МУК 4.1.2785-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств паклобутразола в воде, почве, зеленой массе, семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2785-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств паклобутразола в воде, почве, зеленой массе, семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2785-10. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2785-10
(утв. Роспотребнадзором 24.11.2010)
Примечание
Документ введен в действие с 24 ноября 2010 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
24 ноября 2010 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПАКЛОБУТРАЗОЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.2785-10
с момента утверждения
1. Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 14.10.2010 № 2).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 ноября 2010 г.
4. Введены в действие с момента утверждения.
Общие положения
Свидетельство об аттестации методики № 0035.16.07.10 от 19.07.2010.
Настоящие Методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств паклобутразола в воде в диапазоне 0,001 — 0,01 мг/куб. дм, в почве и семенах рапса в диапазоне 0,02 — 0,2 мг/кг, в зеленой массе и масле рапса в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг.
Название вещества по ИСО: паклобутразол.
Название вещества по ИЮПАК: (2RS, 3RS)-1-(4-хлорфенил)-4,4-диметил-2-(1Н-1,2,4-триазол-1-ил)пентан-3-ол.
Структурная формула (не приводится).
C H ClN O. 15 20 3
Бесцветное кристаллическое вещество. Температура плавления 165 - 166 °С. Давление паров при 20 °С: 0,001 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 3,2. Растворимость (г/куб. дм) при 20 °С: вода
ow
- 0,026, н-гексан — 10, дихлорметан — 100, ацетон — 110, метанол — 150, циклогексан — 180.
Вещество устойчиво к фотолизу и гидролизу в кислой, нейтральной и щелочной средах.
В почвах паклобутразол разрушается очень медленно (в среднем DT = 180 50
- 360 дней); только в щелочных почвах (pH 8,8) этот процесс протекает быстрее (DT < 42 дней). 50
Краткая токсикологическая характеристика
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — 1300 — 2000 мг/кг; 50 острая дермальная токсичность (LD ) для крыс и кроликов — > 1000 мг/кг; 50 острая ингаляционная токсичность (LD ) для крыс — 3,2 — 4,8 мг/куб. дм 50
воздуха. Оказывает слабое раздражающее действие на слизистую оболочку глаз и кожу. LD для рыб - 27,8 мг/куб. дм (96 ч). Паклобутразол нетоксичен для
50
птиц, пчел, дафний, водорослей.
Паклобутразол — системный ретардант, обладающий также фунгицидными свойствами. Как ретардант активен на ряде плодовых, древесных, декоративных и зерновых культур. Препарат ингибирует вегетативный рост и увеличивает образование плодовых почек у некоторых плодовых культур, тормозит рост и уменьшает полегание зерновых культур. Помимо этого в небольших дозах он проявляет фунгицидный эффект в отношении возбудителей мучнистой росы и парши. Паклобутразол свободно передвигается по флоэме и ксилеме и поэтому активен как при опрыскивании растений, так и при внесении в почву.
Проходит регистрационные испытания в России в качестве ретарданта и фунгицида в составе смесевых препаратов на посевах ярового рапса при норме расхода до 60 г д.в./га и двукратной обработке за сезон.
1. Метрологические характеристики метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/куб. дм, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, Р = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Вода | от 0,001 до 0,01 вкл. | 100 | 2,9 | 8 | 9 |
| Почва | от 0,02 до 0,1 вкл. | 50 | 2,8 | 8 | 9 |
| более 0,1 до 0,2 вкл. | 25 | 2,5 | 7 | 8 | |
| Зеленая масса | от 0,05 до 0,1 вкл. | 50 | 2,9 | 8 | 10 |
| более 0,1 до 0,5 вкл. | 25 | 2,7 | 7 | 9 | |
| Семена | от 0,02 до 0,1 вкл. | 50 | 2,7 | 7 | 9 |
| более 0,1 до 0,2 вкл. | 25 | 2,2 | 6 | 7 | |
| Масло | от 0,05 до 0,1 вкл. | 50 | 3,0 | 8 | 10 |
| более 0,1 до 0,5 вкл. | 25 | 2,6 | 7 | 8 |
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| предел обнаружения, мг/куб. дм, мг/кг | диапазон определяемых концентраций, мг/куб. дм, мг/кг | полнота извлечения вещества, % | стандартное отклонение, S, % | доверительный интервал среднего результата, +/- % | |
| Вода | 0,001 | 0,001 — 0,01 | 91,3 | 2,6 | +/- 2,5 |
| Почва | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 88,7 | 3,6 | +/- 3,3 |
| Зеленая масса | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 86,1 | 4,1 | +/- 3,8 |
| Семена | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 84,8 | 3,3 | +/- 3,1 |
| Масло | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 86,0 | 3,4 | +/- 3,2 |
2. Метод измерений
Методика основана на определении вещества с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором (ТИД). Контроль паклобутразола в матрицах осуществляется по содержанию вещества после экстракции его из воды смесью гексан — этилацетат (8:2, по объему), из почвы и зеленой массы рапса водным ацетоном, из семян и масла рапса ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем.
Идентификация вещества проводится по времени удерживания, количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" ТИД (СКБ номер Госреестра "Хроматэк", Россия) N 14516-95
Весы аналитические Sartorius 6110 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и пределом допустимой погрешности 0,0001 г ГОСТ 24104-2001
Весы лабораторные Metler P-160 с наибольшим пределом взвешивания до 160 г и пределом допустимой погрешности 0,005 г ГОСТ 24104-2001
Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2 ГОСТ 1770-74
Пипетки градуированные 1-1-2-1, 1-1-2-2, 1-2-2-5, 1-2-2-10 ГОСТ 29227-91
Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-5-0,1; П-2-10-0,2 ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные 1-25; 1-50; 1-100; 1-500; 1-1000 ГОСТ 1770-74
3.2. Реактивы
Аналитический стандарт паклобутразола (CAS 76738-62-0) с содержанием основного вещества 99,7% (Сингента, Швейцария)
Ацетон квалификации чда ГОСТ 2603-79
Ацетонитрил квалификации хч ТУ 6-09-3534-87
Вода дистиллированная или деионизированная ГОСТ 6709-72
н-Гексан квалификации хч ТУ 6-09-3375-78
Калий углекислый квалификации хч ГОСТ 4221-76
Калия перманганат квалификации хч ГОСТ 20490-75
Кальция хлорид квалификации хч ГОСТ 4161-77
Кислота серная квалификации хч ГОСТ 4204-77
Натрий углекислый квалификации хч ГОСТ 83-63
Натрия сульфат безводный квалификации хч ГОСТ 4166-76
Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат) квалификации ч ГОСТ 22300-76
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания проб АВУ-1 ТУ 64-1-1081-73
Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма Branson Instr. Co. (США)
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная ГОСТ 5556-81
Гомогенизатор «Omni-mixer» (Sorvall, США) или гомогенизатор МРТУ 42-1505
Дистиллятор Cyclon III, мод. 4 BD (Fistreem, Великобритания)
Установка Elgastat B 114 с патроном Elgacan B 114 для получения деионизированной воды (Elga, Великобритания)
Воронки делительные вместимостью 100 и 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные стеклянные ГОСТ 25336-82
Колбы плоскодонные вместимостью 250 куб. см ГОСТ 9737-93
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10, 25 и 100 куб. см ГОСТ 9737-93
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая ZB-1 (типа SE-30), длина 25 см, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, фирма Phenomenex (США), или аналогичная
Колонка хроматографическая стеклянная длиной 25 см, внутренним диаметром 8 — 10 мм
Мельница лабораторная электрическая ТУ 46-22-236-84
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi (Швейцария) ТУ 25-11-917-76
Силикагель 60 (0,063 — 0,2 мм) для колоночной хроматографии (Мерк, Германия)
Стаканы химические вместимостью 50 и 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с ГОСТ 9737-93
дефлегматором (ИСО 641-75) Фильтры бумажные "красная лента" обеззоленные ТУ 6-09-2678-77.
Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в разделе 3.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.
6. Условия выполнения измерений
6.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия.
Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:
- температура воздуха (20 +/- 5) °С;
- атмосферное давление (84 — 106) кПа;
- относительная влажность воздуха не более 80%.
6.2 Условия хроматографического анализа.
Температура термостата испарителя 270 °С;
Режим программирования температуры колонки:
начальная температура 170 °С (1 мин.), скорость подъема температуры до 245 °С (0 мин.) 20 °С/мин.;
от 245 до 260 °С (4 мин.), скорость подъема температуры 5 °С/мин.;
от 260 до 280 °С (5 мин.), скорость подъема температуры 20 °С/мин.
газа-носителя (азот) 2,2 куб. см/мин.;
Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.
Время удерживания паклобутразола: 6 мин. 07 с +/- 2%.
Линейный диапазон детектирования: (0,05 — 1,0) нг.
7. Подготовка к выполнению измерений
Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем.
7.1. Очистка органических растворителей
7.1.1 Очистка н-гексана
Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.
7.1.2 Очистка этилацетата
Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.
7.1.3 Очистка ацетона
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 куб. дм ацетона 10 г KMnO и 2 г K CO ). 4 2 3
7.1.4 Очистка силикагеля
Силикагель 60 (0,063 — 0,2 мм) для колоночной хроматографии встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона, высушивают в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 5 — 6 часов и затем активируют при температуре 130 °С в течение 5 часов.
7.2. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта
Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 — 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 3 г силикагеля в 15 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 20 куб. см гексана со скоростью 1 — 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
7.3. Определение объема элюента, необходимого для полного вымывания паклобутразола из колонки с силикагелем
При отработке методики или поступлении новой партии силикагеля проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания паклобутразола из колонки с силикагелем.
В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора № 1 паклобутразола с массовой концентрацией 10,0 мкг/куб. см в смеси гексан — этилацетат (8:2, по объему) (п. 7.5.2) и отдувают растворитель током теплого воздуха. Остаток растворяют в 3 куб. см смеси гексан — этилацетат (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 7.2. Промывают колонку 30 куб. см смеси гексан — этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Затем через колонку с силикагелем пропускают 50 куб. см смеси гексан — этилацетат (4:6, по объему), отбирая последовательно по 5 куб. см элюата. Каждую фракцию упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С, сухие остатки растворяют в 2 куб. см смеси гексан — этилацетат (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и затем хроматографируют в соответствии с п. 6.2. По результатам обнаружения паклобутразола в каждой фракции определяют объем смеси гексан — этилацетат (4:6, по объему), необходимый для полного вымывания вещества с колонки.
Примечание. При разработке метода анализа паклобутразола в масличных культурах целесообразно проверку хроматографического поведения вещества на колонке с силикагелем проводить с использованием экстрактов контрольных образцов семян и масла.
7.4. Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки
Капиллярную кварцевую колонку ZB-1 (типа SE-30) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 280 °С и скорости газа-носителя 2 куб. см/мин. в течение 8 — 10 часов.
7.5. Приготовление градуировочных растворов
7.5.1 Исходный раствор паклобутразола для градуировки с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают (0,010 +/- 0,0001) г паклобутразола, растворяют в 40 куб. см ацетона, доводят объем раствора этим же растворителем до метки, тщательно перемешивают.
Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше (-18) °С в течение 2-х месяцев.
7.5.2 Градуировочный раствор паклобутразола с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см (раствор № 1)
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10,0 куб. см исходного раствора паклобутразола с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.5.1), разбавляют смесью гексан — этилацетат (8:2, по объему) до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов № 2 — 5.
Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше (-18) °С в течение месяца.
7.5.3. Градуировочные растворы паклобутразола с массовой концентрацией (0,05 — 0,5) мкг/куб. см (растворы № 2 — 5)
В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 0,5; 1,0; 2,5 и 5,0 куб. см градуировочного раствора № 1 паклобутразола с массовой концентрацией 10,0 мкг/куб. см (п. 7.5.2), доводят до метки смесью гексан — этилацетат (8:2, по объему), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 5 с концентрацией паклобутразола 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/куб. см соответственно.
Растворы готовят непосредственно перед использованием.
7.6. Градуировка хроматографа
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ х с) от концентрации паклобутразола в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м градуировочным растворам (п. 7.5.3).
В испаритель (инжектор) хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора (п. 7.5.3) и анализируют при условиях хроматогрфирования по п. 6.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предела повторяемости r.
7.7. Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.
Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.
Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:
S - S
изм гр
---------- х 100 <= К ,
S гр
гр
где:
S и S - значение площади пика паклобутразола в образце для
изм гр
контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике
соответственно, усл. ед.; К — норматив контроля; гр
где +/- дельта — границы относительной погрешности, % (табл. 1).
Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.
Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.
8. Отбор, подготовка и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.1979) и правилами, определенными ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 17.4.3.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 8988-2002 «Масло рапсовое. ТУ».
Пробы воды анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре (-18) °С не более 2-х недель.
Образцы почвы подсушивают на воздухе в темноте, помещают в герметичную полиэтиленовую тару и хранят в холодильнике при температуре (4 — 6) °С не более 4-х недель. Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температуре (-18) °С.
Пробы зеленой массы рапса хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 1 дня; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при (-18) °С.
Пробы семян подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
Пробы масла рапса хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре (0 — 4) °С. В некоторых случаях масло получают из семян рапса экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.
Перед проведением анализа зеленую массу измельчают, а семена размалывают на электрической мельнице.
9. Выполнение определения
9.1. Экстракция и очистка
9.1.1. Вода. 100 куб. см отфильтрованной воды помещают в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, добавляют 30 куб. см смеси гексан — этилацетат (8:2, по объему) и воронку интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз верхний органический слой отделяют и фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу. Водную фазу экстрагируют указанной выше смесью еще дважды порциями по 25 куб. см. Объединенную органическую фракцию упаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси гексан — этилацетат (8:2, по объему), раствор помещают в ультразвуковую ванну на 1 минуту и анализируют на содержание паклобутразола по 10.
9.1.2. Почва. Образец воздушно-сухой почвы массой 25 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 125 куб. см смеси ацетон — вода (8:2, по объему), перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 1 час. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 куб. см. Почву повторно экстрагируют 75 куб. см указанной выше смеси в течение 30 минут при встряхивании и фильтруют. Измеряют объем объединенного экстракта и 1/5 его часть, эквивалентную 5 г образца, переносят в круглодонную колбу. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.
9.1.3. Зеленая масса. Навеску (20 г) измельченного растительного материала помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, приливают 100 куб. см смеси ацетон — вода (8:2, по объему), перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 40 минут. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 куб. см. Остаток на фильтре промывают 50 куб. см смеси ацетон — вода (8:2, по объему). Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/4 его часть, эквивалентную 5 г образца, переносят в круглодонную колбу. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.
9.1.4. Семена. Образец размолотых семян массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и колбу помещают на аппарат для встряхивания на 40 минут. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 куб. см. Растительный материал, оставшийся на фильтре, повторно экстрагируют 30 куб. см ацетонитрила в течение 30 минут при встряхивании и суспензию фильтруют. Измеряют объем объединенного ацетонитрильного экстракта и 1/2 его часть, эквивалентную 5 г образца, переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 10 куб. см насыщенного ацетонитрилом гексана, интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают, а ацетонитрильную фракцию упаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.3.
9.1.5. Масло. Образец масла массой 5 г переносят в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и колбу помещают на аппарат для встряхивания на 40 минут. Верхний ацетонитрильный слой декантируют в делительную воронку через слой ваты, помещенной в конусную воронку. К оставшемуся в колбе маслу приливают 25 куб. см ацетонитрила и операцию экстракции повторяют. После декантации вату промывают 10 куб. см ацетонитрила, которые объединяют с фильтратом. В делительную воронку, содержащую объединенную ацетонитрильную фракцию, вносят 15 куб. см насыщенного ацетонитрилом гексана, интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают, а ацетонитрильную фракцию упаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Далее очистку экстракта проводят по п. 9.3.
9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
Экстракты, полученные по пп. 9.1.2 и 9.1.3 и помещенные в круглодонные колбы, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка при температуре не выше 40 °С. К водному остатку прибавляют 20 куб. см дистиллированной воды, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 30 куб. см смеси гексан — этилацетат (8:2), интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз верхний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 30 и 20 куб. см смеси гексан — этилацетат (8:2, по объему). Объединенную органическую фракцию, содержащую паклобутразол, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток экстракта почвы растворяют в 2 куб. см смеси гексан — этилацетат (8:2, по объему), раствор помещают в ультразвуковую ванну на 1 минуту и анализируют на содержание паклобутразола по п. 10. Экстракт зеленой массы подвергают дальнейшей очистке по п. 9.3.
9.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем
Сухой остаток экстрактов семян и масла, полученный по пп. 9.1.4 и 9.1.5, и сухой остаток экстракта зеленой массы, полученный по п. 9.2, растворяют в 2 куб. см смеси гексан — этилацетат (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.2. Колбу обмывают 2 куб. см смеси гексан — этилацетат (8:2, по объему), которые также наносят на колонку. Колонку промывают 25 куб. см смеси гексан — этилацетат (1:1, по объему) при анализе экстракта зеленой массы и 15 куб. см этой же смеси при анализе экстрактов семян и масла со скоростью 1 — 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Паклобутразол элюируют с колонки 50 куб. см смеси гексан — этилацетат (4:6, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток экстракта семян растворяют в 2 куб. см, а экстрактов зеленой массы и масла в 5 куб. см смеси гексан — этилацетат (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание паклобутразола по п. 10.
10. Выполнение измерений
10.1. В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм очищенного экстракта анализируемой пробы (пп. 9.1 - 9.3), анализируют при условиях п. 6.2 и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.
10.2. Для каждого образца воды, почвы, зеленой массы, семян и масла рапса повторяют операции по пп. 9.1 - 9.3, 10.1.
11. Обработка результатов анализа
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программа сбора и обработки хроматографической информации «Хроматэк Аналитик», версия 1.20.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание паклобутразола рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
H х A х V
1
X = ------------, 100 х H х m 0
где:
X - содержание паклобутразола в пробе, мг/куб. дм, мг/кг;
H - площадь пика образца, мВ х с;
1
H - площадь пика стандарта, мВ х с;
0
A - концентрация стандартного раствора паклобутразола, мкг/куб. см;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m - масса анализируемой части образца, соответствующая доле экстракта, использованной для очистки и последующего хроматографического определения,
куб. см, г.
12. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 |X - X | х 100
1 2
----------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг (куб. дм);
1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
13. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
(X +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, (куб. дм) при вероятности Р = 0,95,
где:
_
X - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг (куб. дм); ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг (куб. дм);
дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе „менее нижней границы определения“»
менее 0,001 мг/куб. дм для воды <*>;
менее 0,02 мг/кг для почвы и семян <**>;
менее 0,05 мг/кг для зеленой массы и масла <***>.
<*> 0,001 мг/куб. дм — предел обнаружения для воды.
<**> 0,02 мг/кг — предел обнаружения для почвы и семян.
<***> 0,05 мг/кг — предел обнаружения для зеленой массы и масла.
Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал паклобутразола, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 0,5 мкг/куб. см, разбавляют, но не более чем в 10 раз, и анализируют в соответствии с данной методикой. При расчете содержания паклобутразола учитывают разбавление.
14. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
14.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
14.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки С должна удовлетворять условию: д
С = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг (куб. дм) при этом:
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг (куб. дм);
дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
_ _ К = X' - X - С , к д _ _ где X', X, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 12) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг (куб. дм).
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
______________________
/ 2 2 К = / ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА . \/ л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
14.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 |X - X | х 100
1 2
----------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг
1 2
(куб. дм); R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
| Матрица | Внесено паклобутразола, мг/куб. дм, мг/кг | Открыто паклобутразола, % | Доверительный интервал среднего результата, % |
| Вода | 0,001 | 89,2 | +/- 3,3 |
| 0,002 | 91,2 | +/- 2,4 | |
| 0,005 | 91,8 | +/- 2,3 | |
| 0,01 | 93,0 | +/- 1,7 | |
| Почва | 0,02 | 86,0 | +/- 3,9 |
| 0,04 | 88,0 | +/- 3,2 | |
| 0,10 | 88,6 | +/- 2,4 | |
| 0,20 | 92,2 | +/- 2,1 | |
| Зеленая масса | 0,05 | 83,4 | +/- 4,4 |
| 0,10 | 84,6 | +/- 3,3 | |
| 0,25 | 86,0 | +/- 2,8 | |
| 0,50 | 90,2 | +/- 2,5 | |
| Семена рапса | 0,02 | 83,0 | +/- 3,3 |
| 0,04 | 83,2 | +/- 3,2 | |
| 0,10 | 85,6 | +/- 2,7 | |
| 0,20 | 87,2 | +/- 2,3 | |
| Масло рапса | 0,05 | 85,4 | +/- 4,0 |
| 0,10 | 84,0 | +/- 3,2 | |
| 0,25 | 86,0 | +/- 3,0 | |
| 0,50 | 88,4 | +/- 2,7 |