МУК 4.1.2857-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Тербутилазина в зеленой массе, зерне и масле кукурузы методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 31.03.2011)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 31 марта 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
31 марта 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТЕРБУТИЛАЗИНА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, ЗЕРНЕ И МАСЛЕ КУКУРУЗЫ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.2857-11
с момента утверждения
1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28.12.2010 № 3).
3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31.03.2011.
4. Введены в действие с момента утверждения.
Общие положения и область применения
Свидетельство об аттестации методики от 08.12.2010 № 0069.06.12.10.
Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Тербутилазина в зеленой массе, зерне и масле кукурузы в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг.
Название по ИЮПАК: N2-трет-бутил-6-хлоро-N4-этил-1,3,5-триазин-2,4-диамин.
Структурная формула: (не приводится).
Эмпирическая формула: C H ClN . 9 16 5
Агрегатное состояние: кристаллическое, порошок.
Цвет, запах: вещество белого цвета без ощутимого запаха.
Температура плавления: 177 — 179 °C.
Давление паров: 0,15 мПа (при 25 °C).
Коэффициент распределения октанол-вода: K log P = 3,21. ow
Растворимость в воде (при 25 °C и pH 7,0): 8,5 мг/куб. дм.
Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, при 25 °C): ацетон — 41,0; этанол — 14,0; н-октанол — 12,0; гексан — 0,36.
Тербутилазин стабилен в водных растворах в нейтральной, слабощелочной и
слабокислой среде; гидролизуется сильными кислотами и щелочами. Период полураспада DT (при 20 °C) - 8 дней (pH 1) и 12 дней (pH 13).
50
Краткая токсикологическая характеристика: Тербутилазин относится к веществам малоопасным по острой пероральной (ЛД для крыс от 1590 и более
50
2000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД для крыс более 2000 мг/кг), но к 50 умеренно опасным веществам острой ингаляционной токсичности (ЛД для 50 крыс (4 ч) более 5300 мг/куб. м воздуха). Не вызывает раздражения глаз и кожи. Практически не токсичен для пчел.
Область применения: Тербутилазин применяется для борьбы с сорными растениями в посевах кукурузы, сорго, гороха, бобов, на картофеле, на виноградниках, на плантациях фруктовых деревьев, цитрусовых, олив, кофе, сахарного тростника при нормах расхода 0,6 — 3 кг/га. В Европе используется на кукурузе и сорго при норме расхода 1,5 кг/га обычно в смеси с другими гербицидами.
В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД — 0,003 мг/кг массы человека; ПДК в воде — 0,005 мг/куб. дм; ПДК в почве — 0,04 мг/кг; ПДК в воздухе рабочей зоны — 1,0 мг/куб. м; ОБУВ в воздухе атмосферы — 0,002 мг/куб. м; МДУ: в плодовых семечковых, винограде, цитрусовых (мякоть) — 0,1 мг/кг; в картофеле — 0,05 мг/кг.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ ТЕРБУТИЛАЗИНА
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , r % | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Зеленая масса | 0,05 — 0,1 вкл. | 50 | 3,31 | 9,20 | 10,95 |
| кукурузы | 0,1 — 0,5 вкл. | 25 | 3,80 | 10,55 | 12,56 |
| Зерно кукурузы | 0,05 — 0,1 вкл. | 50 | 4,50 | 12,51 | 14,89 |
| 0,1 — 0,5 вкл. | 25 | 4,90 | 13,62 | 16,21 | |
| Масло кукурузы | 0,05 — 0,1 вкл. | 50 | 5,68 | 15,78 | 18,79 |
| 0,1 — 0,5 вкл. | 25 | 4,06 | 11,29 | 13,44 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
ДЛЯ ТЕРБУТИЛАЗИНА
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| предел обнаружения, мг/кг | диапазон определяемых концентраций, мг/кг | полнота извлечения вещества, % | стандартное отклонение, S, % | доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Зеленая масса кукурузы | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 83,2 | 3,11 | 1,21 |
| Зерно кукурузы | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 83,8 | 4,11 | 1,67 |
| Масло кукурузы | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 78,1 | 4,24 | 1,56 |
2. Метод измерений
Метод основан на определении Тербутилазина методом капиллярной ГЖХ с использованием капиллярной колонки и термоионного детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах Диапак С16.
Идентификация проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором капиллярной колонки и условий программирования температуры.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», EP 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-2001 — специальный (I)
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г «ACCULAB» V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-2001 — средний (III)
Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Микрошприц для газовой хроматографии «Hamilton, 1700», объем 10 куб. мм, фирма «SUPELCO», кат. № 20972
Пипетки мерные на 1,0, 2,0, 5,0 и 10 куб. см ГОСТ 29227-91
Хроматограф газовый «Кристалл 5000.1» с термоионным детектором (ТИД) с пределом детектирования по фосфору -14 в Паратионметиле 3 x 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки. Номер в государственном реестре средств измерений 14516-95
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Тербутилазин, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,1%, чист., СОП 20-05
Ацетон, ос.ч. ТУ 6-09-3513-86 Ацетонитрил, ос.ч., УФ-200 нм ТУ 6-09-2167-84
Вода бидистиллированная (бидистиллят), деионизированная или перегнанная над KMnO ГОСТ 6709-72 4
Гелий очищенный, марки "А" ТУ-51-940-80 n-Гексан, х.ч. ТУ 6-09-3818-89
Калий марганцовокислый, х.ч. ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, ч. ТУ 6-09-4711-81
Концентрирующие патроны Диапак С16
(0,6 г), фирма "БиоХимМак СТ" ТУ 4215-002-05451931-94 Метилен хлористый, х.ч. ТУ 6-09-2662-77
Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, х.ч. ГОСТ 4233-77
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Алонж прямой с отводом для вакуума (АО-14/23) для работы с концентрирующими патронами ГОСТ 25336-82 Диапак Амин и Диапак С16
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYPLT1»
Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. № 3120-0250, фирма «NALGENE»
Ванна ультразвуковая «UNITRA» UNIMA OLSZTYN UM-4
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная ГОСТ 5556-81
Воронки делительные на 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные стеклянные ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней B-480, фирма «Buchi»
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 куб. см и 4000 куб. см ТС ТУ 92-891.029-91
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5, длина 10 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,6 мкм, фирма «Hewlett Packerd»
Насос диафрагменный FT.19, фирма «KNF Neu Laboport»
Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100 — 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической колбой объемом 1000 куб. см
Фильтры бумажные, «красная лента» ТУ-6-09-1678-86
Шприц инъекционный однократного применения объемом 10 куб. см ГОСТ 24861-91 (ИСО 7886-84)
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.
7.1.2 Очистка ацетона
Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм.
Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.
7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды
Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.
7.2. Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1 Приготовление градуировочных растворов
7.2.1.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией Тербутилазина 1,0 мг/куб. см.
Взвешивают 50 мг Тербутилазина в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 12 месяцев.
7.2.1.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией Тербутилазина 10,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов и для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.1.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией Тербутилазина 5,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов, для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 3 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.
7.2.1.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией Тербутилазина 2,5 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 4 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.
7.2.1.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией Тербутилазина 1,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 5 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.
7.2.1.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией Тербутилазина 0,5 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 6 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.
7.3. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Тербутилазина в растворе (мкг/куб.см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,5, 1,0, 2,5 и 5,0 мкг/куб. см.
В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
7.4. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения Тербутилазина на них
7.4.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16
для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 — 2 кап./с).
Патрон Диапак С16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см, затем 10 куб. см воды. Элюаты отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.4.2 Проверка хроматографического поведения Тербутилазина
на концентрирующих патронах Диапак С16
Из стандартного раствора Тербутилазина в ацетоне, содержащего 5 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 4 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Исходный концентратор обмывают последовательно 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, затем двумя порциями по 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1, полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в испаритель хроматографа.
Определяют фракции, содержащие Тербутилазин, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюата.
Изучение поведения Тербутилазина на концентрирующих патронах Диапак С16 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.
8. Отбор и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» от 21.08.1979 № 2051-79, а также в соответствии с ГОСТ 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 27262-87 «Корма растительного происхождения. Методы отбора проб», ГОСТ 8808-2000 «Масло кукурузы, ТУ», ГОСТ 5471-83 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб»,
Пробы зеленой массы кукурузы хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 — 4 °C не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C до 2 лет.
Отобранные пробы зерна кукурузы подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
Пробы кукурузного масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C не более 10 суток.
9. Подготовка проб и выполнение измерений
9.1. Зеленая масса и зерно кукурузы
9.1.1 Экстракция
Образец измельченной зеленой массы кукурузы (или зерна) массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, прибавляют 50 куб. см ацетонитрила (зерно кукурузы дополнительно смачивают 5 куб. см воды) и помещают на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 40 куб. см ацетонитрила и помещая на 15 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.
9.1.2 Очистка экстракта перераспределением в системе
несмешивающихся растворителей
К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, прибавляют 2 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора, добавляют 50 куб. см дистиллированной воды, перемешивают и фильтруют в делительную воронку объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Добавляют в делительную воронку 5 г хлористого натрия, перемешивают. Тербутилазин экстрагируют тремя порциями гексана объемом по 30 куб. см, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) собирают в концентратор объемом 250 куб. см. Гексан выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре 30 °C.
9.1.3 Очистка экстракта на концентрирующих
патронах Диапак С16
Сухой остаток, полученный в п. 9.1.2, растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 4 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, вносят на патрон и элюат отбрасывают. Тербутилазин элюируют 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток в концентраторе растворяют в 1 куб. см ацетона и вводят 1 куб. мм пробы в хроматограф.
9.2. Масло кукурузы
9.2.1 Экстракция
Из пробы кукурузного (или соевого) масла отбирают в стакан навеску массой 10 г и переносят ее в делительную воронку объемом 250 куб. см тремя порциями гексана объемом по 30 куб. см. Тербутилазин экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 50 куб. см, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой сливают в концентратор объемом 250 куб. см. Верхний слой (гексан) отбрасывают.
Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.2 «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей» и по п. 9.1.3 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С16».
Сухой остаток в концентраторе растворяют в 1 куб. см ацетона и вводят 1 куб. мм пробы в хроматограф.
9.3. Условия хроматографирования
Хроматограф газовый «Кристалл 5000.1» с термоионным детектором (ТИД) с -14 пределом детектирования по фосфору в Паратионметиле 3 x 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки.
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5, длина 10 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,6 мкм, фирма «Hewlett Packerd».
Температура термостата колонки программированная: начальная температура — 160 °C, выдержка — 1 мин., нагрев колонки — по 25 °C в минуту до 260 °C.
Температура испарителя — 250 °C, детектора — 300 °C.
Газ 1 — гелий (газ-носитель), давление на входе — 10 кПа, линейная скорость — 34,426 см/с, давление на выходе — 101,3 кПа; поток через колонку — 3,294 куб. см/мин.; мертвое время — 0,48 мин.
Газ 2 — гелий (сброс пробы), режим — Splitless, деление потока — 1:30, начало сброса — 30 с, длительность сброса — 2 мин., расход во время анализа — 10,0 куб. см/мин.; регулятор давления гелия — РРГ-10; регулятор расхода гелия — РРГ-11.
Газ 4 — азот (поддув в детектор), расход во время анализа — 30 куб. см/мин.
Газ 5 — водород, расход во время анализа — 11,5 куб. см/мин.;
Газ 6 — воздух, расход — 200 куб. см/мин.
Продувка детектора азотом после анализа — 50 куб. см/мин. в течение 3 мин. при температуре колонки 270 °C.
Абсолютное время удерживания Тербутилазина: 4 мин. 56 с — 4 мин. 59 с + 2% мин.
Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 0,25 — 2,0 нг.
10. Обработка результатов
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа «Хроматэк Аналитик», версия 1.20.
Содержание Тербутилазина в пробах рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
S x A x V
пр
X = ------------- x P, 100 x S x m ст
X — содержание Тербутилазина в пробе, мг/кг;
S — высота (площадь) пика стандарта, мВ; ст
S — высота (площадь) пика образца, мВ; пр
A — концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m — масса анализируемого образца, г;
P — содержание Тербутилазина в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг; 1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 x сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности P = 0,95,
X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг; _
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,05 мг/кг» <*>.
<*> 0,05 мг/кг — предел обнаружения.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок. Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X'
+/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности (абсолютная л,X л,X' погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с
добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг; _
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры K рассчитывают по формуле: к
_ _ K = X' - X - C , к д _ _ где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг; 1 2
R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
14. Разработчики
Российский государственный аграрный университет — МСХА им. К.А. Тимирязева.
Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов».
Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации № 0030.28.05.10 от 31.05.2010) и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2010.07439).
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ТЕРБУТИЛАЗИНА
ИЗ ЗЕЛЕНОЙ МАССЫ, ЗЕРНА И МАСЛА КУКУРУЗЫ
(5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)
| Среда | Внесено Тербутилазина, мг/кг | Обнаружено Тербутилазина, мг/кг | Полнота определения, % |
| Зеленая масса кукурузы | 0,05 | 0,0419 +/- 0,002 | 83,8 |
| 0,10 | 0,0836 +/- 0,002 | 83,6 | |
| 0,25 | 0,2068 +/- 0,009 | 82,7 | |
| 0,50 | 0,4121 +/- 0,019 | 82,4 | |
| Зерно кукурузы | 0,05 | 0,0427 +/- 0,002 | 85,5 |
| 0,10 | 0,0830 +/- 0,005 | 83,0 | |
| 0,25 | 0,2047 +/- 0,011 | 81,9 | |
| 0,50 | 0,4246 +/- 0,026 | 84,9 | |
| Масло кукурузы | 0,05 | 0,0396 +/- 0,003 | 79,1 |
| 0,10 | 0,0778 +/- 0,005 | 77,8 | |
| 0,25 | 0,1963 +/- 0,007 | 78,5 | |
| 0,50 | 0,3843 +/- 0,019 | 76,9 |