---
title: "\"МУК 4.1.2921-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений остаточного содержания клотианидина в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.2921-11"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2921-11"
---

## "МУК 4.1.2921-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений остаточного содержания клотианидина в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.2921-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений остаточного содержания клотианидина в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 12 июля 2011 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

12 июля 2011 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**МЕТОДИКА**
**ИЗМЕРЕНИЙ ОСТАТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ КЛОТИАНИДИНА**
**В ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР МЕТОДОМ**
**ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="right">

**МУК 4.1.2921-11**

<a id="p100002"></a>Дата введения:

</div>

с момента утверждения

1. <a id="p100006"></a>Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии.
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены в действие с момента утверждения.
5. <a id="p100010"></a>Введены впервые.


## <a id="p100011"></a>Введение


<a id="p100012"></a>Клотианидин - инсектицид нервно-паралитического действия, обладает широким спектром активности против сосущих, грызущих и почвенных насекомых на овощных культурах, фруктовых и цитрусовых деревьях, рисе, кукурузе и рапсе. Вещество обладает системной активностью и может использоваться как в качестве протравителя, так и для обработки почвы и надземных органов растений.
<a id="p100013"></a>Применяется в России в качестве инсектицида для предпосевного протравливания зерна злаковых культур при норме расхода 375 г д.в./т семян, а также в качестве составного компонента комбинированных протравителей.


## 1. <a id="p100014"></a>Общие положения


<a id="p100015"></a>Свидетельство о метрологической аттестации от 11.01.2011 N 01.00225/2-11.
<a id="p100016"></a>Настоящий документ устанавливает процедуру измерений массовой доли клотианидина в зерне в диапазоне 0,02 - 0,20 мг/кг, в соломе в диапазоне 0,05 - 0,50 мг/кг методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
<a id="p100017"></a>Название вещества по ИСО: Клотианидин.
<a id="p100018"></a>Название вещества по ИЮПАК: (Е)-1-(2-хлор-1,3-тиазол-5-илметил)-3-метил-2-нитрогуанидин.
<a id="p100019"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100020"></a>    C H ClN O S.
     6 8   5 2
<a id="p100021"></a>    Мол. масса: 249,7.
<a id="p100022"></a>    Бесцветный   порошок  без  запаха.  Температура  плавления:  176,8  °C.
                                        -7
Давление  паров  при  25  °C:  1,3  x 10   мПа. Коэффициент распределения в
системе  н-октанол/вода: K   log P = 0,7 (при 25 °C). Растворимость (г/куб.
                          ow
дм)  при  20  °C:  ацетон  -  15,2;  метанол  -  6,26;  этилацетат  - 2,03;
дихлорметан - 1,32; гептан - 0,001; вода - 0,327.
<a id="p100023"></a>    В  почве  в  аэробных  условиях клотианидин разрушается очень медленно:
DT   = 148 - 1155 дней.
  50


## 2. <a id="p100024"></a>Метрологические характеристики


<a id="p100025"></a>При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.

<a id="p100026"></a>Таблица 1


<table>
<colgroup><col width="9%"><col width="18%"><col width="16%"><col width="15%"><col width="15%"><col width="14%"><col width="14%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый объект</td><td>Диапазон измерений массовой доли клотианидина (мг/кг)</td><td>Показатель точности (границы относительной погрешности), +/- дельта, % при P = 0,95</td><td>Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), сигма , % r</td><td>Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), сигма , % R</td><td>Предел повторяемости, r, %, P = 0,95, n = 2</td><td>Критическая разность для результатов анализа, полученных в двух лабораториях, CD , % 0,95 (n = 1 n = 2) 2</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Зерно</td><td>От 0,02 до 0,10 вкл.</td><td>50</td><td>12</td><td>16</td><td>33</td><td>38</td></tr>
<tr><td>Св. 0,10 до 0,20 вкл.</td><td>39</td><td>8</td><td>12</td><td>22</td><td>29</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Солома</td><td>От 0,05 до 0,10 вкл.</td><td>65</td><td>14</td><td>21</td><td>39</td><td>51</td></tr>
<tr><td>Св. 0,10 до 0,5 вкл.</td><td>45</td><td>9</td><td>14</td><td>25</td><td>35</td></tr>
</table>



## 3. <a id="p100032"></a>Метод измерений


<a id="p100033"></a>Метод основан на экстракции клотианидина из зерна и соломы пшеницы водным ацетоном, очистке экстрактов, содержащих клотианидин, от коэкстрактивных компонентов перераспределением их в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с флоризилом, с последующим измерением содержания клотианидина в очищенных экстрактах на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым детектированием и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.
<a id="p100034"></a>В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.


## 4. <a id="p100035"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы



### <a id="p100036"></a>4.1. Средства измерений


<a id="p100037"></a>Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором
с переменной длиной волны (фирма "Waters", США)
(номер Госреестра 15311-02)
<a id="p100038"></a>Весы аналитические Sartorius 6110 2-го класса точности,
погрешность взвешивания 0,0001 г ГОСТ 24104-2001
<a id="p100039"></a>Весы лабораторные Metler P-160 2-го класса точности,
погрешность взвешивания 0,005 г ГОСТ 24104-2001
<a id="p100040"></a>Набор гирь ГОСТ 7328-2001
<a id="p100041"></a>Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2 [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100042"></a>Пипетки градуированные 1-1-2-1; 1-1-2-2; 1-2-2-5;
1-2-2-10 [ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91)
<a id="p100043"></a>Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой
П-2-5-0,1; П-2-10-0,2 [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100044"></a>Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой
П-2-5-0,1; П-2-10-0,2 [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100045"></a>Микрошприц МШ-1Ф                                            ТУ 64-1-2850


### <a id="p100046"></a>4.2. Реактивы


<a id="p100047"></a>Клотианидин (CAS 210880-92-5) с содержанием
основного вещества 99,4%, аналитический стандарт
(Байер, Германия)
<a id="p100048"></a>Ацетон, квалификации ч.д.а. ГОСТ 2603-79
<a id="p100049"></a>Ацетонитрил для хроматографии, квалификации х.ч.            ТУ 6-09-3534-87
<a id="p100050"></a>Вода бидистиллированная или деионизированная ГОСТ 6709-72
<a id="p100051"></a>н-Гексан, квалификации х.ч.                                 ТУ 6-09-3375-78
<a id="p100052"></a>Калий углекислый, квалификации х.ч. [ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76)
<a id="p100053"></a>Метилен хлористый (дихлорметан), квалификации х.ч. [ГОСТ 12794-80](https://bukva.ai/docs/standart-gost-12794-80)
<a id="p100054"></a>Натрий сернокислый, безводный, квалификации х.ч. [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
<a id="p100055"></a>Этиловый эфир уксусной кислоты
(этилацетат), квалификации ч [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76)


### <a id="p100056"></a>4.3. Вспомогательные устройства, материалы


<a id="p100057"></a>Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с                        ТУ 64-1-2851-78
<a id="p100058"></a>Ванна ультразвуковая, модель D-50,
фирма Branson Instr. Co. (США)
<a id="p100059"></a>Дистиллятор Cyclon III, модель 4BD,
фирма Fistreem Int.Ltd. (Великобритания)
<a id="p100060"></a>Установка Elgastat B 114 с патроном Elgacan C 114
для получения деионизированной воды,
фирма Elga Ltd. (Великобритания)
<a id="p100061"></a>Воронка Бюхнера ГОСТ 9147-80
<a id="p100062"></a>Воронки делительные вместимостью 100, 250 куб. см ГОСТ 25336-82
<a id="p100063"></a>Воронки лабораторные, стеклянные ГОСТ 25336-82
<a id="p100064"></a>Колба Бунзена вместимостью 250 куб. см ГОСТ 25336-82
<a id="p100065"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью
10, 100 и 250 куб. см [ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
<a id="p100066"></a>Колбы плоскодонные вместимостью 250 куб. см [ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
<a id="p100067"></a>Колонка хроматографическая стеклянная
длиной 25 см и внутренним диаметром 10 мм
<a id="p100068"></a>Колонка хроматографическая стальная длиной 15 см,
внутренним диаметром 4,6 мм,
Symmetry-C18 (5 мкм), (Waters Corp., США)
<a id="p100069"></a>Мельница лабораторная электрическая                         ТУ 46-22-236-84
<a id="p100070"></a>Насос водоструйный вакуумный                                ГОСТ 10696-75
<a id="p100071"></a>Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М
или ротационный вакуумный испаритель
B-169 фирмы "Buchi" (Швейцария)                             ТУ 25-11-917-76
<a id="p100072"></a>Флоризил для колоночной хроматографии
с размером частиц 60 - 100 меш
("Acros Organics", США)
<a id="p100073"></a>Стаканы химические вместимостью 100 и 500 куб. см ГОСТ 25336-82
<a id="p100074"></a>Стекловата
<a id="p100075"></a>Установка для перегонки растворителей с дефлегматором [ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
                                                            (ИСО 641-75)
<a id="p100076"></a>Фильтры бумажные "красная лента" обеззоленные               ТУ 6-09-2678-77
<a id="p100077"></a>Фильтры мембранные диаметром 47 мм с размером
пор 0,45 мкм, фирма Pall Corp. (США)
<a id="p100078"></a>Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками, аналогичными приведенным в разделе 4.


## 5. <a id="p100079"></a>Требования безопасности


<a id="p100080"></a>5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, 12.1.005-88.
<a id="p100081"></a>5.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91, и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.
<a id="p100082"></a>5.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
<a id="p100083"></a>5.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07.


## 6. <a id="p100084"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100085"></a>К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.


## 7. <a id="p100086"></a>Требования к условиям измерений


<a id="p100087"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

#### <a id="p100088"></a>7.1 Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

- <a id="p100089"></a>температура воздуха (20 +/- 5) °C;
- <a id="p100090"></a>атмосферное давление (84 - 106) кПа;
- <a id="p100091"></a>относительная влажность воздуха не более 80%.

#### <a id="p100092"></a>7.2 Условия хроматографического анализа

<a id="p100093"></a>Температура колонки: 27 °C.
<a id="p100094"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (с объемным соотношением компонентов 20:80).
<a id="p100095"></a>Скорость потока элюента: 0,8 куб. см/мин.
<a id="p100096"></a>Рабочая длина волны: 270 нм.
<a id="p100097"></a>Чувствительность: 0,00075 ед. абсорбции на шкалу.
<a id="p100098"></a>Объем вводимой пробы: 5 куб. мм.
<a id="p100099"></a>Время удерживания клотианидина: (8,0 +/- 0,2) мин.
<a id="p100100"></a>Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 1,0 нг.


## 8. <a id="p100101"></a>Подготовка к выполнению измерений


<a id="p100102"></a>Измерениям предшествуют следующие операции: приготовление растворов, приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ, подготовка колонки с флоризилом, кондиционирование хроматографической колонки, градуировка хроматографа.


### <a id="p100103"></a>8.1. Приготовление раствора углекислого калия с молярной концентрацией 0,05 моль/куб. дм


<a id="p100104"></a>    В  мерную  колбу  вместимостью  1000  куб.  см  помещают  6,9  г K CO ,
                                                                      2  3
приливают  100  куб. см  деионизированной воды, перемешивают до растворения
осадка,  доводят  объем  водой  до  метки,  перемешивают.  Срок  хранения -
1 неделя.


### <a id="p100105"></a>8.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ


<a id="p100106"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 200 куб. см ацетонитрила, 800 куб. см бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.
<a id="p100107"></a>Срок хранения - 1 неделя.


### <a id="p100108"></a>8.3. Кондиционирование хроматографической колонки


<a id="p100109"></a>Хроматографическую колонку Symmetry C18 устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют при температуре 27 °C и скорости потока подвижной фазой 0,8 куб. см/мин. не менее часа до установления стабильной базовой линии.


