---
title: "\"МУК 4.1.2985-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств ацетамиприда в плодах и соке яблок методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.2985-12"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2985-12"
---

## "МУК 4.1.2985-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств ацетамиприда в плодах и соке яблок методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.2985-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств ацетамиприда в плодах и соке яблок методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 19.03.2012)

> [!IMPORTANT]
> Документ [введен](#p100002) в действие с 19 марта 2012 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**<br>
19 марта 2012 года

<a id="p100002"></a>Дата введения:

</div>

с момента утверждения


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АЦЕТАМИПРИДА**
**В ПЛОДАХ И СОКЕ ЯБЛОК МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ**
**ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="center">

**МУК 4.1.2985-12**

</div>


1. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22.12.2012 N 2).
2. <a id="p100007"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 19 марта 2012 г.
3. <a id="p100008"></a>Введены в действие с момента утверждения.

<div align="center">

4. <a id="p100009"></a>Введены впервые.

</div>


<a id="p100010"></a>Свидетельство о метрологической аттестации от 10.06.2011 N 01.5.04.009/01.00043/2011.
<a id="p100011"></a>Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количеств ацетамиприда в плодах и соке яблок в диапазоне концентраций 0,005 - 0,1 мг/кг.
<a id="p100012"></a>Название действующего вещества по ИСО: ацетамиприд.
<a id="p100013"></a>Структурная формула:

<a id="p100014"></a> ![рис. 1](https://i.bukva.ai/H4IXjmD1/img_0.png) 

<div align="center">

<a id="p100015"></a>Название действующего вещества по ИЮПАК: $(E) - N^{1} - [(6 - \text{хлор} - 3 - \text{пиридил})\text{метил}] - N^{2} - \text{циано} - N^{1} - \text{метилацетамидин}$ .<br>
<a id="p100016"></a>Молекулярная масса: 222,7.<br>
<a id="p100017"></a>Эмпирическая формула: $C_{10}H_{11}ClN_{4}$ .

</div>

<a id="p100018"></a>Химически чистое вещество представляет собой белый кристаллический порошок.
<a id="p100019"></a>Температура плавления: 98,9 °C.
<a id="p100020"></a>Давление пара: $<1 \times 10^{- 3}\text{м}Pa$ (25 °C).
<a id="p100021"></a>Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода: $K_{ow}logP = 0,80$ (25 °C).
<a id="p100022"></a>Растворимость в воде (мг/дм3, 25 °C): 4250.
<a id="p100023"></a>Растворимость в органических растворителях: растворим в ацетоне, метаноле, этаноле, дихлорметане, хлороформе, ацетонитриле и тетрагидрофуране.
<a id="p100024"></a>Стабилен в буферных при pH 4, 5, 7. Медленно разлагается при pH 9 и 45 °C. Устойчив к воздействию света.
<a id="p100025"></a>Слабое основание, $pK_{a}0,7$ .
<a id="p100026"></a>Краткая токсикологическая характеристика
<a id="p100027"></a>Острая оральная токсичность $LD_{50}$ 2148 мг/кг (крысы). При подкожном введении $LD_{50}$ 4166 мг/кг (кролики). Ингаляционная токсичность $LC_{50}$ более 3,0 мг на 1 дм3 воздуха (крысы, период наблюдения 4 ч). Практически не раздражает кожу и слизистую глаз у кроликов.
<a id="p100028"></a>Область применения
<a id="p100029"></a>Системный инсектицид - агонист никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, влияющий на синапсы центральной нервной системы насекомых.
<a id="p100030"></a>Механизм действия: трансламинарная активность контактного и желудочного действия.
<a id="p100031"></a>Используется для подавления развития тли Hemiptera, Thysanoptera и Lipidoptera посредством обработки почвы и листьев растений во фруктовых садах при нормах расхода 100 - 700 г/га.
<a id="p100032"></a>В России для ацетамиприда установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,01 мг/кг массы человека; ОДК в почве - 0,6 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,02 мг/дм3; МДУ (мг/кг) картофель и зерно пшеницы - 0,5, огурцы и томаты - 0,3.
<a id="p100033"></a>Нормативы для плодов и сока яблок не установлены.


## 1. <a id="p100034"></a>Метрологическая характеристика метода


<a id="p100035"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100036"></a>Таблица 1

<div align="center">

<a id="p100037"></a>Метрологические параметры

</div>



| <a id="p100038"></a>Диапазон измерений, массовая концентрация, мг/кг | <a id="p100039"></a>Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), $\sigma_{r}$ , % | <a id="p100040"></a>Показатель промежуточной прецизионности (относительное среднеквадратическое отклонение в условиях вариации факторов "время", "оператор" в одной лаборатории), $\sigma_{R_{\text{л}}}$ , % | <a id="p100041"></a>Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), $\sigma_{R}$ , % | <a id="p100042"></a>Показатель точности <*> (границы относительной погрешности при вероятности P = 0,95), $\pm \delta$ , % |
| --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100043"></a>Плоды яблок от 0,005 до 0,1 вкл. | <a id="p100044"></a>8 | <a id="p100045"></a>9 | <a id="p100046"></a>11 | <a id="p100047"></a>22 |
| <a id="p100048"></a>Сок яблок от 0,005 до 0,1 вкл. | <a id="p100049"></a>6 | <a id="p100050"></a>8 | <a id="p100051"></a>9 | <a id="p100052"></a>18 |


<div align="center">

<a id="p100053"></a>Таблица 2

<a id="p100054"></a>Полнота извлечения ацетамиприда, стандартное отклонение,<br>
доверительный интервал среднего результата<br>
для n = 20, P = 0,95

</div>



| <a id="p100055"></a>Анализируемый объект | <a id="p100056"></a>Предел обнаружения, мг/кг | <a id="p100057"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | <a id="p100058"></a>Среднее значение определения, % | <a id="p100059"></a>Стандартное отклонение, S | <a id="p100060"></a>Доверительный интервал среднего результата, +/-, % |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100061"></a>Плоды яблок | <a id="p100062"></a>0,005 | <a id="p100063"></a>0,005 - 0,1 | <a id="p100064"></a>89,9 | <a id="p100065"></a>9,63 | <a id="p100066"></a>4,53 |
| <a id="p100067"></a>Сок яблок | <a id="p100068"></a>0,005 | <a id="p100069"></a>0,005 - 0,1 | <a id="p100070"></a>85,8 | <a id="p100071"></a>4,31 | <a id="p100072"></a>2,02 |



## 2. <a id="p100073"></a>Метод измерения


<div align="center">

<a id="p100074"></a>Методика основана на определении ацетамиприда методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его экстракции водным ацетоном и очисткой проб перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на концентрирующем патроне, заполненном силикагелем.

</div>

<a id="p100075"></a>Идентификация ацетамиприда проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.
<a id="p100076"></a>Полнота извлечения ацетамиприда, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для n = 20, P = 0,95.
<a id="p100077"></a>Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.


## 3. <a id="p100078"></a>Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы



#### <a id="p100079"></a>3.1 Средства измерений



| <a id="p100080"></a>Жидкостный хроматограф "ACQUITY" фирмы "Waters" с быстросканирующим УФ-детектором, снабженным дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки |  |
| --- | --- |
| <a id="p100081"></a>Весы аналитические ВЛА-200 | <a id="p100082"></a>ГОСТ 24104-01 |
| <a id="p100083"></a>Весы технические ВЛКТ-500 | <a id="p100084"></a>ГОСТ 24104-01 |
| <a id="p100085"></a>Колбы мерные на 10, 100 и 1000 см3 | <a id="p100086"></a>ГОСТ 23932-90 |
| <a id="p100087"></a>Микродозаторы Ленпипет переменного объема от 200 до 1000 мм3 и от 1 до 5 см3 | <a id="p100088"></a>ТУ 9452-002-33189998-02 |
| <a id="p100089"></a>Пипетки градуированные | <a id="p100090"></a>[ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) |
| <a id="p100091"></a>Цилиндры мерные на 50 и 100 см3 | <a id="p100092"></a>ГОСТ 23932-90 |


<a id="p100093"></a>*Примечание.* Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными характеристиками.


