---
title: "\"МУК 4.1.2784-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дифеноконазола в ягодах и соке винограда методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.2784-10"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2784-10"
---

## "МУК 4.1.2784-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дифеноконазола в ягодах и соке винограда методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.2784-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дифеноконазола в ягодах и соке винограда методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 24.11.2010)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 24 ноября 2010 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

<div align="center">

24 ноября 2010 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДИФЕНОКОНАЗОЛА**
**В ЯГОДАХ И СОКЕ ВИНОГРАДА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ**
**ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="center">

**МУК 4.1.2784-10**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения:

</div>

<div align="center">

с момента утверждения

</div>


1. <a id="p100006"></a>Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии.
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 14.10.2010 N 2).
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 ноября 2010 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены в действие с момента утверждения.
5. <a id="p100010"></a>Введены впервые.


### <a id="p100011"></a>Общие положения


<a id="p100012"></a>Свидетельство об аттестации методики N 0036.16.07.10 от 19.07.2010.
<a id="p100013"></a>Настоящий документ устанавливает процедуру измерений массовой доли дифеноконазола в ягодах винограда в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг, в виноградном соке в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг методом капиллярной газожидкостной хроматографии.
<a id="p100014"></a>Название вещества по ИСО: дифеноконазол.
<a id="p100015"></a>Название вещества по ИЮПАК: 4-хлорфениловый эфир cis,trans-3-хлор-4-[4-метил-2-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-1,3-диоксолан-2-ил] фенила.
<a id="p100016"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100017"></a>    C  H  Cl N O .
     19 17  2 3 3
    Мол. масса: 406,3.
<a id="p100018"></a>    Кристаллическое   вещество   от   белого   до   светло-бежевого  цвета.
                                                                    -5
Температура  плавления:  78,6 °С. Давление паров при 25 °С: 3,3 х 10   мПа.
Коэффициент  распределения  н-октанол/вода: К   log Р = 4,20. Растворимость
                                             ow
(г/куб. дм) при 25 °С: этанол - 330, ацетон - 610, толуол - 490, н-гексан -
< 3,4, н-октанол - 95, вода - 0,015.
<a id="p100019"></a>    Вещество  устойчиво  к гидролизу и фотолизу (при естественном солнечном
свете DT   = 145 дней).
        50
<a id="p100020"></a>    Дифеноконазол быстро сорбируется почвой и медленно разрушается.
<a id="p100021"></a>    Краткая гигиеническая характеристика:
<a id="p100022"></a>    Острая  пероральная  токсичность  (LD  ) для крыс - 1453, для мышей - >
                                         50
2000  мг/кг;  острая  дермальная  токсичность  (LD  ) для кроликов - > 2010
                                                  50
мг/кг; острая  ингаляционная токсичность (LC  ) для крыс - > 3300 мг/куб. м
                                            50
воздуха.  LC   для рыб 0,8 - 1,2 мг/куб. дм (96 ч). Фунгицид нетоксичен для
            50
птиц, пчел и дождевых червей.
<a id="p100023"></a>В России установлены следующие гигиенические нормативы:
<a id="p100024"></a>ДСД - 0,01 мг/кг массы тела человека; МДУ в яблоках, грушах, сахарной свекле - 0,1 мг/кг, в зерне хлебных злаков - не допускается в пределах чувствительности метода контроля.
<a id="p100025"></a>Область применения препарата:
<a id="p100026"></a>Дифеноконазол - системный фунгицид и протравитель семян. Обладает длительным защитным и лечебным действием против широкого круга растительных патогенов из классов аскомицетов, базидиомицетов, дейтеромицетов, включая возбудителей альтернариоза, септориоза, церкоспороза, парши, антракноза, ржавчины, мучнистой росы, а также некоторых патогенов, обитающих на семенах пшеницы, сахарной свеклы, картофеля, семечковых плодовых и овощных культур.
<a id="p100027"></a>Применяется в России в качестве составного компонента комбинированных протравителей для предпосевной обработки семян сахарной свеклы, зерновых колосовых культур и рапса при норме расхода 45 - 60 г д.в./т семян, а также используется для обработки вегетирующих растений сахарной и столовой свеклы, картофеля, моркови и рапса, яблоневых и грушевых садов с нормой расхода до 100 г д.в./га.


### 1. <a id="p100028"></a>Метрологические характеристики


<a id="p100029"></a>При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.

