---
title: "\"МУК 4.1.2924-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изопротурона и дифлюфеникана в воде, почве, зерне и соломе зерновых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.2924-11"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2924-11"
---

## "МУК 4.1.2924-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изопротурона и дифлюфеникана в воде, почве, зерне и соломе зерновых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.2924-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изопротурона и дифлюфеникана в воде, почве, зерне и соломе зерновых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 12 июля 2011 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

12 июля 2011 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИЗОПРОТУРОНА**
**И ДИФЛЮФЕНИКАНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ**
**КУЛЬТУР МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.2924-11**

<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения:

</div>

с момента утверждения

1. <a id="p100006"></a>Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийского НИИ защиты растений Россельхозакадемии.
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены в действие с момента утверждения.
5. <a id="p100010"></a>Введены впервые.

<a id="p100011"></a>Настоящий документ устанавливает методику измерения массовых концентраций изопротурона в воде водоемов в диапазоне концентраций 0,001 - 0,01 мг/куб. дм, в зерне в диапазоне 0,005 - 0,1 мг/кг, в почве - 0,01 - 0,1 мг/кг, дифлюфеникана в воде водоемов в диапазоне концентраций 0,001 - 0,01 мг/куб. дм, в зерне и почве в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг, изопротурона и дифлюфеникана в соломе зерновых в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг.
<a id="p100012"></a>Действующее вещество 1: изопротурон.
<a id="p100013"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100014"></a>3-(4-изопропил)-1,1-диметилмочевина (IUPAC).
<a id="p100015"></a>    Брутто формула: C  H  N O.
                     12 18 2
<a id="p100016"></a>    Молекулярная масса: 206,3.
<a id="p100017"></a>    Химически  чистое  вещество  представляет  собой  белый кристаллический
порошок.
<a id="p100018"></a>    Температура плавления: 158 °C.
                            -<...>
<a id="p100019"></a>    Давление пара: 3,15 x 10       мРа (20 °C).
<a id="p100020"></a>    Коэффициент  распределения  в  системе  н-октанол-вода:  K   lg P = 2,5
                                                              ow
(20 °C).
<a id="p100021"></a>    Растворимость в воде (мг/куб. дм, 22 °C): 65.
<a id="p100022"></a>    Растворимость  в  органических   растворителях   (г/куб. дм, 20 °C):  в
метаноле - 75, дихлорметане - 63,  ацетоне - 38,  бензоле - 5, ксилоле - 4,
н-гексане - 0,2.
<a id="p100023"></a>    Очень стабилен к воздействию света, кислот и щелочей. Гидролизуется при
нагревании в концентрированной щелочи.
<a id="p100024"></a>    Краткая  токсикологическая  характеристика: острая оральная токсичность
LD   - 1826 - 2417 мг/кг (крысы), 3350 мг/кг (мыши). При подкожном введении
  50
LD    для  крыс  более 2000 мг/кг. Ингаляционная токсичность для крыс  LC
  50                                                                     50
превышает  1,95 мг/куб. дм  (период  наблюдения 4 ч).  Не раздражает кожу и
слизистую глаз у кроликов.
<a id="p100025"></a>Область применения: селективный системный гербицид, адсорбируемый корнями и листьями растений. Используется для контроля до и после появления однолетних трав и многолетних широколиственных сорняков на озимых и яровых посевах пшеницы, ржи и ячменя с нормой расхода 1,0 - 1,5 кг/га.
<a id="p100026"></a>В России для изопротурона установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,006 мг/кг/сут.; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,8 мг/куб. м; ОДК в воде водоемов - 0,09 мг/куб. дм; ОДК в почве - 0,05 мг/кг; МДУ в зерне хлебных злаков - 0,01 мг/кг.
<a id="p100027"></a>Действующее вещество 2: дифлюфеникан.
<a id="p100028"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100029"></a>2',4'-дифтор-2(альфа,альфа,альфа-трифтор-м-толилокси)никотинанилид (IUPAC).
<a id="p100030"></a>    Брутто формула: C  H  F N O .
                     19 11 5 2 2
<a id="p100031"></a>    Молекулярная масса: 394,3.
<a id="p100032"></a>    Химически  чистое  вещество  представляет  собой  белый кристаллический
порошок.
<a id="p100033"></a>    Температура плавления: 159 - 161 °C.
                            -3
<a id="p100034"></a>    Давление пара: 4,25 x 10   мРа (25 °C).
<a id="p100035"></a>    Коэффициент  распределения  в  системе  н-октанол-вода:  K   lg P = 4,9
                                                              ow
(20 °C).
<a id="p100036"></a>    Растворимость в воде (мг/куб. дм, 25 °C): < 0,05.
<a id="p100037"></a>    Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, 20 °C) в ацетоне
и  диметилформамиде - 100,  ацетофеноне  и циклогексаноне - 50, изофороне -
35, ксилоле - 20, циклогексане - 2, керосине - менее 10.
<a id="p100038"></a>    На  воздухе  стабилен  вплоть до температуры плавления. При 22 °C очень
стабилен  в  водных  растворах  при  pH 5,  7  и  9.  Достаточно устойчив к
фотолизу.
<a id="p100039"></a>    Краткая  токсикологическая  характеристика: острая оральная токсичность
LD    более  2000 мг/кг (крысы),  более 1000 мг/кг (мыши), более 5000 мг/кг
  50
(кролики).  Ингаляционная токсичность для крыс  LC    более 2,34 мг/куб. дм
                                                  50
(период наблюдения 4 ч). Не раздражает кожу и слизистую глаз у кроликов.
<a id="p100040"></a>Область применения: гербицид, используемый для постобработки осенних посевов с целью контроля трав и широколистных сорняков. Обычно применяется в комбинации с изопротуроном или другими гербицидами хлебных злаков. Норма расхода 125 - 250 г/га.
<a id="p100041"></a>В России для дифлюфеникана установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,01 мг/кг/сут.; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,6 мг/куб. м; ОДУ в воде водоемов - 0,15 мг/куб. дм; ОДК в почве - 0,05 мг/кг; МДУ в зерне хлебных злаков - 0,05 мг/кг.

1. <a id="p100042"></a>Метрологическая характеристика метода

<a id="p100043"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100044"></a>Таблица 1

<a id="p100045"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ**


<table>
<colgroup><col width="31%"><col width="15%"><col width="22%"><col width="15%"><col width="18%"></colgroup>
<tr><td>Диапазон измерений, массовая концентрация</td><td>Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), сигма , % r</td><td>Показатель промежуточной прецизионности (относительное среднеквадратическое отклонение в условиях вариации факторов "время", "оператор" в одной лаборатории), сигма , % Rл</td><td>Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), сигма , % R</td><td>Показатель точности &lt;*&gt; (границы относительной погрешности при вероятности P = 0,95), +/- дельта, %</td></tr>
<tr><td colspan="5">Изопротурон</td></tr>
<tr><td>Вода, мг/куб. дм от 0,001 до 0,01 вкл.</td><td>7</td><td>8</td><td>10</td><td>19</td></tr>
<tr><td>Почва, мг/кг от 0,01 до 0,1 вкл.</td><td>9</td><td>11</td><td>13</td><td>25</td></tr>
<tr><td>Зерно, мг/кг от 0,005 до 0,05 вкл. св. 0,05 до 0,1 вкл.</td><td>8 6,5</td><td>9 7</td><td>11 9</td><td>22 18</td></tr>
<tr><td>Солома, мг/кг от 0,02 до 0,1 вкл. св. 0,1 до 0,2 вкл.</td><td>6,5 5</td><td>7 6</td><td>9 7</td><td>18 14</td></tr>
<tr><td colspan="5">Дифлюфеникан</td></tr>
<tr><td>Вода, мг/куб. дм от 0,001 до 0,01 вкл.</td><td>6</td><td>7</td><td>8</td><td>16</td></tr>
<tr><td>Почва, мг/кг от 0,01 до 0,1 вкл.</td><td>7,5</td><td>9</td><td>11</td><td>21</td></tr>
<tr><td>Зерно, мг/кг от 0,01 до 0,1 вкл.</td><td>7,5</td><td>9</td><td>11</td><td>21</td></tr>
<tr><td>Солома, мг/кг от 0,02 до 0,1 вкл. св. 0,1 до 0,2 вкл.</td><td>7,2 6</td><td>8 7</td><td>10 8</td><td>20 16</td></tr>
<tr><td colspan="5">&lt;*&gt; Соответствует расширенной неопределенности U при коэффициенте отн. охвата k = 2.</td></tr>
</table>


