---
title: "\"МУК 4.1.2688-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств азоксистробина в зеленой массе, семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.2688-10"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2688-10"
---

## "МУК 4.1.2688-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств азоксистробина в зеленой массе, семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.2688-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств азоксистробина в зеленой массе, семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 октября 2010 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

2 августа 2010 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АЗОКСИСТРОБИНА**
**В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ**
**ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.2688-10**

<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

1 октября 2010 года

1. <a id="p100006"></a>Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийского НИИ защиты растений.
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 N 1).
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены в действие с 1 октября 2010 г.
5. <a id="p100010"></a>Введены впервые.

<a id="p100011"></a>Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количеств азоксистробина в семенах и масле рапса в диапазоне концентраций 0,02 - 0,2 мг/кг.
<a id="p100012"></a>Действующее вещество: Азоксистробин.
<a id="p100013"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100014"></a>Молекулярная масса: 403,4.
<a id="p100015"></a>    Брутто формула: C  H  N O .
                     22 17 3 5
<a id="p100016"></a>Метил(Е)-2-{2-[6-(2-цианофенокси)пиримидин-4-илокси]фенил}-3-метоксиакрилат (IUPAC).
<a id="p100017"></a>Химически чистое вещество представляет собой бесцветный кристаллический порошок без запаха.
<a id="p100018"></a>Температура плавления 116 °C.
                          -7
<a id="p100019"></a>    Давление пара 1,1 x 10   мРа.
<a id="p100020"></a>    Коэффициент  распределения  в  системе  н-октанол-вода   K   lg P = 2,5
                                                              ow
(20 °C).
<a id="p100021"></a>Растворимость в воде 6 мг/куб. дм.
<a id="p100022"></a>Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, 20 °C): дихлорметан - 400, ацетонитрил - 340, этилацетат - 130, ацетон - 86, толуол - 55, метанол - 20, н-октанол - 1,40.
<a id="p100023"></a>    Гидролитически  стабилен.  Фотолиз  протекает с образованием Z-изомера.
Для водных растворов DT   составляет две недели.
                       50
<a id="p100024"></a>    Краткая  токсикологическая  характеристика: острая оральная токсичность
для крыс  и  мышей:  LD    >  5000 мг/кг;  дермальная  -  LD   > 2000 мг/кг
                       50                                   50
(крысы),  ингаляционная -  LC    0,69  -  0,96  мг/куб. дм  (интраназально,
                             50
4 часа,  крысы).  Не обладает генотоксичным, канцерогенным и нейротоксичным
эффектами.  Может  вызвать  слабое  раздражение  при  попадании на кожу или
слизистую оболочку глаз.
<a id="p100025"></a>Область применения: фунгицид системного и контактного действия с длительным защитным эффектом. Ингибирует образование спор и мицеллярный рост. Эффективен против широкого набора патогенов, в том числе возбудителей ложной и настоящей мучнистой росы.
<a id="p100026"></a>В России для Азоксистробина установлены следующие гигиенические нормативы:
- <a id="p100027"></a>ПДК в воде - 0,01 мг/куб. дм;
- <a id="p100028"></a>ПДК в почве - 0,4 мг/кг;
- <a id="p100029"></a>МДУ в винограде, огурцах, томатах - 0,2 мг/кг;
- <a id="p100030"></a>ВМДУ в зерне хлебных злаков - 0,2 мг/кг.
<a id="p100031"></a>R-230310 - Z-геометрический изомер Азоксистробина.
<a id="p100032"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100033"></a>Метил(2)-2-{2-[6-(2-цианофенокси)-пиримидин-4-илокси]фенил}-3-метоксиакрилат (IUPAC).
<a id="p100034"></a>Химически чистое вещество представляет собой кристаллический порошок желтого цвета.
<a id="p100035"></a>По физико-химическим свойствам R-230310 близок к Азоксистробину.

1. <a id="p100036"></a>Метрологическая характеристика метода

<a id="p100037"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100038"></a>Таблица 1

<a id="p100039"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ**


| Объект анализа | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Норматив точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, % | Относительное стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| Семена рапса | 0,02 - 0,10 0,10 - 0,20 | <= 50 <= 25 | 5 3 | 14 8 | 42 25 |
| Зеленая масса рапса | 0,02 - 0,10 0,10 - 0,20 | <= 50 <= 25 | 5 3 | 14 8 | 42 25 |
| Масло рапса | 0,02 - 0,10 0,10 - 0,20 | <= 50 <= 25 | 5 3 | 14 8 | 42 25 |


<a id="p100044"></a>Таблица 2

<div align="center">

<a id="p100045"></a>**ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ АЗОКСИСТРОБИНА, СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ,**<br>
**ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА**

</div>

ДЛЯ n = 20, P = 0,95


| Анализируемый объект | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, S | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| Семена рапса | 0,02 | 0,02 - 0,20 | 100,0 | 7,7 | 16 |
| Зеленая масса рапса | 0,02 | 0,02 - 0,20 | 95,3 | 8,8 | 18 |
| Масло рапса | 0,02 | 0,02 - 0,20 | 94,7 | 6,5 | 14 |


2. <a id="p100050"></a>Метод измерения

<a id="p100051"></a>Методика основана на определении азоксистробина и его геометрического изомера методом ВЭЖХ с использованием УФ детектора после его извлечения из образцов ацетонитрилом в присутствии ацетатного буфера, насыщенного сульфатом магния, и обеспечивающего разделение водной и органической фаз и очистки ацетонитрильного экстракта силикагелем с помощью дисперсионной твердофазной экстракции при одновременном удалении воды безводным сульфатом магния.
<a id="p100052"></a>Идентификация E- и Z- азоксистробина проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.
<a id="p100053"></a>Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

<div align="center">

3. <a id="p100054"></a>Средства измерений, реактивы,

</div>

вспомогательные устройства и материалы


#### <a id="p100055"></a>3.1 Средства измерений


<a id="p100056"></a>Жидкостный хроматограф "ACQUITY" фирмы "Waters" с
быстросканирующим УФ детектором, снабженным дегазатором,
автоматическим пробоотборником и термостатом колонки
<a id="p100057"></a>Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104-2001
<a id="p100058"></a>Весы технические ВЛКТ-500 ГОСТ 24104-2001
<a id="p100059"></a>Колбы мерные на 10, 25, 50, 100 куб. см [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100060"></a>Микродозаторы Ленпипет переменного объема
от 200 до 1000 куб. мм и от 1 до 5 куб. см
<a id="p100061"></a>Пипетки градуированные [ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91)
<a id="p100062"></a>Цилиндры мерные на 50 и 100 куб. см [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100063"></a>Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100064"></a>3.2 Реактивы


<a id="p100065"></a>Ацетонитрил для ВЭЖХ, "В-230НМ" или х.ч.            ТУ 6-09-3534-87
<a id="p100066"></a>Гексан, х.ч.                                        ТУ 2631-003-05807999-98
<a id="p100067"></a>Ацетон, о.с.ч.                                      ТУ 6-09-3513-86
<a id="p100068"></a>Вода бидистиллированная, деионизированная ГОСТ 6709-79
<a id="p100069"></a>Азоксистробин с содержанием основного вещества
99,7% (Zeneca)
<a id="p100070"></a>Метаболит азоксистробина (Z-изомер) с содержанием
основного вещества 96,0% (Zeneca)
<a id="p100071"></a>Кислота ортофосфорная, х.ч. ГОСТ 6552-80
<a id="p100072"></a>Кислота уксусная, ледяная                           ГОСТ 61-69
<a id="p100073"></a>Магний сернокислый безводный, х.ч.                  ГОСТ 4523-67
<a id="p100074"></a>Натрий уксуснокислый, ч. ГОСТ 199-68
<a id="p100075"></a>Силикагель, Merck 1.09385.1000
<a id="p100076"></a>Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрила и
0,005 М H PO  в соотношении 50:50
         3  4
<a id="p100077"></a>Элюент 1: смесь гексана и ацетона в соотношении
75:25 (по объему)
<a id="p100078"></a>Элюент 2: смесь гексана и ацетона в соотношении
65:35 (по объему)
<a id="p100079"></a>Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.


#### <a id="p100080"></a>3.3 Вспомогательные устройства и материалы


<a id="p100081"></a>Аналитическая колонка ACQUITY UPLC BEH
C18 (100 x 2,1) мм, 1,7 мкм (Waters)
<a id="p100082"></a>Аппарат для встряхивания
<a id="p100083"></a>Воронки лабораторные В-75-110 ГОСТ 25336-82
<a id="p100084"></a>Бидистиллятор
<a id="p100085"></a>Концентрирующие патроны, заполненные силикагелем 60
<a id="p100086"></a>Пробирки с притертыми пробками на 10, 20 куб. см ГОСТ 25336-82
<a id="p100087"></a>Фильтры бумажные "красная лента"                           ТУ 6.091678-86
<a id="p100088"></a>Центрифуга ОПн-8УХЛ4.2                                     ТУ 5.375-4261-76

<div align="center">

<a id="p100089"></a>Шприц медицинский с разъемом Льюера ГОСТ 22090

</div>

<a id="p100090"></a>Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не хуже указанных.

