МУК 4.1.2692-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций 3-[3-(4-бром-1,1-бифенил-4-ил)3-гидрокси-1-фенилпропил]-4-гидрокси-2H-1-бензопиран-2-он (бромадиолон) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания

(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["МУК 4.1.1352-03"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1352-03" "МУК 4.1.1352-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций 3-[3-(4-бром-1,1-бифенил-4-ил)-3-гидрокси-1-фенилпропил]-4-гидрокси-2Н-1-бензопиран-2-он "
  n1["МУК 4.1.2692-10"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2692-10" "МУК 4.1.2692-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций 3-[3-(4-бром-1,1-бифенил-4-ил)3-гидрокси-1-фенилпропил]-4-гидрокси-2H-1-бензопиран-2-он ("
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

2 августа 2010 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ИЗМЕРЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ 3-[3-(4-БРОМ-1,1-БИФЕНИЛ-4-ИЛ)3-ГИДРОКСИ-1-ФЕНИЛПРОПИЛ]- 4-ГИДРОКСИ-2H-1-БЕНЗОПИРАН-2-ОН (БРОМАДИОЛОН) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.2692-10

1 октября 2010 года

<*> Методика разработана взамен МУК 4.1.1352-03, утв. 16.05.2003 Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко.

1. Методические указания подготовлены коллективом авторов Научно-исследовательского института медицины труда РАМН.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10 июня 2010 г. № 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.

4. Введены в действие с 1 октября 2010 г.

5. Введены впервые.

1. Общие положения

Настоящие методические указания устанавливают методику количественного химического анализа воздуха рабочей зоны для определения в нем бромадиолона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в диапазоне массовых концентраций 0,005 — 0,05 мг/куб. м. Погрешность измерений соответствует характеристикам, приведенным в табл. 1.

Таблица 1

ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОГРЕШНОСТИ МЕТОДИКИ ВЫПОЛНЕНИЯ ИЗМЕРЕНИЙ

Методические указания аттестованы в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 с изм. № 1, 2 и ГОСТ Р ИСО 5725-2002.

Аттестация МВИ проведена во ФГУП Всероссийском научно-исследовательском институте метрологической службы Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии. Свидетельство № 67-09.

2. Характеристика вещества

2.1 Структурная формула (не приводится).

2.2 Эмпирическая формула C H BrO .

                           30 23   4

2.3 Молекулярная масса 527,44.

2.4 Регистрационный номер CAS 28772-56-7.

2.5 Физико-химические свойства

Бромадиолон — белое кристаллическое вещество, температура плавления 200 — 210 °C, нерастворим в воде, гексане, эфире, хорошо растворим в ацетоне, хлороформе, этаноле.

Агрегатное состояние в воздухе — аэрозоль.

2.6 Токсикологическая характеристика

Бромадиолон является антикоагулянтом (нарушает свертываемость крови, повышает проницаемость сосудов).

Предельно допустимая концентрация (ПДК) бромадиолона в воздухе рабочей зоны 0,01 мг/куб. м. Первый класс опасности.

3. Метрологические характеристики методики выполнения измерений

При соблюдении всех регламентных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности измерений (и ее составляющих) не превышает значений, приведенных в табл. 1.

4. Метод измерений

Измерение массовой концентрации бромадиолона выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектированием.

Измерение проводят при длине волны 280 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерений содержания бромадиолона в анализируемом объеме пробы — 0,01 мкг.

Нижний предел измерения концентрации бромадиолона в воздухе — 0,005 мг/куб. м (при отборе 80 куб. дм воздуха).

Измерению не мешают сопутствующие вещества: триэтаноламин, триэтиленгликоль, а также сахар, мука.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Хроматограф жидкостный фирмы «Waters», США, модель М-996 с градиентной системой элюирования, автосэмплером и УФ-детектором 190 — 400 нм типа «диодная матрица».

Колонка аналитическая, из нержавеющей стали, длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная Separon C-18 (размер частиц 5 мкм)

Аспирационное устройство ПУ 4Э ЗАО «Химко» № 14531-03 в Государственном реестре средств измерений

Весы лабораторные общего назначения модели ВЛА-200 с наибольшим пределом взвешивания 200 г ГОСТ 24104-2001

Колбы мерные 2-25-2, 2-100-2 ГОСТ 1770-74

Пипетки градуированные 1-1-2-1, 1-1-2-2, 1-1-2-5, 1-1-2-10 ГОСТ 29227-91

Цилиндры мерные 3-100 ГОСТ 1770-74

Пробирки мерные с притертыми пробками П-2-10-0,1ХС ГОСТ 1770-74

Ротационный испаритель ИР-1М с набором колб              ТУ 25-11-917-76
Фильтродержатель                                         ТУ 95-72-05-77

Фильтры бумажные обеззоленные «синяя лента», диаметр 5,5 см ТУ 6-09-1678-77

Бюксы стеклянные СВ 19/9, СВ 24/10 ГОСТ 25336-82

5.2. Реактивы

Бромадиолон — продукт фирмы «Cipa Agrochimica», Италия, с содержанием основного вещества не менее 95,0%, сертификационный № 02990531

Ацетонитрил квалификации ос.ч. (для ВЭЖХ UV 200 нм) ТУ 6-09-14-2167-84

О-фосфорная кислота квалификации х.ч., 85% ГОСТ 6552-80

Спирт метиловый, х.ч.                                    ГОСТ 6995-67
Бидистиллированная вода                                  ТУ 6-09-2502-77
Хлороформ, ч.                                            ТУ 6-09-4263-76

Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в разделе 5.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

6.5. Обучение работающих безопасности труда по ГОСТ 12.0.004-90.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц, имеющих высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедших обучение и владеющих техникой хроматографического анализа, освоивших метод анализа в процессе тренировки и уложившихся в нормативы контроля.

8. Условия выполнения измерений

8.1 Процессы приготовления растворов и подготовку проб к анализу проводят в следующих условиях:

• температура воздуха (20 +/- 5) °C,
• атмосферное давление (84 — 106) кПа,
• относительная влажность воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовку посуды, приготовление растворов, подготовку жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1. Подготовка посуды

Стеклянную посуду ополаскивают ацетоном для удаления органических примесей, несколько раз промывают водопроводной водой, заливают хромовой смесью и выдерживают один час. После этого посуду извлекают из хромовой смеси, ополаскивают несколько раз водопроводной, а затем дистиллированной водой и сушат в сушильном шкафу. Чистую посуду для анализа хранят в закрытом виде.

9.2. Приготовление растворов

9.2.1. Основной стандартный раствор бромадиолона в хлороформе с массовой концентрацией 1 мг/куб. см готовят растворением (0,0263 +/- 0,0001) г бромадиолона (с учетом % содержания основного вещества) в мерной колбе вместимостью 25 куб. см. Раствор устойчив в течение трех дней при хранении в холодильнике.

9.2.2. Рабочие стандартные растворы бромадиолона № 1, 2, 3, 4, 5 и 6 с массовой концентрацией 40,0; 80,0; 160,0; 240,0; 320,0 и 400,0 мкг/куб. см готовят разбавлением основного стандартного раствора бромадиолона хлороформом в мерных колбах вместимостью 25 куб. см. Объем основного стандартного раствора (V, куб. см), необходимый для приготовления рабочих стандартных растворов бромадиолона № 1, 2, 3, 4, 5 и 6, рассчитывают по формуле (1):

                                   C  x V
                                    1    к
                               V = -------,                             (1)

                                  X

где:

X — массовая концентрация бромадиолона в основном стандартном растворе, мкг/куб. см;

    V  - объем мерной колбы градуировочного раствора, V  = 25 куб. см;
     к                                                 к
    C   -  рабочий  стандартный  раствор  (N 1, 2, 3, 4, 5 и 6  с  массовой

 1

концентрацией 40,0; 80,0; 160,0; 240,0; 320,0 и 400,0 мкг/куб. см).

Растворы устойчивы в течение трех дней при хранении в холодильнике.

9.2.3 Приготовление элюента

Состав элюента: А — ацетонитрил:метанол = 1:1

Элюент хранят в герметичной стеклянной посуде в холодильнике в течение месяца.

Градиент В — ортофосфорная кислота 0,2%-ная (по объему), готовят в мерной колбе вместимостью 100 куб. см следующим образом: к 99,8 куб. см бидистиллированной воды приливают 0,2 куб. см ортофосфорной кислоты.

9.3. Подготовка прибора

Подготовку жидкостного хроматографа проводят в соответствии с руководством по эксплуатации.

9.4. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пиков (приборные единицы) от содержания бромадиолона в градуировочном объеме раствора, устанавливают по методу абсолютной калибровки по шести сериям растворов, по пять параллельных определений в каждой серии, согласно таблице 2 следующим образом: на фильтры «синяя лента», помещенные в стаканчики, наносят по 0,1 куб. см каждого стандартного раствора с массовой концентрацией 40,0; 80,0; 160,0; 240,0; 320,0 и 400,0 мкг/куб. см, что соответствует 4,0 мкг, 8,0 мкг, 16,0 мкг, 24,0 мкг, 32,0 мкг и 40,0 мкг. После чего фильтры подсушивают при комнатной температуре, затем заливают 5,0 куб. см хлороформа и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр отжимают, раствор сливают в пробирку, а фильтр повторно заливают 5,0 куб. см хлороформа и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр отжимают. Экстракты объединяют. Объем растворов доводят до 10,0 куб. см хлороформом. Инжектируют в хроматограф по 0,025 куб. см каждого из градуировочных растворов.

Градуировочные растворы устойчивы в течение суток при хранении в холодильнике.

Инжектируют в хроматограф по 0,025 куб. см каждого из градуировочных растворов.

По полученным данным строят градуировочную характеристику зависимости площади пика (усл. ед. x c) от содержания бромадиолона в хроматографируемом объеме (мкг).

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

    Температура термостата колонки                  20 °C
    Градиент В                                      от 40 до 10% за 10 мин.
    Скорость подачи элюента                         0,5 куб. см/мин.
    Длина волны УФ-детектора                        280 нм
    Объем вводимой пробы                            0,025 куб. см
    Время удерживания бромадиолона                  10 мин. 12 сек.

9.5. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа. Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с прописью методики.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие (2):

                           |S    - S  |
                             изм    гр
                           ------------ <= K  ,                         (2)
                                 S          гр

                              гр

где:

    S   , S   - значение площади пика (усл. ед. x c) бромадиолона в образце
     изм   гр
для  контроля,  измеренное  и  найденное  по  градуировочной характеристике

соответственно;

    K   - норматив контроля, K   = 0,5 x дельта,
     гр                       гр

где +/- дельта — границы относительной погрешности, % (таблица 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики ее устанавливают заново.

9.6. Отбор проб воздуха

Отбор проб проводят с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны» и Руководства Р 2.2.2006-05 (прилож. 9) «Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны», раздел 2 «Контроль соответствия максимальным ПДК».

Воздух с объемным расходом 10 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр «синяя лента», помещенный в фильтродержатель.

Для измерения 1/2 ПДК бромадиолона необходимо отобрать 80 куб. дм воздуха. Фильтры с отобранной пробой хранят в бюксах в холодильнике в течение недели.

10. Выполнение измерений

После отбора пробы фильтр помещают в химический бюкс вместимостью 25 куб. см и добавляют 5,0 куб. см хлороформа, помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 15 мин., затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в другой бюкс. Фильтр повторно обрабатывают 5,0 куб. см хлороформа, снова тщательно отжимают и удаляют. Экстракты объединяют и переносят в остродонную колбу со шлифом. Колбу присоединяют к ротационному испарителю и упаривают растворитель при температуре не выше 50 °C досуха. Сухой остаток в колбе растворяют в 1,0 куб. см хлороформа. Для анализа отбирают 0,025 куб. см полученного раствора. Хроматографический анализ выполняют в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов.

Регистрируют не менее двух хроматограмм для каждой пробы.

Количественное определение бромадиолона (в мкг) в анализируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенной градуировочной зависимости.

11. Обработка результатов измерений

11.1 Массовую концентрацию бромадиолона в воздухе рабочей зоны C (мг/куб. м) вычисляют по формуле (3):

                                 а x В

C = -------, (3) б x V 20

где:

а — содержание бромадиолона в анализируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

В — общий объем раствора пробы, куб. см (1 куб. см);

б — хроматографируемый объем раствора пробы, куб. см;

V — объем воздуха, отобранный для анализа (куб. дм) и приведенный к 20 стандартным условиям (см. Прилож. 1);

11.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости (4):

                          2 x |C  - C | x 100
                                1    2
                          ------------------- <= r,                     (4)
                               (C  + C )
                                 1    2

где:

    C , C   - результаты  параллельных  определений  массовой  концентрации
     1   2

бромадиолона в воздухе рабочей зоны, мг/куб. м;

r — значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие (4) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.

12. Оформление результатов измерения

Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

              _                     _

C +/- 0,01 x дельта x C, при P = 0,95,

где: _

C — среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми по 11.2, мг/куб. м;

+/- дельта — границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

В случае, если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: «массовая концентрация бромадиолона менее 0,005 мг/куб. м (более 0,05 мг/куб. м)».

13. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

13.1 Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

13.2. Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

    13.3.  Приемлемость   результатов   измерений,   полученных   в    двух
лабораториях, оценивают сравнением разности этих результатов с  критической
разностью CD     по формуле (5):

        0,95

                    2 x |C    - C   | x 100
                          ср1    ср2
                    ----------------------- <= CD    ,                  (5)
                         (C    + C   )           0,95
                           ср1    ср2

где:

    C   , C     -  средние  значения  массовой  концентрации,  полученные в
     ср1   ср2

первой и второй лабораториях, мг/куб. м;

CD — значение критической разности, % (табл. 1). 0,95

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют VER 4/1/ процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6 (5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6 (5.3.4).

14. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6 и показателя правильности по 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.

Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

15. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 2 часа (включая отбор проб).

Методические указания разработаны НИИ медицины труда РАМН.

Приведение объема воздуха к стандартным условиям при температуре 293 K (20 °C) и атмосферном давлении 101,33 кПа (760 мм рт. ст.):

                               V  x 293 x P
                                t

                          V   = ------------------,
                           20   (273 + t) x 101,33

где:

V — объем воздуха, отобранный для анализа, куб. дм; t

P — барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);

t — температура воздуха в месте отбора пробы, °C.

Для удобства расчета V следует пользоваться таблицей коэффициентов 20 (Прилож. 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить V t на соответствующий коэффициент.

Атропина сульфат

Бродифакум

Бромадиолон

Гексаметилентетрамин

Диоксид циркония

Пиретрум

Ритонавир

Ставудин

Уротропин

ЭП

Этилпрокситол