--- title: "\"МУК 4.1.2771-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовых концентраций формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в желчи методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\"" number: "МУК 4.1.2771-10" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2771-10" --- ## "МУК 4.1.2771-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовых концентраций формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в желчи методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания" # "МУК 4.1.2771-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовых концентраций формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в желчи методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания" (утв. Роспотребнадзором 22.11.2010) > [!IMPORTANT] > Документ [введен](#p100002) в действие с 22 ноября 2010 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
22 ноября 2010 года #### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ФОРМАЛЬДЕГИДА,** **АЦЕТАЛЬДЕГИДА, ПРОПИОНОВОГО АЛЬДЕГИДА, МАСЛЯНОГО АЛЬДЕГИДА** **И АЦЕТОНА В ЖЕЛЧИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ** **ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **МУК 4.1.2771-10**
Дата введения:
с момента утверждения 1. Разработаны Федеральным государственным учреждением науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Роспотребнадзора. 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 14.10.2010 N 2). 3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 22 ноября 2010 г. 4. Введены впервые. ### 1. Общие положения и область применения Свидетельство о метрологической аттестации N 223.1.11.11.95/2009. 1.1. Методические указания по определению массовых концентраций альдегидов (формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида) и ацетона в желчи предназначены для использования территориальными органами и подведомственными организациями Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, осуществляющими деятельность в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды. 1.2. Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием альдегидов и ацетона в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды. #### 1.3 Формальдегид (HCHO), молекулярная масса 30,03. Формальдегид (муравьиный альдегид, метаналь) - бесцветный газ с резким раздражающим запахом. Температура кипения: -19,2 °C, плотность: 0,8153 г/куб. см. Хорошо растворим в воде, спиртах и других полярных растворителях. При низких температурах смешивается с неполярными растворителями (толуолом, диэтиловым эфиром, этилацетатом) [[пункт 5](#p100249) Приложения к настоящему МУК] <*>. Обладает раздражающим, сенсибилизирующим и кожно-резорбтивным действием, оказывает гепатотропный эффект, относится к веществам, обуславливающим канцерогенную опасность [[3]](#p100247). --- <*> Далее по тексту ссылка на номер пункта [Приложения](#p100244) указывается одним номером в квадратных скобках. #### 1.4 Ацетальдегид (CH CHO), молекулярная масса 44,05. 3 Ацетальдегид (уксусный альдегид) - бесцветная жидкость с удушающим запахом. Температура кипения: 20,16 °C, плотность: 0,778 г/куб. см. Смешивается во всех соотношениях с водой и большинством органических растворителей [[1]](#p100245). Оказывает наркотическое, раздражающее, мутагенное и канцерогенное действие [[3]](#p100247). #### 1.5 Пропионовый альдегид (CH CH CHO), молекулярная масса 58,08. 3 2 Пропионовый альдегид (пропаналь) - бесцветная жидкость с характерным запахом. Температура кипения: 48,8 °C, плотность: 0,8058 г/куб. см. Растворим в воде, смешивается со многими органическими растворителями [[4]](#p100248). Оказывает наркотическое действие, вызывает изменения со стороны дыхательной системы, паренхиматозных органов, угнетает гемопоэз [[3]](#p100247). #### 1.6 Масляный альдегид (CH (CH ) CHO), молекулярная масса 72,11. 3 2 2 Масляный альдегид (бутаналь) - бесцветная прозрачная жидкость с резким запахом. Температура кипения: 75,7 °C, плотность: 0,817 г/куб. см [[2]](#p100246). Растворим в воде, смешивается со многими органическими растворителями. Оказывает наркотическое, раздражающее и кожно-резорбтивное действие [[3]](#p100247). #### 1.7 Ацетон (CH COCH ), молекулярная масса 58,08. 3 3 Ацетон (диметилкетон) - летучая бесцветная жидкость с характерным запахом. Температура кипения: 56,1 °C, плотность: 0,792 г/куб. см [[1]](#p100245). Смешивается с водой и органическими растворителями (эфиром, хлороформом, бензолом, четыреххлористым углеродом). Обладает наркотическим и кожно-резорбтивным действием, угнетает репродуктивную функцию. Преимущественно действует на центральную нервную систему [[3]](#p100247). 1.8. Диапазон измерений массовых концентраций альдегидов и ацетона приведен в табл. 1. Таблица 1 **НАЗВАНИЕ ОПРЕДЕЛЯЕМОГО ВЕЩЕСТВА И ДИАПАЗОНЫ ИЗМЕРЕНИЙ** | Название определяемого вещества | Диапазон измерений, мкг/куб. см | | --- | --- | | Формальдегид | От 0,001 до 0,1 включ. | | Ацетальдегид | -"- 0,001 -"- 0,1 -"- | | Пропионовый альдегид | -"- 0,001 -"- 0,1 -"- | | Масляный альдегид | -"- 0,001 -"- 0,1 -"- | | Ацетон | -"- 0,01 -"- 2,0 -"- | ### 2. Приписанные характеристики погрешности измерений Методика обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в табл. 2. Таблица 2
**ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТОЧНОСТИ,**
**ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВНУТРИЛАБОРАТОРНОЙ ПРЕЦИЗИОННОСТИ,**
**ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ**
Диапазон измерений, мкг/куб. смПоказатель повторяемости (относительное значение среднеквадратического отклонения повторяемости), сигма , % rПоказатель внутрилабораторной прецизионности (относительное значение среднеквадратического отклонения внутрилабораторной прецизионности), сигма , % RлПоказатель воспроизводимости (относительное значение среднеквадратического отклонения воспроизводимости), сигма , R %Показатель точности <*> (границы относительной погрешности при вероятности P = 0,95), +/- дельта, %
От 0,001 до 0,01 включ.6121530
Св. 0,01 -"- 0,1 -"-5810,521
-"- 0,1 -"- 2 -"-45612
<*> Соответствует относительной расширенной неопределенности измерений при коэффициенте охвата 2
### 3. Сущность метода Методика основана на предварительном переводе альдегидов и ацетона в производные 2,4-динитрофенилгидразина, концентрировании продуктов дериватизации из биологического материала экстракцией гексаном и количественном определении полученных гидразонов альдегидов и ацетона на жидкостном хроматографе с УФ-детектором. Измерению не мешают спирты, органические кислоты, кетоны и другие альдегиды. ### 4. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, растворы и реактивы При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы: #### 4.1. Средства измерений Жидкостный хроматограф с УФ-детектором Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические ГОСТ 24104-01 Гири Г -210 ГОСТ 7328-01 2 Термометр стеклянный [ГОСТ 28498-90](https://bukva.ai/docs/gost-28498-90) Микрошприцы МШ-1, МШ-10 ТУ 2.833.106-00 Цилиндр мерный вместимостью 50 куб. см [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5 куб. см [ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) Пипетка градуированная вместимостью 0,1 куб. см [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74) Колбы мерные вместимостью 100, 200, 500, 1000, 2000 куб. см Термостойкий стакан вместимостью 2000 куб. см Пробирки мерные вместимостью 10 куб. см [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Редуктор кислородный ТУ 26-05-236-73 Стандартные образцы: Формальдегид в воде с концентрацией 1,0 мг/куб. см ГСО 7347-96 Ацетон в воде с концентрацией 1,0 мг/куб. см ГСО 8460-2003 #### 4.2. Вспомогательные устройства Колонка хроматографическая металлическая (длина 80 мм, внутренний диаметр 2 мм) с сорбентом Диасорб С зернением 5 - 6 - 7 мкм 16 Предколонка металлическая 12 x 1,5 мм, заполненная сорбентом Диасорб С 16 Центрифуга ЦЛМН-Р10-01-"Элекон" ТУ 9443-001-245.23530-97 Дистиллятор ТУ 61-1-721-79 Сушильный шкаф ШСС-80 П УХЛ 4.2 ТУ 16.531.743-83 Дефлегматор длиной 300 мм ГОСТ 25336-82 Холодильник шариковый ХШ-300 (6 шар.) [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Холодильник прямой ХПТ-3-300 [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Воронка Шотта (пор 16) ГОСТ 25336-82 Воронки делительные вместимостью 100 куб. см ГОСТ 23932-90 Бюксы СВ 19/9 ТУ 92-891.029-91 Колбы для перегонки круглодонные вместимостью 1,0; 2,0 куб. дм ГОСТ 25336-82 Стакан термостойкий вместимостью 2 куб. дм ГОСТ 25336-82 Пробирки центрифужные пропиленовые с завинчивающейся крышкой вместимостью 15 куб. см Фильтры обеззоленные "Синяя лента" ТУ 2642-001-42624157-98 Универсальная индикаторная бумага pH 1,0 - 10,0 ПНД 50-975-84 #### 4.3. Реактивы Гексан для хроматографии, ос.ч. ТУ 6-09-4521-77 Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, ос.ч. ТУ 6-09-14-2167-84 Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72 Ацетальдегид для хроматографии, чистота не менее 99,5% Пропионовый альдегид для хроматографии, чистота не менее 99,5% Масляный альдегид для хроматографии, чистота не менее 99,5% 2,4-динитрофенилгидразин (2,4-ДНФГ), ч. ТУ-6-09-2394-77 Кислота хлористоводородная (плотность 1,19), х.ч. ГОСТ 3118-77 Перманганат калия, ч. ГОСТ 20490-75 Спирт этиловый, ректификованный, из пищевого сырья [ГОСТ Р 51652-2000](https://bukva.ai/docs/gost-r-51652-2000) Калий двухромовокислый, ч.д.а. ГОСТ 4220-75 Серная кислота ГОСТ 4204-77 Уксусная кислота, х.ч. ГОСТ 61-75 Диэтиламин, ч., перегнанный для хроматографии ТУ 6-09-68-89 #### 4.4. Материалы Гелий газообразный ТУ 51-940-80 Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования, химических реактивов и материалов по метрологическим и техническим характеристикам, не уступающим перечисленным. ### 5. Требования безопасности 5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности по ГОСТ 12.1.007-76 [[6]](#p100250) и ГОСТ 12.1.005-88 [[7]](#p100251). 5.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают меры безопасности, указанные в "Руководстве по правилам эксплуатации прибора", правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 [[8]](#p100252), противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 [[9]](#p100253) и имеют средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83 [[10]](#p100254). #### 5.3 Помещение должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. 5.4. При работе с биологическими средами необходимо соблюдать правила в соответствии с требованиями СП 1.3.2322-08 от 01.05.2008 [[11]](#p100255). 5.5. При выполнении измерений на приборе соблюдают правила, указанные в Руководстве по правилам эксплуатации жидкостного хроматографа. ### 6. Требования к квалификации оператора К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоившие метод анализа и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности анализа. ### 7. Условия измерений #### 7.1 При подготовке проб к анализу и приготовлении растворов соблюдают следующие условия: - температура воздуха 15 - 25 °C; - атмосферное давление 630 - 800 мм рт. ст.; - влажность воздуха не более 80% при температуре 25 °C. 7.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору. ### 8. Подготовка к выполнению измерений Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды и растворителей, приготовление растворов, подготовка хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики. #### 8.1. Подготовка посуды Используемую посуду замочить на 1 ч в хромовой смеси, промыть проточной водопроводной водой, ополоснуть дистиллированной водой и просушить при температуре 120 °C. #### 8.2. Подготовка растворителей ##### 8.2.1 Очистка ацетонитрила от примесей. В колбу вместимостью 2 куб. дм помещают 1 куб. дм ацетонитрила и 20 г KMnO , кипятят с шариковым 4 холодильником в течение 1 ч, затем перегоняют с дефлегматором при температуре 81,6 °C, отбирая фракции по 200 куб. см. Когда в колбе останется около 200 куб. см продукта, перегонку прекращают. Остаток можно смешивать с новой порцией растворителя. Первую фракцию (200 куб. см) отбрасывают, а остальные проверяют на поглощение в УФ-области (оптическая плотность при 200 нм не должна превышать 0,05 о.е./см). 8.2.2. Очистка диэтиламина от примесей. В колбу вместимостью 1,0 куб. дм помещают 0,5 куб. дм диэтиламина и перегоняют с прямым холодильником. Первые и последние порции (50 куб. см) отбрасывают, оставляют среднюю порцию. Перегнанный раствор должен быть бесцветным. 8.2.3. Очистка этилового спирта от альдегидов и кетонов. К 1 куб. дм 96%-ного спирта добавляют 2 г 2,4-динитрофенилгидразина, 0,5 куб. см концентрированной хлористоводородной кислоты и кипятят с шариковым холодильником 1 ч. Перегоняют с дефлегматором в приборе со стеклянными шлифами, отбрасывая первые и последние 100 куб. см, после этого отгоняют вторично. #### 8.3. Приготовление растворов 8.3.1. Хромовая смесь. В термостойкий стакан вместимостью 2 куб. дм насыпают 50 г хромовокислого калия, осторожно приливают по палочке частями, тщательно перемешивая, 1 куб. дм концентрированной серной кислоты. 8.3.2. Элюент для хроматографии. 600 куб. см ацетонитрила смешивают с 400 куб. см дистиллированной воды. Смесь фильтруют через воронку Шотта (пор 16) и дегазируют барботированием гелия в течение 5 мин. со скоростью 50 - 60 куб. см/мин. Добавляют 25 куб. см уксусной кислоты и 10 куб. см диэтиламина и перемешивают содержимое колбы. Срок хранения элюента 5 дней в стеклянной посуде с притертой пробкой в темном месте. 8.3.3. Хлористоводородная кислота, 2 моль/куб. дм. В мерную колбу вместимостью 1 куб. дм, наполненную до половины объема дистиллированной водой, прибавляют 61,0 куб. см концентрированной хлористоводородной кислоты (плотность 1,19 г/куб. см), доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. 8.3.4. 2,4-динитрофенилгидразин, 0,2%-ный раствор в 2 М растворе хлористоводородной кислоты. 0,2 г 2,4-динитрофенилгидразина вносят в мерную колбу на 100 куб. см и доводят до метки 2 М раствором хлористоводородной кислоты. ##### 8.3.5 Исходный раствор альдегидов для градуировки (раствор A). В мерную колбу объемом 500 куб. см, содержащую 450 куб. см дистиллированной воды, добавляют 5 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина, переносят 4 куб. см ГСО формальдегида с концентрацией 1,0 мг/куб. см (4,0 мг) и реактивы по [п. 4.3](#p100082) в количестве 5,0 куб. мм (3,9 мг) ацетальдегида, 5,0 куб. мм (4,03 мг) пропионового альдегида, 5,0 куб. мм (4,08 мг) масляного альдегида и доводят дистиллированной водой до метки. Градуировочные растворы готовят с предварительным охлаждением альдегидов и дистиллированной воды, которые выдерживают при температуре (-10 +/- 2) °C в течение 20 мин. Используют свежеприготовленный раствор. Содержание альдегидов в растворе A составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): формальдегида - 8,0 мкг/куб. см; ацетальдегида - 7,8 мкг/куб. см; пропионового альдегида - 8,1 мкг/куб. см; масляного альдегида - 8,2 мкг/куб. см. Исходный раствор ацетона для градуировки (раствор B). В мерную колбу объемом 200 куб. см, содержащую 180 куб. см дистиллированной воды, добавляют 5 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина, переносят 5,0 куб. см (3,96 мг) ГСО ацетона и доводят водой до метки. Используют свежеприготовленный раствор. Содержание ацетона в растворе B составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества) 19,8 мкг/куб. см. 8.3.6. Получение 2,4-динитрофенилгидразонов альдегидов и ацетона. В колбу с притертой пробкой вместимостью 500 куб. см вносят 300 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М хлористоводородной кислоте, прибавляют 0,17 г формальдегида (для получения 2,4-ДНФгидразона ацетальдегида прибавляют 0,24 г ацетальдегида, пропионового альдегида - 0,38 г, масляного альдегида - 0,46 г, ацетона - 0,32 г), перемешивают и оставляют смесь на 12 часов. После выпадения окрашенного осадка 2,4-динитрофенилгидразона соответствующего альдегида или ацетона его отфильтровывают через фильтр "Синяя лента", промывают 100 куб. см 2 М раствора хлористоводородной кислоты, дистиллированной водой до нейтральной реакции среды, которую проверяют по индикаторной бумаге, высушивают на воздухе. Проверяют качество производного методом ВЭЖХ, приемлемый уровень чистоты 99,0% и выше. Если уровень чистоты неудовлетворительный, перекристаллизовывают гидразон из этилового спирта и повторяют проверку качества. #### 8.4. Подготовка хроматографической колонки Колонку устанавливают на хроматограф и подают элюент, приготовленный в соответствии с [п. 8.3.2](#p100123), со скоростью 100 куб. мм/мин. до установления равновесия колонки, которое определяют по стабильности нулевой линии детектора. #### 8.5. Установление градуировочной характеристики 8.5.1. Строят две зависимости площади хроматографического пика от концентрации альдегидов и ацетона в желчи в диапазонах 0,001 - 0,020 мкг/куб. см и 0,02 - 0,50 мкг/куб. см - для альдегидов; 0,005 - 0,10 мкг/куб. см и 0,1 - 2,0 мкг/куб. см - для ацетона. Градуировочные характеристики устанавливают по пяти сериям растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из трех растворов, готовят из растворов A и B. 8.5.2. Для приготовления градуировочных смесей отбирается проба желчи объемом 125 куб. см (при сборе желчь хранится при температуре не выше 0 °C). В соответствии с [п. 9](#p100182) проводят анализ пробы желчи на содержание альдегидов. При наличии анализируемых веществ в холостой пробе вычитают их фоновое содержание при построении калибровки. 8.5.3. Градуировочные растворы готовят в мерных пробирках вместимостью 10 куб. см. Для этого в каждую колбу вносят микрошприцем или микропипеткой растворы A и B в соответствии с табл. 3 и [4](#p100148), доводят объем до 5 куб. см желчью и перемешивают. Анализируют свежеприготовленные растворы. Таблица 3
**РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ**
**ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ В ЖЕЛЧИ АЛЬДЕГИДОВ В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ**
**0,001 - 0,020 МКГ/КУБ. СМ И АЦЕТОНА В ДИАПАЗОНЕ**
**КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,01 - 0,10 МКГ/КУБ. СМ** | Номер раствора | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Объем раствора A, куб. мм | 0,6 | 1,2 | 2,6 | 6,0 | 12,0 | | Массовая концентрация формальдегида, мкг/куб. см | 0,001 | 0,002 | 0,004 | 0,010 | 0,020 | | Массовая концентрация ацетальдегида, мкг/куб. см | 0,001 | 0,002 | 0,004 | 0,010 | 0,020 | | Массовая концентрация пропионового альдегида, мкг/куб. см | 0,001 | 0,002 | 0,004 | 0,010 | 0,020 | | Массовая концентрация масляного альдегида, мкг/куб. см | 0,001 | 0,002 | 0,004 | 0,010 | 0,020 | | Объем раствора B, куб. мм | 2,6 | 5,0 | 12,6 | 20,0 | 25,0 | | Массовая концентрация ацетона, мкг/куб. см | 0,01 | 0,02 | 0,05 | 0,08 | 0,10 | Таблица 4
**РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ**
**ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ В ЖЕЛЧИ АЛЬДЕГИДОВ В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ**
**0,02 - 0,1 МКГ/КУБ. СМ И АЦЕТОНА В ДИАПАЗОНЕ**
**КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,1 - 2,0 МКГ/КУБ. СМ** | Номер раствора | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Объем раствора A, куб. мм | 12,0 | 24,0 | 36,0 | 48,0 | 60,0 | | Массовая концентрация формальдегида, мкг/куб. см | 0,02 | 0,04 | 0,06 | 0,08 | 0,10 | | Массовая концентрация ацетальдегида, мкг/куб. см | 0,02 | 0,04 | 0,06 | 0,08 | 0,09 | | Массовая концентрация пропионового альдегида, мкг/куб. см | 0,02 | 0,04 | 0,06 | 0,08 | 0,10 | | Массовая концентрация масляного альдегида, мкг/куб. см | 0,02 | 0,04 | 0,06 | 0,08 | 0,10 | | Объем раствора B, куб. мм | 25,0 | 50,0 | 125,0 | 250,0 | 500,0 | | Массовая концентрация ацетона, мкг/куб. см | 0,1 | 0,2 | 0,5 | 1,0 | 2,0 | В делительную воронку объемом 100 куб. см помещают 2,0 куб. см градуировочного раствора, разводят дистиллированной водой до объема 40 куб. см, добавляют 2,0 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М растворе хлористоводородной кислоты, 2 капли концентрированной хлористоводородной кислоты, 5 куб. см гексана и экстрагируют 15 мин. После расслоения жидкостей верхний слой переносят в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют 5 мин. со скоростью 2800 об./мин., затем 2 куб. см гексана переносят в бюкс и высушивают в потоке воздуха до сухого остатка. Высушенный остаток растворяют в 0,4 куб. см элюента и анализируют аликвотную часть (10 куб. мм) в условиях: элюент - раствор, приготовленный по [п. 8.3.2](#p100123); скорость движения элюента 100 куб. мм/мин.; длина волны УФ-детектора 358 нм; время удерживания: 2,4-динитрофенилгидразона формальдегида 4,1 +/- 0,2 мин.; 2,4-динитрофенилгидразона ацетальдегида 5,0 +/- 0,2 мин.; 2,4-динитрофенилгидразона ацетона 6,2 +/- 0,2 мин.; 2,4-динитрофенилгидразона пропионового альдегида 7,5 +/- 0,2 мин.; 2,4-динитрофенилгидразона масляного альдегида 8,5 +/- 0,2 мин. Градуировочный коэффициент рассчитывают по формуле: n SUM C / S i=1 i i K = -----------, n где: C - концентрация вещества в градуировочном растворе, мкг/куб. см; i S - среднее значение пяти измерений площади пика i-ой концентрации, i расхождение между минимальным и максимальным значением которых не должно превышать 4% относительно среднего значения S ; i n - количество градуировочных смесей (n = 5). ##### 8.5.4 Контроль стабильности градуировочной характеристики Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация альдегида (ацетона) соответствовала нижней, верхней границам и середине диапазона построения градуировочной характеристики. Градуировка признается стабильной при выполнении условия: |X - C| <= 0,10 x C, где: C - заданная концентрация альдегида (ацетона) в градуировочном растворе; X - результат измерения массовой концентрации альдегида (ацетона) в градуировочном растворе. При невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики эксперимент повторяют с другим градуировочным раствором. При повторном невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики. #### 8.6. Отбор проб Отбор проб желчи в объеме не менее 4 куб. см проводят в чистую пробирку с притертой пробкой. Срок хранения пробы в холодильнике 2 дня. ### 9. Выполнение измерений 9.1. Выполняют два параллельных измерения образца желчи. В делительную воронку 100 куб. см помещают 2,0 куб. см желчи, разбавляют дистиллированной водой до объема 40 куб. см, добавляют 2,0 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М растворе хлористоводородной кислоты, 2 капли концентрированной хлористоводородной кислоты, 5 куб. см гексана и экстрагируют 15 мин. После отстаивания верхний слой переносят в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют 5 мин. со скоростью 2800 об./мин. После расслоения жидкостей 2 куб. см гексанового экстракта переносят в бюкс и высушивают в потоке воздуха до сухого остатка. Высушенный остаток растворяют в 0,4 куб. см элюента, вводят в хроматограф аликвотную часть (10 куб. мм) и анализируют в условиях, указанных в [п. 8.5.3](#p100136). 9.2. Идентификацию хроматографических пиков 2,4-динитрофенилгидразонов формальдегида, ацетальдегида, пропионового и масляного альдегидов и ацетона проводят путем сравнения времен удерживания хроматографических пиков в анализируемой пробе и в растворах 2,4-динитрофенилгидразонов альдегидов и ацетона, полученных согласно [п. 8.3.6](#p100130). ### 10. Обработка (вычисление) результатов измерений #### 10.1 Массовые концентрации альдегидов и ацетона в желчи (мкг/куб. см) вычисляют по формуле: X = S x K, l где: X - массовая концентрация вещества в анализируемой пробе, мкг/куб. см; S - площадь пика соответствующего 2,4-динитрофенилгидразона альдегида l (или ацетона) на хроматограмме, е.о.п.; K - градуировочный коэффициент. _ 10.2. За результат измерения X принимают среднее арифметическое значение двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости X , X (параллельных определений), для которых выполняется условие: 1 2 X + X 1 2 |X - X | <= 0,01 x r x -------, (1) 1 2 2 где r - предел повторяемости. Значения предела повторяемости приведены в табл. 5. Таблица 5
**ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ**
**И КРИТИЧЕСКОГО ДИАПАЗОНА ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ**
**ВЕРОЯТНОСТИ P = 0,95** | Диапазон измерений, мкг/куб. см | Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории в условиях повторяемости), r, % | Критический диапазон (относительное значение допускаемого расхождения между наибольшим и наименьшим четырех результатов измерений, полученных в одной лаборатории в условиях повторяемости), CR (4), % 0,95 | Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), R, % | | --- | --- | --- | --- | | От 0,001 до 0,01 включ. | 17 | 34 | 42 | | Св. 0,01 -"- 0,1 -"- | 14 | 22 | 29 | | -"- 0,1 -"- 2 -"- | 11 | 14 | 17 | При невыполнении [условия (1)](#p100193) получают дополнительно еще два результата измерений. За результат измерений принимают среднее арифметическое четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие: X + X + X + X 1 2 3 4 |X - X | <= 0,01 x CR (4) x -----------------, (2) max,4 min,4 0,95 4 где CR (4) - критический диапазон. Значения критического диапазона 0,95 приведены в [табл. 5](#p100196). При невыполнении [условия (2)](#p100202) в качестве окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений). Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению [условия (1)](#p100193). 10.3. Расхождение между результатами измерений, полученными в двух лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости: _ _ X + X _ _ 1 2 |X - X | <= 0,01 x R x -------, (3) 1 2 2 _ _ где X и X - результаты измерений массовых концентраций альдегидов и 1 2 ацетона, полученные в разных лабораториях, - средние арифметические двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется [условие (1)](#p100193). При выполнении [условия (3)](#p100206) приемлемы оба результата измерений, и в качестве окончательного может быть использовано их среднее арифметическое значение. Значения предела воспроизводимости приведены в [табл. 5](#p100196). ### 11. Оформление результатов измерений _ Результат измерения представляют в виде (X + ДЕЛЬТА), мкг/куб. см, где ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. см, при P = 0,95, значение ДЕЛЬТА рассчитывают по формуле: _ дельта x X ДЕЛЬТА = ----------, 100 где значение дельта приведено в [табл. 2](#p100038). В случае, если содержание компонента меньше нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание альдегида < 0,001 мкг/куб. см, содержание ацетона < 0,01 мкг/куб. см". ### 12. Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории организуют и проводят в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-6](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002) [[12]](#p100256) и [РМГ 76-2004 ГСИ](https://bukva.ai/docs/rmg-76-2004) [[13]](#p100257). Периодичность получения результатов контрольных процедур и формы их регистрации приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории. ### 13. Алгоритм оперативного контроля процедуры измерений с использованием метода добавок Оперативный контроль процедуры измерений проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры K с нормативом контроля к K. Результат контрольной процедуры K рассчитывают по формуле: к _ _ K = |X' - X - C |, к д где: _ X' - результат измерений массовой концентрации альдегида (или ацетона) в пробе с известной добавкой - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет [условию (1)](#p100193); _ X - результат измерений массовой концентрации альдегида (или ацетона) в исходной пробе - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет [условию (1)](#p100193). Норматив контроля K рассчитывают по формуле: _________________________ / 2 2 K = \/ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА , л,X' л,X ср ср 2 2 где ДЕЛЬТА , ДЕЛЬТА - значения характеристики погрешности л,X' л,X ср ср результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации методики, соответствующие массовой концентрации альдегида (или ацетона) в пробе с известной добавкой и в исходной пробе соответственно. Примечание. Допустимо характеристику погрешности результатов измерений при внедрении методики в лаборатории устанавливать на основе выражения: ДЕЛЬТА = 0,84 x ДЕЛЬТА, с последующим уточнением по мере накопления л информации в процессе контроля стабильности результатов измерений. Процедуру измерений признают удовлетворительной при выполнении условия: K <= K. (4) к При невыполнении [условия (4)](#p100229) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (4) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению. ### 14. Алгоритм проведения контрольной процедуры при контроле внутрилабораторной прецизионности Контрольные процедуры при контроле промежуточной прецизионности получают с использованием рабочих проб желчи. При реализации контрольной процедуры получают два результата _ _ контрольных измерений (первичного X и повторного X ) массовой концентрации 1 2 альдегида (или ацетона) в условиях внутрилабораторной прецизионности. Результат контрольной процедуры признают удовлетворительным при выполнении следующего условия: _ _ X + X _ _ 1 2 |X - X | <= 0,01 x R x -------. (5) 1 2 л 2 Значения предела внутрилабораторной прецизионности приведены в табл. 6. Таблица 6
**ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛА ВНУТРИЛАБОРАТОРНОЙ ПРЕЦИЗИОННОСТИ**
**ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ P = 0,95** | Диапазон измерений, мкг/куб. см | Предел внутрилабораторной прецизионности (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории в условиях внутрилабораторной прецизионности), R , % л | | --- | --- | | От 0,001 до 0,01 включ. | 34 | | Св. 0,01 -"- 0,1 -"- | 22 | | -"- 0,1 -"- 2 -"- | 14 |
Приложение
**СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ** 1. Химическая энциклопедия/ Под. ред. И.Л. Кнунянц. М.: "Советская энциклопедия", 1988. Т. 1. 2. Химическая энциклопедия/ Под. ред. И.Л. Кнунянц. М.: "Советская энциклопедия", 1990. Т. 2. 3. Филов В.А., Тиунов Л.А. Справ.: Вредные химические вещества. Галоген- и кислородсодержащие органические соединения. С.-П.: "Химия", 1994. 4. Химическая энциклопедия/ Под. ред. Н.С. Зефирова. М.: "Большая российская энциклопедия", 1995. Т. 4. 5. Химическая энциклопедия/ Под. ред. Н.С. Зефирова. М.: "Большая российская энциклопедия", 1999. Т. 5. 6. ГОСТ 12.1.007-76 "Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности". 7. ГОСТ 12.1.005-88 "Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны". 8. ГОСТ 12.1.019-79 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты". 9. ГОСТ 12.1.004-91 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования". 10. ГОСТ 12.4.009-90 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание". 11. Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08 от 01.05.2008 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней". 12. [ГОСТ Р ИСО 5725-6](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений". 13. [РМГ 76-2004](https://bukva.ai/docs/rmg-76-2004) "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа". ---