--- title: "\"МУК 4.1.2917-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Тритиконазола в семенах и масле сои методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания\"" number: "МУК 4.1.2917-11" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2917-11" --- ## "МУК 4.1.2917-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Тритиконазола в семенах и масле сои методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания" # "МУК 4.1.2917-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Тритиконазола в семенах и масле сои методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания" (утв. Роспотребнадзором 12.07.2011) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ [введен](#p100002) в действие с 12 июля 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
12 июля 2011 года
#### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТРИТИКОНАЗОЛА В СЕМЕНАХ** **И МАСЛЕ СОИ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **МУК 4.1.2917-11**
Дата введения:
с момента утверждения
1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1). 2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г. 3. Введены в действие с момента утверждения. 4. Введены впервые. Свидетельство о метрологической аттестации N 0088.05.05.11 от 11.05.2011. Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Тритиконазола в семенах и масле сои в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг. Название по ИЮПАК: (+/-)-(Е)-2,2-диметил-1-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-5-(4-хлор-бензилиден)циклопентан-1-ол. Эмпирическая формула: C H ClN O. 17 20 3 Структурная формула (не приводится). Молекулярная масса: 317,82. Агрегатное состояние: порошок. Цвет, запах: белый, без запаха. -5 Давление паров: 0,1 х 10 мПа при 50 °С. Плотность (при 20 °С): 1,326 - 1,369 г/куб. см. Коэффициент распределения октанол/вода: K log P = 3,29 (при 20 °С). ow Растворимость в воде: 9,3 мг/куб. дм, не зависит от величины pH. Растворимость в органических растворителях (г/100 куб. см при 25 °С): дихлорметан - 19,1; ацетон - 7,45; этилацетат - 4,86; толуол - 1,26; гексан - 0,012; метанол - 1,82; изопропанол - 0,76; 1-октанол - 0,62. Тритиконазол термостабилен до 180 °С и устойчив к гидролизу. Не разлагается в водном растворе в темноте в течение 2 лет. В почве Тритиконазол высокостоек Т от 224 до 360 дней при 10 °С. В 50 растениях соединение метаболизируется до гидроксипроизводных. Краткая токсикологическая характеристика: Тритиконазол относится к веществам, мало опасным по острой пероральной и дермальной токсичности (ЛД для крыс более 2000 мг/кг), но опасным веществам по ингаляционной 50 токсичности (ЛК для крыс (4 ч) более 1400 мг/куб. м). Не раздражает 50 кожные покровы и слизистую глаз кроликов. Тритиконазол - фунгицид системного действия из группы ингибиторов синтеза стеролов, эффективно подавляет развитие головневых грибов, возбудителей плесневения семян при использовании в качестве протравителя семян и при обработке растений - мучнистой росы, пятнистости листьев зерновых культур и кукурузы. Применяется для подавления пыльной, твердой головни, гельминтоспориозных и фузариозных корневых гнилей, септориоза и плесневания семян с нормой расхода 30 - 50 г д.в. на т семян в зависимости от культуры путем протравливания семян с увлажнением перед посевом или заблаговременно до посева (до 1 года). В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,005 мг/кг массы тела человека; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,8 мг/куб. м; ПДК в воде водоемов - 0,001 мг/куб. дм; ПДК в воде рыбохозяйственных водоемов - 0,001 мг/куб. дм; ОДК в почве - 0,1 мг/кг; МДУ в зерне хлебных злаков - 0,04 мг/кг, в зерне кукурузы и проса - 0,1 мг/кг. МДУ Тритиконазола (в импортируемой продукции): в семенах и масле сои - 0,02 мг/кг.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в [табл. 1](#p100034) для соответствующих диапазонов концентраций. Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в [табл. 2](#p100039).
