МУК 4.1.2917-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Тритиконазола в семенах и масле сои методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2917-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Тритиконазола в семенах и масле сои методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2917-11. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2917-11
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 12 июля 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
12 июля 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТРИТИКОНАЗОЛА В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ СОИ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.2917-11
с момента утверждения
1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 № 1).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.
3. Введены в действие с момента утверждения.
Свидетельство о метрологической аттестации № 0088.05.05.11 от 11.05.2011.
Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Тритиконазола в семенах и масле сои в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.
Название по ИЮПАК: (+/-)-(Е)-2,2-диметил-1-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-5-(4-хлор-бензилиден)циклопентан-1-ол.
Эмпирическая формула: C H ClN O. 17 20 3
Структурная формула (не приводится).
Агрегатное состояние: порошок.
Цвет, запах: белый, без запаха. -5
Давление паров: 0,1 х 10 мПа при 50 °С.
Плотность (при 20 °С): 1,326 — 1,369 г/куб. см.
Коэффициент распределения октанол/вода: K log P = 3,29 (при 20 °С). ow
Растворимость в воде: 9,3 мг/куб. дм, не зависит от величины pH.
Растворимость в органических растворителях (г/100 куб. см при 25 °С): дихлорметан — 19,1; ацетон — 7,45; этилацетат — 4,86; толуол — 1,26; гексан — 0,012; метанол — 1,82; изопропанол — 0,76; 1-октанол — 0,62.
Тритиконазол термостабилен до 180 °С и устойчив к гидролизу. Не разлагается в водном растворе в темноте в течение 2 лет.
В почве Тритиконазол высокостоек Т от 224 до 360 дней при 10 °С. В 50 растениях соединение метаболизируется до гидроксипроизводных.
Краткая токсикологическая характеристика: Тритиконазол относится к веществам, мало опасным по острой пероральной и дермальной токсичности (ЛД для крыс более 2000 мг/кг), но опасным веществам по ингаляционной
50 токсичности (ЛК для крыс (4 ч) более 1400 мг/куб. м). Не раздражает 50 кожные покровы и слизистую глаз кроликов.
Тритиконазол — фунгицид системного действия из группы ингибиторов синтеза стеролов, эффективно подавляет развитие головневых грибов, возбудителей плесневения семян при использовании в качестве протравителя семян и при обработке растений — мучнистой росы, пятнистости листьев зерновых культур и кукурузы.
Применяется для подавления пыльной, твердой головни, гельминтоспориозных и фузариозных корневых гнилей, септориоза и плесневания семян с нормой расхода 30 — 50 г д.в. на т семян в зависимости от культуры путем протравливания семян с увлажнением перед посевом или заблаговременно до посева (до 1 года).
В России установлены следующие гигиенические нормативы:
ДСД — 0,005 мг/кг массы тела человека; ОБУВ в воздухе рабочей зоны — 0,8 мг/куб. м; ПДК в воде водоемов — 0,001 мг/куб. дм; ПДК в воде рыбохозяйственных водоемов — 0,001 мг/куб. дм; ОДК в почве — 0,1 мг/кг; МДУ в зерне хлебных злаков — 0,04 мг/кг, в зерне кукурузы и проса — 0,1 мг/кг.
МДУ Тритиконазола (в импортируемой продукции): в семенах и масле сои — 0,02 мг/кг.
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, Р = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Семена сои | 0,01 — 0,1 | 50 | 4,02 | 11,18 | 15,65 |
| Масло сои | 0,01 — 0,1 | 50 | 3,87 | 10,76 | 15,08 |
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ,
ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ ТРИТИКОНАЗОЛА
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20 | ||||
| Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Полнота извлечения вещества, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Семена сои | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 85,55 | 3,00 | 1,41 |
| Масло сои | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 83,35 | 2,83 | 1,11 |
Метод основан на определении Тритиконазола методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов после экстракции его из семян сои этилацетатом, масла сои ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на колонках с Флоризилом и на концентрирующих патронах Диапак С16.
Идентификация проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором капиллярной колонки и условий программирования температуры.
3.1 Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», ЕР 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-1 — специальный (I)
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г «ACCULAB» V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-1 — средний (III)
Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Микрошприц для газовой хроматографии «Hamilton, 1700», объем 10 куб. мм, фирма «SUPELCO», кат. № 20972
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см ГОСТ 29227-91
Хроматограф газовый «Кристалл 2000м» с детектором по захвату электронов (ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану -14 4 х 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки. Номер в государственном реестре средств измерений 14516-95
Цилиндры мерные на 10,25 и 50 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2 Реактивы
Тритиконазол, CAS 131983-72-7, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 96,1%, фирма Dr. Ehreustorfer GmbH, аккредитованная по ИСО 9001:2000
Ацетон, ос.ч. ТУ 6-09-3513-86 Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм ТУ 6-09-2167-84
Вода бидистиллированная (бидистиллят), деионизированная или перегнанная над KMnO ГОСТ 6709-72 4
Гелий очищенный марки "А" ТУ 51-940-80 n-Гексан, хч ТУ 6-09-3818-89
Калий марганцово-кислый, чда ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, ч. ТУ 6-09-4711-81
Концентрирующие патроны Диапак С16 (0,6 г), фирма «БиоХимМак СТ» ТУ 4215-002-05451931-94
Натрий серно-кислый безводный, хч ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233-77
Этилацетат, чда ГОСТ 22300-76
Флоризил(R) (магния силикат, 99%, CAS 1343-88-0) для колоночной хроматографии, зернение 60/100 меш, фирма «Acros Organics»
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3 Вспомогательные устройства, материалы
Аллонж прямой с отводом для вакуума (АО-14/23) для работы с концентрирующими патронами ГОСТ 25336-82
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1»
Виалы (пузырьки) с тефлоновыми прокладками емкостью 40 куб. см, кат. № Z 27,702-9, фирма «Aldrich»
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная ГОСТ 5556-81
Воронки делительные на 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные стеклянные ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма «Buchi»
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 500 и 1000 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 куб. см и 4000 куб. см ТС ТУ 92-891.029-91
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-1 (100% метилсилоксан), длина 5 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,65 мкм, фирма «Hewlett Packard»
Насос диафрагменный FT.19 фирмы KNF Neu Laboport
Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100 — 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической колбой объемом 1000 куб. см
Фильтры бумажные «красная лента» ТУ 6-09-1678-86
Центрифуга MPW-350e с набором полипропиленовых банок емкостью 200 куб. см
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
- выполнение измерений на газожидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак С16 и колонок с Флоризилом для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах Диапак С16 и на колонках с Флоризилом, установление градуировочной характеристики.
7.1 Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5° С, отбрасывают.
7.1.2 Очистка ацетона
Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцово-кислый калий из расчета 1 г/куб. дм.
Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С, отбрасывают.
7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды
Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцово-кислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.
7.2 Приготовление градуировочных растворов
7.2.1 Стандартный раствор № 1 с концентрацией Тритиконазола 1,0 мг/куб. см
Взвешивают 50 мг Тритиконазола в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и построения калибровочной кривой. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 12 месяцев.
7.2.2 Стандартный раствор № 2 с концентрацией Тритиконазола 10,0 мкг/куб. см
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов и построения калибровочной кривой. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.3 Стандартный раствор № 3 с концентрацией Тритиконазола 1,0 мкг/куб. см
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов и для построения калибровочной кривой. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.4 Стандартный раствор № 4 с концентрацией Тритиконазола 0,5 мкг/куб. см
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используется для приготовления стандартных растворов и для построения калибровочной кривой. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.
7.2.5 Стандартный раствор № 5 с концентрацией Тритиконазола 0,25 мкг/куб. см
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 5 используется для построения калибровочной кривой. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.
7.2.6 Стандартный раствор № 6 с концентрацией Тритиконазола 0,1 мкг/куб. см
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 6 используется для построения калибровочной кривой. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.
7.2.7 Стандартный раствор № 7 с концентрацией Тритиконазола 0,05 мкг/куб. см
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 7 используется для построения калибровочной кривой. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.
7.3 Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Тритиконазола в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,5; 0,25; 0,1 и 0,05 мкг/куб. см.
В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
7.4 Подготовка колонок с Флоризилом для очистки экстракта
и проверка хроматографического поведения
Тритиконазола на них
7.4.1 Подготовка колонки с Флоризилом для очистки экстракта
В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 4 г Флоризила с зернением 60/100 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. На слой Флоризила наносят слой безводного серно-кислого натрия толщиной 1 см.
Непосредственно перед нанесением пробы колонку промывают 30 куб. см ацетона, тщательно отжимают.
7.4.2 Проверка хроматографического поведения Тритиконазола на колонке с Флоризилом
В концентратор объемом 100 куб. см вносят 1 куб. см стандартного раствора Тритиконазола в ацетоне с концентрацией 0,5 мкг/куб. см и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора, добавляют 5 куб. см гексана, перемешивают и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.
Исходную колбу обмывают сначала 20 куб. см гексана, затем 25 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 5:1, а затем еще пятью порциями смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:1 объемом 5 куб. см каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Определяют фракции, содержащие Тритиконазол, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Тритиконазола на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии Флоризила.
7.5 Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16
для очистки экстракта и проверка хроматографического
поведения Тритиконазола на них
7.5.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак C16 для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 — 2 кап./с).
Патрон Диапак С16 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см ацетона, затем 10 куб. см воды. Элюаты отбрасывают.
7.5.2 Проверка хроматографического поведения Тритиконазола на концентрирующих патронах Диапак С16
В концентратор объемом 100 куб. см вносят 1 куб. см стандартного раствора Тритиконазола в ацетоне с концентрацией 0,5 мкг/куб. см и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора, добавляют 9 куб. см воды, перемешивают и наносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.
Исходную колбу обмывают сначала 10 куб. см смеси ацетона с водой в соотношении 1:3, затем четырьмя порциями смеси ацетона с водой в соотношении 1:1 объемом 5 куб. см каждая и последовательно вносят их на патрон. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Определяют фракции, содержащие Тритиконазол, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Тритиконазола на концентрирующих патронах Диапак С16 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» № 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ Р 52062-03 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».
Пробы семян сои подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
Пробы масла сои хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 — 4 °С не более 2 недель.
9.1 Семена сои
9.1.1 Экстракция
Образец измельченных семян сои массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют 50 куб. см этилацетата и помещают на 45 мин. на аппарат для встряхивания проб. Пробу центрифугируют в течение 10 мин. при скорости 4000 об./мин. и экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 30 куб. см этилацетата и помещая каждый раз на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют в течение 10 мин. при скорости 4000 об./мин., супернатант фильтруют. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
9.1.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
К сухому остатку в концентраторе, полученному в п. 9.1.1, прибавляют 1 куб. см ацетона, обмывают стенки концентратора и добавляют 20 куб. см гексана, переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Тритиконазол экстрагируют тремя порциями ацетонитрила по 20 куб. см, каждый раз встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а ацетонитрил объединяют в плоскодонной колбе объемом 250 куб. см.
Объединенные ацетонитрильные экстракты возвращают в делительную воронку, добавляют 20 куб. см гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний ацетонитрильный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см, а верхний (гексан) отбрасывают. Ацетонитрильную фракцию возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру еще один раз, используя 20 куб. см гексана. Ацетонитрильный экстракт собирают в концентратор объемом 250 куб. см, пропуская через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
9.1.3 Очистка экстракта на колонке с Флоризилом
Сухой остаток в концентраторе, полученный по п. 9.1.2, растворяют в 1 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют 5 куб. см гексана, перемешивают и наносят на заранее подготовленную колонку с Флоризилом, элюат отбрасывают.
Исходную колбу последовательно обмывают 20 куб. см гексана, 25 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:5 и 5 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:1, вносят полученные растворы на колонку, а элюаты отбрасывают.
Тритиконазол элюируют с колонки 20 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:1, элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
9.2 Масло сои
9.2.1 Экстракция и очистка полученного экстракта
Из пробы соевого масла отбирают в стакан навеску массой 10 г, добавляют 50 куб. см гексана, тщательно обмывая стенки стакана, и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Добавляют в делительную воронку 50 куб. см ацетонитрила и встряхивают смесь в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний (ацетонитрильный) слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 30 куб. см ацетонитрила, встряхивая делительную воронку каждый раз в течение 2 мин. Объединенный ацетонитрильный экстракт переносят в новую делительную воронку, добавляют 20 куб. см гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний ацетонитрильный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см, а верхний (гексан) отбрасывают. Ацетонитрильную фракцию возвращают в делительную воронку, повторяют процедуру еще раз, используя 30 куб. см гексана. Ацетонитрильный экстракт собирают в концентратор и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
9.2.2 Очистка экстракта на колонке с Флоризилом
Сухой остаток, полученный по п. 9.2.1, растворяют в 1 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 5 куб. см гексана, перемешивают и проводят очистку на колонках с Флоризилом, как указано в п. 9.1.3 «Очистка экстракта на колонках с Флоризилом».
9.2.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С16
Сухой остаток, полученный по п. 9.2.2, растворяют в 1 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см воды, тщательно перемешивают и наносят на заранее подготовленный патрон Диапак С16, элюат отбрасывают. Промывают патрон 10 куб. см смеси ацетона с водой в соотношении 1:3, элюат отбрасывают. Тритиконазол элюируют 15 куб. см смеси ацетона с водой в соотношении 1:1, собирая элюент в концентратор объемом 100 куб. см, и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С.
9.3 Условия хроматографирования
Хроматограф газовый «Кристалл 2000м» с детектором по захвату электронов -14
(ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану 4 х 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки. Номер в государственном реестре
средств измерений 14516-95.
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-1 (100%-ой метилсилоксан), длина 5 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,65 мкм, фирма «НР».
Температура детектора — 320 °С, испарителя — 260 °С, программированный нагрев колонки с 220 °С (выдержка 2 мин.) по 10 град./мин. до 260 °С (выдержка 6 мин.).
Газ 1: тип регулятора расхода газа РРГ 11, режим нормальный, скорость 50 см/с, давление 9,1 кПа.
Газ 2 (гелий) — 10 куб. см/мин.: расход 0,5 куб. см/мин., сброс 1:20.
Газ 3 (азот, поддув детектора) — 45 куб. см/мин.
Абсолютное время удерживания Тритиконазола: 6,33 мин. +/- 2%.
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа «Хроматэк Аналитик», версия 1.20.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание Тритиконазола рассчитывают по формуле:
S х А х V
пр
Х = ------------- х Р , 100 х S х m ст
где:
X - содержание Тритиконазола в пробе, мг/кг;
S - высота (площадь) пика стандарта, мВ;
ст
S - высота (площадь) пика образца, мВ;
пр
А - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m - масса анализируемого образца, г;
Р - содержание Тритиконазола в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов
параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 х |X + X | х 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 х сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности Р = 0,95,
где:
_
X - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта х X
дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг» <*>.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
Контроль стабильности градуировочной характеристики для Тритиконазола проводят при смене основного градуировочного раствора № 1 каждые 12 месяцев, при смене основных градуировочных растворов № 2 и 3 — каждые 6 месяцев, при смене основных градуировочных растворов № 4, 5, 6 и 7 — каждые 3 месяца, а также в начале и окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание Тритиконазола в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 0,5 мкг/куб. см.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:
(X - С) х 100
X- концентрация Тритиконазола контрольного измерения, мкг/куб. см;
С — известная концентрация градуировочного раствора Тритиконазола в гексане, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/куб. см;
7,54 — погрешность градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения (А) превышает 4,5%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов Тритиконазола, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки С должна удовлетворять условию: д
С = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X' где +/-ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце сдобавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта х X
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
_ _ К = X' - X - С , к д _ _ где X', X, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 К = \/ ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
|К | <= К, (2) к процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 х |X - X | х 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,<br>
табл. 1), %.
Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева.
Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов».