МУК 4.1.2919-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Аминопиралида в зеленой массе, зерне и масле кукурузы, семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 12 июля 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
12 июля 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АМИНОПИРАЛИДА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, ЗЕРНЕ И МАСЛЕ КУКУРУЗЫ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
с момента утверждения
1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 № 1).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.
3. Введены в действие с момента утверждения.
Свидетельство о метрологической аттестации № 0065.03.12.10 от 08.12.2010.
Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Аминопиралида в зеленой массе в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг, в зерне и масле кукурузы, в семенах и масле рапса в диапазоне 0,01 — 0,2 мг/кг.
Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-амино-3,6-ди-хлорпиридино-2-карбоновая кислота.
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H Cl № O . 6 4 2 2 2
Физическое состояние технического продукта: желтоватый порошок. -9
Давление паров: 9,52 х 10 Па при 20 °С. Коэффициент перераспределения октанол-вода (при 19 °С): К log P =
ow
1,76 (рН = 5); 2,87 при рН = 7; 2,96 при рН = 9.
Аминопиралид — сильная кислота: рКа = 2,56 (при 20 °С).
Температура плавления: 163,5 — 165,2 °С, разлагается в точке плавления.
Растворимость в воде (г/куб. дм, при 20 °С): 2,48 при рН 2,35; 212 при рН 5; 205 — 203 при рН 7 и 9.
Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, при 20 °С): в гептане < 10; в ксилоле — 0,05; в дихлорэтане — 0,15; в этилацетате — 4,37; в ацетоне — 37,0; в метаноле — 66,4.
Стабилен к гидролизу при рН 5, 7 и 9 при температуре от 20 до 50 °С.
Фотолитически малостоек, разрушается на свету с периодом полураспада — 0,6 дня.
Устойчив к разложению в почве в анаэробных условиях: DT при 20 °С 50 составляет в среднем 67 дней (от 18 до 143 дней в различных почвах Европы); DT — от 26 до 116 дней. В аэробных условиях скорость деградации 90 Аминопиралида значительно выше: DT в среднем составляет 25 дней (от 8 до 50 35 дней); DT — 84 дня (от 26 до 116 дней). 90
Краткая токсикологическая характеристика: Аминопиралид относится к веществам малоопасным по острой пероральной и дермальной токсичности (СД
50
для крыс более 5000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности. При продолжительном контакте раздражает слизистые оболочки. Малотоксичен для водных организмов (СК для рыб и
50
дафний более 100 мг/куб. дм).
Область применения: Аминопиралид — гербицид системного ауксиноподобного действия из группы гетерилкарбоновых кислот. Рекомендуется для послевсходовой обработки зерновых культур и пастбищ против широкого спектра широколистных сорняков в смеси с Флорасуламом с нормой расхода препарата 33 — 66 г/га.
В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД — 0,5 мг/кг массы человека; ПДК в воде водоемов — 0,1 мг/куб. дм; ОДК в почве — 0,2 мг/кг; МДУ в зерне хлебных злаков — 0,1 мг/кг.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Зеленая масса кукурузы | 0,05 — 0,1 вкл. | 50 | 2,7 | 7,5 | 8,9 |
| 0,1 — 0,5 вкл. | 25 | 5,2 | 16,4 | 19,6 | |
| Зерно кукурузы | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 4,8 | 13,5 | 16,0 |
| 0,1 — 0,2 вкл. | 25 | 6,9 | 19,2 | 22,8 | |
| Масло кукурузы | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 4,3 | 12,1 | 14,3 |
| 0,1 — 0,2 вкл. | 25 | 4,0 | 11,1 | 13,2 | |
| Семена рапса | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 3,2 | 9,0 | 10,7 |
| 0,1 — 0,2 вкл. | 25 | 4,4 | 12,2 | 14,5 | |
| Масло рапса | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 3,4 | 9,3 | 11,1 |
| 0,1 — 0,2 вкл. | 25 | 5,9 | 16,3 | 19,4 |
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА,
СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ, ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ
СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ АМИНОПИРАЛИДА
| Анализируемый | Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20 | ||||
| объект | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Полнота извлечения вещества, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % |
| Зеленая масса кукурузы | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 82,8 | 0,88 | 1,92 |
| Зерно кукурузы | 0,01 | 0,01 — 0,2 | 83,4 | 1,16 | 2,63 |
| Масло кукурузы | 0,01 | 0,01 — 0,2 | 85,2 | 0,79 | 1,86 |
| Семена рапса | 0,01 | 0,01 — 0,2 | 84,0 | 0,70 | 1,70 |
| Масло рапса | 0,01 | 0,01 — 0,2 | 83,0 | 0,95 | 2,06 |
2. Метод измерений
Метод основан на определении Аминопиралида методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов после его экстракции из зеленой массы кукурузы и масел подкисленным ацетонитрилом и водно-спиртовым раствором щелочи из зерна кукурузы и семян рапса, очистки экстракта концентрированной серной кислотой, на концентрирующих патронах Диапак С16 и Диапак П, бутилирования и дополнительной очистки полученного бутилового эфира Аминопиралида на колонках с Флоризилом.
Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором капиллярной колонки и условий программирования температуры.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», ЕР 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-1 — специальный (I)
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г «ACCULAB» V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-1 — средний (III)
Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и ГОСТ 1770-74 1000 куб. см
Микрошприц для газовой хроматографии «Hamilton, 1700», объем 10 куб. мм, фирма «SUPELCO», кат. № 20972
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 и 10 ГОСТ 29227-91 куб. см
0...14 рН; +/- 1999 мВ, номер госрегистрации № 10663
Хроматограф газовый «Кристалл 2000м» с детектором по захвату электронов (ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану -14 4 х 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки. Номер в госу-
дарственном реестре средств измерений
14516-95
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Аминопиралид, CAS 150114-71-9, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,5%, фирма Dr. Ehreus-torfer GmbH, аккредитованная по ИСО 9001:2000
Ацетон, осч ТУ 6-09-3513-86 Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм ТУ 6-09-2167-84
Бутанол, ч ГОСТ 6006-78
Вода дистиллированная и (или) бидистил- ГОСТ 6709-72 лированная (вода дистиллированная, пере- гнанная повторно в стеклянной емкости)
Гелий очищенный марки "А" ТУ 51-940-80 n-Гексан, хч ТУ 6-09-3818-89
Калий марганцово-кислый, хч ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, ч ТУ 6-09-4711-81
Кислота серная, хч ГОСТ 4204-77
Кислота соляная, хч ГОСТ 3118-77
Кислота уксусная ледяная, хч ГОСТ 61-75
Концентрирующие патроны Диапак С16 и ТУ 4215-002-05451931-94
Диапак П (0,6 г), фирма «БиоХимМак СТ»
Натрий гидроокись, хч ГОСТ 4328-77
Натрий серно-кислый безводный, хч ГОСТ 4166-76
Спирт метиловый (метанол), хч ГОСТ 6995-77
Спирт этиловый, ректификованный ГОСТ 18300-87 технический Флоризил(R) (Магния силикат,
99%, CAS 1343-88-0) для колоночной
хроматографии, зернение 60/100 меш,
фирма «Acros Organics»
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Аллонж прямой с отводом для вакуума ГОСТ 25336-82 (АО-14/23) для работы с концентрирующими патронами Диапак С16
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1»
Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. № 3120-0250, фирма «NALGENE»
Блок нагревательный для виал, Dri-Block DB-3, фирмы Tecam, или песчаная баня
Ванна ультразвуковая «UNITRA» UNIMA OLSZTYN UM-4
Вата медицинская гигроскопическая ГОСТ 5556-81 хлопковая нестерильная
Виалы (пузырьки) с тефлоновыми прокладками емкостью 40 куб. см, кат. № Z 27, 702-9, фирма «Aldrich»
Воронки делительные на 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные стеклянные ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма «Buchi»
Колбы конические плоскодонные ГОСТ 25336-82 на 100, 250 и 1000 куб. см
Колбы круглодонные со шлифом ТУ 92-891.029-91 (концентраторы) на 100, 250 куб. см и 4000 куб. см ТС
Колонка хроматографическая кварцевая НР-1 длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирма «Hewlett Packerd»
Насос водоструйный ГОСТ 25336-82
Насос диафрагменный FT.19, фирма «KNF Neu Laboport»
Стаканы стеклянные термостойкие ГОСТ 25336-82 объемом 100 — 2000 куб. см
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической колбой объемом 1000 куб. см
Фильтры бумажные «красная лента» ТУ 6-09-1678-86
Центрифуга MPW-350e с набором полипро- пиленовых банок емкостью 200 куб. см
Шприц инъекционный однократного ГОСТ 24861-91 применения объемом 10 куб. см (ИСО 7886:84)
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
- выполнение измерений на газожидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению определений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак С16, Диапак П и колонок с Флоризилом для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах Диапак С16, Диапак П и на колонках с Флоризилом, установление градуировочной характеристики.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.