4. <a id="p100091"></a>Требования безопасности

<a id="p100092"></a>4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
<a id="p100093"></a>При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.
<a id="p100094"></a>4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

5. <a id="p100095"></a>Требования к квалификации операторов

<a id="p100096"></a>Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по [п. 13](#p100175).

6. <a id="p100097"></a>Условия измерений

<a id="p100098"></a>При выполнении измерений выполняют следующие условия:
- <a id="p100099"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха 20 +/- 5 °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100100"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. <a id="p100101"></a>Подготовка к определению


#### <a id="p100102"></a>7.1 Кондиционирование колонки


<a id="p100103"></a>Перед началом анализа колонку (Acquity BEH C18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 куб. см/мин.) до стабилизации нулевой линии.


#### <a id="p100104"></a>7.2 Приготовление растворов


<a id="p100105"></a>7.2.1. 0,005 М раствор ортофосфорной кислоты: 0,5 +/- 0,01 г 98%-ной ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 куб. дм, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.
<a id="p100106"></a>7.2.2. Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50 по объему, используя мерные цилиндры.
<a id="p100107"></a>7.2.3. Приготовление элюента 1. В коническую колбу с притертой пробкой помещают 75 куб. см гексана и 25 куб. см ацетона. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
<a id="p100108"></a>7.2.4. Приготовление элюента 2. В коническую колбу с притертой пробкой помещают 65 куб. см гексана и 35 куб. см ацетона. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.


#### <a id="p100109"></a>7.3 Приготовление основного и градуировочных растворов


<a id="p100110"></a>7.3.1. Основной раствор с концентрациями изомеров по 0,5 мг/куб. см: точные навески азоксистробина и его метаболита (50 +/- 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
<a id="p100111"></a>Градуировочные растворы с концентрациями по каждому аналиту 0,02, 0,05, 0,1, 0,15 и 0,2 мкг/куб. см готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50).
<a id="p100112"></a>7.3.2. Раствор N 1 с концентрациями изомеров по 0,2 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 1 куб. см основного раствора и доводят до метки подвижной фазой (5 мкг/куб. см). 4,0 куб. см полученного раствора переносят пипеткой в другую мерную колбу вместимостью 100 куб. см. Объем вновь доводят до метки подвижной фазой (0,2 мкг/куб. см).
<a id="p100113"></a>7.3.3. Раствор N 2 с концентрациями изомеров по 0,15 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят пипеткой 7,5 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100114"></a>7.3.4. Раствор N 3 с концентрациями изомеров по 0,1 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят пипеткой 5 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100115"></a>7.3.5. Раствор N 4 с концентрациями изомеров по 0,05 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят пипеткой 2,5 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100116"></a>7.3.6. Раствор N 5 с концентрациями изомеров по 0,02 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят пипеткой 1 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100117"></a>Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.
<a id="p100118"></a>При изучении полноты определения изомеров азоксистробина в семенах, зеленой массе и масле рапса используют ацетонитрильные растворы вещества. Например, раствор внесения с концентрацией изомеров азоксистробина по 0,1 мкг/куб. см готовят из основного раствора с концентрацией изомеров азоксистробина по 0,5 мг/куб. см методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом аналогично [п. 7.3.4](#p100114).

##### <a id="p100119"></a>7.4.1 Построение градуировочного графика

<a id="p100120"></a>Для установления градуировочной характеристики (площадь пика - концентрация изомеров азоксистробина в растворе) в хроматограф вводят по 10 куб. мм градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации азоксистробина в градуировочном растворе.
<a id="p100121"></a>Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии:

<a id="p100122"></a>C = K x S,

<a id="p100123"></a>где S - площадь пика градуировочного раствора.
<a id="p100124"></a>Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
<a id="p100125"></a>Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
<a id="p100126"></a>Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

                      |C - C |
                            K
<a id="p100127"></a>                      -------- x 100 <= лямбда      ,
                         C                    контр.

<a id="p100128"></a>    где:
<a id="p100129"></a>    C -  аттестованное  значение  массовой  концентрации  азоксистробина  в
градуировочном растворе;
<a id="p100130"></a>    C    -   результат   контрольного   измерения   массовой   концентрации
     K
азоксистробина в градуировочном растворе;
<a id="p100131"></a>    лямбда        -  норматив  контроля  градуировочного  коэффициента,  %.
          контр.
(лямбда       = 10% при P = 0,95).
       контр.

8. <a id="p100132"></a>Отбор проб и хранение

<a id="p100133"></a>Отбор проб семян рапса для анализа проводят в соответствии с [ГОСТ 10852-86](https://bukva.ai/docs/3979) "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб". Семена хранят при комнатной температуре в полотняных мешочках, перед анализом доводят до стандартной влажности и измельчают. Растительное масло хранят в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в герметично закрытой стеклянной таре в течение 6 месяцев.

<div align="center">

9. <a id="p100134"></a>Проведение определения

</div>



#### <a id="p100135"></a>9.1 Определение азоксистробина и его метаболита

в семенах и зеленой массе рапса

<a id="p100136"></a>(10 +/- 0,01) г семян рапса или измельченной зеленой массы помещают в тефлоновую центрифужную пробирку вместимостью 50 куб. см, прибавляют 10 куб. см воды, 10 куб. см ацетонитрила, 0,1 куб. см ледяной уксусной кислоты, 4 г безводного магния сернокислого и 1 г натрия уксуснокислого. Пробирку плотно закрывают пробкой, встряхивают на аппарате в течение 15 мин. и центрифугируют при скорости 8000 об./мин. в течение 10 мин. Супернатант декантируют и количественно переносят в другую тефлоновую центрифужную пробирку. Если супернатант декантировать не удается, то массу фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр "красная лента". Измеряют объем супернатанта или фильтрата и прибавляют к нему силикагель и безводный магний из расчета 50 мг силикагеля, 150 мг магния сернокислого на 1 куб. см супернатанта. При работе с образцами зеленой массы к супернатанту также прибавляют активированный уголь из расчета 7,5 мг на 1 куб. см супернатанта. Пробирку плотно закрывают пробкой, встряхивают на аппарате 15 мин. и центрифугируют при скорости 8000 об./мин. в течение 10 мин. Количественно отбирают с помощью шприца верхний ацетонитрильный слой, переносят его в мерную колбу вместимостью 10 куб. см и доводят объем до метки водой. 10 куб. мм полученного раствора вводят в хроматограф.


#### <a id="p100137"></a>9.2 Определение азоксистробина

и его метаболита в масле рапса

<a id="p100138"></a>10 г масла растворяют в 50 куб. см гексана и пропускают через патрон, заполненный силикагелем 60 и предварительно откондиционированный 2,5 куб. см гексана. Промывают последовательно 25 куб. см гексана и 2 куб. см элюента 1. Фильтрат и промывку отбрасывают. Азоксистробин элюируют 4 куб. см элюента 2. Элюат упаривают досуха на ротационном испарителе (40 °C). Остаток растворяют в 10 куб. см смеси ацетонитрил:вода в соотношении 8:2, переносят в центрифужную пробирку и прибавляют 0,1 куб. см ледяной уксусной кислоты, 4 г безводного магния сернокислого и 1 г натрия уксуснокислого. Дальнейшую обработку проводят так, как это описано для семян в [п. 9.1](#p100135).


#### <a id="p100139"></a>9.3 Условия хроматографирования


<a id="p100140"></a>Ультраэффективный жидкостный хроматограф "ACQUITY" фирмы Waters с быстросканирующим УФ детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка ACQUITY UPLC BEH C18 (2,1 x 100) мм, 1,7 мкм (Waters). Температура колонки 30 +/- 1 °C. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50. Скорость потока элюента: 0,2 куб. см/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 245 нм. Объем вводимой пробы 10 куб. мм.
<a id="p100141"></a>Время удерживания Z-азоксистробина (метаболита) 3,9 +/- 0,1 мин.

<div align="center">

<a id="p100142"></a>Время удерживания E-азоксистробина 4,9 +/- 0,1 мин.

</div>

<a id="p100143"></a>Линейный диапазон детектирования сохраняется в интервале концентраций 0,02 - 0,2 мкг/куб. см.

10. <a id="p100144"></a>Обработка результатов анализа

<a id="p100145"></a>Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание E-азоксистробина в семенах, зеленой массе и масле рапса (X, мг/кг), вычисляют по формуле:

<div align="center">

                               S  x K x V

</div>

                                x           100
<a id="p100146"></a>                           X = ---------- x ---,
                                   P         f

<a id="p100147"></a>    где:
<a id="p100148"></a>    S   -  площадь  пика азоксистробина или его метаболита на хроматограмме
     x
испытуемого образца, кв. мм (AU);
<a id="p100149"></a>K - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;
<a id="p100150"></a>V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, куб. см;
<a id="p100151"></a>P - навеска анализируемого образца, г;
<a id="p100152"></a>f - полнота извлечения азоксистробина, приведенная в [табл. 2](#p100045), (%).
<a id="p100153"></a>При проявлении на хроматограмме пика Z-азоксистробина (метаболита) его содержание в пробе рассчитывают по этой же [формуле](#p100146). Общее содержание азоксистробина суммируют.
<a id="p100154"></a>Содержание остаточных количеств азоксистробина или его метаболита в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
<a id="p100155"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор азоксистробина с концентрацией 0,2 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

11. <a id="p100156"></a>Проверка приемлемости результатов
параллельных определений

<a id="p100157"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

<div align="center">

                         2 x |X  - X | x 100

</div>

                               1    2
<a id="p100158"></a>                         ------------------- <= r,
                              (X  + X )
                                1    2

<a id="p100159"></a>    где:
<a id="p100160"></a>    X , X  - результаты параллельных определений, мг/кг;
     1   2
<a id="p100161"></a>    r - значение предела повторяемости (r = 2,8 сигма ).
                                                     r
<a id="p100162"></a>При невыполнении [условия](#p100158) (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. <a id="p100163"></a>Оформление результатов

<a id="p100164"></a>Результат анализа представляют в виде:

               _
<a id="p100165"></a>              (X +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности P = 0,95,

<a id="p100166"></a>    где:
    _
<a id="p100167"></a>    X -  среднее   арифметическое   результатов   определений,   признанных
приемлемыми, мг/кг;
<a id="p100168"></a>    ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

<a id="p100169"></a>ДЕЛЬТА = дельта x X / 100,

<a id="p100170"></a>дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100171"></a>В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100172"></a>"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,01 мг/кг <*>).

<a id="p100173"></a>

---

<a id="p100174"></a><*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения азоксистробина или его метаболита в семенах, зеленой массе или масле рапса.

13. <a id="p100175"></a>Контроль качества результатов измерений

<a id="p100176"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002). "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100177"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100178"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
<a id="p100179"></a>    Величина добавки C  должна удовлетворять условию:
                      д

<a id="p100180"></a>                       C  = ДЕЛЬТА    + ДЕЛЬТА    ,
                        д         л,X         л,X'

<a id="p100181"></a>    где  +/-  ДЕЛЬТА    (+/- ДЕЛЬТА    )   -   характеристика   погрешности
                    л,X            л,X'
(абсолютная погрешность) результатов  анализа,  соответствующая  содержанию
компонента  в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в  образце с добавкой), мг/кг, при этом:

<a id="p100182"></a>                         ДЕЛЬТА  = +/- 0,84 ДЕЛЬТА,
                               л

<a id="p100183"></a>    где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100184"></a>                        ДЕЛЬТА = дельта x X / 100,

<a id="p100185"></a>    дельта  -  граница  относительной   погрешности   методики  (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100186"></a>    Результат контроля процедуры К  рассчитывают по формуле:
                                  к

<a id="p100187"></a>                             К  = X' - X - C ,
                              к             д

<a id="p100188"></a>    где X', X, C   -  среднее   арифметическое   результатов   параллельных
                д
определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100156)) содержания компонента в
образце    с    добавкой,   испытуемом   образце,   концентрация   добавки,
соответственно, мг/кг.
<a id="p100189"></a>    Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

                              _____________________
                             /     2            2
<a id="p100190"></a>                       К = \/ДЕЛЬТА     + ДЕЛЬТА   .                    (1)
                                   л,X'         л,X

<a id="p100191"></a>    Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К )  с нормативом
                                                           к
контроля (К).
<a id="p100192"></a>    Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

<a id="p100193"></a>                                 |К | <= К,                             (2)
                                   к

процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100194"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100193) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

#### <a id="p100195"></a>13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

<a id="p100196"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

                               2 x |X  - X | x 100
                                     1    2
<a id="p100197"></a>                               ------------------- <= R,                (3)
                                    (X  + X )
                                      1    2

<a id="p100198"></a>    где:
<a id="p100199"></a>    X , X  - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
     1   2
<a id="p100200"></a>    R   -   предел   воспроизводимости   (в   соответствии   с   диапазоном

<div align="center">

концентраций), %.

</div>


14. <a id="p100201"></a>Разработчики

<a id="p100202"></a>ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург.



<a id="p100203"></a>

---