МУК 4.1.2691-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств ацетамиприда в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 1 октября 2010 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
2 августа 2010 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АЦЕТАМИПРИДА В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.2691-10
1 октября 2010 года
1. Разработаны Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.10 № 1).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.
3. Введены в действие с 1 октября 2010 г.
Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовых концентраций ацетамиприда в семенах и масле рапса в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.
(E)-N -[(6-хлор-3-пиридил)метил]-N -циано-N -метилацетамиприд (IUPAC).
Структурная формула (не приводится).
C H ClN . 10 11 4
Бесцветное кристаллическое вещество. Температура плавления: 98,9 °C. -3
Давление паров при 25 °C < 1 x 10 мПа. Коэффициент распределения н-октанол-вода K log P = 0,80 (25 °C). Хорошо растворим в ацетоне,
ow
метаноле, этаноле, дихлорметане, хлороформе, ацетонитриле и тетрагидрофуране, растворимость в н-гексане — 6,5 мг/куб. дм. Растворимость
в воде при 25 °C - 4,25 г/куб. дм. Стабилен в буферных растворах при pH 4, 5, 7, медленно разлагается при pH 9. Устойчив к воздействию солнечного
света. Является слабым основанием, pKa — 0,7.
Краткая токсикологическая характеристика:
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — 217 мг/кг (самцы), 50 146 мг/кг (самки); острая дермальная токсичность (LD ) для 50 крыс > 2000 мг/кг, острая ингаляционная токсичность (LK ) для 50 крыс > 290 мг/куб. м (4 часа).
Ацетамиприд — инсектицид системного, контактного и кишечного действия из группы неоникотиноидов, эффективно подавляет развитие тли, белокрылки, клопов, трипсов и жесткокрылых в посевах многих культур, особенно овощных и плодовых.
ВМДУ ацетамиприда в семенах и масле рапса — 0,01 мг/кг.
1. Метрологические характеристики
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Семена рапса | от 0,01 до 0,1 | 50 | 5,0 | 14 | 17 |
| Масло рапса | от 0,01 до 0,1 | 50 | 5,8 | 16 | 19 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в таблице 2.
| Анализируемый | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| объект | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Полнота извлечения вещества, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % |
| Семена рапса | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 76,3% | 4,3 | 2,4 |
| Масло рапса | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 80,0% | 4,8 | 2,7 |
2. Метод измерений
Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции из анализируемых проб семян и масла ацетонитрилом, последовательной очистки экстрактов, перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, на колонке с силикагелем, затем окислением и вновь перераспределением между несмешивающимися фазами.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны,
фирмы «Waters» Номер Госреестра 15311-08
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104-2001
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,005 г ГОСТ 24104-2001
Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-500-2, 2-1000-2 ГОСТ 1770-74
Микропипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 0,2 куб. см ГОСТ 29227-91
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см ГОСТ 29227-91
Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой вместимостью 5 и 10 куб. см ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные 2-го класса точности
вместимостью 25, 50, 100, 250, 500 и
1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Ацетамиприд, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 99,0% (CAS No. 135410-20-7, GAB code 20061236, Lot number 50114), аттестованное значение погрешности +/- 1,0%
Ацетонитрил для хроматографии, х.ч. ТУ 6-09-14-2167-84
Вода деионизованная ГОСТ 6709-72 н-Гексан, для ВЭЖХ ТУ 6-09-06-657-84
Калий углекислый (карбонат калия, поташ), прокаленный х.ч. ГОСТ 4221-76
Калий марганцовокислый (перманганат калия), х.ч. ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, насыщенный водный раствор, х.ч. ГОСТ 450-77
Кислота серная концентрированная, х.ч. ГОСТ 4204-77
Метилен хлористый (дихлорметан), х.ч. ГОСТ 12794-80
Натрий сернокислый (сульфат натрия), безводный, х.ч. ГОСТ 4166-78
Натрий углекислый (карбонат натрия), 5% водный раствор х.ч. ГОСТ 83-79
Пропанол-2 (изопропиловый спирт, изопропанол), х.ч. ТУ 6-09-4522-77
Силикагель для колоночной хроматографии КСК, измельченный и рассеянный, 0,1 — 0,25 мм ГОСТ 3956-76
Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора) ТУ 6-09-4173-85
Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), х.ч. ГОСТ 22300-76
Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих выполнения п. 7.1 (очистка растворителей).
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с ТУ 64-1-2851-78
Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)
Бумага индикаторная универсальная pH 1 — 10 ТУ 6-09-1181-89
Бумажные фильтры «красная лента», обеззоленные или фильтры из хроматографической бумаги
Ватман 3ММ ТУ 2642-001-05015242-07
Воронка делительная вместимостью 250 и 500 куб. см ГОСТ 9737-93
Воронки конусные диаметром 30 — 37 и 60 мм ГОСТ 25336-82
Груша резиновая ТУ 9398-005-0576-9082-2003
Колбы конические (плоскодонные) вместимостью 100, 250, 400 — 500 куб. см ГОСТ 23932-90
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10, 150, 250 и 1000 куб. см ГОСТ 9737-93
Колонка стеклянная для препаративной хроматографии, длиной 25 см, внутренним диаметром 10 — 12 мм
Мельница лабораторная электрическая
Мембранные фильтры микропористые, марки ММК, капроновые, диаметром 50 мм, размер пор 0,45 мкм ТУ 9471-002-10471723-2003
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 25336-82
Стаканы химические, вместимостью 100, 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Ректификационная колонна с числом теоретических колонок 30
Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария
Установка для перегонки растворителей
Холодильник водяной обратный ГОСТ 25336-82
Хроматографическая колонка стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Zorbax SB C8, зернением 5 мкм
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50 — 100 куб. мм
Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004-90.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка препаративной колонки для очистки экстрактов, проверка хроматографического поведения вещества на ней.
7.1. Очистка органических растворителей
7.1.1 Ацетонитрил
Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.
Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом калия.
7.1.3 Хлористый метилен и этилацетат
Каждый растворитель промывают последовательно 5%-ным водным раствором углекислого натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным углекислым калием и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.
7.2. Приготовление 4 № раствора серной кислоты
В мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают 200 — 300 куб. см деионизованной воды, вносят 56 куб. см концентрированной серной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.
7.3. Приготовление 0,1%-ного раствора марганцовокислого калия
В мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают 0,5 г марганцовокислого калия, доводят водой до метки, перемешивают.
7.4. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 300 куб. см ацетонитрила, вносят 700 куб. см деионизованной воды, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.
7.5. Кондиционирование хроматографической колонки
Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.4) при скорости подачи растворителя 1 куб. см/мин. не менее 2-х часов до установления стабильной базовой линии.
7.6 Приготовление градуировочных растворов
7.6.1. Исходный раствор ацетамиприда для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г ацетамиприда, растворяют в 50 — 70 куб. см ацетонитрила, доводят до метки этим же растворителем, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.
Градуировочные растворы № 1 — 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.
7.6.2. Растворы № 1 ацетамиприда для градуировки (концентрация 5 мкг/куб. см).
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,5 куб. см исходного раствора ацетамиприда с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.6.1), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают.
Раствор хранится в холодильнике не более месяца.
7.6.3. Рабочие растворы № 2 — 5 ацетамиприда для градуировки (концентрация 0,05 — 0,5 мкг/куб. см).
В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0, 2,0, 5,0 и 10 куб. см раствора № 1 ацетамиприда с концентрацией 5 мкг/куб. см (п. 7.6.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.4, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 5 с концентрацией ацетамиприда 0,05, 0,1, 0,25 и 0,5 мкг/куб. см, соответственно.
Растворы хранятся в холодильнике не более 5-ти дней.
7.7. Приготовление растворов внесения для оценки полноты извлечения ацетамиприда из образцов
7.7.1. Исходный раствор (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г ацетамиприда, растворяют в 50 — 70 куб. см изопропилового спирта, доводят им же до метки, тщательно перемешивают.
7.7.2. Основной раствор ацетамиприда для внесения (концентрация 10 мкг/куб. см).
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10,0 куб. см исходного раствора ацетамиприда с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.7.1), доводят до метки изопропанолом, тщательно перемешивают.
Раствор хранится в холодильнике не более месяца.
Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено».
7.8. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площадей пиков (мкВ x сек.) от концентрации ацетамиприда в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки № 2 — 5.
В инжектор хроматографа вводят 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3.1. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.
Устанавливают площади пиков (в мкВ x сек.) ацетамиприда.
Градуировочную характеристику проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значение площадей отличается более чем на 10% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.
7.9. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстрактов
Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 10 — 12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 30 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают смесями гексан-этилацетат в объемном соотношении 1:9, затем 1:3, порциями по 30 куб. см, скорость прохождения растворителя 1 — 2 капли в секунду. Колонка готова к работе.
7.10. Проверка хроматографического поведения ацетамиприда на колонке с силикагелем
В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,2 куб. см раствора № 1 ацетамиприда с концентрацией 5 мкг/куб. см (п. 7.6.2), упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Сухой остаток растворяют в 5 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:3, по объему), помещая на ультразвуковую баню на 30 — 40 сек., и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.9. Колбу обмывают дважды этой же смесью растворителей, порциями по 5 куб. см, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку — 1 - 2 капли в сек. Промывают колонку 90 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:3, по объему), элюаты отбрасывают.
Затем колонку промывают 100 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:9, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в сек. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 2 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ, анализируют содержание ацетамиприда по п. 9.3.1.
Фракции, содержащие ацетамиприд, объединяют и вновь анализируют.
Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.
Примечание: Проверку хроматографического поведения ацетамиприда следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
8. Отбор и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТами 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», 10583-76 «Рапс. Требования при заготовках и поставках», 52062-2003 «Масло растительное. Правила приемки и методы отбора проб», 8988-2002 «Масло рапсовое. Технические условия», «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (N 2051-79 от 21.08.79)».
Семена подсушивают в темноте до постоянного веса и хранят в тканевых мешочках в сухом, защищенном от света месте при комнатной температуре не более 6-ти месяцев. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °C.
Пробы масла (помещенные в стеклянные флаконы) хранят в холодильнике в темноте.
Перед анализом образцы семян измельчают.
9. Выполнение определения
9.1. Семена рапса
9.1.1 Экстракция
Образец измельченных семян массой 10 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, вносят 50 куб. см ацетонитрила и помещают на встряхиватель на 1 час. Полученный экстракт (надосадочная жидкость) фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через бумажный фильтр «красная лента». Осадок возвращают в коническую колбу и повторяют экстракцию дополнительной порцией ацетонитрила объемом 30 куб. см, выдерживая на встряхивателе 20 мин. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через бумажный фильтр «красная лента», осадок на фильтре промывают 10 куб. см ацетонитрила. Объединенный отфильтрованный экстракт подвергают очистке по п. 9.1.2.
9.1.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
Объединенный отфильтрованный экстракт, полученный по п. 9.1.1 или 9.2.1, переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, добавляют 30 куб. см гексана (насыщенного ацетонитрилом), интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническую колбу. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильную фазу вновь переносят в делительную воронку и повторяют операцию промывки, используя 25 куб. см гексана (насыщенного ацетонитрилом). Ацетонитрильный раствор переносят в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см, упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C и подвергают очистке на колонке с силикагелем по п. 9.1.3.
9.1.3 Очистка экстракта на колонке с силикагелем
Остаток, полученный по п. 9.1.2, находящийся в круглодонной колбе, растворяют в 5 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:3, по объему), помещая на ультразвуковую баню на 1 мин. Затем раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.9. Колбу обмывают дважды смесью гексан-этилацетат (1:3, по объему) порциями по 5 куб. см, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку — 1 - 2 капли в сек. Промывают колонку 90 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:3, по объему), элюат отбрасывают.
Ацетамиприд элюируют с колонки 100 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:9, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в сек., собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см, раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °C, подвергают очистке окислением и перераспределением в системе несмешивающихся растворителей по п. 9.1.4.
9.1.4 Очистка экстракта окислением и перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
Остаток в колбе, полученный после упаривания по п. 9.1.3, растворяют в 10 куб. см ацетонитрила, переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, вносят в воронку 30 куб. см деионизованной воды, предварительно ополоснув ими колбу, где находилась проба, колбу дополнительно обмывают 20 куб. см воды, которую также переносят в воронку. Вносят в воронку 10 куб. см 4 № раствора серной кислоты, доводя pH до 1 — 2 (контроль по индикаторной бумаге).
Добавляют в воронку 10 куб. см 0,1%-ного водного раствора марганцовокислого калия (если раствор при перемешивании обесцвечивается, добавляют дополнительно 2 — 3 куб. см 0,1%-ного водного раствора марганцовокислого калия), встряхивают 1 мин. Затем в делительную воронку с водным раствором вносят 15 куб. см дихлорметана, интенсивно встряхивают в течение 1 мин, после полного разделения фаз нижний дихлорметановый слой переносят в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 150 куб. см, фильтруя через слой безводного сульфата натрия (толщиной около 1 см), помещенный на бумажном фильтре в химической воронке. Экстракцию ацетамиприда повторяют еще дважды порциями дихлорметана объемом 15, затем 10 куб. см. Для полного разделения фаз содержимое воронки должно отстояться 10 — 15 мин. Следы дихлорметана в водной фазе недопустимы, поскольку это снижает полноту извлечения вещества.
Объединенный дихлорметановый экстракт, пропущенный через слой сульфата натрия, упаривают, остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы, анализируют содержание ацетамиприда по п. 9.3.1.
9.2. Масло рапса
9.2.1 Экстракция
Образец масла массой 10 г помещают в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, растворяют его в 50 куб. см гексана, вносят 30 куб. см ацетонитрила (насыщенного гексаном) и интенсивно встряхивают в течение 5 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой осторожно декантируют через бумажный фильтр, помещенный в конусную воронку, в коническую колбу вместимостью 250 куб. см. Экстракцию повторяют дважды дополнительными порциями ацетонитрила (насыщенного гексаном) объемом 20 куб. см. Объединенный отфильтрованный экстракт подвергают очистке по п. 9.1.2, 9.1.3, затем 9.1.4.
Условия хроматографирования
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны.
Хроматографическая колонка стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Zorbax SB C8, зернением 5 мкм.
Температура колонки: комнатная.
Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (30:70, по объему).
Скорость потока элюента: 1,0 куб. см/мин.
Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.
Ориентировочное время выхода ацетамиприда: 8,4 — 8,7 мин.
Линейный диапазон детектирования 1 — 10 нг.
Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площади пиков (в мкВ x сек.) вещества, находят среднее значение, с помощью градуировочной характеристики определяют концентрацию ацетамиприда в хроматографируемом растворе.
Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 0,5 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой, приготовленной по п. 7.4, не более чем в 50 раз.
10. Обработка результатов анализа
Содержание ацетамиприда в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
C x V
C — концентрация ацетамиприда, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m — масса анализируемого образца, г.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг; 1 2
r — значение предела повторяемости (таблица 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности P = 0,95,
X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание ацетамиприда в пробе менее 0,01 мг/кг» <*>.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок. Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C >= ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X'
+/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности (абсолютная л,X л,X' погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с
добавкой), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
Контрольный параметр процедуры (К ) рассчитывают по формуле: к
_ _ К = X' - X - C , к д _ _ где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R)
2 x |X - X | x 100
1 2
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг; 1 2 R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном определяемых
концентраций, таблица 1), %.
14. Разработчики
ФГУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора.