МУК 4.1.2851-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Индоксакарба в луке-перо, луке-репке, плодах томата, томатном соке, семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2851-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Индоксакарба в луке-перо, луке-репке, плодах томата, томатном соке, семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2851-11. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2851-11
(утв. Роспотребнадзором 31.03.2011)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 31 марта 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
31 марта 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИНДОКСАКАРБА В ЛУКЕ-ПЕРО, ЛУКЕ-РЕПКЕ, ПЛОДАХ ТОМАТА, ТОМАТНОМ СОКЕ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
с момента утверждения
1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28.12.2010 № 3).
3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31.03.2011.
4. Введены в действие с момента утверждения.
Общие положения и область применения
Свидетельство об аттестации методики от 28.09.2010 № 0046.22.09.10.
Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Индоксакарба в плодах томата, томатном соке в диапазоне 0,1 — 1,0 мг/кг, в луке-перо, луке-репке в диапазоне 0,02 — 1,0 мг/кг, в семенах и масле рапса в диапазоне 0,05 — 1,0 мг/кг.
Название по ИЮПАК: Метил(S)-N-[7-хлоро-2,3,4а,5-тетрагидро-4а-(метоксикарбонил)индено[1,2-e][1,3,4]оксадиазин-2-илкарбонил]-4'-(трифторметокси)карбанилат.
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H ClF N O . 22 17 3 3 7
Агрегатное состояние: порошок.
Давление паров: 2,5 x 10 мПа (25 °C). Коэффициент распределения октанол/вода (при 25 °C): К log P = 4,65.
ow
Температура плавления: 88,1 °C.
Растворимость в воде (мг/куб. дм, 25 °C): 0,2.
Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, при 25 °C): ацетон — более 250; ацетонитрил — 139; метанол — 103; н-октанол — 14,5.
Гидролитически стоек в кислой и нейтральной среде с ДТ более 30 дней 50 (pH 5), 38 дней (pH 7), но быстро разрушается в щелочном растворе ДТ — 1 50 день (при pH 9).
В почве Индоксакарб умеренно персистентен, в аэробных условиях ДТ — 50 от 3 до 23 дней, в анаэробных условиях ДТ — 186 дней. В илистой почве 50 ДТ — 17 дней. 50
Краткая токсикологическая характеристика: Индоксакарб относится к умеренно опасным веществам по острой пероральной (ЛД для крыс от 268 до
50
1732 мг/кг) и по ингаляционной токсичности (ЛК для крыс (4 ч) более 2000 50 мг/куб. м) и к малоопасным веществам по дермальной токсичности (ЛД для 50 кроликов более 5000 мг/кг). Не раздражает слизистую глаз и кожу кроликов.
Область применения: Индоксакарб — инсектицид из класса оксадиазинов контактного и кишечного действия, блокирует натриевые каналы нервных волокон активным S-изомером. Насекомые прекращают питаться, у них нарушается координация, наступает паралич и затем смерть.
Применяется для борьбы с широким спектром различных бабочек на хлопчатнике, овощных культурах и в фруктовых садах при нормах расхода 12,5 — 125 г/га.
Проходит регистрационные испытания в России в качестве инсектицида для борьбы с вредителями яблоневых садов и виноградников с нормой расхода 0,4 — 0,5 л/га и 5 обработками за сезон.
В России установлены следующие гигиенические нормативы: МДУ в продукции: лук-перо, лук-репка — 0,02 мг/кг, томаты и томатный сок — 0,5 мг/кг; семена и масло рапса — 0,05 мг/кг.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ ИНДОКСАКАРБА
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Лук-перо | 0,02 — 0,1 вкл. | 50 | 3,17 | 8,81 | 10,49 |
| 0,1 — 1,0 вкл. | 25 | 2,33 | 6,48 | 7,71 | |
| Лук-репка | 0,02 — 0,1 вкл. | 50 | 2,2 | 7,84 | 9,33 |
| 0,1 — 1,0 вкл. | 25 | 1,88 | 5,23 | 6,22 | |
| Томаты | 0,1 — 1,0 вкл. | 25 | 2,65 | 7,37 | 8,77 |
| Томатный сок | 0,1 — 1,0 вкл. | 25 | 1,96 | 5,45 | 6,49 |
| Семена рапса | 0,05 — 0,1 вкл. | 50 | 2,53 | 7,03 | 8,37 |
| 0,1 — 1,0 вкл. | 25 | 1,55 | 4,31 | 5,13 | |
| Масло рапса | 0,05 — 0,1 вкл. | 50 | 1,03 | 2,86 | 3,41 |
| 0,1 — 1,0 вкл. | 25 | 1,93 | 5,37 | 6,39 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
ДЛЯ ИНДОКСАКАРБА
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| предел обнаружения, мг/кг | диапазон определяемых концентраций, мг/кг | полнота извлечения вещества, % | стандартное отклонение, S, % | доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Лук-перо | 0,02 | 0,02 — 1,0 | 82,03 | 2,41 | 1,42 |
| Лук-репка | 0,02 | 0,02 — 1,0 | 75,89 | 2,31 | 1,26 |
| Томаты | 0,1 | 0,1 — 1,0 | 86,06 | 2,59 | 1,18 |
| Томатный сок | 0,1 | 0,1 — 1,0 | 83,77 | 1,99 | 0,87 |
| Семена рапса | 0,05 | 0,05 — 1,0 | 79,52 | 2,3 | 1,13 |
| Масло рапса | 0,05 | 0,05 — 1,0 | 78,91 | 2,1 | 0,86 |
2. Метод измерений
Метод основан на определении Индоксакарба с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на концентрирующих патронах Диапак С, Диапак Амин и Диапак С16.
Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», EP 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-2001 — специальный (I)
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г «ACCULAB» V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-2001 — средний (III)
Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Микрошприц для жидкостной хроматографии, объем 100 куб. мм, фирма «Hamilton», кат. № 80665
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см ГОСТ 29227-91 pH-метр/милливольтметр pH-150 0 — 14 pH; +/- 1999 мВ, номер госрегистрации 10663
Хроматограф жидкостной Waters 515 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу,
номер госрегистрации № 15311-02
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Индоксакарб, CAS 144171-61-9, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,6%, фирма «Dr. Ehreustorfer GmbH», аккредитованная по ИСО-9001-2000
Ацетон, ос.ч. ТУ 6-09-3513-86 Ацетонитрил, ос.ч., УФ-200 нм ТУ 6-09-2167-84
Вода дистиллированная и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости) ГОСТ 6709-72
Гелий очищенный, марки "А" ТУ 51-940-80 n-Гексан, х.ч. ТУ 6-09-3818-89
Калий марганцовокислый, ч.д.а. ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, ч. ТУ 6-09-4711-81
Кислота соляная, х.ч. ГОСТ 857-95
Кислота уксусная, ледяная, х.ч. ГОСТ 61-75
Концентрирующие патроны Диапак С, Диапак Амин и Диапак С16 (0,6 г) фирма «БиоХимМак СТ» ТУ 4215-002-05451931-94
Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Эфир диэтиловый, ФС 42-3643-98
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Алонж прямой с отводом для вакуума (АО-14/23) для работы с концентрирующими патронами Диапак С16 ГОСТ 25336-82
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1»
Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. № 3120-0250, фирма «NALGENE»
Ванна ультразвуковая «UNITRA» UNIMA OLSZTYN UM-4
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная ГОСТ 5556-81
Воронки делительные на 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные стеклянные ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма «Buchi»
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 куб. см и 4000 куб. см ТС ТУ 92-891.029-91
Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetry Shield RP18, зернение 5 мкм, фирма «Waters»
Насос диафрагменный FT.19, фирма «KNF Neu Laboport»
Предколонка хроматографическая стальная, Symmetry С 18, длиной 20,0 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма «Waters»
Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100 — 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической колбой объемом 1000 куб. см
Фильтры бумажные «красная лента» ТУ 6-09-1678-86
Фильтры для очистки растворителей диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм, фирма «Waters»
Центрифуга MPW-350e с числом оборотов 4000 об./мин. и с набором полипропиленовых банок емкостью 200 куб. см
Шприц инъекционный однократного применения объемом 10 куб. см ГОСТ 24861-91 (ИСО 7886-84)
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению определений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак Амин, Диапак С и Диапак С16 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах Диапак Амин, Диапак С и Диапак С16, установление градуировочной характеристики.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.
7.1.2 Очистка ацетона
Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм.
Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.
7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды
Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.
7.2. Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ
Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил и очищенную воду, а также ледяную уксусную кислоту.
В плоскодонную колбу объемом 1000 куб. см помещают 700 куб. см ацетонитрила и 300 куб. см очищенной воды. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 куб. см/мин. в течение 5 мин., после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин. Готовый раствор подвижной фазы хранят при комнатной температуре не более 7 суток.
7.2.2 Приготовление градуировочных растворов
7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией Индоксакарба 1,0 мг/куб. см.
Взвешивают 50 мг Индоксакарба в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией Индоксакарба 10,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 2 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией Индоксакарба 1,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 3 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 3 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией Индоксакарба 0,5 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 4 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией Индоксакарба 0,2 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 50 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 5 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией Индоксакарба 0,1 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 6 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.7. Стандартные растворы с концентрацией Индоксакарба 10,0, 5,0, 2,0 и 1,0 мкг/куб. см для внесения в контрольные образцы.
Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 5,0 и 2,0 мкг/куб. см, и используют эти растворы с целью внесения в контрольные образцы лука-перо, лука-репки, плодов томата, томатного сока и семян рапса. Стандартные растворы для внесения в контрольные образцы хранятся в холодильнике не более 30 суток.
Методом последовательного разведения ацетоном готовят растворы, содержащие по 10,0, 5,0, 2,0, 1,0 мкг/куб. см и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы масла. Стандартные растворы для внесения в контрольные образцы масла хранятся в холодильнике не более 7 суток.
7.3. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Индоксакарба в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0, 0,5, 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.
В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
7.4. Подготовка концентрирующих патронов Диапак Амин для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Индоксакарба на них
7.4.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак Амин
для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 — 2 кап./с).
Патрон Диапак Амин устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:2. Элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.4.2 Проверка хроматографического поведения Индоксакарба
на концентрирующих патронах Диапак Амин
Из стандартного раствора Индоксакарба в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Исходный концентратор обмывают последовательно двумя порциями по 10 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:2, полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие Индоксакарб, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Индоксакарба на концентрирующих патронах Диапак Амин проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.
7.5. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Индоксакарба на них
7.5.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак С
для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 — 2 кап./с).
Патрон Диапак С устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:2. Элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.5.2 Проверка хроматографического поведения Индоксакарба
на концентрирующих патронах Диапак С
Из стандартного раствора Индоксакарба в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Исходный концентратор обмывают последовательно двумя порциями по 10 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:2, полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие Индоксакарб, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Индоксакарба на концентрирующих патронах Диапак С проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.
7.6. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16 для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Индоксакарба на них
7.6.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16
для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 — 2 кап./с).
Патрон Диапак С16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3, затем 20 куб. см воды. Элюаты отбрасывают.
7.6.2 Проверка хроматографического поведения Индоксакарба
на концентрирующих патронах Диапак С16
Из стандартного раствора Индоксакарба в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Исходный концентратор обмывают последовательно 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:2, затем двумя порциями по 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3, полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие Индоксакарб, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Индоксакарба на концентрирующих патронах Диапак С16 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.
7.7. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии
Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с предколонкой Symmetry С18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25 °C и скорости потока подвижной фазы 1 куб. см/мин. 3 — 4 ч.
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», от 21.08.1979 № 2051-79, а также с ГОСТ Р 51783-2001 «Лук репчатый свежий, реализуемый в розничной торговой сети. ТУ», ГОСТ Р 51810-2001 «Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети», ГОСТ Р 52183-2003 «Консервы. Соки овощные. Сок томатный. ТУ», ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 8988-2002 «Масло рапсовое. ТУ».
Пробы лука-перо, лука-репки, плодов томата хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 — 4 °C не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C до 2 лет.
Пробы семян рапса подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
Пробы томатного сока и масла рапса хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 — 4 °C не более суток.
9. Подготовка проб и выполнение измерений
9.1. Плоды томата и томатный сок
9.1.1 Экстракция
Образец измельченных плодов томата (или томатного сока) массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, прибавляют 30 куб. см ацетонитрила и помещают в ультразвуковую ванну на 5 мин. Затем экстракт фильтруют через фильтр «красная лента» в коническую колбу объемом 250 куб. см с 5 г сухого хлорида натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см ацетонитрила и помещая каждый раз на 5 мин. в ультразвуковую ванну. Экстракты объединяют в конической колбе с хлоридом натрия, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 мин. Затем содержимое колбы (без нерастворившейся соли) переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см и выдерживают 5 мин. Выделившуюся нижнюю водную фазу отбрасывают, а верхний ацетонитрильный экстракт собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.1.2 Очистка экстракта перераспределением в системе
несмешивающихся растворителей
К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, прибавляют 3 куб. см ацетона, обмывают стенки колбы. Туда же прибавляют 100 куб. см дистиллированной воды, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Туда же прибавляют 5 г сухого хлорида натрия и интенсивно перемешивают до полного растворения соли. Индоксакарб экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира объемом по 30 куб. см, интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой диэтилового эфира объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.1.3 Очистка экстракта на концентрирующих
патронах Диапак С
Сухой остаток, полученный в п. 9.1.2, растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см гексана, перемешивают и вносят на заранее подготовленный концентрирующий патрон Диапак С, элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:2 и также вносят на патрон. Элюаты объединяют, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.1.4 Очистка экстракта на концентрирующих патронах
Диапак С16
Сухой остаток, полученный по п. 9.1.3, растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см воды, перемешивают и вносят на заранее подготовленный патрон Диапак С16. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, затем 10 куб. см смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:2 вносят на патрон, элюаты отбрасывают. Индоксакарб элюируют 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток растворяют в 10 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.2. Лук-перо и лук-репка
9.2.1 Экстракция и очистка полученного экстракта
Образец измельченного лука-перо (или лука-репки) массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, прибавляют 30 куб. см ацетонитрила и помещают в ультразвуковую ванну на 5 мин. Затем экстракт фильтруют через фильтр «красная лента» в коническую колбу объемом 250 куб. см с 5 г сухого хлорида натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см ацетонитрила и помещая каждый раз на 5 мин. в ультразвуковую ванну. Экстракты объединяют в конической колбе с хлоридом натрия, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 мин. Затем содержимое колбы (без нерастворившейся соли) переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см и выдерживают 5 мин. Выделившуюся нижнюю водную фазу отбрасывают, а верхнюю ацетонитрильную оставляют в делительной воронке.
К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 30 куб. см гексана и интенсивно встряхивают воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 250 куб. см, верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще одной порцией гексана объемом по 30 куб. см, гексан отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.2 «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей», п. 9.1.3 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С» и п. 9.1.4 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С16».
После очистки элюат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 — 10 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.3. Семена рапса
9.3.1 Экстракция
Образец измельченных семян рапса массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют 30 куб. см ацетонитрила и помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин. на аппарат для встряхивания проб. Пробу центрифугируют в течение 5 мин. при скорости 4000 об./мин. и экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 30 куб. см ацетонитрила и помещая на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин. на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют в течение 5 мин. при скорости 4000 об./мин., супернатант фильтруют. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см. Экстракт упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.3.2 Очистка экстракта перераспределением в системе
несмешивающихся растворителей
К маслянистому остатку, полученному по п. 9.3.1, добавляют 50 куб. см гексана, тщательно обмывают стенки концентратора и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Индоксакарб экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 20 куб. см, встряхивая каждый раз делительную воронку по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 100 куб. см.
Ацетонитрильный экстракт переносят в делительную воронку, прибавляют к нему 25 куб. см гексана и интенсивно встряхивают воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 100 куб. см, верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще одной порцией гексана объемом по 30 куб. см, гексан отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.3.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах
Диапак С16
Сухой остаток, полученный по п. 9.3.2, растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см воды, перемешивают и проводят очистку на концентрирующих патронах Диапак С16, как указано в п. 9.1.4 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С16».
9.3.4 Очистка экстракта на концентрирующих патронах
Диапак Амин
Сухой остаток, полученный в п. 9.3.3, растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см гексана, перемешивают и вносят на заранее подготовленный концентрирующий патрон Диапак Амин, элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:2 и также вносят на патрон. Элюаты объединяют, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
После очистки элюат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 5 — 10 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.4. Масло рапса
9.4.1 Экстракция и очистка полученного экстракта
Из пробы рапсового масла отбирают в стакан навеску массой 10 г и переносят ее в делительную воронку объемом 250 куб. см тремя порциями гексана объемом по 30 куб. см. Индоксакарб экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 30 куб. см, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой объединяют в стакане объемом 100 куб. см. Верхний слой (гексан) отбрасывают.
Ацетонитрильный экстракт, полученный в п. 9.4.1, переносят в чистую делительную воронку объемом 250 куб. см, прибавляют 50 куб. см гексана и интенсивно встряхивают воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще одной порцией гексана объемом 50 куб. см. Гексан отбрасывают, а ацетонитрил собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.4 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С16» и п. 9.3.4 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Амин».
После очистки элюат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 5 — 10 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.5. Условия хроматографирования
Хроматограф жидкостной Waters 515 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу, номер госрегистрации 15311-02 или другой с аналогичными характеристиками.
Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 250 мм x 4,6 мм, зернение 5 мкм, фирма «Waters».
Предколонка стальная Symmetry С8, 20 мм x 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма «Waters».
Подвижная фаза: ацетонитрил-вода в соотношении 70:30.
Время удерживания Индоксакарба: 9,255 мин. +/- 2%.
Чувствительность не менее 0,005 AUFS (единиц абсорбции на шкалу).
Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 — 20 нг.
10. Обработка результатов
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа Millenium 3.05.01.
Альтернативная обработка результатов. Содержание Индоксакарба рассчитывают по формуле:
S x A x V
пр
X = ------------- x P, 100 x S x m ст
X — содержание Индоксакарба в пробе, мг/кг;
S — высота (площадь) пика стандарта, мм; ст
S — высота (площадь) пика образца, мм; пр
A — концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m — масса анализируемого образца, г (куб. см);
P — содержание Индоксакарба в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг; 1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 x сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности P = 0,95,
X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг; _
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,02 мг/кг» <*>.
<*> 0,01 мг/кг — предел обнаружения.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X'
+/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности (абсолютная л,X л,X' погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с
добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг; _
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры K рассчитывают по формуле: к
_ _ K = X' - X - C , к д
_ _ X', X, С - среднее арифметическое результатов параллельных определений
д
(признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле: _____________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг; 1 2
R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
14. Разработчики
Российский государственный аграрный университет — МСХА им. К.А. Тимирязева.
Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов».
Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации № 0046.22.09.10 от 28.09.2010 и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2010.09007).
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ИНДОКСАКАРБА ИЗ ПЕРА И РЕПКИ ЛУКА,
ПЛОДОВ ТОМАТА, ТОМАТНОГО СОКА, СЕМЯН И МАСЛА РАПСА
(5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)
| Среда | Внесено, мг/кг | Обнаружено, мг/кг | Полнота определения, % |
| Лук-перо | 0,02 | 0,0161 +/- 0,0006 | 80,4 |
| 0,20 | 0,1654 +/- 0,0048 | 82,7 | |
| 0,50 | 0,4080 +/- 0,0090 | 81,6 | |
| 1,0 | 0,8338 +/- 0,0089 | 83,4 | |
| Лук-репка | 0,02 | 0,0153 +/- 0,0005 | 76,3 |
| 0,02 | 0,1505 +/- 0,0035 | 75,3 | |
| 0,05 | 0,3718 +/- 0,0016 | 74,4 | |
| 0,10 | 0,7762 +/- 0,0129 | 77,6 | |
| Плоды томатов | 0,10 | 0,0871 +/- 0,0029 | 87,1 |
| 0,20 | 0,1680 +/- 0,0046 | 84,0 | |
| 0,50 | 0,4255 +/- 0,0086 | 85,1 | |
| 1,0 | 0,880 +/- 0,0031 | 88,0 | |
| Томатный сок | 0,10 | 0,0843 +/- 0,0019 | 84,3 |
| 0,20 | 0,1645 +/- 0,0015 | 83,2 | |
| 0,50 | 0,4148 +/- 0,0101 | 83,0 | |
| 1,0 | 0,8556 +/- 0,0082 | 85,7 | |
| Семена рапса | 0,05 | 0,0397 +/- 0,0012 | 79,4 |
| 0,20 | 0,1603 +/- 0,0026 | 80,0 | |
| 0,50 | 0,3943 +/- 0,0095 | 78,9 | |
| 1,0 | 0,7754 +/- 0,0098 | 77,5 | |
| Масло рапса | 0,05 | 0,0405 +/- 0,0005 | 80,1 |
| 0,20 | 0,1567 +/- 0,0026 | 78,3 | |
| 0,50 | 0,3943 +/- 0,0095 | 78,9 | |
| 1,0 | 0,7750 +/- 0,0098 | 77,5 |