<a id="p100030"></a>Таблица 1


<table>
<colgroup><col width="14%"><col width="18%"><col width="23%"><col width="20%"><col width="15%"><col width="11%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый объект</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, Р = 0,95</td><td>Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r</td><td>Предел повторяемости, r, %</td><td>Предел воспроизводимости, R, %</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Ягоды винограда</td><td>от 0,02 до 0,10 вкл.</td><td>50</td><td>2,4</td><td>7</td><td>8</td></tr>
<tr><td>св. 0,10 до 0,20</td><td>25</td><td>1,9</td><td>5</td><td>6</td></tr>
<tr><td>Сок винограда</td><td>от 0,01 до 0,1 вкл.</td><td>50</td><td>3,5</td><td>10</td><td>12</td></tr>
</table>


<a id="p100035"></a>Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

<a id="p100036"></a>Таблица 2


<table>
<colgroup><col width="9%"><col width="18%"><col width="20%"><col width="16%"><col width="18%"><col width="19%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">Анализируемый объект</td><td colspan="5">Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>предел обнаружения, мг/кг</td><td>диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>полнота извлечения вещества, %</td><td>стандартное отклонение, S, %</td><td>доверительный интервал среднего результата, +/- %</td></tr>
<tr><td>Ягоды</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>88,6</td><td>3,7</td><td>+/- 3,4</td></tr>
<tr><td>Сок</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>90,4</td><td>2,7</td><td>+/- 2,6</td></tr>
</table>



### 2. <a id="p100040"></a>Метод измерений


<a id="p100041"></a>Метод основан на экстракции дифеноконазола из ягод ацетоном, из сока смесью гексан - диэтиловый эфир (4:1, по объему), очистке экстрактов, содержащих дифеноконазол, от коэкстрактивных компонентов перераспределением их в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне Диапак-диол, с последующим измерением содержания дифеноконазола в очищенных экстрактах методом капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) при программировании температуры с электронозахватным детектором (ЭЗД) и обработкой хроматограмм методом абсолютной калибровки.
<a id="p100042"></a>В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.


### 3. <a id="p100043"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы



#### <a id="p100044"></a>3.1. Средства измерений


<a id="p100045"></a>Газовый хроматограф "Кристалл 2000М"
с ЭЗД (СКБ "Хроматэк", Россия)                    номер Госреестра
                                                  N 14516-95
<a id="p100046"></a>Весы аналитические Sartorius 6110 с наибольшим
пределом взвешивания до 110 г и погрешностью
0,0001 г ГОСТ 24104-2001
<a id="p100047"></a>Весы лабораторные Metler Р-160 с наибольшим
пределом взвешивания до 160 г и пределом
допустимой погрешности 0,005 г ГОСТ 24104-2001
<a id="p100048"></a>Набор гирь ГОСТ 7328-2001
<a id="p100049"></a>Колбы мерные вместимостью 2-100-2; 2-1000-2 [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100050"></a>Пипетки градуированные 1-1-2-1; 1-1-2-2;
1-2-2-5; 1-2-2-10 [ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91)
<a id="p100051"></a>Пробирки градуированные с пришлифованной
пробкой П-2-5-0,1; П-2-10-0,2 [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100052"></a>Цилиндры мерные 1-25; 1-50; 1-100; 1-500;
1-1000 [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100053"></a>Микрошприц МШ-1А                                  ТУ 64-1-2850


#### <a id="p100054"></a>3.2. Реактивы


<a id="p100055"></a>Аналитический стандарт дифеноконазола
(CAS 119446-68-3) с содержанием основного
вещества 99,1% (Сингента, Швейцария)
<a id="p100056"></a>Ацетон квалификации ч д а. ГОСТ 2603-79
<a id="p100057"></a>Вода дистиллированная или деионизированная ГОСТ 6709-72
<a id="p100058"></a>н-Гексан квалификации хч                          ТУ 6-09-3375-78
<a id="p100059"></a>Калий углекислый квалификации хч [ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76)
<a id="p100060"></a>Калия перманганат квалификации хч ГОСТ 20490-75
<a id="p100061"></a>Кислота серная квалификации хч ГОСТ 4204-77
<a id="p100062"></a>Натрия сульфат безводный квалификации хч [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
<a id="p100063"></a>Эфир диэтиловый квалификации хч                   ТУ 2600-001-45682126-06


#### <a id="p100064"></a>3.3. Вспомогательные устройства, материалы


<a id="p100065"></a>Азот газообразный (баллон) квалификации осч ГОСТ 9293-74
<a id="p100066"></a>Ванна ультразвуковая, модель D-50,
фирма Branson Instr. Co. (США)
<a id="p100067"></a>Гомогенизатор "Omni-mixer" (Sorvall, США)
или гомогенизатор                                 МРТУ 42-1505
<a id="p100068"></a>Дистиллятор Cyclon III, мод. 4 BD
(Fistreem, Великобритания)
<a id="p100069"></a>Установка Elgastat В 114 с патроном Elgacan
<a id="p100070"></a>В 114 для получения деионизированной воды
(Elga, Великобритания)
<a id="p100071"></a>Воронки делительные вместимостью 100 куб. см ГОСТ 25336-82
<a id="p100072"></a>Воронки лабораторные стеклянные ГОСТ 25336-82
<a id="p100073"></a>Воронка Бюхнера ГОСТ 9147-80
<a id="p100074"></a>Колба Бунзена ГОСТ 25336-82
<a id="p100075"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10,
25 и 100 куб. см [ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
<a id="p100076"></a>Колонка хроматографическая капиллярная
кварцевая ZB-1 (типа SE-30), длина 25 м,
внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки
0,5 мкм, фирма "Phenomenex" (США),
или аналогичная
<a id="p100077"></a>Колонка хроматографическая стеклянная
длиной 25 см, внутренним диаметром 8 - 10 мм
<a id="p100078"></a>Патроны концентрирующие Диапак-диол
(0,6 г) /ЗАО "БиоХимМак СТ", Москва/              ТУ 4215-001-05451931-94
<a id="p100079"></a>Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М
или ротационный вакуумный испаритель
В-169 фирмы Buchi (Швейцария)                     ТУ 25-11-917-76
<a id="p100080"></a>Силикагель 60 (0,063 - 0,20 мм) для колоночной
хроматографии (Мерк, Германия)
<a id="p100081"></a>Стаканы химические вместимостью ГОСТ 25336-82
100 и 500 куб. см
<a id="p100082"></a>Стекловата
<a id="p100083"></a>Установка для перегонки растворителей с [ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
дефлегматором                                     (ИСО 641-75)
<a id="p100084"></a>Фильтры бумажные "красная лента" обеззоленные     ТУ 6-09-2678-77
Центрифуга J2-21 (Beckman, США) или
аналогичная
<a id="p100085"></a>Шприц медицинский с разъемом Льюера
вместимостью 20 куб. см ГОСТ 22090.
<a id="p100086"></a>Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в разделе 3.


### 4. <a id="p100087"></a>Требования безопасности


<a id="p100088"></a>4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88.
<a id="p100089"></a>4.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83.
<a id="p100090"></a>4.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
<a id="p100091"></a>4.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.


### 5. <a id="p100092"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100093"></a>К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.


### 6. <a id="p100094"></a>Условия выполнения измерений



#### <a id="p100095"></a>6.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

<a id="p100096"></a>Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:
- <a id="p100097"></a>температура воздуха (20 +/- 5) °С;
- <a id="p100098"></a>атмосферное давление (84 - 106) кПа;
- <a id="p100099"></a>относительная влажность воздуха не более 80%.

#### <a id="p100100"></a>6.2 Условия хроматографического анализа:

<a id="p100101"></a>    Температура термостата испарителя    265 °С;
<a id="p100102"></a>    Температура детектора                300 °С.
<a id="p100103"></a>Режим программирования температуры колонки:
<a id="p100104"></a>начальная температура 200 °С (2 мин.), скорость подъема температуры до 275 °С (7 мин.) 20 °С/мин.;
<a id="p100105"></a>от 275 °С до 290 °С (5 мин.), скорость подъема температуры 10 °С/мин.
<a id="p100106"></a>Расход газов:
<a id="p100107"></a>газа-носителя (азот) 2,5 куб. см/мин.;
<a id="p100108"></a>поддувочного газа через детектор 25 куб. см/мин.
<a id="p100109"></a>Деление потока: 1:1.
<a id="p100110"></a>Время удерживания дифеноконазола: (8,5 +/- 0,2) мин.
<a id="p100111"></a>Линейный диапазон детектирования: (0,02 - 0,25) нг.


### 7. <a id="p100112"></a>Подготовка к выполнению измерений


<a id="p100113"></a>Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем и концентрирующих патронов Диапак-диол.


#### <a id="p100114"></a>7.1. Очистка органических растворителей



##### <a id="p100115"></a>7.1.1 Очистка н-гексана

<a id="p100116"></a>Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

##### <a id="p100117"></a>7.1.2 Очистка ацетона

<a id="p100118"></a>    Ацетон  перегоняют над  перманганатом  калия и  поташом (на 1 л ацетона
10 г KMnO  и 2 г K CO ).
         4        2  3

##### <a id="p100119"></a>7.1.3 Очистка силикагеля

<a id="p100120"></a>Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона, высушивают в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 5 - 6 ч и затем активируют при температуре 130 °С в течение 5 ч.


#### <a id="p100121"></a>7.2. Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки


<a id="p100122"></a>Капиллярную кварцевую колонку ZB-1 (типа SE-30) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 290 °С и скорости газа-носителя 2 куб. см/мин. в течение 8 - 10 часов.


#### <a id="p100123"></a>7.3. Подготовка колонки с силикагелем и концентрирующего патрона Диапак-диол для очистки экстракта


<a id="p100124"></a>Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 3 г силикагеля I степени активности в 15 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 15 куб. см смеси гексан - ацетон (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
<a id="p100125"></a>Концентрирующий патрон Диапак-диол промывают последовательно с помощью медицинского шприца 10 куб. см смеси гексан - ацетон (1:1, по объему) и 6 куб. см смеси гексан - ацетон (9:1, по объему) со скоростью 5 куб. см/мин. Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.


#### <a id="p100126"></a>7.4. Определение объема элюента, необходимого для полного вымывания дифеноконазола из колонки с силикагелем


<a id="p100127"></a>При отработке методики или поступлении новой партии силикагеля проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания дифеноконазола из колонки с силикагелем.
<a id="p100128"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,2 куб. см градуировочного раствора дифеноконазола с массовой концентрацией 2 мкг/куб. см в смеси гексан - ацетон (8:2, по объему) [(п. 7.6.2)](#p100137). Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 куб. см смеси гексан - ацетон (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по [п. 7.3](#p100123). Промывают колонку 30 куб. см смеси гексан - ацетон (7:3, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через колонку пропускают 40 куб. см смеси гексан - ацетон (1:1, по объему), отбирая последовательно по 5 куб. см элюата. Каждую фракцию упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 40 °С, сухие остатки растворяют в 1 куб. см смеси гексан - ацетон (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и затем хроматографируют в соответствии с [п. 6.2](#p100100).
<a id="p100129"></a>По результатам обнаружения дифеноконазола в каждой из фракций определяют объем смеси гексан - ацетон (1:1, по объему), необходимый для полного вымывания фунгицида с колонки.


#### <a id="p100130"></a>7.5. Определение объема элюента, необходимого для полного вымывания дифеноконазола из патрона Диапак-диол


<a id="p100131"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,2 куб. см градуировочного раствора дифеноконазола с массовой концентрацией 2 мкг/куб. см в смеси гексан - ацетон (8:2, по объему) [(п. 7.6.2)](#p100137). Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 1 куб. см смеси гексан - ацетон (9:1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на патрон Диапак-диол, подготовленный по [п. 8.3](#p100123). Промывают патрон 2 куб. см смеси гексан - ацетон (9:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через патрон пропускают 20 куб. см смеси гексан - ацетон (8:2, по объему), отбирая последовательно по 3 куб. см элюата. Каждую фракцию упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С, сухие остатки растворяют в 1 куб. см смеси гексан - ацетон (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и затем хроматографируют в соответствии с [п. 6.2](#p100100).
<a id="p100132"></a>По результатам обнаружения дифеноконазола в каждой из фракций определяют объем смеси гексан - ацетон (8:2, по объему), необходимый для полного вымывания фунгицида из патрона.


#### <a id="p100133"></a>7.6. Приготовление градуировочных растворов



##### <a id="p100134"></a>7.6.1 Исходный раствор дифеноконазола для градуировки с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см

<a id="p100135"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают (0,010 +/- 0,0001) г дифеноконазола, растворяют в 40 - 50 куб. см смеси гексан - ацетон (8:2, по объему), доводят объем раствора этой же смесью до метки, тщательно перемешивают.
<a id="p100136"></a>Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше (-18) °С в течение 3-х месяцев.

##### <a id="p100137"></a>7.6.2 Градуировочный раствор дифеноконазола с массовой концентрацией 2 мкг/куб. см (раствор N 1)

<a id="p100138"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 2 куб. см исходного раствора дифеноконазола с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см [(п. 7.6.1)](#p100134), разбавляют смесью гексан - ацетон (8:2, по объему) до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов N 2 - 5.
<a id="p100139"></a>Градуировочный раствор N 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше (-18) °С в течение месяца.
<a id="p100140"></a>7.6.3. Градуировочные растворы дифеноконазола с массовой концентрацией (0,02 - 0,2) мкг/куб. см (растворы N 2 - 5)
<a id="p100141"></a>В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора дифеноконазола с массовой концентрацией 2 мкг/куб. см [(п. 8.6.2)](#p100137), доводят до метки смесью гексан - ацетон (8:2, по объему), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией дифеноконазола 0,02; 0,04; 0,1 и 0,2 мкг/куб. см соответственно.
<a id="p100142"></a>Растворы готовят непосредственно перед использованием.


#### <a id="p100143"></a>7.7. Градуировка хроматографа


<a id="p100144"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ х с) от массовой концентрации дифеноконазола в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м градуировочным растворам [(п. 7.6.3)](#p100140).
<a id="p100145"></a>В испаритель (инжектор) хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора [(п. 7.6.3)](#p100140) и анализируют при условиях [п. 6.2](#p100100). Осуществляют не менее 3-х параллельных определений. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предела повторяемости r.
<a id="p100146"></a>По полученным данным строят градуировочную характеристику.


#### <a id="p100147"></a>7.8. Контроль стабильности градуировочной характеристики


<a id="p100148"></a>Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.
<a id="p100149"></a>Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.
<a id="p100150"></a>Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

                               |S    - S  |
                                 изм    гр
<a id="p100151"></a>                               ------------ х 100 <= К  ,
                                    S                 гр
                                     гр

    где:
    S   ,  S    -  значение  площади  пика  дифеноконазола  в  образце  для
     изм    гр
контроля,   измеренное   и   найденное   по  градуировочной  характеристике
соответственно, усл. ед.;
    К   - норматив контроля;
     гр

<div align="center">

<a id="p100152"></a>К = 0,5 х дельта,

</div>


<a id="p100153"></a>где +/- дельта - граница относительной погрешности, % [(табл. 1)](#p100030).
<a id="p100154"></a>Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.
<a id="p100155"></a>Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.


### 8. <a id="p100156"></a>Отбор, подготовка и хранение проб


<a id="p100157"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.1979) и правилами, определенными [ГОСТ 25896-83](https://bukva.ai/docs/gost-25896-83) "Виноград свежий столовый. ТУ" и ГОСТ 25892-83 "Сок виноградный. ТУ".
<a id="p100158"></a>Пробы ягод хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более одного дня; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре (-18) °С до анализа. Сок получают из ягод непосредственно перед проведением анализа. Перед анализом ягоды измельчают.


### 9. <a id="p100159"></a>Проведение определения



#### <a id="p100160"></a>9.1. Экстракция дифеноконазола


<a id="p100161"></a>9.1.1. Ягоды. Образец измельченного растительного материала массой 25 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 куб. см, добавляют 100 куб. см ацетона и гомогенизируют 3 мин. при 10000 об./мин. Гомогенат переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют 5 мин. при 5000 об./мин. Надосадочную жидкость переносят в химический стакан, а осадок в центрифужной пробирке промывают 50 куб. см ацетона и суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу. Экстракт и промывную жидкость объединяют, перемешивают, измеряют объем раствора. Отбирают 1/5 объема экстракта (эквивалентную 5 г образца), переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см и добавляют 30 куб. см дистиллированной воды. Раствор упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С до водной фазы, которую переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. Далее проводят очистку экстракта по [п. 9.2](#p100163).
<a id="p100162"></a>9.1.2. Сок. Навеску (10 г) свежевыжатого виноградного сока помещают в химический стакан вместимостью 100 куб. см, приливают 60 кв. см дистиллированной воды, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/2 его часть (эквивалентную 5 г образца) переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.


#### <a id="p100163"></a>9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей


<a id="p100164"></a>К экстрактам, полученным по [п. п. 9.1.1](#p100161) и [9.1.2](#p100162) и помещенным в делительные воронки, приливают по 30 куб. см смеси гексан - диэтиловый эфир (4:1, по объему) и содержимое интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После разделения фаз верхний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 30 и 20 куб. см смеси гексан - диэтиловый эфир (4:1, по объему). Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Далее проводят очистку по п. 9.3.


#### <a id="p100165"></a>9.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем


<a id="p100166"></a>Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по [п. 9.2](#p100163), растворяют в 0,4 куб. см ацетона, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., добавляют 1,6 куб. см гексана, перемешивают, вновь помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.3](#p100123). Колбу обмывают 1 куб. см смеси гексан - ацетон (8:2, по объему), которые также наносят на колонку. Промывают колонку 20 куб. см смеси гексан - ацетон (7:3, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Дифеноконазол элюируют с колонки 30 куб. см смеси гексан - ацетон (1:1, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С и окончательную очистку экстрактов проводят по п. 9.4.


#### <a id="p100167"></a>9.4. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак-диол


<a id="p100168"></a>Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по [п. 9.3](#p100165), растворяют с помощью ультразвуковой ванны в 2 куб. см смеси гексан - ацетон (9:1, по объему) и переносят в подготовленный концентрирующий патрон Диапак-диол [(п. 7.3)](#p100123). Патрон промывают 2 куб. см смеси гексан - ацетон (9:1, по объему), элюат отбрасывают. Дифеноконазол элюируют 8 куб. см смеси гексан - ацетон (8:2, по объему) в круглодонную колбу вместимостью 25 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток экстрактов сока и ягод растворяют соответственно в 2,5 и 5 куб. см смеси гексан - ацетон (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание дифеноконазола по п. 10.


### 10. <a id="p100169"></a>Выполнение измерений


<a id="p100170"></a>10.1. В инжектор хроматографа вводят 1 куб. мм очищенного экстракта анализируемой пробы ([п. п. 9.1](#p100160) - 9.4), анализируют при условиях [(п. 6.2)](#p100100) и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.
<a id="p100171"></a>10.2. Для каждого образца ягод и сока повторяют операции по [п. п. 9.1](#p100160) - 9.4, [10.1](#p100170).


### 11. <a id="p100172"></a>Обработка результатов измерений


<a id="p100173"></a>Для обработки результатов хроматографического анализа используется программа сбора и обработки хроматографической информации "Хроматэк Аналитик", версия 1.20.
<a id="p100174"></a>Альтернативная обработка результатов.
<a id="p100175"></a>Массовую долю дифеноконазола X (мг/кг) в образцах ягод и сока рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                                 S  х А х V
                                  1
<a id="p100176"></a>                            X = ------------ х Р,
                                100 х S  х m
                                       0

    где:
    S  - площадь пика дифеноконазола в образце, мВ х с;
     1
    S  - площадь пика дифеноконазола в градуировочном растворе, мВ х с;
     0
    А  -  массовая  концентрация  градуировочного  раствора дифеноконазола,
мкг/куб. см;
    V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
    m  - масса анализируемой части образца, соответствующая доле экстракта,
использованной   для   очистки   на  колонке  с  силикагелем  и  патроне  и
последующего хроматографического определения, г;
    Р - содержание дифеноконазола в аналитическом стандарте, %.


### 12. <a id="p100177"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100178"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

                            2 х |X  - X | х 100
                                  1    2
<a id="p100179"></a>                            ------------------ <= r,                    (1)
                                 (X  + X )
                                   1    2

    где:
    X , X  - результаты параллельных определений, мг/кг;
     1   2
 r - значение предела повторяемости [(табл. 1)](#p100030), при этом r = 2,8 сигма .
                                                                         r
<a id="p100180"></a>При невыполнении [условия (1)](#p100179) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


### 13. <a id="p100181"></a>Оформление результатов


<a id="p100182"></a>Результат анализа представляют в виде:

          _
<a id="p100183"></a>         (X +/- ДЕЛЬТА), мг/кг (куб. дм), при вероятности Р = 0,95,

    где:
    _
    X   -   среднее   арифметическое  результатов  определений,  признанных
приемлемыми, мг/кг (куб. дм);
    ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг (куб. дм);

<div align="center">

<a id="p100184"></a>ДЕЛЬТА = дельта х X / 100,

</div>


<a id="p100185"></a>дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100030)), %.
<a id="p100186"></a>В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100187"></a>"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения"
<a id="p100188"></a>менее 0,02 мг/кг для ягод винограда <*>.
<a id="p100189"></a>менее 0,01 мг/кг для виноградного сока <**>.

<a id="p100190"></a>

---

<a id="p100191"></a><*> 0,02 мг/кг - предел обнаружения для ягод.
<a id="p100192"></a><**> 0,01 мг/кг - предел обнаружения для сока.

<a id="p100193"></a>Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал дифеноконазола, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 0,2 мкг/куб. см, разбавляют, но не более чем в 10 раз, и анализируют в соответствии с данной методикой. При расчете содержания дифеноконазола учитывают разбавление.


### 14. <a id="p100194"></a>Контроль качества результатов измерений


<a id="p100195"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100196"></a>14.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100197"></a>14.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
<a id="p100198"></a>    Величина добавки С  должна удовлетворять условию:
                      д

<a id="p100199"></a>                       С  = ДЕЛЬТА    + ДЕЛЬТА    ,
                        д           _           _
                                  л,X         л,X'

    где +/- ДЕЛЬТА    (+/- ДЕЛЬТА    )   -    характеристика    погрешности
                    _              _
                  л,X            л,X'
(абсолютная погрешность)  результатов  анализа,  соответствующая содержанию
компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания  компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг (куб. дм), при этом:

<a id="p100200"></a>                        ДЕЛЬТА  = +/- 0,84 ДЕЛЬТА,
                              л

<a id="p100201"></a>где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг (куб. дм);

<div align="center">

<a id="p100202"></a>ДЕЛЬТА = дельта х X / 100,

</div>


<a id="p100203"></a>дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100030)), %.
<a id="p100204"></a>    Результат контроля процедуры К  рассчитывают по формуле:
                                  к

                                  _    _
<a id="p100205"></a>                             К  = X' - X - С  ,
                              к             д

        _   _
    где X', X, С  - среднее    арифметическое   результатов    параллельных
                д
определений (признанных приемлемыми по [п. 12](#p100177)) содержания компонента
в  образце   с   добавкой,   испытуемом   образце,   концентрация   добавки
соответственно, мг/кг (куб. дм).
<a id="p100206"></a>    Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

                              _____________________
                             /     2            2
<a id="p100207"></a>                       К = \/ДЕЛЬТА     + ДЕЛЬТА   .
                                     _            _
                                   л,X'         л,X

<a id="p100208"></a>    Проводят  сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
                                                            к
контроля (К).
<a id="p100209"></a>    Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

<a id="p100210"></a>                              |К | <= К,                                (2)
                                к

процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100211"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100210) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

#### <a id="p100212"></a>14.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

<a id="p100213"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

                           2 х |X  - X | х 100
                                  1    2
<a id="p100214"></a>                           ------------------- <= R,                    (3)
                                (X  + X )
                                  1    2

    где:
    X ,  X   - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг (куб.
     1    2
дм);
    R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
[табл. 1](#p100030)), %.





<div align="right">

<a id="p100215"></a>Приложение

<a id="p100216"></a>Таблица

</div>


<div align="center">

<a id="p100217"></a>**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИФЕНОКОНАЗОЛА**<br>
В МОДЕЛЬНЫХ МАТРИЦАХ (n = 5)

</div>



<table>
<colgroup><col width="18%"><col width="26%"><col width="28%"><col width="28%"></colgroup>
<tr><td>Матрица</td><td>Внесено дифеноконазола, мг/кг</td><td>Открыто дифеноконазола, %</td><td>Доверительный интервал среднего результата, %</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Ягоды винограда</td><td>0,02</td><td>84,6</td><td>+/- 2,7</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>88,6</td><td>+/- 2,3</td></tr>
<tr><td>0,10</td><td>89,2</td><td>+/- 2,2</td></tr>
<tr><td>0,20</td><td>92,0</td><td>+/- 2,0</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Виноградный сок</td><td>0,01</td><td>89,0</td><td>+/- 4,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>90,2</td><td>+/- 3,2</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>90,8</td><td>+/- 2,6</td></tr>
<tr><td>0,10</td><td>91,6</td><td>+/- 2,0</td></tr>
</table>




<a id="p100227"></a>

---