2. <a id="p100064"></a>Метод измерения

<a id="p100065"></a>Методика основана на определении изопротурона и дифлюфеникана методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после их экстракции из образцов смесью ацетона с водой и очистки экстракта методом последовательной твердофазной экстракции на патронах Диапак С16 и Силикагель 60.
<a id="p100066"></a>Идентификация изопротурона и дифлуфеникана проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.
<a id="p100067"></a>Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

<div align="center">

3. <a id="p100068"></a>Средства измерений, реактивы,<br>
вспомогательные устройства и материалы

</div>



#### <a id="p100069"></a>3.1 Средства измерений


<a id="p100070"></a>Жидкостный хроматограф "ACQUITY" фирмы "Waters"
с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный
дегазатором, автоматическим пробоотборником
и термостатом колонки
<a id="p100071"></a>Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104-2001
<a id="p100072"></a>Весы технические ВЛКТ-500 ГОСТ 24104-2001
<a id="p100073"></a>Колбы мерные на 10, 100, 1000 куб. см ГОСТ 23932-90
<a id="p100074"></a>Микродозаторы Ленпипет переменного объема
от 200 до 1000 куб. мм и от 1 до 5 куб. см,
вид климатического исполнения УХЛЧ.2 [ГОСТ 50444](https://bukva.ai/docs/standart-1552)
<a id="p100075"></a>Пипетки градуированные [ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91)

<div align="center">

<a id="p100076"></a>Цилиндры мерные на 50 и 100 куб. см ГОСТ 23932-90

</div>

<a id="p100077"></a>Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100078"></a>3.2 Реактивы


<a id="p100079"></a>Ацетон, ч.д.а. ГОСТ 2603-79
<a id="p100080"></a>Ацетонитрил для ВЭЖХ, "В-230НМ" или х.ч.           ТУ 6-09-3534-87
<a id="p100081"></a>Вода дистиллированная ГОСТ 6709-79
<a id="p100082"></a>Гексан, х.ч.                                       ТУ 2631-003-05807999-98
<a id="p100083"></a>Дифлюфеникан с содержанием основного
вещества 99,5% (Sigma-Aldrich)
<a id="p100084"></a>Изопротурон с содержанием основного
вещества 99,0% (Sigma-Aldrich)
<a id="p100085"></a>Этилацетат, х.ч. [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76)
<a id="p100086"></a>Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.


#### <a id="p100087"></a>3.3 Вспомогательные устройства и материалы


<a id="p100088"></a>Аналитическая колонка ACQUITY UPLC BEH C18
(100 x 2,1) мм, 1,7 мкм (Waters)
<a id="p100089"></a>Бидистиллятор
<a id="p100090"></a>Баня ультразвуковая "Сапфир", УЗВ-1,3              ГОСТ Р МЭК 60335-2-15-98
<a id="p100091"></a>Вакуумный манипулятор для работы
с патронами для твердофазной экстракции
(Waters, кат. N WAT 200677)
<a id="p100092"></a>Воронка Бюхнера                                    ГОСТ 0147
<a id="p100093"></a>Воронки лабораторные В-75-110 ГОСТ 25336-82
<a id="p100094"></a>Колба Бунзена                                      ГОСТ 5614-75
<a id="p100095"></a>Колбы круглодонные на шлифах КШ 50 14/23 ТС        ГОСТ 10384-72
<a id="p100096"></a>Колбы круглодонные на шлифах КШ 250 29/32 ТС       ГОСТ 10384-72
<a id="p100097"></a>Колбы плоскодонные на шлифах КШ 250 29/32 ТС ГОСТ 25336-82
<a id="p100098"></a>Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная
зерновая ЛМЗ                                       ТУ 1-01-0593-79
<a id="p100099"></a>Патроны Диапак С16 (БиоХимМак), 0,4 г              ТУ 4215-002-05451931-94
<a id="p100100"></a>Патроны, заполненные силикагелем 60
(Merck), 0,5 г
<a id="p100101"></a>Ротационный вакуумный испаритель фирмы BUCHI,
мод. R 205 (Швейцария)
<a id="p100102"></a>Фильтры бумажные "красная лента"                   ТУ 6.091678-86
<a id="p100103"></a>Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не хуже указанных.

4. <a id="p100104"></a>Требования безопасности

<a id="p100105"></a>4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
<a id="p100106"></a>При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.
<a id="p100107"></a>4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

5. <a id="p100108"></a>Требования к квалификации операторов

<a id="p100109"></a>Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по [п. 13](#p100209).

6. <a id="p100110"></a>Условия измерений

<div align="center">

<a id="p100111"></a>При выполнении измерений выполняют следующие условия:

</div>

- <a id="p100112"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100113"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

<div align="center">

7. <a id="p100114"></a>Подготовка к определению

</div>



#### <a id="p100115"></a>7.1 Кондиционирование колонки


<a id="p100116"></a>Перед началом анализа колонку (Acquity BEH C18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 куб. см/мин.) до стабилизации нулевой линии.


#### <a id="p100117"></a>7.2 Приготовление растворов


<a id="p100118"></a>7.2.1. 0,005 М раствор ортофосфорной кислоты: (0,5 +/- 0,01) г 98% ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 куб. дм, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.
<a id="p100119"></a>7.2.2. Для приготовления подвижной фазы 1 смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 40:60 по объему, используя мерные цилиндры.
<a id="p100120"></a>7.2.3. Для приготовления подвижной фазы 2 смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 65:35 по объему, используя мерные цилиндры.

##### <a id="p100121"></a>7.2.4 Приготовление элюентов для твердофазной экстракции.

<a id="p100122"></a>Элюент 1. В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 5 куб. см этилацетата и доводят объем до метки гексаном. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
<a id="p100123"></a>Элюент 2. В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 20 куб. см этилацетата и доводят объем до метки гексаном. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
<a id="p100124"></a>Элюент 3. В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 50 куб. см этилацетата и доводят объем до метки гексаном. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.


#### <a id="p100125"></a>7.3 Приготовление основных и градуировочных растворов


<a id="p100126"></a>7.3.1. Основные растворы 1 и 2 с концентрацией 0,5 мг/куб. см: точные навески изопротурона и дифлуфеникана (50 +/- 0,5) мг помещают в мерные колбы вместимостью 100 куб. см, растворяют в ацетонитриле и доводят объемы до метки тем же растворителем.
<a id="p100127"></a>Градуировочные растворы изопротурона и дифлуфеникана с концентрациями 0,05, 0,1, 0,2, 0,5, 0,75 и 1,0 мкг/куб. см готовят методом последовательного разбавления основных растворов 1 и 2 по объему, используя соответственно подвижные фазы 1 и 2.
<a id="p100128"></a>7.3.2. Раствор N 1 с концентрацией изопротурона 1,0 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,2 куб. см основного раствора 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
<a id="p100129"></a>7.3.3. Раствор N 2 с концентрацией изопротурона 0,75 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 7,5 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
<a id="p100130"></a>7.3.4. Раствор N 3 с концентрацией изопротурона 0,5 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 5 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
<a id="p100131"></a>7.3.5. Раствор N 4 с концентрацией изопротурона 0,2 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 2,0 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
<a id="p100132"></a>7.3.6. Раствор N 5 с концентрацией изопротурона 0,1 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 1 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
<a id="p100133"></a>7.3.7. Раствор N 6 с концентрацией изопротурона 0,05 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,5 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
<a id="p100134"></a>7.3.8. Раствор N 7 с концентрацией дифлюфеникана 1,0 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,2 куб. см основного раствора 2 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
<a id="p100135"></a>7.3.9. Раствор N 8 с концентрацией дифлюфеникана 0,75 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 7,5 куб. см раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
<a id="p100136"></a>7.3.10. Раствор N 9 с концентрацией дифлюфеникана 0,5 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 5,0 куб. см раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
<a id="p100137"></a>7.3.11. Раствор N 10 с концентрацией дифлюфеникана 0,2 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 2,0 куб. см раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
<a id="p100138"></a>7.3.12. Раствор N 11 с концентрацией дифлюфеникана 0,1 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 1,0 куб. см раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
<a id="p100139"></a>Основные растворы 1 и 2 можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.
<a id="p100140"></a>При изучении полноты определения изопротурона и дифлуфеникана в почве, зерне и соломе зерновых используют ацетонитрильные растворы веществ. Растворы с концентрациями аналитов 1,0 и 10,0 мкг/куб. см готовят из основных растворов 1 и 2 с концентрациями изопротурона и дифлюфеникана 0,5 мг/куб. см методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.


#### <a id="p100141"></a>7.4 Построение градуировочного графика


<a id="p100142"></a>Для установления градуировочных характеристик (площадь пика - концентрация изопротурона или дифлуфеникана в растворах) в хроматограф вводят по 10 куб. мм градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации изопротурона или дифлуфеникана в градуировочных растворах.
<a id="p100143"></a>Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочные коэффициенты (K) в уравнении линейной регрессии:

<a id="p100144"></a>**C = KS,**

<a id="p100145"></a>где S - площадь пика градуировочного раствора.
<a id="p100146"></a>Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
<a id="p100147"></a>Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
<a id="p100148"></a>Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

                      |C - C |
                            к
<a id="p100149"></a>                      -------- x 100 <= лямбда      ,
                         C                    контр.

<a id="p100150"></a>    где:
<a id="p100151"></a>    C  -  аттестованное  значение  массовой   концентрации изопротурона или
дифлуфеникана в градуировочном растворе в мг/куб. см;
<a id="p100152"></a>    C   -  результат   контрольного    измерения    массовой   концентрации
     к
изопротурона или дифлуфеникана в градуировочном растворе в мг/куб. см;
<a id="p100153"></a>    лямбда        -  норматив  контроля   градуировочного  коэффициента,  %
          контр.
(лямбда       = 10% при P = 0,95).
       контр.


#### <a id="p100154"></a>7.5 Подготовка патронов для твердофазной экстракции


<a id="p100155"></a>Диапак С16: Непосредственно перед употреблением в два последовательно соединенных патрона вносят сначала 1 куб. см ацетонитрила, а затем 1 куб. см воды.
<a id="p100156"></a>Патрон Силикагель 60: Непосредственно перед употреблением через патрон пропускают 2 куб. см гексана.

<div align="center">

8. <a id="p100157"></a>Отбор проб и хранение

</div>


<a id="p100158"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с [ГОСТ Р 51592-2000](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-51592-2000) "Вода. Общие требования к отбору проб"; [ГОСТ Р 50436-92](https://bukva.ai/docs/gost-r-50436-92) (ИСО 950-79) "Зерновые. Отбор проб зерна"; [ГОСТ 28168-89](https://bukva.ai/docs/gost-28168-89) "Почвы. Отбор проб". Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторных мельницах.

<div align="center">

9. <a id="p100159"></a>Проведение определения

</div>



#### <a id="p100160"></a>9.1 Определение изопротурона и дифлюфеникана

в воде водоемов

<a id="p100161"></a>Две аликвоты воды по 50 куб. см пропускают отдельно через патроны Диапак С16. Фильтраты отбрасывают. Через каждый патрон пропускают 3 куб. см ацетонитрила. Элюаты 1 и 2 собирают по отдельности и упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Сухой остаток 1 растворяют в 0,5 куб. см подвижной фазы 1, а сухой остаток 2 - в 0,5 куб. см подвижной фазы 2. Первый раствор (10 куб. мм) вводят в жидкостный хроматограф для определения изопротурона в соответствующих условиях хроматографирования (см. [п. 9.3](#p100164)). Второй раствор хроматографируют в условиях соответствующих анализу дифлюфеникана.


#### <a id="p100162"></a>9.2 Определение изопротурона и дифлюфеникана

в почве, зерне и соломе зерновых

<a id="p100163"></a>По (20 +/- 0,1) г почвы или измельченного на лабораторной мельнице зерна или (5 +/- 0,1) г нарезанной ножом соломы помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, прибавляют 10 куб. см воды и, спустя 2 - 3 мин., 40 куб. см ацетона. Экстрагируют на ультразвуковой бане в течение 10 мин. Массу фильтруют через бумажный фильтр "красная лента" на воронке Бюхнера. Экстракцию повторяют, используя в качестве экстрагента 50 куб. см смеси ацетона и воды в соотношении 4:1. Объединенный экстракт упаривают на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C до полного удаления ацетона. Водный остаток (около 20 куб. см) фильтруют через бумажный фильтр "красная лента" и пропускают через два соединенных последовательно и откондиционированных по [п. 7.5](#p100154) патрона Диапак С16. Фильтрат отбрасывают. Изопротурон и дифлюфеникан элюируют 4 куб. см ацетона. Элюат упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C, сухой остаток растворяют в 2,0 куб. см гексана и количественно переносят в патрон Силикагель 60, откондиционированный гексаном по п. 7.5. Фильтрат отбрасывают. Патрон промывают двумя порциями по 2 куб. см гексана и 2 куб. см элюента 1. Промывки отбрасывают. Дифлюфеникан элюируют 5 куб. см элюента 2 и собирают элюат 1 в отдельную колбу. Патрон промывают 2 куб. см элюента 3. Промывку отбрасывают. Изопротурон элюируют 5 куб. см элюента 3, собирая отдельно элюат 2. Элюаты 1 и 2 упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C. Сухие остатки изопротурона в зерне и соломе растворяют в 1 куб. см подвижной фазы 1, а в почве - в 2 куб. см подвижной фазы 1. Сухие остатки дифлюфеникана в почве и зерне растворяют в 2 куб. см подвижной фазы 2, а остаток дифлюфеникана в соломе - в 1 куб. см подвижной фазы 2.


#### <a id="p100164"></a>9.3 Условия хроматографирования


<a id="p100165"></a>Ультраэффективный жидкостный хроматограф "ACQUITY" фирмы Waters с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка ACQUITY UPLC BEH C18 (2,1 x 100) мм, 1,7 мкм (Waters). Температура колонки (30 +/- 1) °C.
<a id="p100166"></a>Изопротурон: Подвижная фаза 1: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 40:60. Скорость потока элюента: 0,2 куб. см/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 240 нм. Объем вводимой пробы 10 куб. мм. Время удерживания изопротурона (4,2 +/- 0,1) мин.
<a id="p100167"></a>Дифлюфеникан: Подвижная фаза 2: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 65:35. Скорость потока элюента: 0,2 куб. см/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 285 нм. Объем вводимой пробы 10 куб. мм. Время удерживания дифлюфеникана (4,7 +/- 0,1) мин.
<a id="p100168"></a>Линейные диапазоны детектирования изопротурона и дифлюфеникана сохраняются в интервале концентраций 0,01 - 1,0 мкг/куб. см.

10. <a id="p100169"></a>Обработка результатов анализа

<a id="p100170"></a>Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание изопротурона и дифлюфеникана в воде (X, мг/куб. дм), в почве, зерне и соломе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

                               S  x K x V   100
                                х
<a id="p100171"></a>                           X = ---------- x ---,
                                   P         f

<a id="p100172"></a>    где:
<a id="p100173"></a>    S   -  площадь  пика  изопротурона  и  дифлюфеникана  на  хроматограмме
     х
испытуемого образца, AU x сек. (AU);
<a id="p100174"></a>    K  -  градуировочный   коэффициент,   найденный  на  стадии  построения
соответствующей градуировочной зависимости;
<a id="p100175"></a>    V  -  объем  пробы,  подготовленной  для  хроматографического  анализа,
куб. см;
<a id="p100176"></a>    P - навеска анализируемого образца, г (воды, куб. см);
<a id="p100177"></a>    f - полнота извлечения  изопротурона  и  дифлюфеникана,  приведенная  в
табл. 2 (%).

<a id="p100178"></a>Таблица 2

<div align="center">

<a id="p100179"></a>**ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ИЗОПРОТУРОНА И ДИФЛЮФЕНИКАНА,**<br>
**СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ, ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ**

</div>

СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ n = 20, P = 0,95


<table>
<colgroup><col width="12%"><col width="9%"><col width="18%"><col width="19%"><col width="12%"><col width="11%"><col width="19%"></colgroup>
<tr><td>Аналит</td><td>Анализируемый объект</td><td>Предел обнаружения, мг/кг (мг/куб. дм)</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/куб. дм)</td><td>Среднее значение определения, %</td><td>Стандартное отклонение, S</td><td>Доверительный интервал среднего результата, +/- %</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Изопротурон</td><td>Вода</td><td>0,001</td><td>0,001 - 0,01</td><td>91,8</td><td>8,2</td><td>3,8</td></tr>
<tr><td>Почва</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>89,2</td><td>13,0</td><td>6,1</td></tr>
<tr><td>Зерно</td><td>0,005</td><td>0,005 - 0,1</td><td>90,5</td><td>10,5</td><td>4,9</td></tr>
<tr><td>Солома</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>95,9</td><td>6,8</td><td>3,2</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Дифлюфеникан</td><td>Вода</td><td>0,001</td><td>0,001 - 0,01</td><td>89,1</td><td>2,3</td><td>1,1</td></tr>
<tr><td>Почва</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>84,9</td><td>9,9</td><td>4,7</td></tr>
<tr><td>Зерно</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>88,5</td><td>9,4</td><td>4,4</td></tr>
<tr><td>Солома</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>82,1</td><td>8,3</td><td>3,9</td></tr>
</table>


<a id="p100189"></a>Содержание остаточных количеств изопротурона или дифлюфеникана в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
<a id="p100190"></a>Пробы, дающие пики большие, чем стандартный раствор изопротурона или дифлюфеникана с концентрацией 1,0 мкг/куб. см разбавляют подвижной фазой 1 или 2, соответственно.

<div align="center">

11. <a id="p100191"></a>Проверка приемлемости результатов

</div>

параллельных определений

<a id="p100192"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

                         2 x |X  - X | x 100
                               1    2
<a id="p100193"></a>                         ------------------- <= r,
                              (X  + X )
                                1    2

<a id="p100194"></a>    где:
<a id="p100195"></a>    X  и X  - результаты параллельных определений, мг/кг;
     1    2
<a id="p100196"></a>    r - значение предела повторяемости (r = 2,8 сигма ).
                                                     r
<a id="p100197"></a> При невыполнении [условия (1)](#p100193) выясняют причины превышения предела
повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

                        12. <a id="p100198"></a>Оформление результатов

<a id="p100199"></a>    Результат анализа представляют в виде:

<a id="p100200"></a>              (X +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности P = 0,95,

<a id="p100201"></a>    где:
<a id="p100202"></a>    X  -  среднее  арифметическое   результатов   определений,   признанных
приемлемыми, мг/кг;
<a id="p100203"></a>    ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг.

                                     дельта x X
<a id="p100204"></a>                            ДЕЛЬТА = ----------,
                                        100

<a id="p100205"></a>    где дельта - граница относительной  погрешности   методики  (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100206"></a>    В  случае  если  содержание  аналита  менее  нижней  границы  диапазона
определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100207"></a>    содержание изопротурона в зерне менее 0,005 мг/кг, в почве - менее 0,01
мг/кг,  дифлюфеникана  в  пробах почвы и зерна менее 0,01 мг/кг, содержание
изопротурона  и  дифлюфеникана  в  пробах  воды менее 0,001 мг/куб. дм, а в
пробах соломы менее 0,02 мг/кг <*>.
    --------------------------------
<a id="p100208"></a>    <*> 0,005 мг/кг - предел обнаружения изопротурона в зерне, 0,01 мг/кг -
предел  обнаружения  дифлюфеникана  в  пробах почвы и зерна, изопротурона в
пробах  почвы;  0,001  мг/куб. дм  -  предел  обнаружения  изопротурона   и
дифлюфеникана в воде, а 0,02 мг/кг - предел обнаружения в пробах соломы.

                13. <a id="p100209"></a>Контроль качества результатов измерений

<a id="p100210"></a>    Оперативный   контроль   погрешности   и   воспроизводимости  измерений
осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность
(правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

#### <a id="p100211"></a>13.1 Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением

измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

#### <a id="p100212"></a>13.2 Плановый   внутрилабораторный  оперативный  контроль  процедуры

выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
<a id="p100213"></a>    Величина добавки C  должна удовлетворять условию:
                      д

<a id="p100214"></a>                        C  = ДЕЛЬТА    + ДЕЛЬТА    ,
                         д         л,X         л,X'

<a id="p100215"></a>    где   +/- ДЕЛЬТА    (+/- ДЕЛЬТА    )   -   характеристика   погрешности
                    л,X            л,X'
(абсолютная  погрешность)  результатов анализа,  соответствующая содержанию
компонента в испытуемом  образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:

<a id="p100216"></a>                        ДЕЛЬТА  = +/- 0,84 ДЕЛЬТА,
                              л

<a id="p100217"></a>    где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

                                    дельта x X
<a id="p100218"></a>                           ДЕЛЬТА = ----------,
                                       100

<a id="p100219"></a>    где  дельта - граница  относительной  погрешности  методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100220"></a>    Результат контроля процедуры K  рассчитывают по формуле:
                                  к

<a id="p100221"></a>                             K  = X' - X - C ,
                              к             д

<a id="p100222"></a>    где  X',  X,  C   -  среднее  арифметическое  результатов  параллельных
                   д
определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100191)) содержания компонента в
образце   с    добавкой,   испытуемом   образце,   концентрация    добавки,
соответственно, мг/кг.
<a id="p100223"></a>    Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

                             _____________________
                            /     2            2
<a id="p100224"></a>                      K = \/ДЕЛЬТА     + ДЕЛЬТА   .                     (1)
                                  л,X'         л,X

<a id="p100225"></a>    Проводят  сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
                                                            к
контроля (K).
<a id="p100226"></a>    Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

<a id="p100227"></a>                                |K | <= K,                              (2)
                                  к

процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100228"></a> При невыполнении [условия (2)](#p100227) процедуру контроля повторяют. При
повторном   невыполнении   условия   (2)  выясняют  причины,  приводящие  к
неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

#### <a id="p100229"></a>13.3 Проверка   приемлемости   результатов   измерений,  полученных  в

условиях воспроизводимости.
<a id="p100230"></a>    Расхождение  между  результатами  измерений,  выполненных в двух разных
лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

                       2 x |X  - X | x 100
                             1    2
<a id="p100231"></a>                       ------------------- <= R,                        (3)
                            (X  - X )
                              1    2

<a id="p100232"></a>    где:
<a id="p100233"></a>    X  и X   - результаты  измерений  в  двух  разных  лабораториях, мг/кг;
     1    2
<a id="p100234"></a>    R  -  предел    воспроизводимости    (в   соответствии   с   диапазоном

<div align="center">

концентраций), %.

</div>


14. <a id="p100235"></a>Разработчики

<a id="p100236"></a>ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург.

<a id="p100237"></a>Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации N 01.5.04.679) и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2011.10036).



<a id="p100238"></a>

---