МУК 4.1.2926-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Хлорпирифос-метила в зеленой массе и корнеплодах сахарной свеклы, семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 12 июля 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
12 июля 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ХЛОРПИРИФОС-МЕТИЛА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И КОРНЕПЛОДАХ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2926-11
с момента утверждения
1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 № 1).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.
3. Введены в действие с момента утверждения.
Свидетельство о метрологической аттестации № 0090.05.05.11 от 11.05.2011.
Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Хлорпирифос-метила в зеленой массе и корнеплодах сахарной свеклы, семенах и масле рапса в диапазоне 0,02 — 0,2 мг/кг.
Название по ИЮПАК: О,О-диметил О-(3,5,6-трихлор-2-пиридил)тиофосфат.
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H Cl NO PS. 7 7 3 3
Агрегатное состояние: кристаллический порошок.
Цвет, запах: белый со слабым запахом меркаптана.
Давление насыщенного пара: 3,0 мПа (при 25 °C).
Коэффициент распределения в системе октанол/вода: K log P = 4,24. ow
Растворимость в воде: 2,6 мг/куб. дм (20 °C).
Растворимость в органических растворителях (г/кг, при 20 °C): в метаноле — 190, в ацетоне — более 400, в гексане — 120.
Хлорпирифос-метил в водных растворах гидролизуется с образованием 3,5,6-трихлор-2-пиридинола и О,О-диметилфосфата, период полураспада при 25 °C при pH 4 - 27 дней, при pH 8 - 9 дней. Фотолиз ДТ 1,8 дня.
50
Краткая токсикологическая характеристика: Хлорпирифос-метил относится к веществам малоопасным по острой пероральной (ЛД для крыс более 3000 50 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД для крыс более 3700 мг/кг), к 50 опасным по ингаляционной токсичности (ЛК (4 ч) для крыс более 670 50 мг/куб. м воздуха).
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ ХЛОРПИРИФОС-МЕТИЛА
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Зеленая масса сахарной | 0,02 — 0,1 | 50 | 2,20 | 6,12 | 8,56 |
| свеклы | 0,1 — 0,2 | 25 | 2,55 | 7,08 | 9,91 |
| Корнеплоды сахарной | 0,02 — 0,1 | 50 | 2,43 | 6,76 | 9,46 |
| свеклы | 0,1 — 0,2 | 25 | 2,81 | 7,82 | 10,95 |
| Семена рапса | 0,02 — 0,1 | 50 | 2,77 | 7,70 | 10,78 |
| 0,1 — 0,2 | 25 | 2,85 | 7,93 | 11,10 | |
| Масло рапса | 0,02 — 0,1 | 50 | 1,42 | 3,95 | 5,53 |
| 0,1 — 0,2 | 25 | 2,09 | 5,80 | 8,13 |
СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ ХЛОРПИРИФОС-МЕТИЛА
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Полнота извлечения вещества, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Зеленая масса сахарной свеклы | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 89,06 | 2,47 | 1,03 |
| Корнеплоды сахарной свеклы | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 90,06 | 2,61 | 1,10 |
| Семена рапса | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 86,89 | 2,56 | 1,04 |
| Масло рапса | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 89,24 | 2,45 | 1,02 |
Метод основан на определении Хлорпирифос-метила методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов после экстракции его из образцов ацетонитрилом и очистки экстракта на колонках с окисью алюминия.
Идентификация проводится по времени удерживания двух характерных пиков, а количественное определение — методом абсолютной калибровки по сумме двух характерных пиков.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.
устройства и материалы
3.1 Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», EP 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-1 — специальный (I)
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г «ACCULAB» V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-1 — средний (III)
Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Микрошприц для газовой хроматографии «Hamilton 1700», объем 10 куб. мм, фирма «SUPELCO», кат. № 20972
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см ГОСТ 29227-91 pH-метр/милливольтметр pH-150 0...14 pH; +/- 1999 мВ, номер госрегистрации № 10663
Хроматограф газовый HP6890 Series GC System с детектором по захвату электронов (ЭЗД), регистрационный номер в государственном реестре средств измерения № 201/978
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2 Реактивы
Хлорпирифос-метил, CAS 5598-13-0, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,2%, фирма Dr. Ehreustorfer GmbH, аккредитованная по ИСО 9001:2000
Алюминий, окись для хроматографии, ч ТУ 6-09-3916-75 Ацетон, осч ТУ 6-09-3513-86 Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм ТУ 6-09-2167-84
Вода дистиллированная и (или) ГОСТ 6709-72 бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости)
Гелий очищенный марки "А" ТУ-51-940-80 n-Гексан, хч ТУ 6-09-3818-89
Калий марганцово-кислый, чда ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, ч ТУ 6-09-4711-81
Натрий серно-кислый, безводный, хч ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233-77
Полиэтиленгликоль 400 для газовой хроматографии, CAS 25322-68-3, фирма «Merck», кат. № 109726
Эфир диэтиловый, ФС 42-3643-98
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.
3.3 Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1»
Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. № 3120-0250, фирма «NALGENE»
Блок нагревательный для виал, Dri-Block DB-3 фирмы Tecam или песчаная баня
Ванна ультразвуковая «UNITRA» UNIMA OLSZTYN UM-4
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная ГОСТ 5556-81
Виалы (пузырьки) с тефлоновыми прокладками емкостью 40 куб. см, кат. № Z 27,702-9, фирма «Aldrich»
Воронки делительные на 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные, стеклянные ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма «Buchi»
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 куб. см и 4000 куб. см ТС ТУ 92-891.029-91
Колонка хроматографическая, капиллярная кварцевая Rtx(R)-1 (100% диметилполисилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирма «Restek»
Насос диафрагменный FT.19, фирма «KNF Neu Laboport»
Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100 — 2000 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической колбой объемом 1000 куб. см Фильтры бумажные «красная лента» ТУ 6-09-1678-86
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с окисью алюминия, установление градуировочной характеристики.
7.1 Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.
7.1.2 Очистка ацетона
Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцово-кислый калий из расчета 1 г/куб. дм.
Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.
7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды
Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцово-кислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.
7.2 Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1 Приготовление рабочих растворов
7.2.1.1 Приготовление 1%-го раствора полиэтиленгликоля.
Мерной пипеткой отбирают 1 куб. см полиэтиленгликоля и переносят в мерную колбу на 100 куб. см, добавляют 50 куб. см диэтилового эфира. Раствор перемешивают и доводят эфиром объем в колбе до метки.
7.2.2 Приготовление градуировочных растворов
7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией Хлорпирифос-метила 1,0 мг/куб. см.
Взвешивают 50 мг Хлорпирифос-метила в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике не более 6 месяцев.
7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией Хлорпирифос-метила 10,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике не более 4 месяцев.
7.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией Хлорпирифос-метила 1,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 3 хранится в холодильнике не более 4 месяцев.
7.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией Хлорпирифос-метила 0,2 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 4 используется для приготовления стандартных растворов и установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 7 дней.
7.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией Хлорпирифос-метила 0,1 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 4 используется для приготовления стандартных растворов и установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 7 дней.
7.2.2.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией Хлорпирифоса 0,05 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 5 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 7 дней.
7.2.2.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией Хлорпирифоса 0,02 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 6 используется установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 7 дней.
7.2.2.8. Стандартные растворы Хлорпирифос-метила с концентрацией 2, 1, 0,5, 0,2 мкг/куб. см для внесения в образцы.
Методом последовательного разведения ацетоном стандартного раствора № 2 готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,5; 0,2 мкг/куб. см Хлорпирифос-метила, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы.
7.3 Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Хлорпирифос-метила в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,2; 0,1; 0,05 и 0,02 мкг/куб. см.
В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
7.4 Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки
экстракта и проверка хроматографического поведения
Хлорпирифос-метила на ней
7.4.1 Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта
В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 3 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш. и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 куб. см ацетона.
7.4.2 Проверка хроматографического поведения Хлорпирифос-метила на колонке с окисью алюминия
В концентратор объемом 100 куб. см вносят 1 куб. см стандартного раствора Хлорпирифос-метила в гексане с концентрацией 0,2 мкг/куб. см и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 10 куб. см ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см и выпаривают с добавлением 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля досуха при температуре не выше 30 °C.
Исходную колбу обмывают еще пятью порциями ацетона объемом 10 куб. см каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха с добавлением 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Определяют фракции, содержащие Хлорпирифос-метил, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Хлорпирифос-метила на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» № 2051-79 от 21.08.79, а также по ГОСТ 27262-87 «Корма растительного происхождения. Методы отбора проб» и ГОСТ Р 52647-2006 «Свекла сахарная. ТУ», ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ Р 53457-2009 «Масло рапсовое, ТУ», ГОСТ Р 52062-2003 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».
Пробы зеленой массы и корнеплодов сахарной свеклы хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 — 4 °C не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °C до 2-х лет.
Пробы семян рапса хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
Пробы масла рапса хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 — 4 °C.
9. Подготовка проб и выполнение измерений
9.1 Зеленая масса и корнеплоды сахарной свеклы
9.1.1 Экстракция
Образец измельченной зеленой массы или корнеплодов сахарной свеклы массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и помещают на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в коническую колбу объемом 250 куб. см с 5 г хлористого натрия через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 30 куб. см ацетонитрила и помещая каждый раз на 15 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в конической колбе с хлоридом натрия, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 мин.
Затем содержимое колбы (без нерастворившейся соли) переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см и выдерживают 5 мин. Выделившуюся нижнюю водную фазу отбрасывают, а верхний ацетонитрильный экстракт собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.1.2 Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия
Сухой остаток в концентраторе, полученный в п. 9.1.1, растворяют в 10 куб. см ацетона и наносят на заранее подготовленную колонку, элюат собирают. Исходную колбу обмывают еще двумя порциями ацетона по 10 куб. см каждая и наносят последовательно на колонку. Элюаты объединяют в концентраторе объемом 100 куб. см и выпаривают досуха с добавлением 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 30 °C.
Сухой остаток растворяют в 10 куб. см гексана и 1 куб. мм вводят в хроматограф.
9.2 Семена рапса
9.2.1 Экстракция
Образец измельченных семян рапса 10 г помещают в полипропиленовую банку объемом 250 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и встряхивают смесь на аппарате для встряхивания проб в течение 45 мин. По окончании встряхивания экстракт фильтруют методом декантации через фильтр «красная лента» в делительную воронку емкостью 250 куб. см. Повторяют экстракцию еще дважды, используя 30 куб. см ацетонитрила и встряхивая смесь каждый раз по 30 мин. на аппарате для встряхивания проб.
К объединенному ацетонитрильному экстракту в делительной воронке добавляют 20 куб. см гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний ацетонитрильный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см, а верхний гексановый отбрасывают. Ацетонитрильную фракцию возвращают в делительную воронку. Повторяют процедуру еще раз, используя 20 куб. см гексана. Ацетонитрильный экстракт собирают в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 30 °C.
Далее проводят очистку пробы на колонке с окисью алюминия, как указано в п. 9.1.2. «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия».
Сухой остаток растворяют в 10 куб. см гексана и 1 куб. мм вводят в хроматограф.
9.3 Масло рапса
9.3.1 Экстракция
Из пробы рапсового масла отбирают в стакан навеску массой 5 г и переносят ее в делительную воронку объемом 250 куб. см двумя порциями гексана объемом по 25 куб. см. Добавляют в делительную воронку 50 куб. см ацетонитрила и встряхивают смесь в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний (ацетонитрильный) слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 50 куб. см ацетонитрила, встряхивая смесь каждый раз по 2 мин. Объединенный ацетонитрильный экстракт переносят в новую делительную воронку, добавляют 20 куб. см гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний ацетонитрильный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см, а верхний гексановый отбрасывают. Ацетонитрильную фракцию возвращают в делительную воронку. Повторяют процедуру еще раз, используя 20 куб. см гексана. Ацетонитрильный экстракт собирают в концентратор и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 30 °C.
Далее проводят очистку пробы на колонке с окисью алюминия, как указано в п. 9.1.2. «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия».
Сухой остаток растворяют в 5 куб. см гексана и 1 куб. мм вводят в хроматограф.
9.4 Условия хроматографирования
Хроматограф газовый HP6890 Series GC System с детектором по захвату электронов (ЭЗД) в модификации с электронным управлением пневмонической системы (ЭУПС).
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая Rtx-1 (100% диметилполисилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.
Температура детектора — 300 °C, поток обдува анода (азот) — 6,0 куб. см/мин., поток поддува — 59,2 куб. см/мин.
Температура испарителя — 220 °C, тип газа — гелий, режим Split, давление 15,64 psi, деление потока 20:1, split поток 16,0 мл/мин.
Программированный нагрев колонки с 180 °C (выдержка 1 мин.) по 2 град./мин. до 200 °C, с 200 °C по 30 град./мин. до 240 °C (выдержка 2 мин.), режим — постоянный поток, поток колонки 0,8 куб. см/мин., средняя скорость 26 см/с.
Абсолютное время удерживания Хлорпирифос-метила: 8,578 мин. +/- 3%.
10. Обработка результатов анализа
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа HP GC ChemStation Rev. A.06.03RUS.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание Хлорпирифос-метила рассчитывают по формуле:
S х A х V
пр
X = ------------- х P, 100 х S х m ст
где:
X - содержание Хлорпирифос-метила в пробе, мг/кг;
S - высота (площадь) пика стандарта, мВ;
ст
S - высота (площадь) пика образца, мВ;
пр
A - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m - масса анализируемого образца, г;<br>
P - содержание Хлорпирифос-метила в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 х |X - X | х 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 х сигма .
r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности P = 0,95,
где:
_
X - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта х X
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 2,0 мг/кг» <*>.
<*> 2,0 мг/кг — предел обнаружения.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
Контроль стабильности градуировочной характеристики для Хлорпирифос-метила проводят при смене основного градуировочного раствора № 1 каждые 6 месяцев, при смене основных градуировочных растворов № 2 и 3 — каждые 4 месяца, при смене основных градуировочных растворов № 4, 5 и 6 — каждые 7 дней, а также в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание Хлорпирифос-метила в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,02 до 0,2 мкг/куб. см.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:
(X - C) х 100
X — концентрация Хлорпирифос-метила контрольного измерения, мкг/куб. см;
C — известная концентрация градуировочного раствора Хлорпирифос-метила в гексане, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/куб. см;
5,62 — погрешность градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения (А) превышает 5,62%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов Хлорпирифос-метила, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта х X
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры K рассчитывают по формуле: к
_ _ K = X' - X - C , к д
_
где X', X, C - среднее арифметическое параллельных определений
д
(признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг. Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 х |X - X | х 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
табл. 1), %.
Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева.