МУК 4.1.2687-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика выполнения измерений остаточного содержания мезосульфурон-метила в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2687-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика выполнения измерений остаточного содержания мезосульфурон-метила в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2687-10. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2687-10
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 1 октября 2010 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
2 августа 2010 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИКА ВЫПОЛНЕНИЯ ИЗМЕРЕНИЙ ОСТАТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ МЕЗОСУЛЬФУРОН-МЕТИЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
1 октября 2010 года
1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 № 1).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.
1. Назначение и область применения
Настоящий документ устанавливает процедуру измерений массовой концентрации мезосульфурон-метила в воде в диапазоне 0,001 - 0,01 мг/куб.
-1
дм, массовой доли в почве и зерне в диапазоне 0,01 — 0,1 млн. (мг/кг), в -1 зеленой массе и соломе в диапазоне 0,05 — 0,5 млн. (мг/кг) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Название вещества по ИСО: мезосульфурон-метил.
Название вещества по ИЮПАК: метил 2-(4,6-диметоксипиримидин-2-илкарба-моил)-альфа-(метансульфонамидо)-р-толуат.
Структурная формула (не приводится).
Светло-желтоватое кристаллическое вещество. Температура плавления: -8
195,4 °C. Давление паров при 25 °C: 1,1 x 10 мПа. Коэффициент распределения в системе н-октанол/вода при 20 °C: K log P = 1,9 (pH 4),
ow
1,39 (pH 5), -0,48 (pH 7), -2,06 (pH 9). Растворимость (г/куб. дм) при 20 °C: ацетон - 13,66, ацетонитрил - 8,4, дихлорметан - 3,8, этилацетат -
2,0, гексан — < 0,2, вода — 0,007 (pH 4), 0,48 (pH 7), 15,4 (pH 9).
Вещество стабильно на воздухе и на свету, быстро гидролизуется в водном растворе при pH 4 (DT = 3,5 дня).
50
Мезосульфурон-метил относительно слабо передвигается по почвенному профилю и достаточно быстро разрушается в аэробных условиях (DT = 39,1
50
дня).
Краткая токсикологическая характеристика -1 Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс - > 5000 млн. (мг/кг); 50 -1 острая дермальная токсичность (LD ) для крыс - > 5000 млн. (мг/кг);
50
ингаляционная токсичность (LC ) для крыс — > 1,33 мг/куб. дм воздуха. 50
Вещество обладает обратимым раздражающим действием на слизистую оболочки глаз кролика; не обладает сенсибилизирующими свойствами. LC для рыб - 100
50
мг/куб. дм (96 ч). Гербицид практически нетоксичен для птиц, пчел, земляных червей, дафний.
Мезосульфурон-метил — послевсходовый гербицид системного действия из класса сульфонилмочевин. Механизм его действия связан с подавлением синтеза аминокислот с разветвленной цепью (валин и изолейцин), приводящего к прекращению клеточного деления и роста. Он эффективно уничтожает злаковые (Echinochloa cruss-galli, Setaria spp., Elytrigia repens, Sorgum halepense) и широколистные сорные растения в посевах зерновых колосовых культур. Применяется в дозах до 15 г д.в./га.
2. Метрологические характеристики
При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.
| Анализируемый объект | Диапазон измерений содержания мезосульфуронметила, -1 млн. (мг/кг) | Показатель точности (границы относительной погрешности), +/- дельта, %, при P = 0,95 | Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), сигма , % r | Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), сигма , % R | Предел повторяемости, r, %, P = 0,95, n = 2 | Критическая разность для результатов анализа, полученных в двух лабораториях, CD , % 0,95 (n = n = 2) 1 2 |
| Вода | От 0,0010 до 0,005 вкл. (мг/куб. дм) | 75 | 17 | 25 | 47 | 61 |
| Св. 0,005 до 0,010 вкл. (мг/куб. дм) | 60 | 13 | 20 | 36 | 49 | |
| Почва | От 0,010 до 0,05 вкл. | 70 | 15 | 22 | 42 | 53 |
| Св. 0,05 до 0,10 вкл. | 50 | 10 | 15 | 28 | 37 | |
| Зеленая масса | От 0,05 до 0,10 вкл. | 60 | 13 | 20 | 36 | 49 |
| Св. 0,10 до 0,5 вкл. | 35 | 9 | 14 | 25 | 34 | |
| Зерно | От 0,010 до 0,05 вкл. | 65 | 17 | 25 | 47 | 61 |
| Св. 0,05 до 0,10 вкл. | 50 | 10 | 15 | 28 | 37 | |
| Солома | От 0,05 до 0,10 вкл. | 65 | 18 | 27 | 50 | 66 |
| Св. 0,10 до 0,5 вкл. | 35 | 9 | 14 | 25 | 34 |
3. Метод измерений
Метод основан на экстракции мезосульфурон-метила из воды хлористым метиленом, из почвы смесью ацетонитрила и бикарбоната натрия, из зеленой массы, зерна и соломы водным раствором ацетона, очистке экстрактов, содержащих мезосульфурон-метил, от коэкстрактивных компонентов перераспределением их в системе несмешивающихся растворителей в щелочной и кислой средах, а также на колонке с силикагелем, с последующим измерением содержания мезосульфурон-метила в очищенных экстрактах на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым детектированием и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.
4. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
4.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф «Breeze» с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (Waters, США) номер Госреестра 15311-02
Весы лабораторные аналитические ВЛА-200 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г и погрешностью взвешивания 0,0001 г [ГОСТ 24104-2001
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 500 г ГОСТ 24104-2001
Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2 ГОСТ 1770-74
Пипетки градуированные 1-1-2-1; 1-1-2-2; 1-2-2-5; 1-2-2-10 ГОСТ 29227-91
Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-5-0,1; П-2-10-0,2 ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные 1-25; 1-50; 1-100; 1-500; 1-1000 ГОСТ 1770-74
Иономер универсальный ЭВ-74 ГОСТ 22261-91 или аналогичный
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 100 куб. мм, модель Microliter # 1710 («Hamilton», США)
Мезосульфурон-метил, с содержанием основного вещества 98,5% (Байер, Германия)
4.2. Реактивы
Ацетонитрил для хроматографии квалификации х.ч. ТУ 6-09-3534-87
Вода дистиллированная или деионизованная ГОСТ 6709-72
Калий фосфорнокислый двузамещенный квалификации ч.д.а. ГОСТ 2493-75
Кислота ортофосфорная квалификации х.ч., 85,6% ГОСТ 6552-80
Метилен хлористый (дихлорметан) квалификации х.ч. ГОСТ 12794-80
Натрия гидроксид квалификации х.ч. ГОСТ 4328-77
Натрия сульфат безводный квалификации х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрий углекислый кислый квалификации х.ч. ГОСТ 4201-66
Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат) квалификации ч. ГОСТ 22300-76
4.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания типа АВУ-бс ТУ 64-1-2851-78
Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма «Branson Instr. Co.» (США)
Дистиллятор Cyclon III, модель 4BD, фирма Fistreem Int. Ltd. (Великобритания)
Установка Elgastat B 114 с патроном Elgacan C 114 для получения деионизованной воды, фирма Elga Ltd. (Великобритания)
Вата медицинская ТУ 9393-001-00302238
Воронки делительные вместимостью 100 и 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки конусные диаметром 30 — 37 мм ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25 и 100 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы плоскодонные вместимостью 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Колонка хроматографическая стеклянная длиной 25 см и внутренним диаметром 8 — 10 мм
Колонка хроматографическая стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetry C18, зернение 5 мкм, Waters Corporation (США)
Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 10696-75 Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М ТУ 25-11-917-74
или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы «Buchi» (Швейцария)
Силикагель 60 (0,063 — 0,2 мм) для колоночной хроматографии («Мерк», Германия)
Стаканы химические вместимостью 100 и 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с дефлегматором ГОСТ 9737-93 (ИСО 641-75)
Фильтры бумажные «красная лента», обеззоленные ТУ 6-09-2678-77 или фильтры из хроматографической бумаги
Фильтры мембранные диаметром 47 мм с размером пор 0,45 мкм, фирма Pall Corp. (США)
Центрифуга T-23 (Janetzki) или аналогичная
Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в разделе 4.
