МУК 4.1.2860-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Хлорантранилипрола в плодах томата, томатном соке, ягодах винограда и виноградном соке методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 31.03.2011)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 31 марта 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
31 марта 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ХЛОРАНТРАНИЛИПРОЛА В ПЛОДАХ ТОМАТА, ТОМАТНОМ СОКЕ, ЯГОДАХ ВИНОГРАДА И ВИНОГРАДНОМ СОКЕ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
с момента утверждения
1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28.12.2010 № 3).
3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31 марта 2011 г.
4. Введены в действие с момента утверждения.
Общие положения и область применения
Свидетельство об аттестации методики от 01.12.2010 № 0061.30.11.10.
Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Хлорантранилипрола в плодах томата, ягодах винограда, а также в томатном и виноградном соке в диапазоне 0,02 — 0,2 мг/кг.
Структурная формула (не приводится).
Название по ИЮПАК: 3-бром-4'-хлор-1-(3-хлор-2-пиридил)-2'-метил-6'(метилкарбамоил)пиразол-5-карбоксанилид.
Эмпирическая формула: C H BrC N O . 18 14 2 5 2
Агрегатное состояние: мелкий порошок.
Цвет, запах: белого цвета без запаха. -9
Давление насыщенного пара: 6,3 х 10 мПа при 25 °С. Коэффициент распределения в системе октанол - вода (при 20 °С и pH 7): K log P = 2,76.
ow
Растворимость в воде (мг/куб. дм): при pH 4 — 0,972; при pH 7 — 0,88; при pH 9 — 0,971.
Растворимость в органических растворителях (мг/куб. дм): в ацетоне — 3446, в метаноле — 1714, в этилацетате — 1144, в ацетонитриле — 710.
Хлорантранилипрол быстро разлагается на свету. Полураспад при фотолизе в стерильном буфере pH 7 0,37 дня при постоянном освещении. При естественном освещении фотолиз Хлорантранилипрола медленнее, с ДТ - 33 дня. 50 Вещество долго сохраняется в почве с ДТ ; в лаборатории 200 дней, в
50
полевых условиях от 3 до 12 месяцев. Под покровом культур разрушается быстрее.
Краткая токсикологическая характеристика: Хлорантранилипрол относится к веществам малоопасным по острой пероральной (ЛД для крыс > 5000 мг/кг) и 50 дермальной токсичности (ЛД для крыс > 5000 мг/кг), но к умеренно опасным 50 по ингаляционной (ЛК (4 ч) для крыс > 5100 мг/куб. дм воздуха). 50 Хлорантранилипрол не обладает генотоксичностью и онкогенными свойствами, не оказывает влияния на репродуктивную функцию.
Область применения: Хлорантранилипрол — инсектицид кишечного действия, нарушающий баланс кальция в миофибриллах мускулов насекомых. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов чешуекрылых, жесткокрылых (колорадский жук), двукрылых (минеры).
Применяется для борьбы с грызущими насекомыми с нормой расхода 0,01 — 0,06 кг д.в./га в зависимости от культуры в посадках картофеля, винограда, яблоневых садах.
В России установлены следующие гигиенические нормативы: ПДК в воде — 0,2 мг/куб. дм; ОДК в почве — 0,5 мг/кг; МДУ (мг/кг): в яблоках — 0,5, клубнях картофеля — 0,1, в плодах томата — 0,6, в ягодах винограда — 1,0.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , r % | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Томаты | 0,02 — 0,1 вкл. | 50 | 2,60 | 7,23 | 8,60 |
| 0,1 — 0,2 вкл. | 25 | 2,85 | 7,93 | 9,44 | |
| Томатный сок | 0,02 — 0,1 вкл. | 50 | 1,27 | 3,53 | 4,20 |
| 0,1 — 0,2 вкл. | 25 | 0,45 | 1,25 | 1,49 | |
| Ягоды винограда | 0,02 — 0,1 вкл. | 50 | 2,47 | 6,87 | 8,17 |
| 0,1 — 0,2 вкл. | 25 | 2,51 | 6,99 | 8,32 | |
| Виноградный сок | 0,02 — 0,1 вкл. | 50 | 1,26 | 3,50 | 4,16 |
| 0,1 — 0,2 вкл. | 25 | 1,01 | 2,81 | 3,34 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ ХЛОРАНТРАНИЛИПРОЛА
| Анализируемый | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| объект | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Полнота извлечения вещества, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % |
| Томаты | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 90,99 | 2,16 | 0,92 |
| Томатный сок | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 84,06 | 4,15 | 1,63 |
| Ягоды винограда | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 91,41 | 2,16 | 0,92 |
| Виноградный сок | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 80,73 | 6,19 | 2,34 |
2. Метод измерения
Метод основан на определении Хлорантранилипрола методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов после экстракции его из плодов томата и ягод винограда этилацетатом, очистки экстракта путем перераспределения между двумя несмешивающимися фазами и дальнейшей дериватизации Хлорантранилипрола в его основной метаболит IN-EQW78.
Идентификация проводится по времени удерживания IN-EQW78, а количественное определение — методом абсолютной калибровки в пересчете на Хлорантранилипрол.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», ЕР 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности — специальный (I) ГОСТ 24104-1
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г
«ACCULAB» V600, соответствуют классу точности — среднему (III) ГОСТ 24104-1
Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Микрошприц для газовой хроматографии «Hamilton 1700», объем 10 куб. мм, фирма «SUPELCO», кат. № 20972
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см ГОСТ 29227-91
pH-метр/милливольтметр pH-150 0...14 pH; +/- 1999 мВ, номер госрегистрации № 10663
Хроматограф газовый HP6890 Series GC System с детектором по захвату электронов (ЭЗД), регистрационный номер в государственном реестре средств измерения № 201/978
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Аммиак водный 25%, чда ГОСТ 3760-79
Хлорантранилипрол, CAS 500008-45-7, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 98,0%, фирма «Dr. Ehreustorfer GmbH», аккредитованная по ИСО 9001-2000
Ацетон, осч ТУ 6-09-3513-86 Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм ТУ 6-09-2167-84
Вода дистиллированная и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости) ГОСТ 6709-72
Гелий, очищенный марки «А» ТУ 51-940-80
Калий марганцовокислый, чда ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, ч ТУ 6-09-4711-81
Кислота серная, хч ГОСТ 4204-77
Натрий сернокислый безводный, хч ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233-77
Этилацетат, чда ГОСТ 22300-76
Эфир диэтиловый, ФС 42-3643-98
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1»
Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. № 3120-0250, фирма «NALGENE»
Блок нагревательный для виал, Dri-Block DB-3, фирмы «Tecam» или песчаная баня
Ванна ультразвуковая «UNITRA» UNIMA OLSZTYN UM-4
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная ГОСТ 5556-81
Виалы (пузырьки) с тефлоновыми прокладками емкостью 40 куб. см, кат. № Z 27,702-9, фирма «Aldrich»
Воронки делительные на 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные стеклянные ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма «Buchi»
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 куб. см и 4000 куб. см ТС ТУ 92-891.029-91
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая Rtx(R)-1 (100% диметилполисилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирма «Restek»
Насос диафрагменный FT.19, фирма «KNF Neu Laboport»
Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100 — 2000 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической колбой объемом 1000 куб. см
Фильтры бумажные, «красная лента» ТУ 6-09-1678-86
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к определению
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.
7.1.2 Очистка ацетона
Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм.
Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С, отбрасывают.
7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды
Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.
7.2. Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1 Приготовление рабочих растворов
7.2.1.1. Приготовление 1,0%-го водного раствора аммиака для дериватизации.
Мерной пипеткой отбирают 1 куб. см 25%-го раствора аммиака и переносят в мерную колбу на 25 куб. см, куда предварительно наливают около 10 куб. см очищенной воды. Затем раствор перемешивают и доводят объем в колбе до метки очищенной водой (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой). Полученный раствор хранят под тягой в течение одного месяца.
7.2.1.5 Приготовление 4 н раствора серной кислоты.
Мерным цилиндром отбирают 112 куб. см концентрированной серной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, куда предварительно наливают около 300 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.2 Приготовление градуировочных растворов
7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией Хлорантранилипрола 1,0 мг/куб. см.
Взвешивают 50 мг Хлорантранилипрола в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне, помещая колбу в ультразвуковую ванну, и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике не более 5 месяцев.
7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией Хлорантранилипрола 10,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном.
Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике не более 3 месяцев.
7.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией Хлорантранилипрола 1,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики после его дериватизации. Стандартный раствор № 4 хранится в холодильнике не более 3 месяцев.
7.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией Хлорантранилипрола 0,2 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики после его дериватизации. Стандартный раствор № 4 хранится в холодильнике не более 3 месяцев.
7.3. Дериватизации (превращение Хлорантранилипрола в метаболит IN-EQW78)
К сухому остатку в виале добавляют 0,4 куб. см ацетонитрила и растворяют, помещая виалу в ультразвуковую ванну на 2 мин. В виалу добавляют 1 куб. см 1,0%-го водного раствора аммиака и помещают виалу в ультразвуковую ванну еще на 2 мин. Плотно (!) закрывают виалу крышкой и помещают в нагревательный блок для виал на 2 ч при 75 °С. Далее виалу охлаждают до комнатной температуры, добавляют в нее 10 куб. см этилацетата и интенсивно встряхивают смесь. После полного разделения фаз из верхнего этилацетатного слоя аликвоту 5 куб. см переносят в концентратор и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.
Сухой остаток растворяют в 10 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
7.3.1 Дериватизация стандартных растворов
В четыре виалы объемом 40 куб. см помещают по 1 куб. см и 2 куб. см каждого стандартного раствора Хлорантранилипрола в ацетоне (N 3 и № 4 соответственно), удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят превращение Хлорантранилипрола в IN-EQW78, как указано в разделе 7.3.
Получают 4 раствора для градуировки с концентрациями: 0,1; 0,05; 0,02; 0,01 мкг/куб. см в пересчете на Хлорантранилипрол.
7.4. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Хлорантранилипрола в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,01; 0,02; 0,05 и 0,10 мкг/куб. см.
В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» от 21.08.1979 № 2051-79, а также в соответствии с ГОСТ Р 51810-2001 «Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети» и ГОСТ Р 52183-2003 «Консервы. Соки овощные. Сок томатный. ТУ», ГОСТ 25896-83 «Виноград свежий столовый. ТУ», ГОСТ 25892-83Е «Сок виноградный натуральный. ТУ».
Пробы плодов томата и ягод винограда хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 — 4 °С не более суток.
Для длительного хранения пробы плодов томата и ягод винограда замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18 °С до 2 лет.
Пробы соков хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °С не более 10 суток.
9. Подготовка проб и выполнение измерений
9.1. Плоды томата и ягоды винограда
9.1.1 Экстракция
Образец измельченных томатов или ягод винограда массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, добавляют 50 куб. см этилацетата и помещают на 45 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 30 куб. см этилацетата и помещая каждый раз на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
9.1.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
К сухому остатку в концентраторе, полученному в п. 9.1.1, двумя порциями добавляют 100 куб. см воды, тщательно ополаскивают стенки концентратора и переносят водную фазу в делительную воронку объемом 250 куб. см. Подкисляют до pH 2 с помощью 4 н серной кислоты (около 2 куб. см), добавляют 50 куб. см диэтилового эфира, перемешивают, дегазируют и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний водный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см, а верхний эфирный собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Водную фракцию возвращают в делительную воронку и повторяют экстракцию еще два раза, используя каждый раз по 30 куб. см диэтилового эфира и встряхивая воронку в течение 2 мин. Экстракты эфира объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.
9.1.3 Дериватизация
Сухой остаток, полученный в п. 9.1.2, растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, переносят в виалу. Процедуру повторяют еще два раза, используя по 2 куб. см ацетона, удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят дериватизацию, как указано в п. 7.3.
После дериватизации из верхнего слоя (этилацетата) отбирают аликвоту 5 куб. см, переносят в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.
Сухой остаток в концентраторе растворяют в 10 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.2. Томатный и виноградный сок
9.2.1 Экстракция
Навеску томатного или виноградного сока массой 10 г помешают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, добавляют 20 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия и 40 куб. см ацетонитрила и помещают на 20 мин. на аппарат для встряхивания проб. Затем смесь переносят в делительную воронку и после полного разделения слоев нижний водный слой возвращают в банку, а верхний ацетонитрильный собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще два раза, используя по 40 куб. см ацетонитрила и помещая каждый раз на 20 мин. на аппарат для встряхивания проб. Объединенный ацетонитрильный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.
Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.2 «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей», а затем проводят дериватизацию, как указано в п. 9.1.3.
После дериватизации из верхнего слоя (этилацетата) отбирают аликвоту 5 куб. см, переносят в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.
Сухой остаток в концентраторе растворяют в 10 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.3. Условия хроматографирования
Хроматограф газовый HP6890 Series GC System с детектором по захвату электронов (ЭЗД) в модификации с электронным управлением пневмонической системой (ЭУПС).
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая Rtx-1 (100% диметилполисилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.
Температура детектора — 320 °С, поток обдува анода (азот) — 6,0 куб. см/мин., поток поддува — 58,5 куб. см/мин.
Температура испарителя — 300 °С, тип газа гелий, режим Split, давление 24,5 psi, деление потока 20:1, split поток 30,0 куб. см/мин.
Программированный нагрев колонки со 180 °С (выдержка 1 мин.) по 25 град./мин. до 270 °С, с 270 °С по 5 град./мин. до 300 °С (выдержка 10 мин.), режим постоянный поток, поток колонки 1,5 куб. см/мин., средняя скорость 40 см/с.
Абсолютное время удерживания IN-EQW78: 11,451 мин. +/- 3%.
Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,01 — 0,1 нг.
10. Обработка результатов анализа
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа HP GC ChemStation Rev. A.06.03RUS.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание Хлорантранилипрола рассчитывают по формуле:
S х V
пр
X = ------------- х P, 100 х S х m ст
где: X — содержание Хлорантранилипрола в пробе, мг/кг; S — высота (площадь) пика стандарта, мВ; ст S — высота (площадь) пика образца, мВ; пр A — концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см; V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см; m — масса анализируемого образца, г; P — содержание Хлорантранилипрола в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела
повторяемости (1):
2 х |X - X | х 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 х сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде: _
(X +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности P = 0,95,
где:
_
X - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,05 мг/кг» <*>.
<*> 0,02 мг/кг — предел обнаружения.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _, д л,X л,X' где ДЕЛЬТА _, (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
_ _ К = X' - X - C , к д _ _ где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом контроля (К). к
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 х |X - X | х 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
табл. 1), %.
14. Разработчики
Российский государственный аграрный университет — МСХА им. К.А. Тимирязева.
Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов». 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (495) 976-37-68, факс: (495) 976-43-26.
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ХЛОРАНТРАНИЛИПРОЛА ИЗ ТОМАТОВ И ЯГОД
ВИНОГРАДА (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)
| Среда | Внесено, мг/кг | Обнаружено, мг/кг | Полнота определения, % |
| Томаты | 0,2 | 0,1814 +/- 0,0064 | 90,7 |
| 0,1 | 0,0905 +/- 0,0023 | 90,5 | |
| 0,04 | 0,0363 +/- 0,0012 | 90,7 | |
| 0,02 | 0,0184 +/- 0,0002 | 92,0 | |
| Томатный сок | 0,2 | 0,1631 +/- 0,0009 | 81,6 |
| 0,1 | 0,0838 +/- 0,0003 | 83,8 | |
| 0,04 | 0,0325 +/- 0,0005 | 81,3 | |
| 0,02 | 0,01792 +/- 0,0002 | 89,6 | |
| Ягоды винограда | 0,2 | 0,1820 +/- 0,0045 | 91,0 |
| 0,1 | 0,0904 +/- 0,0028 | 90,4 | |
| 0,04 | 0,0366 +/- 0,0011 | 91,6 | |
| 0,02 | 0,0185 +/- 0,0003 | 92,6 | |
| Виноградный сок | 0,2 | 0,1483 +/- 0,0019 | 74,1 |
| 0,1 | 0,0789 +/- 0,0010 | 78,9 | |
| 0,04 | 0,0331 +/- 0,0005 | 82,7 | |
| 0,02 | 0,0175 +/- 0,0002 | 87,2 |