7.1.2 Очистка ацетона
Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцово-кислый калий из расчета 1 г/куб. дм.
Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С, отбрасывают.
7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды
Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцово-кислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.
7.2. Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1 Приготовление рабочих растворов
7.2.1.1 Приготовление 10%-ного водного раствора гидроокиси натрия.
В мерную колбу на 500 куб. см переносят 50 г гидроокиси натрия, добавляют 500 — 600 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.1.2 Приготовление водно-спиртового раствора щелочи.
Водно-спиртовой раствор щелочи готовят путем смешивания 950 куб. см этилового спирта и 50 куб. см 10%-ного водного раствора гидроокиси натрия.
7.2.1.3 Приготовление подкисленного ацетонитрила.
К необходимому объему ацетонитрила пипеткой добавляют концентрированную соляную кислоту до рН ~ 1. При приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой.
7.2.1.4. Приготовление 2%-ного раствора серной кислоты в бутаноле (бутилирующей смеси).
Мерным цилиндром отбирают 2 куб. см концентрированной серной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 100 куб. см, куда предварительно наливают около 60 куб. см бутанола. Затем раствор перемешивают и доводят бутанолом объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.1.5 Приготовление 1 М раствора соляной кислоты.
Мерным цилиндром отбирают 82 куб. см концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, куда предварительно наливают около 400 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.1.6 Приготовление 2 М раствора соляной кислоты.
Мерным цилиндром отбирают 164 куб. см концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, куда предварительно наливают около 400 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.1.7 Приготовление 10 М раствора гидроокиси натрия.
В мерную колбу на 500 куб. см переносят 200 г гидроокиси натрия, добавляют 200 — 300 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.2 Приготовление градуировочных растворов
7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией Аминопиралида 1,0 мг/куб. см.
Взвешивают 50 мг Аминопиралида в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и построения калибровочной кривой. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией Аминопиралида 100,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для построения калибровочной кривой. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией Аминопиралида 1,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 3 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией Аминопиралида 0,5 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используется для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 4 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией Аминопиралида 0,2 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 5 используется для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 5 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.2.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией Аминопиралида 0,1 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 6 используется для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 6 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.2.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией Аминопиралида 0,01 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 6 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном.
Стандартный раствор № 7 используется для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 7 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.3. Бутилирование
7.3.1 Бутилирование экстракта
К сухому остатку в концентраторе прибавляют 4 куб. см 2%-ного раствора концентрированной серной кислоты в бутаноле (бутилирующей смеси), полученной по п. 7.2.1.4, тщательно обмывают стенки концентратора и выдерживают 1 — 2 мин. в ультразвуковой ванне. Отбирают пипеткой 2 куб. см раствора из концентратора и переносят его в виалу. Виалу плотно закрывают крышкой, помещают в блок для виал, нагретый до 100 °С, и оставляют на 30 мин. По истечении этого времени виалу вынимают из блока, охлаждают до комнатной температуры, добавляют 10 куб. см гексана и 25 — 30 куб. см очищенной воды. Смесь интенсивно встряхивают и после разделения фаз в виале из верхнего (гексанового) слоя 1 куб. мм вводят в хроматограф.
7.3.2 Бутилирование стандартных растворов
В виалы объемом 40 куб. см помещают по 1 куб. см каждого стандартного раствора Аминопиралида в ацетоне (N 3, 4, 5, 6), удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят бутилирование, как указано выше.
7.4. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Аминопиралида в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,01; 0,02; 0,05 и 0,10 мкг/куб. см.
В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
7.5. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16 для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Аминопиралида
7.5.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16 для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 — 2 кап./с).
Патрон Диапак С16 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1, затем 10 куб. см воды. Элюаты отбрасывают.
7.5.2 Проверка хроматографического поведения Аминопиралида на концентрирующих патронах Диапак С16
Из стандартного раствора Аминопиралида в ацетоне, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С.
Исходный концентратор обмывают 2 куб. см ацетонитрила, прибавляют 8 куб. см воды, перемешивают, вносят на патрон. Процедуру повторяют еще раз, используя тот же объем и состав элюентов. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 4 куб. см бутилирующей смеси и проводят бутилирование, как указано в п. 7.3.1.
Определяют фракции, содержащие Аминопиралид, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Аминопиралида на концентрирующих патронах Диапак С16 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.
7.6. Подготовка концентрирующих патронов Диапак П для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Аминопиралида
7.6.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак П для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 — 2 кап./с).
Патрон Диапак П устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 20 куб. см очищенной воды, затем 10 куб. см 1%-ного водного раствора уксусной кислоты. Элюаты отбрасывают.
7.6.2 Проверка хроматографического поведения Аминопиралида на концентрирующих патронах Диапак П
Из стандартного раствора Аминопиралида в ацетоне, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см 1 М водного раствора соляной кислоты, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 5 куб. см воды, перемешивают, помещают на 10 с в ультразвуковую ванну и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С.
Исходный концентратор обмывают последовательно 20 куб. см очищенной воды, затем 20 куб. см 1%-ного водного раствора уксусной кислоты и тремя порциями по 10 куб. см каждая 1%-ного раствора уксусной кислоты в метаноле. Полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 4 куб. см бутилирующей смеси и проводят бутилирование, как указано в п. 7.3.1.
Определяют фракции, содержащие Аминопиралид, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Аминопиралида на концентрирующих патронах Диапак П проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.
7.7. Подготовка колонок с Флоризилом для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения бутилового эфира Аминопиралида
7.7.1 Подготовка колонки с Флоризилом для очистки экстракта
В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помешают 4 г Флоризила с зернением 60/100 меш. и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. На слой Флоризила наносят слой безводного серно-кислого натрия толщиной 1 см.
За день до использования колонку промывают 20 куб. см ацетона, затем 10 куб. см гексана и высушивают при комнатной температуре.
7.7.2 Проверка хроматографического поведения бутилового эфира Аминопиралида на колонке с Флоризилом
В концентратор объемом 100 куб. см вносят 1 куб. см стандартного раствора бутилового эфира Аминопиралида в гексане с концентрацией 1,0 мкг/куб. см и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см гексана, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.
Исходную колбу обмывают сначала 10 куб. см гексана, затем 10 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1, а затем еще двумя порциями смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:1 объемом 10 куб. см каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 10 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Определяют фракции, содержащие Аминопиралид, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Аминопиралида на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии Флоризила.
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» № 2051-79 от 21.08.79, а также по ГОСТ 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950:79) «Зерновые. Отбор проб зерна», ГОСТ 8808-2000 «Масло кукурузное, ТУ», ГОСТ 5471-83 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 27262 «Корма растительного происхождения. Методы отбора проб», ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб» и ГОСТ 8988-2002 «Масло рапсовое. ТУ».
Пробы зеленой массы хранятся в полиэтиленовых пакетах в холодильнике при температуре 0 — 4 °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся в морозильной камере при температуре -18 °С.
Пробы зерна кукурузы и семян рапса подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
Пробы масла кукурузы и рапса хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 — 4 °С не более 2 недель.
9. Подготовка проб и выполнение измерений
9.1. Зеленая масса кукурузы
9.1.1 Экстракция и очистка полученного экстракта
Образец измельченной зеленой массы кукурузы массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции, прибавляют 50 куб. см подкисленного ацетонитрила и помещают на механический встряхиватель на 30 мин. Экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 40 куб. см подкисленного ацетонитрила и помещая на 15 мин. на механический встряхиватель. Экстракты объединяют в делительной воронке объемом 250 куб. см.
К полученному экстракту добавляют 30 куб. см гексана и интенсивно встряхивают воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а ацетонитрил собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
9.1.2 Очистка экстракта концентрированной серной кислотой
(Внимание! Последующий этап анализа следует проводить только в вытяжном шкафу!)
К сухому остатку в концентраторе, полученному в п. 9.1.1, прибавляют 4 куб. см концентрированной серной кислоты и тщательно обмывают стенки концентратора. Концентратор оставляют при комнатной температуре на 20 мин. По истечении этого времени в концентратор осторожно прибавляют 20 куб. см дистиллированной воды, перемешивают и охлаждают полученную смесь до комнатной температуры. Затем в концентратор добавляют 10 М раствор щелочи до рН 3, перемешивают и охлаждают до комнатной температуры. Помещают концентратор в ультразвуковую ванну на 1 — 2 мин., а затем содержимое фильтруют в чистый концентратор объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Исходный концентратор обмывают 10 куб. см дистиллированной воды, выдерживают в ультразвуковой ванне 1 — 2 мин. и фильтруют в тот же концентратор. Объединенный раствор выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
К сухому остатку в концентраторе добавляют 10 куб. см метанола, тщательно обмывают стенки концентратора и помещают на 1 мин. в ультразвуковую ванну. Содержимое концентратора фильтруют в чистый концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Во избежание потерь исходный концентратор тщательно обмывают еще двумя порциями по 10 куб. см каждая 1%-ным раствором уксусной кислоты в метаноле и 10 куб. см метанола, каждый раз помещая концентратор в ультразвуковую ванну. Все порции фильтруют через слой безводного сульфата натрия в концентратор, а затем выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
9.1.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С16
К остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.2, добавляют 2 куб. см ацетонитрила, обмывая стенки концентратора, затем в концентратор прибавляют 8 куб. см очищенной воды, тщательно перемешивают, выдерживают концентратор в ультразвуковой ванне 1 — 2 мин. и отфильтровывают содержимое через фильтр «красная лента» в емкость для элюента. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см.
Исходный концентратор обмывают 2 куб. см ацетонитрила, прибавляют 8 куб. см воды, перемешивают, вносят на патрон. Элюаты объединяют в концентраторе объемом 100 куб. см и выпаривают до объема 1 — 2 куб. см на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
К остатку после упаривания добавляют 5 куб. см очищенной воды, перемешивают содержимое концентратора и помещают на 1 — 2 мин. в ультразвуковую ванну.
Далее проводят очистку экстракта на концентрирующих патронах Диапак П.
9.1.4 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак П
Раствор, полученный по п. 9.1.3, наносят на заранее подготовленный патрон Диапак П, элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают последовательно 20 куб. см очищенной воды, затем 20 куб. см 1%-ного водного раствора уксусной кислоты. Полученные растворы последовательно вносят на патрон, элюаты отбрасывают.
Аминопиралид элюируют с патрона 20 куб. см 1%-ного раствора уксусной кислоты в метаноле. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
9.1.5 Бутилирование экстракта
К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.2, добавляют 4 куб. см бутилирующей смеси, проводят бутилирование, как указано в п. 7.3.1 «Бутилирование экстракта».
Полученный бутиловый эфир Аминопиралида подвергают дополнительной очистке на колонках с Флоризилом.
9.1.6 Очистка бутилированного экстракта на колонках с Флоризилом
Из верхнего (гексанового) слоя в виале, полученного в п. 9.1.5, отбирают 2 куб. см и наносят на заранее подготовленную колонку с Флоризилом.
Исходную колбу обмывают сначала 10 куб. см гексана, затем 10 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1, последовательно наносят на колонку и элюаты отбрасывают.
Аминопиралид элюируют с колонки 15 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Сухой остаток растворяют в 5 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.2. Зерно кукурузы
9.2.1 Экстракция
Образец измельченного зерна кукурузы массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют 75 куб. см водно-спиртового раствора щелочи и помещают на 30 мин. на механический встряхиватель. Пробу центрифугируют в течение 15 мин. при скорости 4000 об./мин. и экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 40 куб. см водно-спиртового раствора щелочи и помещая каждый раз на 30 мин. на механический встряхиватель. Пробы центрифугируют в течение 15 мин. при скорости 4000 об./мин., супернатант фильтруют. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см. К объединенному экстракту прибавляют 5 куб. см 2 М соляной кислоты и упаривают до водного остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Далее проводят очистку экстракта по схеме, указанной в пунктах 9.1.2 - 9.1.6.
Сухой остаток после упаривания растворяют в 5 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.3. Семена рапса
9.3.1 Экстракция
Образец измельченных семян рапса массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют 75 куб. см водно-спиртового раствора щелочи и помещают на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Пробу центрифугируют в течение 15 мин. при скорости 4000 об./мин. и экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 40 куб. см водно-спиртового раствора щелочи и помещая на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют в течение 15 мин. при скорости 4000 об./мин., супернатант фильтруют. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см. К объединенному экстракту прибавляют 5 куб. см 2 М соляной кислоты и упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
9.3.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
К водному остатку в концентраторе, полученному в п. 9.3.1, прибавляют 25 куб. см ацетонитрила, обмывают стенки концентратора и добавляют 25 куб. см дистиллированной воды, переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Полученную водную фракцию промывают двумя порциями гексана по 30 куб. см каждая, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а водную фракцию переносят в чистый концентратор объемом 250 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С.
Далее проводят очистку экстракта по схеме, указанной в пунктах 9.1.2 - 9.1.6.
Сухой остаток после упаривания растворяют в 5 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.4. Масло кукурузы и рапса
9.4.1 Экстракция
Из пробы кукурузного (или рапсового) масла отбирают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см навеску массой 20 г, добавляют 50 куб. см гексана и 75 куб. см подкисленного ацетонитрила и помещают на 30 мин. на механический встряхиватель, а затем на 10 мин. в ультразвуковую ванну. Содержимое банки переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см, после разделения слоев нижний слой (ацетонитрил) фильтруют через фильтр «красная лента» в концентратор объемом 250 куб. см, а верхний (гексановый) слой возвращают в банку для экстракции. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 и 50 куб. см подкисленного ацетонитрила и помещая на 30 мин. на механический встряхиватель, а затем на 10 мин. в ультразвуковую ванну.
Объединенный ацетонитрильный экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С.
Далее проводят очистку экстракта по схеме, указанной в пунктах 9.1.2 - 9.1.6.
Сухой остаток после упаривания растворяют в 5 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.5. Условия хроматографирования
Хроматограф газовый «Кристалл 2000 м» с электронно-захватным детектором -14
с пределом детектирования по Линдану 4 х 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки. Номер в государственном реестре средств измерений
14516-95.
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-1 (Crosslinked Methyl Siloxane), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.
Температура термостата программированная. Начальная температура — 180 °С, выдержка 2 мин.; нагрев колонки по 10 град./мин. до температуры 240 °С, выдержка 7 мин.
Температура: детектора — 340 °С; испарителя — 260 °С.
Газ-носитель — гелий (Г1): тип регулятора расхода газа — РРГ 11, линейная скорость — 22 см/с, давление на входе 102,9 кПа.
Газ 2 (Г2) — гелий, расход 1 куб. см/мин., сброс 1:50, начало сброса — 20 с, длительность сброса — 2 мин.
Газ 3 (Г3) — азот (поддув в детектор), расход во время анализа — 45 куб. см/мин.
Продувка системы после анализа при температуре 260 °С в течение 4 мин.: продувка испарителя гелием — 50 куб. см/мин.; продувка детектора азотом — 65 куб. см/мин.
Абсолютное время удерживания Аминопиралида — 10 мин. 11 с +/- 2%.
Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.
Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,01 — 0,1 нг.
10. Обработка результатов анализа
Содержание Аминопиралида в образцах зеленой массы, зерна и масла кукурузы, семян и масла рапса рассчитывают по формуле:
S х A х V
пр
Х = ------------- х Р, 100 х S х m ст
где:
X - содержание Аминопиралида в пробе, мг/кг;
S - высота (площадь) пика стандарта, мВ;
ст
S - высота (площадь) пика образца, мВ;
пр
A - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m - масса анализируемого образца, г;
P - содержание Аминопиралида в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 х |X - X | х 100
1 2 ------------------ <= r, (1)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 х сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела
повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности P = 0,95,
где:
_
X - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта х X
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,02 мг/кг» <*>.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта х X
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
_ _ К = X' - X - C , к д _ _ где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 К = \/ ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в
условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 х |X - X | х 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(Х + Х )
1 2
где:
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
табл. 1), %.
14. Разработчики
Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева.
Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов».