---
title: "\"МУК 4.1.2764-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение метрибузина в биологических средах экспериментальных животных (почках, печени, головном мозге, семенниках, моче, кале) методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.2764-10"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2764-10"
---

## "МУК 4.1.2764-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение метрибузина в биологических средах экспериментальных животных (почках, печени, головном мозге, семенниках, моче, кале) методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.2764-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение метрибузина в биологических средах экспериментальных животных (почках, печени, головном мозге, семенниках, моче, кале) методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 17.11.2010)

> [!IMPORTANT]
> Документ [введен](#p100002) в действие с 17 декабря 2010 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

<div align="center">

17 ноября 2010 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ МЕТРИБУЗИНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ**
**ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ (ПОЧКАХ, ПЕЧЕНИ, ГОЛОВНОМ МОЗГЕ,**
**СЕМЕННИКАХ, МОЧЕ, КАЛЕ) МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ**
**ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="center">

**МУК 4.1.2764-10**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

<div align="center">

17 декабря 2010 года

</div>


1. <a id="p100006"></a>Методические указания разработаны ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Роспотребнадзора".
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 14.10.2010 N 2).
3. <a id="p100008"></a>Введены впервые.

<a id="p100009"></a>Настоящие Методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения массовых концентраций метрибузина в биологических средах экспериментальных животных в диапазонах 0,004 - 0,04 мг/кг (почки, печень, семенники, кал), 0,01 - 0,1 мг/кг (головной мозг) и 0,001 - 0,01 мг/куб. дм (моча).
<a id="p100010"></a>Метрибузин
<a id="p100011"></a>4-амино-6-трет-бутил-4,5-дигидро-3-метилтио-1,2,4-триазин-5-он (IUPAC).
<a id="p100012"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100013"></a>    C H  N OS.
     8 14 4
<a id="p100014"></a>    Мол. масса 214,3.
<a id="p100015"></a>    Белое   кристаллическое   вещество   со   слабым  характерным  запахом.
Температура  плавления  126,2  °С.  Плотность 1,28 (20 °С). Давление паров:
0,058 мПа (при 20 °С). Коэффициент распределения н-октанол/вода (при pH 5,5
и 20 °С): K   log P = 1,6. Растворимость  в органических  растворителях при
           ow
20 °С (г/куб. дм): диметилформамид - 1780, циклогексанон - 1000,  хлороформ
- 850, ацетон  -  820,  метанол  -  450, дихлорметан  -  340, бензол - 220,
н-бутанол  - 150, этанол - 190, толуол - 87, ксилол - 90, изопропанол - 77,
гексан - 1,0. Растворимость в воде при 20 °С: 1,05 г/куб. дм.
<a id="p100016"></a>    Метрибузин  при  20 °С стабилен в разбавленных кислотах и щелочах; DT
                                                                         50
(37  °С) - 6,7 часа (pH  1,2); DT   (70 °С) - 569 часов (pH 4); 47 дней (pH
                                 50
7), 191 час (pH 9).
<a id="p100017"></a>    Подвержен  быстрой  деградации в воде на свету (DT   - менее 1 дня). На
                                                      50
поверхности почвы при естественном облучении DT   - 14 - 15 дней.
                                               50
<a id="p100018"></a>Область применения
<a id="p100019"></a>Метрибузин - избирательный системный гербицид класса 1,2,4-триазинона, ингибирует фотосинтез. В растения проникает через корни и листья.
<a id="p100020"></a>Препараты на основе метрибузина могут представлять собой стандартные суспензии (с размером частиц более 2 мкм), а также наноформы, образующие водные системы с размером частиц менее 0,1 мкм.


## 1. <a id="p100021"></a>Метрологические характеристики


<a id="p100022"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

<div align="right">

<a id="p100023"></a>Таблица 1

</div>


<div align="center">

<a id="p100024"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ**

</div>



<table>
<colgroup><col width="12%"><col width="20%"><col width="22%"><col width="19%"><col width="12%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый объект</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (куб. дм)</td><td>Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95</td><td>Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r</td><td>Предел повторяемости, r, %</td><td>Предел воспроизводимости, R, %</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Почки</td><td>от 0,004 до 0,008 вкл.</td><td>100</td><td>4,5</td><td>13</td><td>15</td></tr>
<tr><td>свыше 0,008 до 0,04 вкл.</td><td>50</td><td>4,9</td><td>14</td><td>17</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Печень</td><td>от 0,004 до 0,008 вкл.</td><td>100</td><td>5,0</td><td>14</td><td>17</td></tr>
<tr><td>свыше 0,008 до 0,04 вкл.</td><td>50</td><td>5,2</td><td>15</td><td>19</td></tr>
<tr><td>Головной мозг</td><td>от 0,01 до 0,1 вкл.</td><td>50</td><td>4,5</td><td>13</td><td>15</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Семенники</td><td>от 0,004 до 0,008 вкл.</td><td>100</td><td>4,9</td><td>14</td><td>17</td></tr>
<tr><td>свыше 0,008 до 0,04 вкл.</td><td>50</td><td>4,8</td><td>13</td><td>15</td></tr>
<tr><td>Моча</td><td>от 0,001 до 0,01 вкл.</td><td>100</td><td>4,9</td><td>14</td><td>17</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Кал</td><td>от 0,004 до 0,008 вкл.</td><td>100</td><td>3,9</td><td>11</td><td>13</td></tr>
<tr><td>свыше 0,008 до 0,04 вкл.</td><td>50</td><td>4,0</td><td>11</td><td>13</td></tr>
</table>


<a id="p100036"></a>Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 2.

<div align="right">

<a id="p100037"></a>Таблица 2

</div>



<table>
<colgroup><col width="12%"><col width="14%"><col width="19%"><col width="15%"><col width="16%"><col width="24%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый</td><td colspan="5">Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>объект</td><td>предел обнаружения, мг/кг (куб. дм)</td><td>диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>полнота извлечения вещества, %</td><td>стандартное отклонение, S, %</td><td>доверительный интервал среднего результата, +/-, %</td></tr>
<tr><td>Почки</td><td>0,004</td><td>0,004 - 0,04</td><td>79,8</td><td>5,5</td><td>2,9</td></tr>
<tr><td>Печень</td><td>0,004</td><td>0,004 - 0,04</td><td>81,3</td><td>5,0</td><td>2,7</td></tr>
<tr><td>Головной мозг</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>81,7</td><td>4,2</td><td>2,2</td></tr>
<tr><td>Семенники</td><td>0,004</td><td>0,004 - 0,04</td><td>81,8</td><td>4,5</td><td>2,4</td></tr>
<tr><td>Моча</td><td>0,001</td><td>0,001 - 0,01</td><td>81,4</td><td>4,9</td><td>2,6</td></tr>
<tr><td>Кал</td><td>0,004</td><td>0,004 - 0,04</td><td>83,1</td><td>3,2</td><td>1,7</td></tr>
</table>



## 2. <a id="p100045"></a>Метод измерений


<a id="p100046"></a>Методика основана на определении вещества с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным (ТИД) и электронозахватным (ЭЗД) детекторами после экстракции из анализируемых проб биологических сред ацетонитрилом, последовательной очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, окислением марганцовокислым калием в щелочной среде, затем на концентрирующих патронах Sep Pak Silica и С18 Sep Pak.
<a id="p100047"></a>Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.


## 3. <a id="p100048"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы



### <a id="p100049"></a>3.1. Средства измерений


<a id="p100050"></a>Газовый хроматограф "Кристалл-2000М",
снабженный электронозахватным и
термоионным детектором с пределом
детектирования соответственно по линдану
        -14
3,5 - 10    г/с и азоту в азобензоле
        -14
3,0 х 10    гР/с предназначенный для
работы с капиллярной колонкой                    Номер Госреестра 14516-08
<a id="p100051"></a>Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104-2001
<a id="p100052"></a>Весы лабораторные общего назначения, с
наибольшим пределом взвешивания до 500 г и
пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г ГОСТ 24104-2001
<a id="p100053"></a>Колбы мерные 2-100-2, 2-500-2 [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100054"></a>Меры массы ГОСТ 7328-2001
<a id="p100055"></a>Микрошприц SGE-Cromatec вместимостью
10 куб. мм                                       Номер Госреестра 39206-08
<a id="p100056"></a>Пипетки градуированные 2-го класса
точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0;
10 куб. см [ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91)
<a id="p100057"></a>Цилиндры мерные 2-го класса точности
вместимостью 25, 50, 100, 250 и 500 куб. см [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100058"></a>Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


### <a id="p100059"></a>3.2. Реактивы


<a id="p100060"></a>Метрибузин, государственный стандартный
образец с содержанием действующего
вещества 99,7%, относительная погрешность
аттестованного значения +/- 0,3%                 ГСО 7713-99
<a id="p100061"></a>Азот газообразный нулевой, марка А
(99,999%), в баллонах                            ТУ 6-21-39-96
<a id="p100062"></a>Ацетонитрил для хроматографии, хч                ТУ 6-09-3534-87
<a id="p100063"></a>Вода деионизованная ГОСТ 6709-72
<a id="p100064"></a>н-Гексан, для ВЭЖХ                               ТУ 6-09-06-657-84
<a id="p100065"></a>Калий гидроокись (гидроксид калия), осч [ГОСТ 24363-80](https://bukva.ai/docs/gost-24363-80)
<a id="p100066"></a>Калий марганцовокислый (перманганат
калия), хч ГОСТ 20490-75
<a id="p100067"></a>Калий углекислый (карбонат калия, поташ),
хч, прокаленный [ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76)
<a id="p100068"></a>Кальций хлористый (хлорид кальция), хч,
<a id="p100069"></a>насыщенный водный раствор [ГОСТ 450-77](https://bukva.ai/docs/gost-450-77)
<a id="p100070"></a>Кислота серная концентрированная, хч ГОСТ 4204-77
<a id="p100071"></a>Метилен хлористый (дихлорметан), хч [ГОСТ 12794-80](https://bukva.ai/docs/standart-gost-12794-80)
<a id="p100072"></a>Метиловый спирт (метанол), хч [ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77)
<a id="p100073"></a>Натрий сернокислый (сульфат натрия)
безводный, хч [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
<a id="p100074"></a>Натрий углекислый (карбонат натрия), хч ГОСТ 83-79
<a id="p100075"></a>Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233-77
<a id="p100076"></a>Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид,
пентоксид фосфора)                               ТУ 6-09-4173-85
<a id="p100077"></a>Этиловый эфир уксусной кислоты
(этилацетат), хч [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76)
<a id="p100078"></a>Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих выполнения [п. 7.1](#p100118) (очистка растворителей).


### <a id="p100079"></a>3.3. Вспомогательные устройства, материалы


<a id="p100080"></a>Аллонж прямой с отводом для вакуума
(для работы с концентрирующими патронами) ГОСТ 25336-82
<a id="p100081"></a>Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)
<a id="p100082"></a>Бумажные фильтры "красная лента"
обеззоленные или фильтры из
хроматографической бумаги Ватман 3ММ             ТУ 2642-001-05015242-07
<a id="p100083"></a>Воронки делительные вместимостью 250
и 1000 куб. см [ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
<a id="p100084"></a>Воронки стеклянные конусные типа
В-36-80 ХС и В-56-80 ХС ГОСТ 25336-82
<a id="p100085"></a>Генератор водорода, исполнение 6.140
(СКБ "Хроматэк", Россия)
<a id="p100086"></a>Груша резиновая                                  ТУ 9398-05-0576-9082-2003
<a id="p100087"></a>Колбы конические (плоскодонные)
вместимостью 100 - 150, 200 - 250 и
500 куб. см ГОСТ 23932-90
<a id="p100088"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью
100, 150 и 250 куб. см [ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
<a id="p100089"></a>Компрессор (СКБ "Хроматэк", Россия)
<a id="p100090"></a>Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 25336-82
<a id="p100091"></a>Стаканы химические вместимостью 100 и
500 куб. см ГОСТ 25336-82
<a id="p100092"></a>Стекловата
<a id="p100093"></a>Стеклянные палочки
<a id="p100094"></a>Патроны для твердофазной экстракции С18
Sep Pak, Classik (Waters, США), масса
сорбента 360 мг
<a id="p100095"></a>Патроны для твердофазной экстракции Sep
Pak Silica (Waters, США), объем сорбента
2 куб. см
<a id="p100096"></a>Ректификационная колонна с числом
теоретических тарелок 30
<a id="p100097"></a>Ротационный вакуумный испаритель В-169
фирмы Buchi, Швейцария
<a id="p100098"></a>Сосуды для гомогенизации тканей стеклянные
с плунжером вместимостью 15 куб. см типа
BBI-8540802 (фирма "Sartorius AG", Германия)
<a id="p100099"></a>Стеклянные или полипропиленовые емкости
вместимостью 100 куб. см с герметичной крышкой
(для хранения биопроб)
<a id="p100100"></a>Установка для перегонки растворителей с
дефлегматором [ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) (ИСО 641-75)
<a id="p100101"></a>Холодильник с морозильной камерой бытовой
<a id="p100102"></a>Хроматографическая колонка DB-5ms длиной 30 м,
внутренним диаметром 0,25 мм, толщина
пленки сорбента 0,25 мкм
<a id="p100103"></a>Хроматографическая колонка капиллярная
DB-1701 длиной 30 м, внутренним диаметром
0,32 мм, толщина пленки сорбента 0,5 мкм
<a id="p100104"></a>Шприцы медицинские с разъемом Льюера вместимостью
5 и 10 куб. см
<a id="p100105"></a>Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100106"></a>Требования безопасности


<a id="p100107"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79, а также требования, изложенные в технической документации на газовом хроматографе.
<a id="p100108"></a>4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.
<a id="p100109"></a>4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 мПа (150 кгс/кв. см), необходимо соблюдать "Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением", ПБ 03-576-03. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.


## 5. <a id="p100110"></a>Требования к квалификации оператора


<a id="p100111"></a>К выполнению измерений допускают специалиста, имеющего квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе, освоившего данную методику и подтвердившего экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по [п. 13](#p100222).


## 6. <a id="p100112"></a>Условия измерений


<a id="p100113"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- <a id="p100114"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100115"></a>выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100116"></a>Подготовка к выполнению измерений


<a id="p100117"></a>Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка концентрирующих патронов Sep Pak Silica и С18 Sep Pak.


### <a id="p100118"></a>7.1. Очистка органических растворителей



##### <a id="p100119"></a>7.1.1 Ацетонитрил

<a id="p100120"></a>Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 куб. дм ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 куб. дм ацетонитрила 10 г карбоната калия).

##### <a id="p100121"></a>7.1.2 Гексан

<a id="p100122"></a>Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

##### <a id="p100123"></a>7.1.3 Хлористый метилен и этилацетат

<a id="p100124"></a>Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%
<a id="p100125"></a>Навеску (5 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют в деионизованной воде, доводят водой до метки, перемешивают.
<a id="p100126"></a>Хлористый метилен (этилацетат) промывают последовательно раствором натрия углекислого с массовой долей 5%, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.


### <a id="p100127"></a>7.2. Приготовление раствора калия гидроксида с молярной концентрацией 2 моль/куб. дм (2 М раствор)


<a id="p100128"></a>В мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают (56 +/- 0,1) г гидроксида калия, растворяют в 250 - 300 куб. см деионизованной воды, доводят водой до метки, перемешивают.


### <a id="p100129"></a>7.3. Приготовление раствора марганцовокислого калия с массовой долей 0,1%


<a id="p100130"></a>В мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают (0,5 +/- 0,01) г марганцовокислого калия, доводят водой до метки, перемешивают. Раствор хранят в темном месте.


### <a id="p100131"></a>7.4. Приготовление гексана, насыщенного ацетонитрилом


<a id="p100132"></a>В коническую колбу вместимостью 500 куб. см с притертой пробкой помещают 250 куб. см гексана, вносят (10 +/- 1) куб. см ацетонитрила, перемешивают в течение 5 мин. Хранят в темном месте.


### <a id="p100133"></a>7.5. Приготовление смесей гексан - этилацетат для очистки экстракта на патроне Sep Pak Silica


<a id="p100134"></a>7.5.1. Смесь гексан - этилацетат (объемное соотношение 7:3). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 70 куб. см гексана и 30 куб. см этилацетата, перемешивают.
<a id="p100135"></a>7.5.2. Смесь гексан - этилацетат (объемное соотношение 9:1). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 90 куб. см гексана и 10 куб. см этилацетата, перемешивают.
<a id="p100136"></a>7.5.3. Смесь гексан - этилацетат (объемное соотношение 8:2). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 80 куб. см гексана и 20 куб. см этилацетата, перемешивают.


#### <a id="p100137"></a>7.6 Приготовление смеси ацетонитрил - вода

<div align="center">

(объемное соотношение 3:7) для очистки экстракта<br>
на патроне С18 Sep Pak

</div>


<a id="p100138"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 30 куб. см ацетонитрила и 70 куб. см деионизованной воды, перемешивают.


### <a id="p100139"></a>7.7. Подготовка концентрирующего патрона Sep Pak Silica


<a id="p100140"></a>Патрон устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума.
<a id="p100141"></a>Концентрирующий патрон промывают с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, последовательно 3 куб. см метанола, 5 куб. см смеси гексан - этилацетат (7:3, по объему), 5 куб. см гексана со скоростью прохождения растворителя через патрон 1 - 2 капли в секунду. Патрон готовят непосредственно перед использованием. Нельзя допускать высыхания верхнего слоя сорбента.


### <a id="p100142"></a>7.8. Подготовка концентрирующего патрона С18 Sep Pak


<a id="p100143"></a>Концентрирующий патрон промывают с помощью медицинского шприца или разряжения, создаваемого водоструйным насосом, 5 куб. см метанола со скоростью прохождения растворителя через патрон 1 - 2 капли в секунду, затем 10 куб. см деионизованной воды.
<a id="p100144"></a>Патрон готовят непосредственно перед использованием.


### <a id="p100145"></a>7.9. Приготовление градуировочных растворов

<div align="center">

и растворов внесения

</div>


<a id="p100146"></a>7.9.1. Исходный раствор метрибузина для градуировки (массовая концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г метрибузина, растворяют в 50 - 70 куб. см этилацетата, доводят до метки этим же растворителем, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 2-х месяцев.
<a id="p100147"></a>Градуировочные растворы N 2 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.
<a id="p100148"></a>7.9.2. Раствор N 1 метрибузина для градуировки (массовая концентрация 10 мкг/куб. см).
<a id="p100149"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора метрибузина с концентрацией 100 мкг/куб. см [(п. 7.9.1)](#p100146), доводят до метки этилацетатом, тщательно перемешивают.
<a id="p100150"></a>Раствор хранится в холодильнике не более месяца.
<a id="p100151"></a>7.9.3. Рабочие растворы N 2 - 5 метрибузина для градуировки и внесения (массовая концентрация 0,1 - 1,0 мкг/куб. см).
<a id="p100152"></a>В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,0; 5,0 и 10 куб. см раствора N 1 метрибузина с концентрацией 10 мкг/куб. см [(п. 7.9.2)](#p100148), доводят до метки этилацетатом, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией метрибузина 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно.
<a id="p100153"></a>Растворы хранятся в холодильнике не более месяца.
<a id="p100154"></a>Эти растворы используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено".


### <a id="p100155"></a>7.10. Установление градуировочной характеристики


<a id="p100156"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площадей пиков (мВ х с) от концентрации метрибузина в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки N 2 - 5 [(п. 7.9.3)](#p100151).
<a id="p100157"></a>В испаритель хроматографа вводят 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.3.1](#p100181) или [9.3.2](#p100190). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площади пиков (в мВ х с) метрибузина.
<a id="p100158"></a>По полученным данным строят градуировочную характеристику.
<a id="p100159"></a>Градуировочную характеристику проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значение площадей отличается более чем на 11% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.


## 8. <a id="p100160"></a>Отбор и хранение проб


<a id="p100161"></a>Пробы органов, тканей, кала и мочи отбирают в лабораторных условиях, герметично упаковывают в полипропиленовые или стеклянные емкости с притертыми крышками, замораживают и хранят в морозильной камере при температуре ниже -18 °С.
<a id="p100162"></a>Непосредственно перед анализом образцы органов, тканей, а также кала тщательно измельчают с использованием гомогенизатора.


## 9. <a id="p100163"></a>Выполнение определения



### <a id="p100164"></a>9.1. Экстракция



##### <a id="p100165"></a>9.1.1 Печень, почки, семенники, головной мозг, кал

<a id="p100166"></a>Образец печени, почек, семенников и кала массой 5 г, головного мозга массой 2 г гомогенизируют в сосуде для гомогенизации с порцией ацетонитрила объемом 5 - 7 куб. см. Гомогенизированный образец с порциями ацетонитрила по 10 - 15 куб. см переносят в коническую колбу вместимостью 100 - 150 куб. см (общий объем ацетонитрила с учетом растворителя, взятого для гомогенизации и обмыва сосуда для гомогенизации, - 70 куб. см), дополнительно тщательно перемешивают и помещают на 1 ч в холодильник (4 - 6 °С). Затем надосадочную жидкость фильтруют через бумажный фильтр, помещенный в конусную воронку, в делительную воронку вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 30 куб. см ацетонитрила, предварительно ополоснув растворителем колбу, в которой находилась проба, объединяя фильтрат с основной порцией в делительной воронке. Затем в делительную воронку вносят 20 куб. см гексана, насыщенного ацетонитрилом, интенсивно встряхивают в течение 1 мин., после полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническую колбу на 100 - 150 куб. см, верхнюю гексановую промывку отбрасывают. Ацетонитрильный раствор возвращают в делительную воронку и операцию промывки повторяют новой порцией гексана, насыщенного ацетонитрилом, объемом 20 куб. см. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильный раствор переносят в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 куб. см, вносят в нее 10 куб. см деионизованной воды, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 35 - 40 °С до объема около 20 куб. см, внимательно следя за процессом, не допуская переброса жидкости при вспенивании, и очищают по [п. 9.2](#p100169).

##### <a id="p100167"></a>9.1.2 Моча

<a id="p100168"></a>Пробу мочи объемом 20 куб. см помещают в коническую колбу вместимостью 100 - 150 куб. см, вносят 50 куб. см ацетонитрила, перемешивают и помещают на 1 час в холодильник (4 - 6 °С). Затем раствор осторожно переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, после полного расслаивания нижний водный слой отделяют и отбрасывают. В делительную воронку вносят 10 куб. см гексана, насыщенного ацетонитрилом, интенсивно встряхивают в течение 1 мин., после полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническую колбу на 100 - 150 куб. см, верхнюю гексановую промывку отбрасывают. Ацетонитрильный раствор возвращают в делительную воронку и операцию промывки повторяют новой порцией гексана, насыщенного ацетонитрилом, объемом 10 куб. см. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильный раствор переносят в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 куб. см, вносят в нее 10 куб. см деионизованной воды, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 35 - 40 °С до объема около 20 куб. см и очищают по п. 9.2.


### <a id="p100169"></a>9.2. Очистка экстракта



##### <a id="p100170"></a>9.2.1 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и окислением

<a id="p100171"></a>Остаток в колбе, полученный по [п. 9.1.1](#p100165) или [9.1.2](#p100167), с помощью 80 куб. см деионизованной воды переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, колбу дополнительно обмывают 20 куб. см воды, которую также переносят в воронку. Вносят в воронку 10 куб. см насыщенного раствора натрия хлористого, перемешивают и помещают на 1 час в холодильник или на 15 мин. в морозильную камеру. Затем в воронку вносят 2 куб. см 2 М раствора калия гидроксида и 50 куб. см дихлорметана, интенсивно встряхивают в течение 1 мин., после полного разделения фаз нижний дихлорметановый слой переносят в новую делительную воронку вместимостью 250 куб. см. Экстракцию метрибузина повторяют еще дважды порциями дихлорметана объемом 20 куб. см. Для полного разделения фаз содержимое воронки должно отстояться 10 - 15 мин. Следы дихлорметана в водной фазе недопустимы, поскольку это снижает полноту извлечения вещества.
<a id="p100172"></a>В делительную воронку, содержащую объединенные дихлорметановые экстракты, вносят 10 куб. см 2 М раствора калия гидроксида и 5 куб. см 0,1%-ного раствора марганцовокислого калия (при анализе печени объем раствора марганцовокислого калия увеличивают до 6 куб. см), интенсивно встряхивают в течение 3-х мин. Для полного разделения фаз содержимое воронки должно отстояться 10 - 15 мин. Следы дихлорметана в водной фазе недопустимы, поскольку это снижает полноту извлечения вещества. После полного разделения фаз нижний дихлорметановый слой переносят в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 150 куб. см, фильтруя через слой (около 1 см) безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусную воронку диаметром 56 мм. Сульфат натрия на фильтре промывают дополнительной порцией дихлорметана объемом 10 куб. см. Верхний водный слой отбрасывают.
<a id="p100173"></a>Объединенные экстракт и промывку, пропущенные через слой сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С. Дальнейшую очистку на концентрирующем патроне Sep Pak Silica проводят по п. 9.2.2.

##### <a id="p100174"></a>9.2.2 Очистка экстракта на концентрирующем патроне Sep Pak Silica

<a id="p100175"></a>Остаток в колбе, полученный после упаривания по [п. 9.2.1](#p100170), растворяют в 5 куб. см гексана, помещая на 30 - 40 с на ультразвуковую баню, и вносят с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, на концентрирующий патрон Sep Pak Silica (подготовленный по [п. 7.7](#p100139)) со скоростью пропускания раствора 1 - 2 капли в секунду. Колбу ополаскивают 5 куб. см гексана, который также наносят на патрон. После нанесения пробы патрон промывают 3 куб. см смеси гексан - этилацетат (9:1, по объему), элюат отбрасывают. Вещество элюируют с патрона 10 куб. см смеси гексан - этилацетат (8:2, по объему), собирая элюат в круглодонную колбу, упаривают при температуре не выше 35 °С досуха. Остаток растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, вносят 9 куб. см деионизованной воды, помещают на ультразвуковую баню на 45 - 60 с. Дальнейшую очистку на концентрирующем патроне С18 Sep Pak проводят по п. 9.2.3.

##### <a id="p100176"></a>9.2.3 Очистка экстракта на концентрирующем патроне С18 Sep Pak

<a id="p100177"></a>Раствор в колбе, полученный по [п. 9.2.2](#p100174), вносят с помощью медицинского шприца или разряжения, создаваемого водоструйным насосом, на концентрирующий патрон С18 Sep Pak, подготовленный по [п. 7.8](#p100142), со скоростью пропускания раствора 2 капли в секунду, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Патрон дополнительно промывают (скорость 2 капли в секунду) 10 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 3:7 (по объему), также собирая элюат в круглодонную колбу. Объединенный элюат упаривают досуха при температуре не выше 40 °С, для полного удаления следов влаги вносят в колбу порцию ацетонитрила (5 - 7 куб. см) и вновь упаривают.
<a id="p100178"></a>Сухой остаток растворяют в 2 куб. см этилацетата и анализируют содержание метрибузина по п. [п. 9.3.1](#p100181) или [9.3.2](#p100190).


### <a id="p100179"></a>9.3. Условия хроматографирования


<a id="p100180"></a>Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

##### <a id="p100181"></a>9.3.1 Хроматограф газовый, снабженный термоионным детектором.

<a id="p100182"></a>Колонка капиллярная DB-5ms длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.
<a id="p100183"></a>    Температура детектора:  350 °С;
<a id="p100184"></a>                испарителя: 300 °С.
<a id="p100185"></a>Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 100 °С, выдержка 1 мин., нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 220 °С, выдержка 5 мин., нагрев колонки со скоростью 25 градусов в минуту до температуры 270 °С (выдержка 2 мин.).
<a id="p100186"></a>Скорость воздуха 200 куб. см/мин.; водорода 10,5 куб. см/мин.; газа 3 (азот) 30 куб. см/мин.
<a id="p100187"></a>Скорость газа 1 (азот): 35,544 см/с, давление 120 кПа, поток 1,393 куб. см/мин., деление потока 1:5.
<a id="p100188"></a>Хроматографируемый объем: 1 куб. мм.
<a id="p100189"></a>Ориентировочное время удерживания метрибузина: ~ 12,5 мин.

##### <a id="p100190"></a>9.3.2 Газовый хроматограф, снабженный электронозахватным детектором.

<a id="p100191"></a>Колонка капиллярная DB-1701 длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки сорбента 0,5 мкм.
<a id="p100192"></a>    Температура детектора:  300 °С;
<a id="p100193"></a>                испарителя: 280 °С.
<a id="p100194"></a>Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 80 °С, выдержка 1 мин., нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 230 °С, выдержка 1 мин., нагрев колонки со скоростью 20 градусов в минуту до температуры 270 °С (выдержка 1 мин.).
<a id="p100195"></a>Скорость газа 1 (азот): 35,971 куб. см/с, давление 70 кПа, поток 2,015 куб. см/мин.
<a id="p100196"></a>Деление потока 1:2,9.
<a id="p100197"></a>Хроматографируемый объем: 1 куб. мм.
<a id="p100198"></a>Ориентировочное время выхода метрибузина: ~ 16,9 мин.
<a id="p100199"></a>Линейный диапазон детектирования: 0,01 - 0,1 нг.
<a id="p100200"></a>Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площади пиков вещества (в мВ х с), находят среднее значение, с помощью градуировочной характеристики определяют концентрацию метрибузина в хроматографируемом растворе.
<a id="p100201"></a>Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с массовой концентрацией 0,1 мкг/куб. см, разбавляют этилацетатом не более чем в 50 раз. При расчете содержания метрибузина учитывают разбавление.


## 10. <a id="p100202"></a>Обработка результатов анализа


<a id="p100203"></a>Содержание метрибузина в пробе (X, мг/кг, мг/куб. дм) рассчитывают по формуле:

                                    C х V
<a id="p100204"></a>                                X = -----,
                                      m

<a id="p100205"></a>где:
<a id="p100206"></a>C - концентрация метрибузина, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;
<a id="p100207"></a>V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
<a id="p100208"></a>m - масса (объем) анализируемого образца, г (куб. см).


## 11. <a id="p100209"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100210"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

                            2 х |X  - X | х 100
                                  1    2
<a id="p100211"></a>                            ------------------- <= r,                   (1)
                                 (X  + X )
                                   1    2

    где:
    X , X  - результаты параллельных определений, мг/кг (куб. дм);
     1   2
 r - значение предела повторяемости [(табл. 1)](#p100024), при этом r = 2,8 сигма .
                                                                         r
<a id="p100212"></a> При невыполнении [условия (1)](#p100211) выясняют причины превышения предела
повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 12. <a id="p100213"></a>Оформление результатов


<a id="p100214"></a>Результат анализа представляют в виде:

          _
<a id="p100215"></a>         (X +/- ДЕЛЬТА) мг/кг (куб. дм) при вероятности P = 0,95,

    где:
    _
    X   -   среднее   арифметическое  результатов  определений,  признанных
приемлемыми, мг/кг (куб. дм);
    ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг (куб. дм);

                                     дельта х X
<a id="p100216"></a>                            ДЕЛЬТА = ----------,
                                        100

<a id="p100217"></a>где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100024)), %.
<a id="p100218"></a>Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100219"></a>"содержание метрибузина в пробе печени, почек, семенников, кала менее 0,004 мг/кг; головного мозга - менее 0,01 мг/кг; мочи - менее 0,001 мг/куб. дм" <*>.

<a id="p100220"></a>

---

<a id="p100221"></a><*> 0,004 мг/кг - предел обнаружения в печени, почках, семенниках, кале; 0,01 мг/кг - головном мозге; 0,001 мг/куб. дм - моче.


## 13. <a id="p100222"></a>Контроль качества результатов измерений


<a id="p100223"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100224"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100225"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
<a id="p100226"></a>    Величина добавки C  должна удовлетворять условию:
                      д

<a id="p100227"></a>                        C  >= ДЕЛЬТА  _ + ДЕЛЬТА  _ ,
                         д          л,X         л,X'

    где   +/- ДЕЛЬТА  _ (+/- ДЕЛЬТА  _ )   -   характеристика   погрешности
                    л,X            л,X'
(абсолютная погрешность)  результатов  анализа, соответствующая  содержанию
компонента   в   испытуемом   образце   (расчетному   значению   содержания
компонента в образце с добавкой), мг/кг (куб. дм), при этом:

<a id="p100228"></a>                        ДЕЛЬТА  = +/- 0,84 ДЕЛЬТА,
                              л

    где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг (куб. дм);

                                дельта х X
<a id="p100229"></a>                       ДЕЛЬТА = ----------,
                                   100

    где    дельта   -   граница    относительной    погрешности    методики
(показатель   точности    в   соответствии   с   диапазоном    определяемых
концентраций, [табл. 1](#p100024)), %.
<a id="p100230"></a>    Контрольный параметр процедуры (К ) рассчитывают по формуле:
                                     к

                               _    _
<a id="p100231"></a>                          К  = X' - X - C ,
                           к             д

          _   _
    где   X', X, C  - среднее   арифметическое   результатов   параллельных
                  д
определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100209)) содержания компонента в
образце    с    добавкой,   испытуемом    образце,   концентрация   добавки
соответственно, мг/кг (куб. дм);
<a id="p100232"></a>    Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

                             _____________________
                            /     2            2
<a id="p100233"></a>                      К = \/ДЕЛЬТА  _  + ДЕЛЬТА  _.
                                  л,X'         л,X
<a id="p100234"></a>    Проводят  сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
                                                            к
контроля (К).
<a id="p100235"></a>    Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

<a id="p100236"></a>                              |К | <= К,                                (2)
                                к

процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100237"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100236) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

#### <a id="p100238"></a>13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

<a id="p100239"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

                            2 х |X  - X | х 100
                                  1    2
<a id="p100240"></a>                            ------------------- <= R,                   (3)
                                 (X  + X )
                                   1    2

    где:
    X ,  X  - результаты   измерений  в  двух  разных  лабораториях,  мг/кг
     1    2
(куб. дм);
    R - предел воспроизводимости (в  соответствии с диапазоном определяемых

<div align="center">

концентраций, [табл. 1](#p100024)), %.

</div>



## 14. <a id="p100241"></a>Разработчики


<a id="p100242"></a>ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора.



<a id="p100243"></a>

---