Таблица 1
**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ ТРИТИКОНАЗОЛА**
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, Р = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Семена сои | 0,01 - 0,1 | 50 | 4,02 | 11,18 | 15,65 | | Масло сои | 0,01 - 0,1 | 50 | 3,87 | 10,76 | 15,08 |
Таблица 2
**ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ,**
**ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ ТРИТИКОНАЗОЛА**
Анализируемый объектМетрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
Предел обнаружения, мг/кгДиапазон определяемых концентраций, мг/кгПолнота извлечения вещества, %Стандартное отклонение, S, %Доверительный интервал среднего результата, +/-, %
Семена сои0,010,01 - 0,185,553,001,41
Масло сои0,010,01 - 0,183,352,831,11
2. Метод измерения
Метод основан на определении Тритиконазола методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов после экстракции его из семян сои этилацетатом, масла сои ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на колонках с Флоризилом и на концентрирующих патронах Диапак С16. Идентификация проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки. В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором капиллярной колонки и условий программирования температуры.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные
устройства и материалы
#### 3.1 Средства измерений Весы аналитические "OHAUS", ЕР 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-1 - специальный (I) Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г "ACCULAB" V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-1 - средний (III) Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Микрошприц для газовой хроматографии "Hamilton, 1700", объем 10 куб. мм, фирма "SUPELCO", кат. N 20972 Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см [ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) Хроматограф газовый "Кристалл 2000м" с детектором по захвату электронов (ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану -14 4 х 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки. Номер в государственном реестре средств измерений 14516-95 Цилиндры мерные на 10,25 и 50 куб. см [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. #### 3.2 Реактивы Тритиконазол, CAS 131983-72-7, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 96,1%, фирма Dr. Ehreustorfer GmbH, аккредитованная по ИСО 9001:2000 Азот, осч ГОСТ 9293-74 Ацетон, ос.ч. ТУ 6-09-3513-86 Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм ТУ 6-09-2167-84 Вода бидистиллированная (бидистиллят), деионизированная или перегнанная над KMnO ГОСТ 6709-72 4 Гелий очищенный марки "А" ТУ 51-940-80 n-Гексан, хч ТУ 6-09-3818-89 Калий марганцово-кислый, чда ГОСТ 20490-75 Кальций хлористый, ч. ТУ 6-09-4711-81 Концентрирующие патроны Диапак С16 (0,6 г), фирма "БиоХимМак СТ" ТУ 4215-002-05451931-94 Натрий серно-кислый безводный, хч [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233-77 Этилацетат, чда [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) Флоризил(R) (магния силикат, 99%, CAS 1343-88-0) для колоночной хроматографии, зернение 60/100 меш, фирма "Acros Organics"
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
#### 3.3 Вспомогательные устройства, материалы Аллонж прямой с отводом для вакуума (АО-14/23) для работы с концентрирующими патронами ГОСТ 25336-82 Аппарат для встряхивания проб "SKLO **UNION TYP LT1"** Виалы (пузырьки) с тефлоновыми прокладками емкостью 40 куб. см, кат. N Z 27,702-9, фирма "Aldrich" Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная [ГОСТ 5556-81](https://bukva.ai/docs/gost-5556-81) Воронки делительные на 250 куб. см ГОСТ 25336-82 Воронки лабораторные стеклянные ГОСТ 25336-82 Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма "Buchi" Колбы конические плоскодонные на 100, 250 500 и 1000 куб. см ГОСТ 25336-82 Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 куб. см и 4000 куб. см ТС ТУ 92-891.029-91 Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-1 (100% метилсилоксан), длина 5 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,65 мкм, фирма "Hewlett Packard" Насос диафрагменный FT.19 фирмы KNF Neu Laboport Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100 - 500 куб. см ГОСТ 25336-82 Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической колбой объемом 1000 куб. см Фильтры бумажные "красная лента" ТУ 6-09-1678-86 Центрифуга MPW-350e с набором полипропиленовых банок емкостью 200 куб. см
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. 4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004. 5. Требования к квалификации операторов К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа. 6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия: - процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
- выполнение измерений на газожидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору. 7. Подготовка к определению Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак С16 и колонок с Флоризилом для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах Диапак С16 и на колонках с Флоризилом, установление градуировочной характеристики.
#### 7.1 Подготовка органических растворителей ##### 7.1.1 Очистка ацетонитрила Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5° С, отбрасывают. ##### 7.1.2 Очистка ацетона Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцово-кислый калий из расчета 1 г/куб. дм. Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С, отбрасывают. ##### 7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцово-кислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.
#### 7.2 Приготовление градуировочных растворов ##### 7.2.1 Стандартный раствор N 1 с концентрацией Тритиконазола 1,0 мг/куб. см Взвешивают 50 мг Тритиконазола в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и построения калибровочной кривой. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 12 месяцев. ##### 7.2.2 Стандартный раствор N 2 с концентрацией Тритиконазола 10,0 мкг/куб. см Из стандартного [раствора N 1](#p100112) отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов и построения калибровочной кривой. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев. ##### 7.2.3 Стандартный раствор N 3 с концентрацией Тритиконазола 1,0 мкг/куб. см Из стандартного [раствора N 2](#p100114) отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 3 используется для приготовления стандартных растворов и для построения калибровочной кривой. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев. ##### 7.2.4 Стандартный раствор N 4 с концентрацией Тритиконазола 0,5 мкг/куб. см Из стандартного [раствора N 3](#p100116) отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 4 используется для приготовления стандартных растворов и для построения калибровочной кривой. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев. ##### 7.2.5 Стандартный раствор N 5 с концентрацией Тритиконазола 0,25 мкг/куб. см Из стандартного [раствора N 4](#p100118) отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 5 используется для построения калибровочной кривой. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев. ##### 7.2.6 Стандартный раствор N 6 с концентрацией Тритиконазола 0,1 мкг/куб. см Из стандартного [раствора N 3](#p100116) отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 6 используется для построения калибровочной кривой. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев. ##### 7.2.7 Стандартный раствор N 7 с концентрацией Тритиконазола 0,05 мкг/куб. см
Из стандартного [раствора N 4](#p100118) отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 7 используется для построения калибровочной кривой. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.
#### 7.3 Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Тритиконазола в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,5; 0,25; 0,1 и 0,05 мкг/куб. см.
В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.3](#p100174). Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
#### 7.4 Подготовка колонок с Флоризилом для очистки экстракта
и проверка хроматографического поведения
Тритиконазола на них
##### 7.4.1 Подготовка колонки с Флоризилом для очистки экстракта В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 4 г Флоризила с зернением 60/100 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. На слой Флоризила наносят слой безводного серно-кислого натрия толщиной 1 см. Непосредственно перед нанесением пробы колонку промывают 30 куб. см ацетона, тщательно отжимают. ##### 7.4.2 Проверка хроматографического поведения Тритиконазола на колонке с Флоризилом В концентратор объемом 100 куб. см вносят 1 куб. см стандартного раствора Тритиконазола в ацетоне с концентрацией 0,5 мкг/куб. см и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора, добавляют 5 куб. см гексана, перемешивают и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Исходную колбу обмывают сначала 20 куб. см гексана, затем 25 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 5:1, а затем еще пятью порциями смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:1 объемом 5 куб. см каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф. Определяют фракции, содержащие Тритиконазол, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Тритиконазола на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии Флоризила.
#### 7.5 Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16
для очистки экстракта и проверка хроматографического
поведения Тритиконазола на них
##### 7.5.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак C16 для очистки экстракта Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 - 2 кап./с). Патрон Диапак С16 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов). Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см ацетона, затем 10 куб. см воды. Элюаты отбрасывают. ##### 7.5.2 Проверка хроматографического поведения Тритиконазола на концентрирующих патронах Диапак С16 В концентратор объемом 100 куб. см вносят 1 куб. см стандартного раствора Тритиконазола в ацетоне с концентрацией 0,5 мкг/куб. см и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора, добавляют 9 куб. см воды, перемешивают и наносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Исходную колбу обмывают сначала 10 куб. см смеси ацетона с водой в соотношении 1:3, затем четырьмя порциями смеси ацетона с водой в соотношении 1:1 объемом 5 куб. см каждая и последовательно вносят их на патрон. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф. Определяют фракции, содержащие Тритиконазол, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Тритиконазола на концентрирующих патронах Диапак С16 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов. 8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с [ГОСТ Р 52062-03](https://bukva.ai/docs/pravila-gost-r-52062-2003) "Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб", [ГОСТ 10852-86](https://bukva.ai/docs/3979) "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб". Пробы семян сои подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
Пробы масла сои хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 - 4 °С не более 2 недель. 9. Подготовка проб и выполнение измерений
#### 9.1 Семена сои ##### 9.1.1 Экстракция Образец измельченных семян сои массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют 50 куб. см этилацетата и помещают на 45 мин. на аппарат для встряхивания проб. Пробу центрифугируют в течение 10 мин. при скорости 4000 об./мин. и экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 30 куб. см этилацетата и помещая каждый раз на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют в течение 10 мин. при скорости 4000 об./мин., супернатант фильтруют. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. ##### 9.1.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей К сухому остатку в концентраторе, полученному в [п. 9.1.1](#p100156), прибавляют 1 куб. см ацетона, обмывают стенки концентратора и добавляют 20 куб. см гексана, переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Тритиконазол экстрагируют тремя порциями ацетонитрила по 20 куб. см, каждый раз встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а ацетонитрил объединяют в плоскодонной колбе объемом 250 куб. см. Объединенные ацетонитрильные экстракты возвращают в делительную воронку, добавляют 20 куб. см гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний ацетонитрильный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см, а верхний (гексан) отбрасывают. Ацетонитрильную фракцию возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру еще один раз, используя 20 куб. см гексана. Ацетонитрильный экстракт собирают в концентратор объемом 250 куб. см, пропуская через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. ##### 9.1.3 Очистка экстракта на колонке с Флоризилом Сухой остаток в концентраторе, полученный по [п. 9.1.2](#p100158), растворяют в 1 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют 5 куб. см гексана, перемешивают и наносят на заранее подготовленную колонку с Флоризилом, элюат отбрасывают. Исходную колбу последовательно обмывают 20 куб. см гексана, 25 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:5 и 5 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:1, вносят полученные растворы на колонку, а элюаты отбрасывают. Тритиконазол элюируют с колонки 20 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:1, элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в испаритель хроматографа.
#### 9.2 Масло сои ##### 9.2.1 Экстракция и очистка полученного экстракта Из пробы соевого масла отбирают в стакан навеску массой 10 г, добавляют 50 куб. см гексана, тщательно обмывая стенки стакана, и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Добавляют в делительную воронку 50 куб. см ацетонитрила и встряхивают смесь в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний (ацетонитрильный) слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 30 куб. см ацетонитрила, встряхивая делительную воронку каждый раз в течение 2 мин. Объединенный ацетонитрильный экстракт переносят в новую делительную воронку, добавляют 20 куб. см гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний ацетонитрильный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см, а верхний (гексан) отбрасывают. Ацетонитрильную фракцию возвращают в делительную воронку, повторяют процедуру еще раз, используя 30 куб. см гексана. Ацетонитрильный экстракт собирают в концентратор и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. ##### 9.2.2 Очистка экстракта на колонке с Флоризилом Сухой остаток, полученный по [п. 9.2.1](#p100167), растворяют в 1 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 5 куб. см гексана, перемешивают и проводят очистку на колонках с Флоризилом, как указано в [п. 9.1.3](#p100161) "Очистка экстракта на колонках с Флоризилом". ##### 9.2.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С16 Сухой остаток, полученный по [п. 9.2.2](#p100169), растворяют в 1 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см воды, тщательно перемешивают и наносят на заранее подготовленный патрон Диапак С16, элюат отбрасывают. Промывают патрон 10 куб. см смеси ацетона с водой в соотношении 1:3, элюат отбрасывают. Тритиконазол элюируют 15 куб. см смеси ацетона с водой в соотношении 1:1, собирая элюент в концентратор объемом 100 куб. см, и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С.
Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
#### 9.3 Условия хроматографирования Хроматограф газовый "Кристалл 2000м" с детектором по захвату электронов -14 (ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану 4 х 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки. Номер в государственном реестре средств измерений 14516-95. Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-1 (100%-ой метилсилоксан), длина 5 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,65 мкм, фирма "НР". Температура детектора - 320 °С, испарителя - 260 °С, программированный нагрев колонки с 220 °С (выдержка 2 мин.) по 10 град./мин. до 260 °С (выдержка 6 мин.). Газ 1: тип регулятора расхода газа РРГ 11, режим нормальный, скорость 50 см/с, давление 9,1 кПа. Газ 2 (гелий) - 10 куб. см/мин.: расход 0,5 куб. см/мин., сброс 1:20. Газ 3 (азот, поддув детектора) - 45 куб. см/мин. Абсолютное время удерживания Тритиконазола: 6,33 мин. +/- 2%.
Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,05 - 0,5 нг. 10. Обработка результатов анализа
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа "Хроматэк Аналитик", версия 1.20. Альтернативная обработка результатов. Содержание Тритиконазола рассчитывают по формуле: S х А х V пр Х = ------------- х Р , 100 х S х m ст где: X - содержание Тритиконазола в пробе, мг/кг; S - высота (площадь) пика стандарта, мВ; ст S - высота (площадь) пика образца, мВ; пр А - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см; V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см; m - масса анализируемого образца, г;
Р - содержание Тритиконазола в аналитическом стандарте, %. 11. Проверка приемлемости результатов
параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1): 2 х |X + X | х 100 1 2 ------------------- <= r, (1) (X + X ) 1 2 где: X , X - результаты параллельных определений, мг/кг; 1 2 r - значение предела повторяемости [(табл. 1)](#p100034), при этом r = 2,8 х сигма . r
При невыполнении [условия (1)](#p100190) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ. 12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде: _ (X +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности Р = 0,95, где: _ X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг; _ дельта х X ДЕЛЬТА = ----------, 100 где: дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100034)), %. В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг" <*>. ---
<*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения.
13. Контроль качества результатов измерений Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений". #### 13.1 Контроль стабильности градуировочной характеристики. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Контроль стабильности градуировочной характеристики для Тритиконазола проводят при смене основного градуировочного раствора N 1 каждые 12 месяцев, при смене основных градуировочных растворов N 2 и 3 - каждые 6 месяцев, при смене основных градуировочных растворов N 4, 5, 6 и 7 - каждые 3 месяца, а также в начале и окончании каждой серии анализов. При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание Тритиконазола в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 0,5 мкг/куб. см. Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение: (X - С) х 100 А = ------------- <= 7,54, С где: X- концентрация Тритиконазола контрольного измерения, мкг/куб. см; С - известная концентрация градуировочного раствора Тритиконазола в гексане, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/куб. см; 7,54 - погрешность градуировочной характеристики, %. Если величина расхождения (А) превышает 4,5%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов Тритиконазола, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно [п. 7.3](#p100126). 13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок. Величина добавки С должна удовлетворять условию: д С = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X' где +/-ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце сдобавкой соответственно), мг/кг, при этом: ДЕЛЬТА = +/- 0,84 ДЕЛЬТА, л где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг; _ дельта х X ДЕЛЬТА = ----------, 100 где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100034)), %. Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к _ _ К = X' - X - С , к д _ _ где X', X, С - среднее арифметическое результатов параллельных д определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100188)), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг. Норматив контроля К рассчитывают по формуле: _____________________ / 2 2 К = \/ ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом к контроля (К). Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию: |К | <= К, (2) к процедуру анализа признают удовлетворительной. При невыполнении [условия (2)](#p100226) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению. 13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости. Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R): 2 х |X - X | х 100 1 2 ------------------- <= R, (3) (X + X ) 1 2 где: X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг; 1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
[табл. 1](#p100034)), %.
14. Разработчики Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". ---