#### <a id="p100094"></a>3.2 Реактивы



| <a id="p100095"></a>Ацетамиприд с содержанием основного вещества 100% (Nippon Soda Co., Ltd.) |  |
| --- | --- |
| <a id="p100096"></a>Ацетонитрил для ВЭЖХ, "В-230НМ" или хч | <a id="p100097"></a>ТУ 6-09-3534-87 |
| <a id="p100098"></a>Ацетон, ОП-2 ОСЧ 9-5 | <a id="p100099"></a>ТУ 2633-039-4449317 |
| <a id="p100100"></a>Вода бидистиллированная, деионизированная | <a id="p100101"></a>ГОСТ 6709-79 |
| <a id="p100102"></a>Гексан, хч | <a id="p100103"></a>ТУ 2631-003-05807999-98 |
| <a id="p100104"></a>Кислота ортофосфорная, хч | <a id="p100105"></a>ГОСТ 6552-80 |
| <a id="p100106"></a>Метилен хлористый, хч | <a id="p100107"></a>ТУ 2631-019-44493179-98<br>с изм. 1, 2, 3 |
| <a id="p100108"></a>Натрий гидроокись, хч | <a id="p100109"></a>ГОСТ 4238-77 |
| <a id="p100110"></a>Сульфат натрия безводный, хч | <a id="p100111"></a>[ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) |
| <a id="p100112"></a>Хлорид натрия, чда | <a id="p100113"></a>ГОСТ 4233-77 |
| <a id="p100114"></a>Этилацетат, хч, ОКП 26 3471 5023 09 | <a id="p100115"></a>[ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) |


<div align="center">

<a id="p100116"></a>*Примечание.* Допускается использование реактивов с аналогичной квалификацией.

</div>



#### <a id="p100117"></a>3.3 Вспомогательные устройства и материалы



<table>
<colgroup><col width="61%"><col width="39%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100118"></a>Аналитическая колонка ACQUITY UPLC BEH C18 (100 x 2,1) мм, 1,7 мкм (Waters)</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100119"></a>Бидистиллятор</td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100120"></a><a id="p100121"></a>Ванна ультразвуковая "Сапфир", УЗВ-1,3<br>ГОСТ Р МЭК 60335-2-15-98</td></tr>
<tr><td><a id="p100122"></a>Вакуумный манипулятор для работы с патронами для твердофазной экстракции (Waters, кат. N WAT 200677).</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100123"></a>Водоструйный насос</td><td><a id="p100124"></a>ГОСТ 10696-75</td></tr>
<tr><td><a id="p100125"></a>Воронка Бюхнера</td><td><a id="p100126"></a>ГОСТ 0147</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100127"></a><a id="p100128"></a>Воронки делительные, вместимостью 100, 250 см3<br>ГОСТ 8613-75</td></tr>
<tr><td><a id="p100129"></a>Воронки лабораторные В-75-110</td><td><a id="p100130"></a>ГОСТ 25336-82</td></tr>
<tr><td><a id="p100131"></a>Колба Бунзена</td><td><a id="p100132"></a>ГОСТ 5614-75</td></tr>
<tr><td><a id="p100133"></a>Патроны, заполненные силикагелем 60 (Merck) 0,5 г</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100134"></a>Ротационный вакуумный испаритель фирмы BÜCHI , мод. R 205 (Швейцария)</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100135"></a>Фильтры бумажные "красная лента"</td><td><a id="p100136"></a>ТУ 6.091678-86</td></tr>
<tr><td></td><td><a id="p100137"></a>Примечание. Допускается использование другого вспомогательного оборудования иных производителей с аналогичными техническими характеристиками.</td></tr>
<tr><td></td><td><a id="p100138"></a>4. Требования безопасности</td></tr>
</table>


<a id="p100139"></a>4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
<a id="p100140"></a>При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.
<a id="p100141"></a>4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".


## 5. <a id="p100142"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100143"></a>Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по [п. 13](#p100222).


## 6. <a id="p100144"></a>Условия измерений


<a id="p100145"></a>При выполнении измерений выполняют следующие условия:
- <a id="p100146"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100147"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100148"></a>Подготовка к определению



#### <a id="p100149"></a>7.1 Кондиционирование колонки

<a id="p100150"></a>Перед началом анализа колонку (Acquity BEH C18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.

#### <a id="p100151"></a>7.2 Приготовление растворов

<a id="p100152"></a>7.2.1. Приготовление 0,005%-го раствора ортофосфорной кислоты: (0,5 +/- 0,01) г 98%-й ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 1 дм3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки. Перемешивают.
<a id="p100153"></a>7.2.2. Приготовление 2 М раствора хлорида натрия: в мерную колбу вместимостью 1 дм3 помещают 117 г хлорида натрия. Растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки. Перемешивают.
<a id="p100154"></a>7.2.3. Приготовление 0,01 М раствора гидроксида натрия: в мерную колбу вместимостью 1 дм3 помещают 0,4 г гидроксида натрия. Растворяют в 0,5 дм3 бидистиллированной воды и доводят объем до метки. Перемешивают.
<a id="p100155"></a>7.2.4. Для приготовления подвижной фазы: смешивают ацетонитрил и 0,005 М раствор ортофосфорной кислоты в соотношении 25:75 по объему, используя мерные цилиндры.

##### <a id="p100156"></a>7.2.5 Приготовление элюентов для твердофазной экстракции:

<a id="p100157"></a>Элюент 1: В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 25 см3 гексана и доводят объем до метки этилацетатом. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
<a id="p100158"></a>Элюент 2: В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 см3 гексана и доводят объем до метки этилацетатом. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.

#### <a id="p100159"></a>7.3 Приготовление основного и градуировочных растворов

<a id="p100160"></a>7.3.1. Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/см3: точную навеску ацетамиприда (50 +/- 0,5) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки тем же растворителем.

<div align="center">

<a id="p100161"></a>Градуировочные растворы ацетамиприда с концентрациями 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему основного раствора подвижной фазы.

</div>

<a id="p100162"></a>7.3.2. Раствор N 1 с концентрацией ацетамиприда 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,2 см3 основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100163"></a>7.3.3. Раствор N 2 с концентрацией ацетамиприда 0,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 5 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100164"></a>7.3.4. Раствор N 3 с концентрацией ацетамиприда 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 2,0 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100165"></a>7.3.5. Раствор N 4 с концентрацией ацетамиприда 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 1,0 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100166"></a>7.3.6. Раствор N 5 с концентрацией ацетамиприда 0,05 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 0,5 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100167"></a>Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение месяца, градуировочные растворы - в течение недели.
<a id="p100168"></a>При изучении полноты определения ацетамиприда в плодах и соке яблок используют ацетонитрильные растворы ацетамиприда. Растворы с концентрациями 1,0 и 10,0 мкг/см3 готовят из основного раствора с концентрацией 0,5 мг/см3 методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.

#### <a id="p100169"></a>7.4 Построение градуировочного графика

<a id="p100170"></a>Для установления градуировочной характеристики (площадь пика - концентрация ацетамиприда в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации ацетамиприда в градуировочном растворе.
<a id="p100171"></a>Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии:

<div align="center">

<a id="p100172"></a>C = KS, где

<a id="p100173"></a>S - площадь пика градуировочного раствора.

</div>

<a id="p100174"></a>Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
<a id="p100175"></a>Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
<a id="p100176"></a>Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

<div align="center">

<a id="p100177"></a> $\frac{|C - C_{\text{к}}|}{C} \cdot 100 \leq \lambda_{\text{контр}.}$ , где

</div>


<a id="p100178"></a>C - аттестованное значение массовой концентрации ацетамиприда в градуировочном растворе;
<a id="p100179"></a> $C_{\text{к}}$ - результат контрольного измерения массовой концентрации ацетамиприда в градуировочном растворе;
<a id="p100180"></a> $\lambda_{\text{контр}.}$ - норматив контроля градуировочного коэффициента, % ( $\lambda_{\text{контр}.} = 10\%$ при P = 0,95).

#### <a id="p100181"></a>7.5 Подготовка концентрирующих патронов Силикагель 60

<a id="p100182"></a>Непосредственно перед употреблением через патрон пропускают 2 см3 элюата 1.


## 8. <a id="p100183"></a>Отбор проб и хранение


<a id="p100184"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.1979) или в соответствии с [ГОСТ 27572-87](https://bukva.ai/docs/gost-27572-87) "Яблоки свежие для промышленной переработки".
<a id="p100185"></a>Плоды яблок хранят до анализа в морозильной камере при температуре -18 °C. Пробы сока хранят в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 3 суток, при температуре -18 °C - в течение месяца (в пластиковых бутылях).


## 9. <a id="p100186"></a>Проведение определения



#### <a id="p100187"></a>9.1 Определение ацетамиприда в соке яблок

<a id="p100188"></a>На воронке Бюхнера фильтруют 20 см3 сока и доводят объем фильтрата до 100 см3 водой. Полученный раствор помещают в делительную воронку вместимостью 250 см3 и промывают двумя порциями гексана по 25 см3. Органический слой отделяют и отбрасывают. К водному остатку прибавляют 50 см3 2 М раствора хлорида натрия и экстрагируют ацетамиприд 25 см3 хлористого метилена, встряхивая воронку в течение 2 мин. Отделяют нижний органический слой и дважды повторяют экстракцию. Объединенный экстракт промывают 20 см3 0,01 М раствора гидроксида натрия, водный слой отделяют и отбрасывают, а органический пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1,5 см3 этилацетата, прибавляют 0,5 см3 гексана и количественно переносят пробу в подготовленный концентрирующий патрон Силикагель 60. Промывают 8 см3 элюента 1. Промывку отбрасывают. Ацетамиприд элюируют 10 см3 элюента 2. Элюат упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и 10 мм3 полученного раствора вводят в хроматограф.

#### <a id="p100189"></a>9.2 Определение ацетамиприда в плодах яблок

<a id="p100190"></a>В коническую колбу вместимостью 250 см3 помещают 20 г измельченных плодов, прибавляют 10 см3 воды. 40 см3 ацетона и экстрагируют в течение 10 мин в ультразвуковой ванне. Суспензию фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют. Объединенный экстракт упаривают на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C до полного удаления ацетона. Объем водного остатка доводят водой до 100 см3 и далее обрабатывают пробу по [п. 9.1](#p100187).

#### <a id="p100191"></a>9.3 Условия хроматографирования

<a id="p100192"></a>Ультраэффективный жидкостный хроматограф "ACQUITY" фирмы Waters с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка ACQUITY UPLC BEH C18 (2,1 x 100) мм, 1,7 мкм (Waters). Температура колонки (30 +/- 1) °C. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 25:75. Скорость потока элюента: 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 245 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3.
<a id="p100193"></a>Время удерживания ацетамиприда (3,4 +/- 0,1) мин.
<a id="p100194"></a>Линейный диапазон детектирования сохраняется в интервале концентраций 0,05 - 1,0 мкг/см3.


## 10. <a id="p100195"></a>Обработка результатов анализа


<a id="p100196"></a>Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание ацетамиприда в плодах и соке яблок (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

<div align="center">

<a id="p100197"></a> $X = \frac{S_{x} \cdot K \cdot V \cdot 100}{P \cdot f}$ , где

</div>


<a id="p100198"></a> $S_{x}$ - площадь пика ацетамиприда на хроматограмме испытуемого образца, мм2 (AU);
<a id="p100199"></a>K - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;
<a id="p100200"></a>V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3:
<a id="p100201"></a>P - навеска анализируемого образца, г;

<div align="center">

<a id="p100202"></a>f - полнота извлечения ацетамиприда, приведенная в [табл. 2](#p100054), %.

</div>

<a id="p100203"></a>Содержание остаточных количеств ацетамиприда в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
<a id="p100204"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор ацетамиприда с концентрацией 1,0 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.


## 11. <a id="p100205"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100206"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

<div align="center">

<a id="p100207"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r$ , где (1)

</div>


<a id="p100208"></a> $X_{1}$ и $X_{2}$ - результаты параллельных определений, мг/кг;
<a id="p100209"></a>r - значение предела повторяемости $(r = 2,8\sigma_{r})$ .
<a id="p100210"></a>При невыполнении [условия (1)](#p100207) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 12. <a id="p100211"></a>Оформление результатов


<div align="center">

<a id="p100212"></a>Результат анализа представляют в виде:

</div>


<a id="p100213"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг}$ при вероятности P = 0,95, где

<a id="p100214"></a> $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
<a id="p100215"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<div align="center">

<a id="p100216"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100}$ , где

</div>


<a id="p100217"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100218"></a>В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100219"></a>"содержание ацетамиприда в пробах плодов и сока яблок менее 0,005 мг/кг" <*>.

<a id="p100220"></a>

---

<a id="p100221"></a><*> - 0,005 мг/кг - предел обнаружения ацетамиприда в пробах плодов и соке яблок.


## 13. <a id="p100222"></a>Контроль качества результатов измерений


<a id="p100223"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100224"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100225"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
<a id="p100226"></a>Величина добавки $C_{\text{д}}$ должна удовлетворять условию:

<div align="center">

<a id="p100227"></a> $C_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X'}$ , где

</div>


<a id="p100228"></a> $\pm \Delta_{\text{л},X}( \pm \Delta_{\text{л},X'})$ - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг; при этом

<a id="p100229"></a> $\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta$ , где

<div align="center">

<a id="p100230"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100231"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100}$ , где

</div>


<a id="p100232"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100233"></a>Результат контроля процедуры $K_{\text{к}}$ рассчитывают по формуле:

<div align="center">

<a id="p100234"></a> $K_{\text{к}} = X\prime - X - C_{\text{д}}$ , где

</div>


<a id="p100235"></a>X', X, $C_{\text{д}}$ - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100205)) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
<a id="p100236"></a>Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

<a id="p100237"></a> $K = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}}$ 

<a id="p100238"></a>Проводят сопоставление результата контроля процедуры $(K_{\text{к}})$ с нормативом контроля (K).
<a id="p100239"></a>Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

<div align="center">

<a id="p100240"></a> $|K_{\text{к}}| \leq K$ , (2)

</div>


<a id="p100241"></a>процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100242"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100240) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении [условия (2)](#p100240) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
<a id="p100243"></a>13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
<a id="p100244"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

<div align="center">

<a id="p100245"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R$ , где (3)

</div>


<a id="p100246"></a> $X_{1}$ и $X_{2}$ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
<a id="p100247"></a>R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.


## 14. <a id="p100248"></a>Разработчики


<div align="center">

<a id="p100249"></a>Долженко В.И., Цибульская И.А., Журкович И.К., Луговкина Н.В., Ковров Н.Г. (ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург).

</div>




<a id="p100250"></a>

---