### <a id="p100110"></a>8.4. Подготовка колонки с флоризилом для очистки экстракта


<a id="p100111"></a>В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 10 мм помещают тампон из стекловаты и затем в нее всыпают 10 г сухого флоризила. Колонку промывают 30 куб. см этилацетата со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см, через колонку пропускают 15 куб. см этилацетата со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего колонка готова к работе.


### <a id="p100112"></a>8.5. Определение объема элюента, необходимого для полного вымывания клотианидина из колонки с флоризилом


<a id="p100113"></a>При отработке методики или поступлении новой партии флоризила проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания клотианидина из колонки с флоризилом.
<a id="p100114"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора N 1 клотианидина с концентрацией 10 мкг/куб. см в ацетонитриле [(п. 8.6.2)](#p100121), раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 2 куб. см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с флоризилом, подготовленную по [п. 8.4](#p100110).
<a id="p100115"></a>Колбу обмывают 3 куб. см этилацетата, которые также вносят в колонку. Промывают колонку 50 куб. см этилацетата со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через колонку пропускают 50 куб. см смеси этилацетат-ацетонитрил (1:1, по объему), отбирая последовательно по 5 куб. см элюата. Каждую фракцию упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., вносят 2 куб. см подвижной фазы, подготовленной по [п. 8.2](#p100105), перемешивают и хроматографируют в соответствии с условиями [п. 7.2](#p100092).
<a id="p100116"></a>По результатам обнаружения клотианидина в каждой из фракций определяют объем смеси этилацетат-ацетонитрил (1:1, по объему), необходимый для полного вымывания клотианидина из колонки.


### <a id="p100117"></a>8.6. Приготовление градуировочных растворов



##### <a id="p100118"></a>8.6.1 Исходный градуировочный раствор клотианидина

с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см

<a id="p100119"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают (0,010 +/- 0,0002) г клотианидина, растворяют в 40 - 50 куб. см ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.
<a id="p100120"></a>Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C. Срок хранения - не более 3 месяцев.


##### <a id="p100121"></a>8.6.2 Градуировочный раствор клотианидина с массовой

концентрацией 10 мкг/куб. см (раствор N 1)

<a id="p100122"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора клотианидина с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см [п. 8.6.1](#p100118)), разбавляют ацетонитрилом до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов N 2 - 5.
<a id="p100123"></a>Градуировочный раствор N 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C. Срок хранения - не более 1 месяца.


##### <a id="p100124"></a>8.6.3 Градуировочные растворы клотианидина с массовой

<div align="center">

концентрацией 0,02 - 0,2 мкг/куб. см

</div>

(растворы N 2 - 5)

<a id="p100125"></a>В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 0,2; 0,4; 1,0 и 2,0 куб. см градуировочного раствора N 1 клотианидина с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см, доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по [п. 8.2](#p100105), тщательно перемешивают. Получают растворы с массовой концентрацией клотианидина 0,02; 0,04; 0,1 и 0,2 мкг/куб. см. соответственно.
<a id="p100126"></a>Растворы готовят непосредственно перед использованием.


### <a id="p100127"></a>8.7. Градуировка хроматографа


<a id="p100128"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ x с) от концентрации клотианидина в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.
<a id="p100129"></a>В инжектор хроматографа вводят по 5 куб. мм каждого градуировочного раствора [(п. 8.6.3)](#p100124) и анализируют при условиях [п. 7.2](#p100092). Осуществляют не менее 3 параллельных определений. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предела повторяемости r.
<a id="p100130"></a>По полученным данным строят градуировочную характеристику.


### <a id="p100131"></a>8.8. Контроль стабильности градуировочной характеристики


<a id="p100132"></a>Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.
<a id="p100133"></a>Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.
<a id="p100134"></a>Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

                      |S    - S  |
                        изм    гр
<a id="p100135"></a>                      ------------ x 100 <= К  ,                        (1)
                          S                  гр
                           гр

<a id="p100136"></a>    где:
<a id="p100137"></a>    S   ,  S   - значение площади пика клотианидина в образце для контроля,
     изм    гр
измеренное  и  найденное  по  градуировочной характеристике соответственно,
усл. ед.;
<a id="p100138"></a>    К   - норматив контроля,
     гр

<a id="p100139"></a>                            К   = 0,5 x дельта,
                             гр

<a id="p100140"></a> где +/- дельта - границы относительной погрешности, % [(табл. 1)](#p100026).
<a id="p100141"></a>Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.
<a id="p100142"></a>Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.


## 9. <a id="p100143"></a>Отбор, подготовка и хранение проб


<a id="p100144"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (от 21.08.79 N 2051-79) и правилами, определенными [ГОСТ 13586.3-83](https://bukva.ai/docs/gost-13586-3-83) "Зерно. Правила приемки и методы отбора проб", [Р 50436-92](https://bukva.ai/docs/gost-r-50436-92) "Зерновые. Отбор проб зерна", [27262-87](https://bukva.ai/docs/gost-27262-87) "Корма растительного происхождения. Методы отбора проб".
<a id="p100145"></a>Пробы зерна и соломы высушивают до стандартной влажности (в соответствии с [ГОСТ 10852-86](https://bukva.ai/docs/3979)) и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.


### <a id="p100146"></a>9.1. Экстракция клотианидина


<a id="p100147"></a>9.1.1. Зерно. Образец размолотого зерна массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода (3:1, по объему), перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 40 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 куб. см. Остаток на фильтре промывают 50 куб. см приведенной выше смеси. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/2 его часть, эквивалентную 5 г образца, переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см. Дальнейшую очистку экстракта проводят по [п. 9.2](#p100149).
<a id="p100148"></a>9.1.2. Солома. Образец измельченного растительного материала массой 5 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода (3:1, по объему), перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 40 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 куб. см. Остаток на фильтре промывают 50 куб. см приведенной выше смеси. Экстракт и промывную жидкость переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.


### <a id="p100149"></a>9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей


<a id="p100150"></a>Отобранные аликвоты экстрактов растительного материала, полученные по [пп. 9.1.1](#p100147) и [9.1.2](#p100148) и помещенные в круглодонные колбы, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка объемом 3 - 5 куб. см при температуре не выше 40 °C. К водному остатку приливают 20 куб. см деионизованной воды, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 30 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз нижний органический слой собирают в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, а водную фазу экстрагируют еще дважды, используя по 30 куб. см хлористого метилена. К объединенной дихлорметановой фракции в делительной воронке приливают 25 куб. см водного раствора углекислого калия с молярной концентрацией 0,05 моль/куб. дм, содержимое интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз нижний органический слой, содержащий клотианидин, фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу и затем упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.3.


### <a id="p100151"></a>9.3. Очистка экстракта на колонке с флоризилом


<a id="p100152"></a>Сухой остаток экстрактов зерна и соломы, полученный по [п. 9.2](#p100149), растворяют в 2 куб. см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по [п. 8.4](#p100110). Колбу обмывают 3 куб. см этилацетата, который также наносят на колонку. Колонку промывают 40 куб. см этилацетата со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Клотианидин элюируют из колонки 25 куб. см смеси этилацетат-ацетонитрил (1:1, по объему) непосредственно в грушевидную колбу. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток экстракта зерна растворяют в 5 куб. см, а соломы - в 12,5 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ [(п. 8.2)](#p100105), раствор помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. и анализируют на содержание клотианидина по [п. 10](#p100154).
<a id="p100153"></a>Полнота извлечения клотианидина при проведении всех операций подготовки пробы не менее 82%.


## 10. <a id="p100154"></a>Выполнение измерений


<a id="p100155"></a>10.1. В инжектор хроматографа вводят 5 куб. мм очищенного экстракта анализируемой пробы ([пп. 9.1](#p100146) - 9.3), анализируют при условиях [(п. 7.2)](#p100092) и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.
<a id="p100156"></a>10.2. Для каждого образца повторяют операции по [пп. 9.1](#p100146) - 9.3, [10.1](#p100155).


## 11. <a id="p100157"></a>Обработка результатов измерений


<a id="p100158"></a>11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используют программное обеспечение "Breeze".
<a id="p100159"></a>Альтернативная обработка результатов.
<a id="p100160"></a>По градуировочной характеристике находят значение массовой концентрации клотианидина в экстрактах, C, мкг/куб. см. Массовую долю клотианидина X, (мг/кг) в образцах зерна и соломы рассчитывают по формуле (2):

                                C x V
                                     экстр
<a id="p100161"></a>                            X = ----------,                             (2)
                                 m x 0,82

<a id="p100162"></a>    где:
<a id="p100163"></a>    C  - значение массовой концентрации клотианидина в экстрактах, мкг/куб.
см;
<a id="p100164"></a>    V      - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб.
     экстр
см;
<a id="p100165"></a>    m  - масса анализируемой части образца, соответствующая доле экстракта,
использованной   для   очистки  на  колонке  с  флоризилом  и  последующего
хроматографического определения, г;
<a id="p100166"></a>    0,82  -  коэффициент извлечения клотианидина, учитывающий все процедуры
подготовки пробы.
<a id="p100167"></a>11.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости (3):

                       2 x |X  - X | x 100
                             1    2
<a id="p100168"></a>                       ------------------- <= r,                        (3)
                             (X  + X )
                               1    2

<a id="p100169"></a>    где:
<a id="p100170"></a>    X ,   X    -   результаты   параллельных   определений   массовой  доли
     1     2
клотианидина, мг/кг;
<a id="p100171"></a> r - значение предела повторяемости, % [(табл. 1)](#p100026).
<a id="p100172"></a>Если [условие (3)](#p100168) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.

#### <a id="p100173"></a>11.3 Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:


                  _                     _
<a id="p100174"></a>                  X +/- 0,01 x дельта x X, при P = 0,95,

<a id="p100175"></a>    где:
    _
<a id="p100176"></a>    X   -   среднее  арифметическое  значение  результатов  n  определений,
признанных приемлемыми по [п. 11.2](#p100167), мг/кг;
<a id="p100177"></a> +/- дельта - границы относительной погрешности измерений, % [(табл. 1)](#p100026).
<a id="p100178"></a>В случае если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале:
<a id="p100179"></a>"массовая доля клотианидина в зерне менее 0,02 мг/кг (более 0,20 мг/кг)";
<a id="p100180"></a>"массовая доля клотианидина в соломе менее 0,05 мг/кг (более 0,50 мг/кг)".
<a id="p100181"></a>Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал клотианидина, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 0,2 мкг/куб. см, разбавляют и анализируют в соответствии с данной методикой.


## 12. <a id="p100182"></a>Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости



#### <a id="p100183"></a>12.1 Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

<a id="p100184"></a>а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;
<a id="p100185"></a>б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).
<a id="p100186"></a>12.2. Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.
<a id="p100187"></a>    12.3.   Приемлемость   результатов   измерений,   полученных   в   двух
лабораториях,  оценивают сравнением разности этих результатов с критической
разностью CD     по формуле (4):
            0,95

                  2 x |C    - C   | x 100
                        ср1    ср2
<a id="p100188"></a>                  ----------------------- <= CD    ,                    (4)
                       (C    + C   )           0,95
                         ср1    ср2

<a id="p100189"></a>    где:
<a id="p100190"></a>    C   ,  C     -  средние  значения  массовой доли, полученные в первой и
     ср1    ср2
второй лабораториях, мг/кг;
<a id="p100191"></a> CD - значение критической разности, % [(табл. 1)](#p100026).
      0,95
<a id="p100192"></a>Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 [(5.3.3)](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002#p100287).
<a id="p100193"></a>При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 [(5.3.4)](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002#p100294).


## 13. <a id="p100194"></a>Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории


<a id="p100195"></a>Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по [ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002) ("Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений"), используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по [п. 6.2.2](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002#p100341) ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и показателя правильности по [п. 6.2.4](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002#p100518) ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.
<a id="p100196"></a>Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.
<a id="p100197"></a>Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.
<a id="p100198"></a>При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.


## 14. <a id="p100199"></a>Разработчики


<a id="p100200"></a>Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии.



<a id="p100201"></a>

---