МУК 4.1.2931-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств диметоморфа в воде, семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 12 июля 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
12 июля 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДИМЕТОМОРФА В ВОДЕ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
с момента утверждения
1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 № 1).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.
3. Введены в действие с момента утверждения.
Свидетельство о метрологической аттестации № 0074.28.01.11 от 02.03.2011.
Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения массовых концентраций диметоморфа в воде, семенах и масле рапса в диапазоне 0,001 — 0,01 мг/куб. дм и 0,01 — 0,1 мг/кг соответственно.
(E,Z)-4-[3-(4-(хлорфенил)-3-(3,4-диметоксифенил)акрилоил]морфолин (IUPAC).
Структурная формула (не приводится).
C H ClNO . 21 22 4
Смесь (E)- и (Z)-изомеров в соотношении 1:1.
Бесцветное кристаллическое вещество без запаха. Температура плавления 127 — 148 °C; (E)-изомер — 135,7 — 137,5 °C, (Z)-изомер — 169,2 — 170,2 °C. -4 Давление паров при 25 °C: (E)-изомер — 9,7 x 10 мПа, (Z)-изомер — -3
1,0 x 10 мПа. Растворимость в органических растворителях смеси (E)- и (Z)-изомеров (г/куб. дм): гексан - 0,11; метанол - 39; этилацетат - 48,3; толуол - 49,5; ацетон - 100; дихлорметан - 461. Растворимость в воде при 20 °C (мг/куб. дм): 19 (pH 5), 18 (pH 7), 16 (pH 9). Коэффициент распределения н-октанол-вода (20 °C) K log P = 2,63 (E)-изомер; 2,73
ow
(Z)-изомер. Гидролитически и термически стабилен при нормальных условиях. Устойчив более 5 лет в темноте. (E)- и (Z)-изомеры на солнечном свету
подвержены взаимопревращению.
Краткая токсикологическая характеристика: острая пероральная токсичность (LD ): для крыс 3500 - 4300 мг/кг, мышей 3700 - 5000 мг/кг;
50
острая дермальная токсичность (LD ) для крыс > 5000 мг/кг; острая 50 ингаляционная токсичность (LC ) для крыс > 4,2 мг/куб. дм (4 ч). 50
Область применения препарата: диметоморф — системный фунгицид для борьбы с заболеваниями, вызываемыми оомицетами, особенно с возбудителями милдью винограда и фитофтороза картофеля и томатов.
1. Метрологические характеристики
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/куб. дм, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Вода | от 0,001 до 0,01 вкл. | 50 | 3,6 | 10 | 14 |
| Семена рапса | от 0,01 до 0,1 вкл. | 50 | 3,8 | 11 | 15 |
| Масло рапса | от 0,01 до 0,1 вкл. | 50 | 3,2 | 9 | 13 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 2.
| Анализируемый | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| объект | Предел обнаружения, мг/куб. дм, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/куб. дм, мг/кг | Полнота извлечения вещества, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % |
| Вода | 0,001 | 0,001 — 0,01 | 88,11 | 1,7 | 3,5 |
| Семена рапса | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 82,29 | 1,5 | 3,4 |
| Масло рапса | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 82,87 | 1,5 | 3,4 |
2. Метод измерений
Метод основан на определении диметоморфа с использованием капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с электронозахватным детектором (ЭЗД) после извлечения вещества из анализируемых образцов воды — дихлорметаном, семян и масла рапса — ацетонитрилом, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с флорисилом.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Газовый хроматограф «Кристалл-2000М», снабженный электронозахватным детектором с пределом детектирования -14 по Линдану 3,5 x 10 г/с, предназначенный для работы с капиллярной колонкой Номер Госреестра 14516-08
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104-2001
Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г ГОСТ 24104-2001
Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2 ГОСТ 1770-74
Микрошприц типа SGE-Cromatek вместимостью 10 куб. мм Номер Госреестра 39206-08
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см ГОСТ 29227-91
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100, 250, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Диметоморф, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 98,2%, аттестованное значение погрешности +/- 0,4% (НПК «Блок-1») СОП 76-07
Азот газообразный нулевой, марка А
(99,999%) в баллонах ТУ 6-21-39-96 Ацетонитрил для хроматографии, х.ч. ТУ 6-09-14-2167-84
Вода для лабораторного анализа (деионизованная, бидистиллированная) ГОСТ Р 52501-2005
н-Гексан (гексан), для ВЭЖХ ТУ 6-09-06-657-84
Калий углекислый (карбонат калия, поташ), х.ч., прокаленный ГОСТ 4221-76
Кальций хлористый (хлорид кальция), х.ч., насыщенный водный раствор ГОСТ 450-77
Кислота серная концентрированная, х.ч. ГОСТ 4204-77
Метилен хлористый (дихлорметан), х.ч. ГОСТ 12794-80
Натрий сернокислый (сульфат натрия) безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрий углекислый (карбонат натрия), х.ч. ГОСТ 83-79
Флорисил, для колоночной хроматографии (60 — 100 меш) фирм «SERVA», «MERK» (Германия) или аналогичный
Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора) ТУ 6-09-4173-85
Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), х.ч. ГОСТ 22300-76
Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих выполнения п. 7.1 (очистка растворителей).
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с ТУ 64-1-2851-78
Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)
Бумажные фильтры «красная лента», обеззоленные или фильтры из хроматографической бумаги Ватман 3ММ ТУ 2642-001-05015242-07
Воронка делительная вместимостью 250 и 1000 куб. см ГОСТ 9737-93
Воронки стеклянные конусные типа В-36-80 ХС и В-56-80 ХС ГОСТ 25336-82
Груша резиновая ТУ 9398-05-0576-9082-2003
Колбы конические (плоскодонные) вместимостью 100, 250 — 300 куб. см ГОСТ 23932-90
Колбы круглодонные на шлифе (для упаривания) вместимостью 150 куб. см ГОСТ 9737-93
Колонка стеклянная для препаративной хроматографии длиной 25 см, внутренним диаметром 10 — 12 мм
Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 25336-82
Стаканы химические вместимостью 100, 250 и 600 куб. см ГОСТ 25336-82
Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30
Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария
Установка для перегонки растворителей
Хроматографическая колонка капиллярная DB-1701 длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм
Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004-90.
4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/кв. см), необходимо соблюдать «Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением», ПБ-03-576-03. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалиста, имеющего квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе, освоившего данную методику и подтвердившего экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов, растворов внесения, установление градуировочной характеристики, приготовление смесей растворителей для очистки экстрактов на колонке, подготовка колонки с флорисилом, проверка хроматографического поведения диметоморфа на ней.
7.1. Очистка органических растворителей
7.1.1 Ацетонитрил
Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 куб. дм ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 куб. дм ацетонитрила 10 г карбоната калия).
Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом калия.
7.1.3 Дихлорметан и этилацетат
7.1.3.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%. Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 куб. см, растворяют в бидистиллированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.
7.1.3.2. Очистка растворителей. Каждый растворитель промывают последовательно 5%-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.
7.2. Приготовление градуировочных растворов
7.2.1 Исходный раствор диметоморфа для градуировки (концентрация 200 мкг/куб. см)
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г диметоморфа, растворяют в 50 — 70 куб. см этилацетата доводят до метки этим же растворителем, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.
7.2.2 Раствор № 1 диметоморфа для градуировки (концентрация 20 мкг/куб. см)
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10,0 куб. см исходного раствора диметоморфа для градуировки с концентрацией 200 мкг/куб. см (п. 7.2.1), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают.
Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
7.2.3. Рабочие растворы № 2 — 5 диметоморфа для градуировки (концентрация 0,2 — 2,0 мкг/куб. см)
В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0, 2,5, 5,0 и 10 куб. см раствора № 1 диметоморфа с концентрацией 20 мкг/куб. см (п. 7.2.2), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 5 с концентрацией диметоморфа 0,2, 0,5, 1,0 и 2,0 мкг/куб. см соответственно.
Растворы хранятся в холодильнике не более 14 дней.
7.3. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость суммы площадей хроматографических пиков E- и Z-изомеров (мВ x с) от концентрации диметоморфа в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки № 2 — 5.
В инжектор хроматографа вводят 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.
Градуировочную характеристику проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значение суммы площадей отличается более чем на 12% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.
7.4. Приготовление смесей гексан-этилацетат для очистки экстрактов на колонке с флорисилом
7.4.1. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 9:1). В мерную колбу вместимостью 250 куб. см помещают 225 куб. см гексана и 25 куб. см этилацетата, перемешивают.
7.4.2. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 7:3). В мерную колбу вместимостью 250 куб. см помещают 175 куб. см гексана и 75 куб. см этилацетата, перемешивают.
7.4.3. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 1:1). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 50 куб. см гексана и 50 куб. см этилацетата, перемешивают.
7.5. Приготовление растворов внесения
7.5.1. Исходный раствор диметоморфа для внесения (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г диметоморфа, растворяют в 50 — 70 куб. см ацетонитрила, доводят до метки этим же растворителем, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.
7.5.2. Раствор № 1 диметоморфа для внесения (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10,0 куб. см исходного раствора диметоморфа для внесения с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.2.2), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают.
Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
7.6. Подготовка колонки с флорисилом для очистки экстрактов
Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 10 — 12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 4 г флорисила в 30 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента, на который помещают слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают смесями гексан-этилацетат в объемном соотношении 7:3, затем — 9:1, порциями по 30 куб. см, скорость прохождения растворителя 1 — 2 кап./с. Колонка готова к работе.
7.7. Проверка хроматографического поведения диметоморфа на колонке с флорисилом
В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,5 куб. см раствора № 1 диметоморфа с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.5.2), упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Сухой остаток растворяют в 3 куб. см смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему), помещая на ультразвуковую баню на 40 — 60 с, и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.6. Колбу обмывают дважды этой же смесью растворителей, порциями по 3 куб. см, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку — 1 - 2 кап./с. Промывают колонку 30 куб. см смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 9:1, затем 100 куб. см смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 7:3, элюат отбрасывают.
Затем колонку промывают 60 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 — 2 кап./с. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 2 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему), анализируют содержание диметоморфа по п. 9.4.
Фракции, содержащие диметоморф, объединяют и вновь анализируют.
Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.
Примечание: Проверку хроматографического поведения диметоморфа следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
8. Отбор в хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТами: вода - ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», рапс - ГОСТ 10852-6 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 10583-76 «Рапс. Требования при заготовках и поставках», масло - ГОСТ 52062-2003 «Масло растительное. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ Р 53457-2009 «Масло рапсовое. Технические условия», «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79).
Отобранные пробы воды хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более недели. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °C. Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр.
Семена подсушивают в темноте до постоянного веса и хранят в тканевых мешочках в сухом, защищенном от света месте при комнатной температуре не более 6 месяцев. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °C. Перед анализом образцы семян измельчают.
Пробы масла (помещенные в стеклянные флаконы) хранят в холодильнике в темноте.
9. Выполнение определения
9.1. Вода
9.1.1. Экстракция
Образец отфильтрованной воды объемом 400 куб. см помещают в делительную воронку объемом 1000 куб. см, добавляют 75 куб. см дихлорметана, делительную воронку встряхивают в течение двух минут. После полного разделения слоев нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу на 250 куб. см. Повторяют экстракцию дважды, используя по 50 куб. см дихлорметана.
Объединенную органическую фракцию упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C. Сухой остаток подвергают дополнительной очистке по п. 9.1.2.
9.1.2. Очистка экстракта на колонке с флорисилом
Остаток, полученный по п. 9.1.2, находящийся в круглодонной колбе, растворяют в 0,5 куб. см этилацетата, помещают на ультразвуковую баню на 30 с, затем добавляют 4,5 куб. см гексана, выдерживая еще 1 мин. на ультразвуковой бане. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.6. Колбу обмывают дважды смесью гексан-этилацетат (9:1, по объему) порциями по 3 куб. см, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку — 1 - 2 кап./с. Промывают колонку 50 куб. см гексана, 30 куб. см смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 9:1, затем 100 куб. см смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 7:3, элюат отбрасывают.
Диметоморф элюируют с колонки 60 куб. см смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 1:1 со скоростью 1 — 2 кап./с, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см, раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °C, остаток растворяют в 2 куб. см (пробы воды) и 1 куб. см (пробы семян и масла рапса) смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) и анализируют на содержание диметоморфа по п. 9.4.
9.2. Семена рапса
9.2.1. Экстракция
Пробу семян рапса массой 20 г помещают в коническую колбу на 250 — 300 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и помещают на аппарат для встряхивания на 30 мин.
Пробам дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр «красная лента». В коническую колбу с пробой вносят новую порцию ацетонитрила объемом 30 куб. см и повторно экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 20 мин., затем раствор фильтруют на воронке Бюхнера. Фильтр промывают ацетонитрилом порцией 20 куб. см.
Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в делительную воронку на 250 куб. см и подвергают очистке по п. 9.2.2.
9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
К ацетонитрильному экстракту, полученному по п. 9.2.1 и помещенному в делительную воронку на 250 куб. см, добавляют 30 куб. см гексана, интенсивно встряхивают в течение 2 — 3 мин. После полного разделения слоев, верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и повторяют операцию очистки с новой порцией гексана объемом 30 куб. см.
Затем ацетонитрильный раствор переносят в колбу для упаривания на 150 куб. см, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C. Сухой остаток подвергают дополнительной очистке на колонке с флорисилом по п. 9.1.2.
9.3. Масло
9.3.1 Экстракция
Образец масла массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 200 — 250 куб. см, растворяют в 100 куб. см гексана, переносят в делительную воронку вместимостью 500 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила. Воронку интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой осторожно декантируют через бумажный фильтр, помещенный в конусную воронку, в химический стакан вместимостью 250 куб. см. Экстракцию повторяют новой порцией ацетонитрила объемом 30 куб. см.
Растворы объединяют, переносят в делительную воронку на 250 куб. см и подвергают очистке в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с флорисилом по п. п. 9.2.2 и 9.1.2.
9.4. Условия хроматографирования
Газовый хроматограф, снабженный электронозахватным детектором.
Колонка капиллярная DB-1701 длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.
Температура термостата колонки программированная. Начальная температура — 130 °C, выдержка 1 мин., нагрев колонки со скоростью 25 градусов в минуту до температуры 280 °C, выдержка 16 мин.
Скорость газа 1 (азот): давление 80 кПа, 33,12 см/с, поток 1,625 куб. см/мин.
Газ 2 (азот): деление потока 1:3; сброс 6,9 куб. см/мин.
Хроматографируемый объем: 1 куб. мм.
Ориентировочное время выхода диметоморфа:
Линейный диапазон детектирования: 0,2 — 2,0 нг.
Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 2,0 мкг/куб. см, разбавляют смесью гексан-этилацетат (1:1, по объему, не более чем в 50 раз.
10. Обработка результатов анализа
Содержание диметоморфа в пробе (X, мг/куб. дм, мг/кг) рассчитывают по формуле:
C x V
C — концентрация диметоморфа, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной суммы площадей хроматографических пиков Z- и E-изомеров, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m — масса (объем) анализируемого образца, г (куб. см).
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений, мг/куб. дм, мг/кг; 1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности P = 0,95,
X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
дельта x X
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание диметоморфа в пробе воды — менее 0,001 мг/куб. дм, семян и масла рапса — 0,01 мг/кг» <*>.
<*> — 0,001 мг/куб. дм, 0,01 мг/кг — предел обнаружения диметоморфа в пробах воды, семян и масла рапса, соответственно.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X' где: +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой), мг/куб. дм, мг/кг, при этом:
где: ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
дельта x X
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Контрольный параметр процедуры (K ) рассчитывают по формуле: к
_ _ K = X' - X - C , к д _ _ где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/куб. дм, мг/кг;
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ . л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию (2):
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости 1 2
(разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/куб. дм, мг/кг;
R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном определяемых
концентраций, табл. 1), %.
14. Разработчики
ФГУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора.