МУК 4.1.2916-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств трициклазола в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе риса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания

(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Г. Г. Онищенко 12 июля 2011 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТРИЦИКЛАЗОЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.2916-11

Дата введения: с момента утверждения

1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 № 1).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации № 0089.05.05.11 от 11.05.2011.

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации трициклазола в воде в диапазоне 0,005 — 0,05 мг/дм3 и в почве в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг, а также уровня остаточных количеств в зеленой массе в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг, в зерне в диапазоне 0,02 — 0,2 мг/кг и соломе риса в диапазоне 0,1 — 1,0 мг/кг.

Название по ИЮПАК: 5-метил-1,2,4-триазоло[3,4-b]бензотиазол.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₉H₇N₃S.

Молекулярная масса: 189,2.

Агрегатное состояние: кристаллическое вещество.

Цвет, запах: вещество бежевого цвета без ощутимого запаха.

Температура плавления: 184,6 — 187,2 °C.

Температура кипения: 275 °C, разлагается до кипения.

Давление паров: 5,86 x 10-4 мПа (при 20 °C).

Растворимость в воде (при 20 °C) — 0,596 г/дм3.

Растворимость в органических растворителях (г/дм3, 20 °C): дихлорэтан — 42,94; метанол — 26,53; ацетон — 13,78; н-октанол — 7,49; ксилол — 4,94; этилацетат — 4,92; n-гептан — 0,019. В кислотных и основных растворителях не растворяется, так как не диссоциирует на ионы.

Коэффициент распределения октанол-вода (pH 7, 25 °C): Kow logP = 1,42.

Трициклазол стабилен в водных растворах в пределах pH от 3 до 10, при 20 °C.

Краткая токсикологическая характеристика: трициклазол относится к веществам умеренно опасным по острой пероральной (ЛД50 для самцов крыс — 337,5 мг/кг; для самок крыс — 289,7 мг/кг) и мало опасным по дермальной токсичности (ЛД50 для крыс более 2000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 ч) более 5000 мг/м3). Не вызывает раздражения глаз и не раздражает кожу. Трициклазол не генотоксичен и не онкогенен.

Область применения: трициклазол — фунгицид защитного действия, предотвращает проникновение в растение клеток гриба. Применяется для борьбы с пирикуляриозом (Pyricularia oryzae) в посевах риса с нормой расхода по препарату — 0,3 — 0,4 кг/га.

МДУ Трициклазола (в импортируемой продукции): зерно и солома риса — 1,0 мг/кг.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры для трициклазола

Анализируемый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)	Показатель точности (граница относительной погрешности), \pm \delta , %, P = 0,95	Стандартное отклонение повторяемости, \sigma_{r} , %	Предел повторяемости, r,%	Предел воспроизводимости, R, %
Вода	0,005 — 0,01 вкл.	40	2,62	7,28	10,20
	0,01 — 0,05 вкл.	30	4,32	12,01	16,82
Почва	0,05 — 0,1 вкл.	50	5,79	16,10	22,54
	0,1 — 0,5 вкл.	25	5,24	14,57	20,39
Зеленая масса	0,05 — 0,1 вкл.	50	4,54	12,62	17,67
	0,1 — 0,5 вкл.	25	6,04	16,79	23,51
Зерно риса	0,02 — 0,1 вкл.	50	3,14	8,73	12,22
	0,1 — 0,2 вкл.	25	5,46	15,18	21,26
Солома риса	0,1 — 1,0 вкл.	25	5,42	15,06	21,08

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для трициклазола

Анализируемый объект	Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20
	Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3)	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)	Полнота извлечения вещества, %	Стандартное отклонение, S, %	Доверительный интервал среднего результата, \pm , %
Вода	0,005	0,005 — 0,05	89,2	3,20	1,35
Почва	0,05	0,05 — 0,5	82,2	5,68	2,04
Зеленая масса	0,05	0,05 — 0,5	84,1	4,58	1,89
Зерно	0,02	0,02 — 2,0	84,7	3,95	1,63
Солома	0,10	0,10 — 1,0	78,3	4,26	1,54

2. Метод измерений

Метод основан на определении трициклазола методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после его экстракции из образцов органическими растворителями, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах Диапак С.

Идентификация проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором капиллярной колонки и условий программирования температуры.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений

Весы аналитические «OHAUS», ЕР 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-1 — специальный (I)
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г «ACCULAB» V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-1 — средний (III)
Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 см3	ГОСТ 1770-74
Микрошприц для газовой хроматографии «Hamilton, 1700», объем 10 мм3, фирма «SUPELCO», кат. № 20972
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 см3	ГОСТ 29227-91
Хроматограф газовый «Кристалл 5000.1» с термоионным детектором (ТИД) с пределом детектирования по фосфору в Паратион-метиле 3 x 10-14 г/см3 и приспособлениями для капиллярной колонки	Номер в государственном реестре средств измерений 14516-95
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 см3	ГОСТ 1770-74

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Трициклазол, CAS 131983-72-7 аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 98,0%, фирма Dr. Ehreustorfer GmbH, аккредитованная по ИСО-9001-2000
Азот, ос.ч.	ГОСТ 9293-74
Ацетон, ос.ч.	ТУ 6-09-3513-86
Ацетонитрил, ос.ч., УФ-200 нм	ТУ 6-09-2167-84
Вода бидистиллированная (бидистиллят), деионизированная или перегнанная над KMnO4	ГОСТ 6709-72
Гелий очищенный марки «А»	ТУ 51-940-80
n-Гексан, х.ч.	ТУ 6-09-3818-89
Калий марганцовокислый, ч.д.а.	ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, ч.	ТУ 6-09-4711-81
Кислота соляная, х.ч.	ГОСТ 3118-77
Концентрирующие патроны Диапак С (0,6 г), фирма «БиоХимМак СТ»	ТУ 4215-002-05451931-94
Метилен хлористый, х.ч.	ТУ 6-09-2662-77
Натрий сернокислый, безводный, х.ч.	ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, х.ч.	ГОСТ 4233-77

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Алонж прямой с отводом для вакуума (АО-14/23) для работы с концентрирующими патронами Диапак С	ГОСТ 25336-82
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1»
Банки с крышками для экстракции на 250 см3, полипропилен, кат. № 3120-0250, фирма «NALGENE»
Ванна ультразвуковая «UNITRA» UNIMA OLSZTYN UM-4
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная	ГОСТ 5556-81
Воронки делительные на 250 и 500 см3	ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные стеклянные	ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R 110 Buchi с водяной баней B-480, фирма «Buchi»
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 см3	ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 см3 и 4000 см3 ТС	ТУ 92-891.029-91
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5 длина 10 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,6 мкм, фирма «Hewlett Packerd»
Насос диафрагменный FT. 19, фирма KNF Neu Laboport»
Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100 — 500 см3	ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3
Фильтры бумажные «красная лента»	ТУ-6-09-1678-86
Центрифуга MPW-350e с набором полипропиленовых банок емкостью 200 см3
Шприц инъекционный однократного применения объемом 10 см3 ГОСТ 24861-91
(ИСО 7886-84)	Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению определений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак С для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах Диапак С, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1 Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.

7.1.2 Очистка ацетона

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3.

Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.

7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1 Приготовление рабочих растворов

7.2.1.1 Приготовление 0,1 М раствора соляной кислоты.

Мерным цилиндром отбирают 8,2 см3 концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1000 см3, куда предварительно наливают около 400 см3 дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.2 Приготовление подкисленного ацетона.

К ацетону пипеткой добавляют концентрированную соляную кислоту до pH \approx 1. При приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой.

7.2.2 Приготовление градуировочных растворов

7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией трициклазола 1,0 мг/см3.

Взвешивают 50 мг трициклазола в мерной колбе объемом 50 см3. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 12 месяцев.

7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией трициклазола 10,0 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов и для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией трициклазола 5,0 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов, для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 3 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией трициклазола 2,5 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 4 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией трициклазола 0,5 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном.

Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 5 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.3. Построение градуировочного графика

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации трициклазола в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,5; 2,5; 5,0 и 10,0 мкг/см3.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.4. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения трициклазола на них

7.4.1 Подготовка концентрирующих патронов

Диапак С для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин. (1 — 2 кап./с).

Патрон Диапак С устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см3 ацетона, затем 10 см3 хлористого метилена. Элюаты отбрасывают.

7.4.2 Проверка хроматографического поведения трициклазола

на концентрирующих патронах Диапак С

В концентратор объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора трициклазола в ацетоне с концентрацией 10 мкг/см3 и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 4 см3 хлористого метилена, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3 и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.

Исходную колбу обмывают сначала 4 см3 хлористого метилена, затем 5 см3 смеси ацетона с хлористым метиленом в соотношении 5:95, и четырьмя порциями смеси ацетона с хлористым метиленом в соотношении 1:1 объемом 5 см3 каждая и последовательно вносят их на патрон. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие трициклазол, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения трициклазола на концентрирующих патронах Диапак С проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 17.4.3.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) «Зерновые. Отбор проб зерна» и ГОСТ 27262-87 «Корма растительного происхождения. Методы отбора проб».

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C; пробы почвы — в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C.

Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

9. Подготовка проб и выполнение измерений

9.1. Вода

9.1.1 Экстракция

Пробу воды объемом 250 см3 помещают в делительную воронку объемом 500 см, прибавляют туда 20 г хлористого натрия и перемешивают до полного растворения соли. Трициклазол экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 50 см3, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) объединяет в концентраторе объемом 250 см3, собирая его через слой безводного сульфата натрия. Экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

9.1.2 Очистка на концентрирующих патронах Диапак С

Сухой остаток, полученный в п. 9.1.1, растворяют в 4 см3 хлористого метилена, тщательно обмывают стенки концентратора и вносят на заранее подготовленный концентрирующий патрон Диапак С. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают сначала 4 см3 хлористого метилена, а затем 5 см3 смеси ацетона с хлористым метиленом в соотношении 5:95, вносят полученные растворы на патрон, элюаты отбрасывают.

Трициклазол элюируют 5 см3 смеси ацетона с хлористым метиленом 1:1, собирая элюент в концентратор объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток растворяют в 1 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.2. Почва

9.2.1 Экстракция

Пробу почвы весом 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см3, прибавляют туда 40 см3 подкисленного ацетона и помещают в ультразвуковую ванну, заполненную дистиллированной водой с температурой 50 °C и выдерживают в течение 15 мин. Затем пробу центрифугируют в течение 15 мин. при скорости 4000 об./мин. Супернатант фильтруют через фильтр «красная лента» в концентратор объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 40 см3 подкисленного ацетона и помещая каждый раз на 10 мин. в ультразвуковую ванну, заполненную дистиллированной водой с температурой 50 °C. Пробы центрифугируют в течение 10 мин. при скорости 4000 об./мин., супернатант фильтруют. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 см3 и упаривают до водного остатка (осторожно, вспенивание!) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

9.2.2 Очистка экстракта перераспределением

в системе несмешивающихся растворителей

К водному остатку в концентраторе, полученному по п. 9.2.1, добавляют 50 см3 дистиллированной воды, перемешивают содержимое в концентраторе и переносят в делительную воронку объемом 250 см3. Добавляют в делительную воронку 5 г хлористого натрия, перемешивают содержимое воронки. Трициклазол экстрагируют тремя порциями хлористого метилена по 30 см3, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 мин. Хлористый метилен собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.2 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С».

Сухой остаток растворяют в 1 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.3. Зеленая масса

9.3.1 Экстракция и очистка полученного экстракта

Пробу измельченной зеленой массы риса массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, приливают 50 см3 ацетонитрила и помещают сначала на аппарат для встряхивания проб на 10 мин., а затем в ультразвуковую ванну на 10 мин. Экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 см3 через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 см3 ацетонитрила и помещая пробу в ультразвуковую ванну на 10 мин. Экстракты объединяют в делительной воронке объемом 250 см3.

К объединенному экстракту в воронке добавляют 30 см3 гексана и встряхивают содержимое воронки в течение 2 мин. После разделения фаз нижний слой ацетонитрила сливают в стеклянный стакан объемом 100 см3, гексан отбрасывают. Экстракт возвращают в делительную воронку и повторяют промывку еще раз, используя 30 см3 гексана. Промытый ацетонитрильный экстракт переносят в концентратор объемом 250 см3 через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.2 «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей» и по п. 9.1.2 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С».

Сухой остаток растворяют в 1 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.4. Зерно и солома риса

9.4.1 Экстракция и очистка полученного экстракта

Образец измельченного зерна риса массой 20 г (для соломы риса масса навески 5 г) помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, добавляют 10 см3 дистиллированной воды и выдерживают 5 мин. при комнатной температуре. Трициклазол экстрагируют 50 см3 ацетонитрила (для соломы риса — 100 см3), помещая пробы сначала на аппарат для встряхивания проб на 10 мин., а затем в ультразвуковую ванну на 10 мин. Экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 500 см3 через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 см3 ацетонитрила (для соломы риса — 70 см3) и помещая пробу в ультразвуковую ванну на 10 мин. Экстракты объединяют в делительной воронке объемом 250 см3.

К объединенному экстракту в воронке добавляют 30 см3 гексана и встряхивают содержимое воронки в течение 2 мин. После разделения фаз нижний слой ацетонитрила сливают в стеклянный стакан объемом 100 см3, гексан отбрасывают. Экстракт возвращают в делительную воронку и повторяют промывку еще раз, используя 30 см3 гексана. Промытый ацетонитрильный экстракт переносят в концентратор объемом 250 см3 через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.2 «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей» и по п. 9.1.2 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С».

Сухой остаток растворяют в 1 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.5. Условия хроматографирования

Хроматограф газовый «Кристалл 5000.1» с термоионным детектором (ТИД) с пределом детектирования по фосфору в Паратион-метиле 3 x 10-14 г/см3 и приспособлениями для капиллярной колонки.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5 длина 10 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,6 мкм, фирма «J&W Scientific».

Температура термостата колонки программированная: начальная температура — 180 °C, выдержка 1 мин., нагрев колонки по 30 °C в минуту до 275 °C, время анализа — 7 мин.

Температура испарителя — 280 °C, детектора — 320 °C.

Газ 1 — гелий (газ-носитель), давление на входе — 10 кПа, линейная скорость — 33,306 см/с, давление на выходе — 101,3 кПа; поток через колонку — 3,046 см3/мин.; мертвое время — 0,50 мин.

Газ 2 — гелий, режим — нормальный, деление потока — 1:4, расход во время анализа — 12,2 см3/мин. Регулятор давления гелия — РРГ-10; регулятор расхода гелия — РРГ-11.

Газ 4 — азот (поддув в детектор), расход во время анализа — 30 см3/мин.

Газ 5 — водород, расход во время анализа — 11,5 см3/мин.

Газ 6 — воздух, расход — 200 см3/мин.

Продувка детектора азотом после анализа — 50 см3/мин. в течение 3 мин. при температуре колонки 270 °C.

Абсолютное время удерживания трициклазола: 5 мин. 47 с \pm 2% мин.

Объем вводимой пробы: 1 мм3.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,5 — 10,0 нг.

10. Обработка результатов

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа «Хроматэк Аналитик», версия 1.20.

Содержание трициклазола в пробах рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

X = \frac{S_{\text{пр}} \cdot A \cdot V}{100 \cdot S_{\text{ст}} \cdot m} \cdot P , где

X — содержание трициклазола в пробе, мг/кг;

S_{\text{ст}} — высота (площадь) пика стандарта, мВ;

S_{\text{пр}} — высота (площадь) пика образца, мВ;

A — концентрация стандартного раствора, мкг/см3;

V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;

m — масса анализируемого образца, г (см3);

P — содержание трициклазола в аналитическом стандарте, %.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , где (1)

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 \times \sigma_{r} .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(\overline{X} \pm \Delta) мг/кг при вероятности P = 0,95,, где

\overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;

\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} , где

\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,02 мг/кг» <*>.

---

<*> 0,02 мг/кг — предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1 Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Контроль стабильности градуировочной характеристики для трициклазола проводят при смене основного градуировочного раствора № 1 каждые 12 месяцев, при смене основных градуировочных растворов № 2 и 3 — каждые 6 месяцев, при смене основных градуировочных растворов № 4 и 5 — каждые 3 месяца, а также в начале и окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание трициклазола в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,5 до 10,0 мкг/см3.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

A = \frac{(X - C) \cdot 100}{C} \leq 2,26 , где

X — концентрация трициклазола контрольного измерения, мкг/см3;

C — известная концентрация градуировочного раствора трициклазола в гексане, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;

2,26 — погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает 2,26%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов трициклазола, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки C_{\text{д}} должна удовлетворять условию:

C_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X\prime} , где

\pm \Delta_{\text{л},X}( \pm \Delta_{\text{л},X\prime}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta , где

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;

\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} , где

\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры Kк рассчитывают по формуле:

K_{\text{к}} = \overline{X}\prime - \overline{X} - C_{\text{д}} , где

\overline{X}\prime , \overline{X} , C_{\text{д}} — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

K = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}}

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Kк) с нормативом контроля (K).

Если результат, контроля процедуры удовлетворяет условию:

|K_{\text{к}}| \leq K , (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R , где (3)

X₁, X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

14. Разработчики

Российский государственный аграрный университет МСХА им. К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов». 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (499)976-37-68, факс: (499)976-43-26.

---