30 см3 и повторно экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 15 мин, затем раствор фильтруют на воронке Бюхнера. Фильтр промывают ацетонитрилом порцией 20 см3.
<a id="p100199"></a>Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в делительную воронку на 250 см3 и подвергают очистке по [п. 9.1.2](#p100200).

##### <a id="p100200"></a>9.1.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

<a id="p100201"></a>К ацетонитрильному экстракту, полученному по [п. 9.1.1](#p100196) и помещенному в делительную воронку на 250 см3, добавляют 40 см3 гексана, интенсивно встряхивают в течение 2 - 3 мин. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и повторяют операцию очистки с новой порцией гексана объемом 30 см3.

<div align="center">

<a id="p100202"></a>Затем ацетонитрильный раствор переносят в колбу для упаривания на 150 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C. Сухой остаток подвергают дополнительной очистке на колонке с силикагелем по [п. 9.1.3](#p100203).

</div>


##### <a id="p100203"></a>9.1.3 Очистка экстракта на колонке с силикагелем

<div align="center">

<a id="p100204"></a>Остаток, полученный по [п. 9.1.2](#p100200), находящийся в круглодонной колбе, растворяют в 0,5 см3 этилацетата, помещают на ультразвуковую баню на 30 с, затем добавляют 4,5 см3 гексана, выдерживая еще 30 с на ультразвуковой бане. Раствор наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.5](#p100182). Колбу обмывают дважды смесью гексан-этилацетат (9:1, по объему) порциями по 3 см3, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку - 1 - 2 капли в секунду. Промывают колонку 40 см3 смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 9:1, 40 см3 смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 7:3, затем 50 см3 смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 1:1, элюат отбрасывают.<br>
<a id="p100205"></a>Тиабендазол элюируют с колонки 70 см3 этилацетата со скоростью 1 - 2 капли в секунду, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 150 см3, раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °C, остаток растворяют в 5 см3 этилацетата и анализируют на содержание тиабендазола по [п. 9.3](#p100210).

</div>


#### <a id="p100206"></a>9.2 Масло


##### <a id="p100207"></a>9.2.1 Экстракция

<a id="p100208"></a>Образец масла массой 25 г помещают в коническую колбу вместимостью 200 - 250 см3, растворяют в 75 см3 гексана, переносят в делительную воронку вместимостью 500 см3, добавляют 50 см3 ацетонитрила. Воронку интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой осторожно декантируют через бумажный фильтр, помещенный в конусную воронку, в химический стакан вместимостью 250 см3. Экстракцию повторяют новой порцией ацетонитрила объемом 50 см3.

<div align="center">

<a id="p100209"></a>Растворы объединяют, переносят в делительную воронку на 250 см3 и подвергают очистке в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем по [пп. 9.1.2](#p100200) и [9.1.3](#p100203).

</div>


#### <a id="p100210"></a>9.3 Условия хроматографирования

<div align="center">

<a id="p100211"></a>Газовый хроматограф, снабженный термоионным детектором.

</div>

<a id="p100212"></a>Колонка капиллярная DB-1701, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.
<a id="p100213"></a>Температура детектора: 310 °C, водород - 3 см3/мин, воздух - 60 см3/мин, makeup (водород + гелий) - 10 см3/мин;
<a id="p100214"></a>испарителя: 250 °C, режим Splitless (гелий): 30 см3/мин - 1 мин, gas saver: 15 см3/мин.
<a id="p100215"></a>Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 100 °C, выдержка 1 мин, нагрев колонки со скоростью 10 °C/мин до температуры 280 °C, выдержка 6 мин.

<div align="center">

<a id="p100216"></a>Скорость газа 1 (гелий): поток 1,2 см3/мин.<br>
<a id="p100217"></a>Хроматографируемый объем: 2 мм3.<br>
<a id="p100218"></a>Ориентировочное время выхода тибендазола ~ 17,68 мин.

</div>

<a id="p100219"></a>Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 1,0 нг.
<a id="p100220"></a>Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/см3, разбавляют этилацетатом не более, чем в 50 раз.


## 10. <a id="p100221"></a>Обработка результатов анализа


<div align="center">

<a id="p100222"></a>Содержание тиабендазола в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

</div>


<a id="p100223"></a> $X = \frac{C \cdot V}{m}$ , где

<a id="p100224"></a>C - концентрация тиабендазола, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;

<div align="center">

<a id="p100225"></a>V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;<br>
<a id="p100226"></a>m - масса анализируемого образца, г.

</div>



## 11. <a id="p100227"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100228"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

<a id="p100229"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r$ , где (1)

<div align="center">

<a id="p100230"></a> $X_{1}$ , $X_{2}$ - результаты параллельных определений, мг/кг;

</div>

<a id="p100231"></a>r - значение предела повторяемости [(табл. 1)](#p100020), при этом $r = 2,8\sigma_{r}$ .
<a id="p100232"></a>При невыполнении [условия (1)](#p100229) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 12. <a id="p100233"></a>Оформление результатов


<a id="p100234"></a>Результат анализа представляют в виде:

<div align="center">

<a id="p100235"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг}$ при вероятности P = 0,95, где

<a id="p100236"></a> $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;<br>
<a id="p100237"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

</div>


<a id="p100238"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100}$ , где

<a id="p100239"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100020)), %.
<a id="p100240"></a>Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100241"></a>"содержание тиабендазола в пробе семян и масле рапса менее 0,01 мг/кг" <*>.

<a id="p100242"></a>

---

<a id="p100243"></a><*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения тиабендазола в пробах семян и масла рапса, соответственно.


## 13. <a id="p100244"></a>Контроль качества результатов измерений


<div align="center">

<a id="p100245"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)-02](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

</div>


#### <a id="p100246"></a>13.1 Контроль стабильности градуировочной характеристики.

<a id="p100247"></a>Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
<a id="p100248"></a>При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание тиабендазола в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,1 до 1,0 мкг/см3.
<a id="p100249"></a>Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

<div align="center">

<a id="p100250"></a> $A = \frac{(X - C) \cdot 100}{C} \leq 2,26$ , где

<a id="p100251"></a>X - концентрация тиабендазола в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;<br>
<a id="p100252"></a>C - известная концентрация градуировочного раствора тиабендазола, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;<br>
<a id="p100253"></a>2,26 - погрешность градуировочной характеристики, %.

</div>

<a id="p100254"></a>Если величина расхождения (A) превышает 2,26%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов тиабендазола, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно [п. 7.3](#p100175).
<a id="p100255"></a>Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100256"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

<div align="center">

<a id="p100257"></a>Величина добавки $\text{С}_{\partial}$ должна удовлетворять условию:

<a id="p100258"></a> $\text{С}_{\partial} \geq \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X\prime}$ , где

</div>


<a id="p100259"></a> $\pm \Delta_{\text{л},X}( \pm \Delta_{\text{л},X\prime})$ - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно) мг/кг, при этом:

<div align="center">

<a id="p100260"></a> $\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta$ , где

<a id="p100261"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

</div>


<a id="p100262"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100}$ , где

<a id="p100263"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100020)), %.

<div align="center">

<a id="p100264"></a>Результат контроля процедуры $K_{\text{к}}$ рассчитывают по формуле:

<a id="p100265"></a> $K_{\text{к}} = \overline{X}\prime - \overline{X} - \text{С}_{\partial}$ , где

</div>


<a id="p100266"></a> $\overline{X}\prime$ , $\overline{X}$ , $\text{С}_{\partial}$ - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100227)) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

<div align="center">

<a id="p100267"></a>Норматив контроля K рассчитывают по формуле

<a id="p100268"></a> $K = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}}$ .

</div>


<a id="p100269"></a>Проводят сопоставление результата контроля процедуры $(K_{\text{к}})$ с нормативом контроля (K).
<a id="p100270"></a>Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

<div align="center">

<a id="p100271"></a> $|K_{\text{к}}| \leq K$ , (2)

<a id="p100272"></a>процедуру анализа признают удовлетворительной.

</div>

<a id="p100273"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100271) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении [условия (2)](#p100271) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
<a id="p100274"></a>13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
<a id="p100275"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R)

<div align="center">

<a id="p100276"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R$ , где (3)

</div>


<a id="p100277"></a> $X_{1}$ , $X_{2}$ - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;
<a id="p100278"></a>R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100020)), %.


## 14. <a id="p100279"></a>Разработчики


<div align="center">

<a id="p100280"></a>Ракитский В.Н., Юдина Т.В., Горячева Л.В. (ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора).

</div>




<a id="p100281"></a>

---