МУК 4.1.2778-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Цимоксанила в луке-перо и луке-репке методом газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 24.11.2010)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 24 ноября 2010 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
24 ноября 2010 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЦИМОКСАНИЛА В ЛУКЕ-ПЕРО И ЛУКЕ-РЕПКЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2778-10
с момента утверждения
1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 14.10.2010 № 2).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 ноября 2010 г.
4. Введены в действие с момента утверждения.
Общие положения
Свидетельство об аттестации методики № 0029.28.05.10 от 31.05.2010.
Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Цимоксанила в луке-перо и луке-репке в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг.
Название по ИЮПАК: 1-(2-циано-2-метоксииминоацетил)-3-этил-мочевина.
O O
|| ||
C C NOCH
/ \ / \ // 3
CH CH NH N C
3 2 H |
CN
Эмпирическая формула: C H № O . 7 10 4 3
Агрегатное состояние: кристаллическое вещество.
Цвет, запах: бесцветное вещество без запаха.
Температура плавления: 160 — 161 °С.
Давление паров: 0,15 мПа (при 20 °С).
Растворимость в воде, мг/куб. дм (при 20 °С и pH 5): 890.
Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, 20 °С): в гексане — 0,037; в толуоле — 5,29; в ацетонитриле — 57; в этилацетате — 28; в н-октаноле — 1,43; в метаноле — 22,9; в ацетоне — 62,4; в хлороформе — 103; в дихлорметане — 133,0.
Коэффициент распределения октанол — вода при 25 °С: K log P = 0,59 ow (pH 5) и 0,67 (pH 7).
Цимоксанил стабилен к гидролизу в интервале pH от 2 до 5; в щелочной среде быстро гидролизуется (ДТ - 148 дней при pH 5, 34 часа при pH 7 и 31
50
минута при pH 9). В воде водоемов период полураспада составляет 1,8 дня.
В почве Цимоксанил быстро разрушается под действием микроорганизмов. В тепличных условиях период полураспада составляет около трех дней, в полевых условиях от 7 до 14 дней. Миграция по почвенному профилю слабая.
В растениях соединение быстро разрушается до нетоксичных метаболитов. Остатки Цимоксанила в клубнях картофеля не обнаруживаются. В ягодах винограда, по данным фирмы Дюпон, остатки составляли ниже 0,2 мг/кг при обработке за несколько дней до уборки.
Краткая токсикологическая характеристика: Цимоксанил относится к веществам умеренно опасным по острой оральной (ЛД для крыс - 960 мг/кг),
50
малоопасным по дермальной токсичности (ЛД для крыс более 2000 мг/кг) и 50 умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК (4 часа) для 50 крыс 5060 мг/куб. м воздуха). Не вызывает раздражения глаз и слабо раздражает кожу.
Область применения: Цимоксанил — контактный фунгицид с местным системным эффектом, обладающий защитным и лечащим действием. Высокоактивен против грибов, вызывающих фитофтороз и пероноспороз, не действует на возбудителей настоящей мучнистой росы. Длительность защитного действия составляет 4 — 6 дней, поэтому рекомендуется его использование в смеси с другими фунгицидами системного и защитного контактного действия.
Применяется в России в качестве фунгицида в составе смесевых препаратов на картофеле, томатах, виноградниках и подсолнечнике с нормой расхода 0,15 кг д.в./га, трехкратная обработка за сезон.
В России установлены следующие гигиенические нормативы:
ДСД — 0,02 мг/кг массы человека;
МДУ в продукции: картофель — 0,05 мг/кг, томаты и виноград — 0,1 мг/кг, подсолнечник (семена и масло) — 0,2 мг/кг, лук-репка — 0,5 мг/кг.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Лук-репка | 0,10 — 0,50 вкл. | 25 | 2,8 | 8 | 10 |
| 0,05 — 0,10 вкл. | 50 | 4,1 | 12 | 14 | |
| Лук-перо | 0,10 — 0,50 вкл. | 25 | 2,6 | 7 | 8 |
| 0,05 — 0,10 вкл. | 50 | 2,9 | 8 | 10 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ ЦИМОКСАНИЛА
| Анализируемый | Метрологические параметры, P = 0,95; n = 20 | ||||
| объект | предел обнаружения, мг/кг | диапазон определяемых концентраций, мг/кг | полнота извлечения вещества, % | стандартное отклонение, S, % | доверительный интервал среднего результата, +/-, % |
| Лук-репка | 0,05 | 0,05 — 0,50 | 86,0 | 0,75 | 1,35 |
| Лук-перо | 0,05 | 0,05 — 0,50 | 87,0 | 0,62 | 1,12 |
2. Метод измерений
Метод основан на определении Цимоксанила с помощью газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с использованием капиллярной колонки и термоионного детектора после его экстракции из образцов подкисленным ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами на концентрирующих патронах Диапак С и Диапак С16.
Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен и может применяться для определения остатков Цимоксанила в присутствии Фамоксадона. Избирательность метода достигается за счет подбора колонки и условий программирования.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», ЕР 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-1 — специальный (I)
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г «ACCULAB» V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-1 — средний (III)
Колбы мерные на 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Микрошприц «Hamilton» многократного применения, объем 10 куб. мм
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см ГОСТ 29227-91
Хроматограф газовый «Кристалл 5000.1» с термоионным детектором (ТИД) с пределом детектирования по фосфору в Паратион-метиле -14
3 х 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки N в государственном реестре
средств измерений
14516-95
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см ГОСТ 1770-74.
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Цимоксанил, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,7%, чист. ГСО 7734
Ацетон, осч ТУ 6-09-3513-86 Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм ТУ 6-09-2167-84
Вода бидистиллированная (бидистиллят), деионизированная или перегнанная над KMnO ГОСТ 6709-72 4
Гелий очищенный марки "А" ТУ 51-940-80 n-Гексан, хч ТУ 6-09-3818-89
Калий марганцовокислый, хч ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, ч ТУ 6-09-4711-81
Кислота соляная, хч ГОСТ 857-95
Концентрирующие патроны Диапак С и
Диапак С16 (0,6 г), фирма "БиоХимМак СТ" ТУ 4215-002-05451931-94 Метилен хлористый, хч ТУ 6-09-2662-77
Натрий сернокислый безводный, хч ГОСТ 4166-76
Натрий углекислый, кислый, хч ГОСТ 4201-79
Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233-77
Этилацетат, чда ГОСТ 22300-76.
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1» Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. № 3120-0250, фирма «NALGENE»
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная ГОСТ 5556-81
Воронки делительные на 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные стеклянные ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма «Buchi»
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 куб. см и 4000 куб. см ТС ТУ 92-891.029-91
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5, длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирма «J&W Scientific»
Насос диафрагменный FT.19, фирма «KNF Neu Laboport»
Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100 — 2000 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической колбой объемом 1000 куб. см
Фильтры бумажные «красная лента» ТУ 6-09-1678-86
Шприц инъекционный однократного применения объемом 10 куб. см ГОСТ 24861-91 (ИСО 7886-84).
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.
К подготовке проб допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80 %;
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак С и Диапак С16 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах Диапак С и Диапак С16, построение калибровочной кривой.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.
7.1.2 Очистка ацетона
Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм.
Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С, отбрасывают.
7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды
Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 часов. Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.
7.2. Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1 Приготовление рабочих растворов
7.2.1.1 Приготовление подкисленного ацетонитрила.
К ацетонитрилу пипеткой добавляют концентрированную соляную кислоту до pH ~= 1. При приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой.
7.2.1.2 Приготовление 2%-ного раствора сульфата натрия.
20 г гидрокарбоната натрия переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, добавляют 200 — 300 куб. см дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.
7.2.2 Приготовление градуировочных растворов
7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией Цимоксанила 1,0 мг/куб. см.
Взвешивают 50 мг Цимоксанила в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и построения калибровочной кривой. Раствор хранится в холодильнике около 120 суток.
7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией Цимоксанила 10,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Раствор может храниться в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией Цимоксанила 5,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Раствор может храниться в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией Цимоксанила 2,5 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используется для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Раствор может храниться в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией Цимоксанила 1,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 5 используется для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Раствор может храниться в холодильнике не более 30 суток.
7.3. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Цимоксанила в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 10,0; 5,0; 2,5 и 1,0 мкг/куб. см.
В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Осуществляют не менее 5-ти параллельных измерений.
По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади хроматографического пика (мВ) от концентрации Цимоксанила в растворе (мкг/куб. см).
7.4. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Цимоксанила на них
7.4.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак С для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин.
Патрон Диапак С устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Льюер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см ацетона, затем 10 куб. см гексана. Элюаты отбрасывают.
7.4.2 Проверка хроматографического поведения Цимоксанила на концентрирующих патронах Диапак С
Из стандартного раствора Цимоксанила в ацетоне, содержащего 10,0 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Исходный концентратор обмывают последовательно 5 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:4, затем четырьмя порциями смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:1 объемом 5 куб. см каждая, полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюаты после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие Цимоксанил, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Цимоксанила на концентрирующих патронах Диапак С проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.
7.5. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16 для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Цимоксанила на них
7.5.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16 для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин.
Патрон Диапак С16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см ацетонитрила, затем 10 куб. см воды. Элюаты отбрасывают.
7.5.2 Проверка хроматографического поведения Цимоксанила на концентрирующих патронах Диапак С16
Из стандартного раствора Цимоксанила в ацетоне, содержащего 10,0 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 10 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Исходный концентратор обмывают последовательно четырьмя порциями смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4 объемом 5 куб. см каждая, полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюаты после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие Цимоксанил, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Цимоксанила на концентрирующих патронах Диапак С16 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.
8. Отбор и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» № 2051-79 от 21.08.1979, а также в соответствии с ГОСТ Р 51783-2001 «Лук репчатый свежий, реализуемый в розничной торговой сети. ТУ».
Пробы целого растения лука и репки лука хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 — 4 °С не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °С до 2-х лет.
9. Выполнение определения
9.1. Лук-перо и лук-репка
9.1.1 Экстракция
Образец измельченного зеленого лука (или лука-репки) массой 20 г помещают в банку для экстракции объемом 250 куб. см, прибавляют туда 50 куб. см подкисленного ацетонитрила и помещают на механический встряхиватель на 30 минут. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 40 куб. см подкисленного ацетонитрила и помещая на 15 минут на механический встряхиватель. Экстракты фильтруют и объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см. Объединенный экстракт выпаривают до водного остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
9.1.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
К водному остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, прибавляют 50 куб. см 2%-ного раствора сульфата натрия, тщательно обмывая стенки концентратора, и переносят смыв в делительную воронку объемом 250 куб. см. Затем концентратор обмывают еще 50 куб. см 2%-ного раствора сульфата натрия и все смывы объединяют в делительной воронке.
Цимоксанил экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 40, 30 и 30 куб. см, каждый раз встряхивая делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 куб. см хлористого метилена, объединяют смыв с основным экстрактом и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Далее проводят очистку пробы на концентрирующих патронах Диапак С и Диапак С16.
9.1.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С
Сухой остаток, полученный в п. 9.1.2, растворяют в 1 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см гексана, перемешивают и вносят на заранее подготовленный концентрирующий патрон Диапак С, элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 5 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:4, элюат отбрасывают. Цимоксанил элюируют 15 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:1, элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
9.1.4 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С16
Сухой остаток, полученный в п. 9.1.3, растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 10 куб. см воды, перемешивают и вносят на заранее подготовленный концентрирующий патрон Диапак С16, элюат отбрасывают. Исходную колбу обмывают 15 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4 и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.2. Условия хроматографирования
Хроматограф «Кристалл 5000.1» с термоионным детектором (ТИД) с пределом -14
детектирования по фосфору в Паратион-метиле 3 х 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки. Номер в государственном реестре
средств измерений 14516-95.
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5 (5% дифенил и 95% диметилполисилоксан), длина 10 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,7 мкм, фирма «НР».
Температура термостата колонки программированная. Начальная температура — 100 °С, выдержка 1 минута, нагрев колонки по 20 градусов в минуту до температуры 170 °С, а затем по 25 градусов в минуту до 200 °С.
Температура испарителя — 200 °С, температура детектора — 300 °С.
Газ 1 — гелий (газ-носитель), давление на входе — 6 кПа, линейная скорость — 22,984 см/с, давление на выходе — 101,3 кПа; поток через колонку — 2,504 куб. см/мин.; мертвое время — 0,73 мин.
Газ 2 — гелий, режим — Split less, деление потока — 1:30 (сброс пробы), начало сброса — 30 секунд, длительность сброса — 2 минуты, расход во время анализа — 10 куб. см/мин.
Регулятор давления гелия — РРГ-10; регулятор расхода гелия — РРГ-11.
Газ 4 — азот (поддув в детектор), расход во время анализа — 30 куб. см/мин.
Газ 5 — водород, расход во время анализа — 12 куб. см/мин.
Газ 6 — воздух, расход — 200 куб. см/мин.
Продувка детектора и испарителя азотом после анализа — по 50 куб. см/мин. в течение 3 минут при температуре колонки 250 °С. Расход газов: Г1 — 50; Г2 — 40; Г4 — 40 куб. см/мин.
Абсолютное время удерживания Цимоксанила: 6,01 мин. +/- 2%.
Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 1,0 — 10,0 нг.
10. Обработка результатов
Содержание Цимоксанила в пробах пера и репки лука рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
S х А х V
пр
Х = ------------- х P, 100 х S х m ст
где:
Х - содержание Цимоксанила в пробе, мг/кг;
S - высота (площадь) пика стандарта, мВ;
ст
S - высота (площадь) пика образца, мВ;
пр
А - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m - масса анализируемого образца, г (куб. см);
P - содержание Цимоксанила в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 |Х - Х | х 100
1 2
----------------- <= r, (1)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(Х +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности P = 0,95,
где:
_
Х - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,05 мг/кг» <*>.
<*> 0,05 мг/кг — предел обнаружения.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки С должна удовлетворять условию: д
С = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,Х л,Х' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,Х л,Х' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
_ _ К = Х' - Х - С , к д _ _ где Х', Х, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,Х' л,Х Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 |Х - Х | х 100
1 2
----------------- <= R, (3)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
табл. 1), %.
| Среда | Внесено, мг/кг | Обнаружено, мг/кг | Полнота определения, % |
| Лукрепка | 0,5 | 0,423 | 84,6 |
| 0,25 | 0,217 | 86,6 | |
| 0,125 | 0,109 | 87,5 | |
| 0,05 | 0,043 | 85,3 | |
| Лук-перо | 0,5 | 0,432 | 86,3 |
| 0,25 | 0,217 | 86,8 | |
| 0,125 | 0,110 | 88,0 | |
| 0,05 | 0,043 | 86,6 |