МУК 4.1.2864-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений остаточных количеств Тиабендазола в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2864-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений остаточных количеств Тиабендазола в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2864-11. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2864-11
(утв. Роспотребнадзором 31.03.2011)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 31 марта 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации Г. Г. Онищенко 31 марта 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИКА ИЗМЕРЕНИЙ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТИАБЕНДАЗОЛА В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Дата введения: с момента утверждения
1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28.12.2010 № 3).
3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31 марта 2011 г.
4. Введены в действие с момента утверждения.
Общие положения и область применения
Свидетельство об аттестации методики от 23.11.2010 № 01.5.04.693.
Настоящие Методические указания устанавливают метод измерения массовой концентрации Тиабендазола в семенах и масле рапса в диапазоне концентраций 0,01 — 0,1 мг/кг.
1. Краткая характеристика препарата
Действующее вещество: Тиабендазол.
Структурная формула (не приводится).
Название действующего вещества по ИЮПАК: 2-(1,3-тиазол-4-ил)бензимидазол.
2-(4-тиазолил)-1H-бензимидазол (С.А.).
Эмпирическая формула: C H № S. 10 7 3
Белое кристаллическое вещество. Температура плавления: 297 — 298 °С. -4
Давление паров при 25 °С: 4,6 х 10 мПа. Коэффициент распределения н-октанол - вода: K log P = 2,39 (pH 7).
ow
Растворимость (г/л) при 20 °С: н-гептан — < 0,01, ксилол — 0,13, ацетон
- 2,43, 1,2-дихлорэтан — 0,81, метанол — 8,28, этилацетат — 1,49, н-октанол
- 3,91, вода — 10,0 (pH 2), 0,16 (pH 4), 0,03 (pH 7 — 10). Устойчив к
гидролизу. Водный фотолиз (20 °С, pH 5, DT 29 ч); pKa = 4,73; pKa =
50 1 2
12,00.
Краткая токсикологическая характеристика: Острая пероральная токсичность (LD ) для мышей - 3600 мг/кг, крыс - 3100 мг/кг, кроликов -
50
3800 мг/кг, птиц — более 2250 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD ) 50
для кроликов - более 2000 мг/кг, не ирритант; ингаляционная токсичность (LC ) для крыс - более 0,5 мг/кг. Не токсичен для пчел. CK для рыб 0,55
50 50
мг/л при экспозиции 96 ч. Класс токсичности по ВОЗ — III.
Область применения: Тиабендазол — системный фунгицид защитного и лечебного действия. Тиабендазол образует защитный слой на обработанной поверхности, используется на овощных, плодовых и зерновых культурах. Не совместим с купратами и окисляющими агентами, такими как хлораты и нитраты.
Гигиенические нормативы для Тиабендазола в семенах и масле рапса в России не установлены.
2. Методика определения Тиабендазола в семенах и масле рапса методом ВЭЖХ
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Методика основана на определении Тиабендазола методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его извлечения из образцов органическим растворителем с последующей очисткой на колонке с силикагелем.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
| Диапазон измерений, массовая концентрация, мг/кг | Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), сигма , % r | Показатель промежуточной прецизионности (относительное среднеквадратическое отклонение в условиях вариации факторов «время», «оператор» в одной лаборатории), сигма , % Rл | Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), сигма , % R | Показатель точности <*> (границы относительной погрешности при вероятности P = 0,95), +/- дельта, % |
| Семена рапса от 0,01 до 0,10 вкл. | 5 | 12 | 14 | 24 |
| Масло рапса от 0,01 до 0,10 вкл. | 6 | 7 | 8 | 16 |
| <*> Соответствует расширенной неопределенности U при коэффициенте отн. охвата k = 2. | ||||
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
| Объект анализа | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Семена рапса | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 89,4 | 2,7 | 5,3 |
| Масло рапса | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 89,8 | 1,1 | 2,3 |
2.1.3 Избирательность метода
Избирательность метода определения Тиабендазола достигается сочетанием условий подготовки проб и хроматографического анализа.
2.2. Реактивы и материалы
Ацетон, осч ТУ 6-09-3513-86 Ацетонитрил для ВЭЖХ, сорт 1 или хч ТУ 6-09-3534-87 Бумажные фильтры "красная лента" ТУ 2642-001-42624157-98
Вода бидистиллированная деионизированная ГОСТ 6709-79
н-Гексан, хч, свежеперегнанный ТУ 2631-003-05807999-98 Изопропиловый спирт ТУ 2632-015-11291058-95
Калий углекислый, хч ГОСТ 4221-76
Калия перманганат ГОСТ 20490-75
Кальция хлорид, хч ГОСТ 4161-77
Кислота ортофосфорная, хч, 0,005 М водный раствор ГОСТ 6552-80
Кислота серная, хч ГОСТ 4204-77
Натрий двууглекислый ГОСТ 83-79
Натрий сернокислый безводный, ч, свежепрокаленный ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, чда ГОСТ 4233-77
Натрия гидроксид, хч ГОСТ 4328-77
Подвижная фаза для ВЭЖХ: ацетонитрил:
0,005 М раствор H PO (40:60, по объему)
3 4
Силикагель для колоночной хроматографии 60 (0,040 — 0,063 mm) («Merck», Германия)
Тиабендазол, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,8% (Cheminova)
Элюент № 1 для колоночной хроматографии:
смесь гексан — ацетон (80:20, по объему)
Элюент № 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан — ацетон (15:85, по объему)
Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.
2.3. Приборы и посуда
Жидкостный хроматограф «Альянс» фирмы «Waters» с УФ-детектором (Waters 2487) с дегазатором и автоматическим пробоотборником или аналогичный Колонка Spherisorb Phenyl (150 х 4,6) мм, 3 мкм (Waters, USA), или аналогичная
Ванна ультразвуковая УЗВ-1, 3 или аналогичная ГОСТ Р МЭК 60335-2-15-98
Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные ГОСТ 24104-2001
Мельница лабораторная зерновая ЛМЗ ТУ 1-01-0593-79 Гомогенизатор МРТУ 42-1505-63
Ротационный испаритель вакуумный Buchi R-205 или аналогичный
pH-метр универсальный ЭВ-74 ГОСТ 22261-76
Насос водоструйный МРТУ 42861-64 Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС ГОСТ 10384-72
Колбы круглодонные на шлифах КШ10 и КШ250 29-32 ТС ГОСТ 10384-72
Воронки лабораторные В-75-110 ГОСТ 25336-82
Воронки делительные ВД-3-250 и 500 ГОСТ 8613-75 Цилиндры мерные на 50, 100, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1774-74
Колбы мерные на 25, 50, 100 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Пипетки на 1, 2, 5, 10 куб. см ГОСТ 22292-74
Колонки стеклянные (25 х 1) см
Допускается использование приборов и посуды с метрологическими характеристиками не ниже указанных.
2.4. Отбор проб
Отбор проб семян рапса производится в соответствии с ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». Семена хранят при комнатной температуре в полотняных мешочках, перед анализом доводят до стандартной влажности и измельчают. Растительное масло хранят в холодильнике при температуре 0 — 4 °С в герметично закрытой стеклянной таре в течение 2 месяцев.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Перед началом работы проверяют чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 куб. см растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 куб. см и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.
2.5.2 Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку (Spherisorb Phenyl) кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 куб. см/мин.) до стабилизации нулевой линии в течение 1 — 2 ч.
2.5.3 Приготовление растворов
Для приготовления 0,005 М раствора ортофосфорной кислоты 0,5 г 98%-ной ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 куб. дм, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.
Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50 по объему, используя мерные цилиндры.
Для приготовления элюента № 1 в колбе на 1000 мл смешивают 800 мл н-гексана и 200 мл ацетона. Для приготовления элюента № 2 в колбе на 1000 мл смешивают 150 мл н-гексана и 850 мл ацетона.
Приготовление стандартного и градуировочных растворов:
Берут точную навеску Тиабендазола (50 мг), переносят в мерную колбу на 50 мл, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 1,0 мг/куб. см).
Градуировочные растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 2,0 мкг/куб. см готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы [смесь ацетонитрил - 0,005 М H PO (40:60, 3 4 по объему)]. Стандартный и градуировочные растворы можно хранить в
холодильнике при температуре 0 — 4 °С в течение 1 месяца.
Для внесения в контрольный образец при определении полноты извлечения используют стандартный раствор, разбавленный ацетонитрилом до нужного уровня концентраций методом последовательного разбавления. Растворы для внесения в масло готовят из стандартного раствора с концентрацией 0,5 мг/куб. см методом последовательного разбавления по объему изопропиловым спиртом.
2.5.4 Построение градуировочного графика
Для построения градуировочного графика (площадь пика — концентрация Тиабендазола в растворе) в хроматограф вводят по 20 куб. мм градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации Тиабендазола в градуировочном растворе (мкг/куб. см).
Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента:
|К - К|
контр.
------------- х 100 <= лямбда , К контр. где лямбда - норматив контроля градуировочного коэффициента, %
контр.
(лямбда = 10% при P = 0,95). контр.
2.5.5 Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 30 куб. см смеси гексан — ацетон (80:20, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 30 куб. см элюента № 2 и 30 куб. см элюента № 1 со скоростью 1 — 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
2.5.6 Проверка хроматографического поведения Тиабендазола на колонке с силикагелем
В круглодонную колбу емкостью 10 куб. см отбирают 0,1 куб. см стандартного раствора Тиабендазола с концентрацией 10 мкг/куб. см. Отдувают растворитель током теплого воздуха (температура не выше 40 °С), остаток растворяют в 5 куб. см элюента № 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 куб. см элюента № 1 и также вносят на колонку. Промывают колонку 50 куб. см элюента № 1, которые отбрасывают, затем 100 куб. см элюента № 2 со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 куб. см каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.3) и анализируют на содержание Тиабендазола (п. 2.6.3).
Фракции, содержащие Тиабендазол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют (п. 2.6.3). Рассчитывают содержание Тиабендазола в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.
Примечание: параметры удерживания Тиабендазола и сопутствующих экстрактивных веществ могут меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
2.5.7 Подготовка приборов и средств измерения
Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.
2.6. Проведение определения
2.6.1 Извлечение Тиабендазола из проб семян и масла рапса
Навеску измельченных семян массой 20 г помещают в коническую колбу емкостью 100 мл и экстрагируют Тиабендазол 40 куб. см ацетонитрила на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют дважды порциями по 30 куб. см.
Навеску масла массой 20 г помещают в делительную воронку емкостью 250 куб. см и экстрагируют Тиабендазол трижды ацетонитрилом порциями по 30 куб. см, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 — 3 мин. и собирая нижний органический слой.
Объединенные экстракты семян или масла промывают гексаном в делительных воронках дважды по 25 куб. см, встряхивая смесь каждый раз в течение 1 — 2 мин. и собирая нижний органический слой.
После этого экстракты выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстрактов проводят на колонке с силикагелем по п. 2.6.2.
Внимание! Отделение ацетонитрильного слоя следует производить только после полного расслоения жидкостей в делительной воронке.
2.6.2 Очистка на колонке с силикагелем
Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. 2.6.1 экстрактов растительных материалов, количественно переносят двумя порциями смеси гексан — ацетон (80:20, по объему) по 5 куб. см каждая в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 50 куб. см элюента № 1, который отбрасывают. Тиабендазол элюируют 80 куб. см элюента № 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 250 куб. см. Раствор упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 куб. мм раствора вводят в жидкостный хроматограф.
2.6.3 Условия хроматографирования
Жидкостный хроматограф «Альянс» фирмы «Waters» с УФ-детектором (Waters 2487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки.
Колонка Spherisorb Phenyl (150 х 4,6) мм, 3 мкм (Waters, USA).
Температура колонки 30 +/- 1 °С.
Подвижная фаза для ВЭЖХ: ацетонитрил: 0,005 М раствор H PO (40:60, по объему). 3 4
Скорость потока элюента: 1 мл/мин.
Объем вводимой пробы 20 куб. мм.
Линейный диапазон детектирования 0,1 — 2,00 мкг/мл.
2.6.4 Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание Тиабендазола в образцах семян или масла (Х, мг/кг) вычисляют по формуле:
S х С х V
2
где:
S - площадь пика Тиабендазола в стандартном растворе, кв. мм (мв х
1
сек.); S — площадь пика Тиабендазола в анализируемой пробе, кв. мм (мв х 2 сек.); V — объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, куб. см; Р — навеска анализируемого образца, г; С — концентрация стандартного раствора Тиабендазола, мкг/куб. см.
Содержание остаточных количеств Тиабендазола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор Тиабендазола 2 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
3. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(Х + Х )
1 2
где:
Х и Х - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r - значение предела повторяемости (r = 2,8 сигма ).
r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
4. Оформление результатов
(Х +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности P = 0,95,
Х — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее нижней границы определения» (например: менее 0,01 мг/кг) <*>.
<*> 0,01 мг/кг — предел обнаружения Тиабендазола в рапсе.
5. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
5.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
5.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки С должна удовлетворять условию: д
С = ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА , д л,Х л,Х' где +/- ДЕЛЬТА (+/- ДЕЛЬТА ) - характеристика погрешности л,Х л,Х' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
л
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг:
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
К = Х' - Х - С , к д где Х', Х, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 4), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА . л,Х' л,Х Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
5.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 |Х - Х | х 100
1 2
----------------- <= R, (3)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном
концентраций), %.
6. Требования безопасности
6.1. При работе необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.
6.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 1.2.2701-10 и ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».
7. Требования к квалификации оператора
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации жидкостного хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 5.
8. Разработчики
ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений Россельхозакадемии, г. Санкт-Петербург.
Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации № 01.5.04.686) и внесена в Федеральный реестр (ФР. 1.31.2011.09107).