5. Требования безопасности
5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88.
5.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.
5.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
5.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.
6. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.
7. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия.
Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в следующих условиях:
- температура воздуха (20 +/- 5) °C;
- атмосферное давление (84 — 106) кПа;
- относительная влажность воздуха не более 80%.
7.2 Условия хроматографического анализа
Подвижная фаза: ацетонитрил — ортофосфорная кислота с молярной концентрацией 0,01 моль/куб. дм (1:1).
Скорость потока элюента: 0,5 куб. см/мин.
Чувствительность: 0,001 ед. абсорбции на шкалу.
Объем вводимой пробы: 5 куб. мм.
Время удерживания мезосульфурон-метила: 7,0 мин. +/- 0,2 мин.
Линейный диапазон детектирования: 0,1 — 1,0 нг.
8. Подготовка к выполнению измерений
Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей, приготовление растворов и подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, градуировка хроматографа, подготовка колонки с силикагелем.
8.1. Очистка органических растворителей
8.1.1 Очистка ацетона
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 куб. дм ацетона 10 г KMnO и 2 г K CO ). 4 2 3
8.1.2 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют. Непосредственно перед применением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.
8.1.3 Очистка этилацетата
Приготовление раствора натрия углекислого кислого с массовой долей 5%. Навеску (5 +/- 0,1) г натрия углекислого кислого в конической колбе растворяют в 40 — 60 куб. см дистиллированной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.
Срок хранения раствора 1 неделя.
Растворитель промывают равным объемом раствора натрия углекислого кислого с массовой долей 5%, сушат над безводным хлоридом кальция и перегоняют над свежей порцией хлорида кальция.
8.1.4 Очистка хлористого метилена
Приготовление раствора гидроксида натрия с массовой долей 2%
Навеску 2 +/- 0,1 г гидроксида натрия в конической колбе растворяют в 40 — 60 куб. см дистиллированной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.
Срок хранения раствора 1 месяц.
Хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворитель последовательно промывают водой, раствором гидроксида натрия с массовой долей 2% и снова водой до нейтральной реакции промывных вод, после чего сушат над поташом и перегоняют.
8.1.5 Очистка силикагеля
Силикагель 60 (0,063 — 0,20 мм) для колоночной хроматографии встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона, высушивают в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 5 — 6 часов и затем активируют при температуре 130 °C в течение 5 часов.
8.2 Приготовление растворов ортофосфорной кислоты
8.2.1 Приготовление раствора ортофосфорной кислоты
с молярной концентрацией 2 моль/куб. дм
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см вносят 137 куб. см 85,6%-ной ортофосфорной кислоты, добавляют 500 — 600 куб. см деионизованной воды, перемешивают и доводят объем раствора водой до метки.
8.2.2 Приготовление раствора ортофосфорной кислоты
с молярной концентрацией 0,01 моль/куб. дм
Отбирают 5 куб. см раствора ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 2 моль/куб. дм, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см, добавляют деионизованную воду и доводят объем раствора до метки, раствор перемешивают.
8.3 Приготовление раствора K HPO x 3H O с молярной
2 4 2
концентрацией 0,1 моль/куб. дм
22,8 г K HPO x 3H O растворяют в химическом стакане в 400 куб. см 2 4 2 деионизованной воды, раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см, добавляют деионизованную воду и доводят объем раствора до метки,
раствор перемешивают.
8.4 Приготовление раствора NaHCO с молярной концентрацией
3
0,06 моль/куб. дм
5,04 г NaHCO растворяют в химическом стакане в 400 куб. см 3
деионизованной воды, раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см, добавляют деионизованную воду и доводят объем раствора до метки,
раствор перемешивают.
8.5. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 500 куб. см ацетонитрила, объем раствора доводят до метки водным раствором ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 0,01 моль/куб. дм (8.2), раствор перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр, дегазируют.
8.6 Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии
Хроматографическую колонку Symmetry C18 устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют при температуре 27 °C и скорости потока приготовленной по 8.5 подвижной фазы 1 куб. см/мин. не менее часа до установления стабильной базовой линии (дрейф базовой линии в течение 1 часа не более 5%, а уровень шумов не более 2% диапазона выходного сигнала на шкале измерений).
8.7. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта
Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 — 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 30 куб. см смеси ацетон-этилацетат (7:3, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 30 куб. см смеси ацетон-этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
8.8. Определение объема элюента, необходимого для полного вымывания мезосульфурон-метила из колонки с силикагелем
При отработке методики или поступлении новой партии силикагеля проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания мезосульфурон-метила из колонки с силикагелем.
В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора мезосульфурон-метила с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см в ацетонитриле (8.9.2). Раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 3 куб. см смеси ацетон-этилацетат (1:1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по 8.5. Промывают колонку 50 куб. см смеси ацетон-этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Затем через колонку пропускают 100 куб. см смеси ацетон-этилацетат (7:3, по объему), отбирая последовательно по 10 куб. см элюата. Каждую фракцию упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., вносят 2 куб. см подвижной фазы, подготовленной по 8.7, перемешивают, а затем хроматографируют. Условия хромтографирования — в соответствии с 7.2.
По результатам обнаружения мезосульфурон-метила в каждой из фракций определяют объем смеси ацетон-этилацетат (7:3, по объему), необходимый для полного вымывания мезосульфурон-метила из колонки.
Примечание: Профиль вымывания мезосульфурон-метила может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
8.9. Приготовление градуированных растворов
8.9.1 Приготовление исходного градуировочного
раствора мезосульфурон-метила с массовой
концентрацией 100 мкг/куб. см
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают (0,010 +/- 0,0001) г мезосульфурон-метила, растворяют в 40 — 50 куб. см ацетонитрила, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.
Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °C в течение месяца.
8.9.2 Приготовление градуировочного раствора
мезосульфурон-метила с массовой концентрацией
10 мкг/куб. см (раствор № 1)
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора мезосульфурон-метила с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см (8.9.1), раствор разбавляют ацетонитрилом и доводят объем до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов № 2 — 5.
Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °C в течение месяца.
8.9.3 Приготовление градуировочных растворов
мезосульфурон-метила с массовой концентрацией
0,02 — 0,20 мкг/куб. см (растворы № 2 — 5)
В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 0,2; 0,4; 1,0 и 2,0 куб. см градуировочного раствора мезосульфурон-метила с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см (8.9.2), объем доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по 8.5, каждый раствор тщательно перемешивают, получают растворы № 2 — 5 с массовой концентрацией мезосульфурон-метила 0,02; 0,04; 0,1 и 0,2 мкг/куб. см, соответственно.
Растворы готовят непосредственно перед использованием.
8.10. Градуировка хроматографа
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ x с) от массовой концентрации мезосульфурон-метила в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной градуировки по 4-м градуировочным растворам (8.9.3).
В инжектор хроматографа вводят по 5 куб. мм каждого градуировочного раствора (8.9.3) и анализируют при условиях 7.2. Каждый раствор хроматографируют дважды. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предела повторяемости r.
По полученным данным строят градуировочную характеристику.
8.11. Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.
Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.
Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие (1):
|S - S |
изм гр
------------ x 100 <= K , (1)
S гр
гр
S , S - значение площади пика мезосульфурон-метила в образце для изм гр контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике
соответственно, усл. ед.;
K - норматив контроля, K = 0,5 x дельта, гр гр
где +/- дельта — границы относительной погрешности, %, (табл. 1).
Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.
Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.
9. Отбор, подготовка и хранение проб
Отбор проб производят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», 1743.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», 26950-89 «Почвы. Отбор проб», Р 50436-92 «Зерновые. Отбор проб зерна».
Пробы воды анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18 °C не более 2-х недель.
Образцы почвы подсушивают при комнатной температуре в течение 24 ч на воздухе в темноте, помещают в герметичную полиэтиленовую тару и хранят в холодильнике при температуре 4 — 6 °C не более 4-х недель. Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температуре -18 °C.
Пробы зеленой массы замораживают и хранят при температуре -18 °C.
Пробы зерна и соломы высушивают до влажности (в соответствии с ГОСТ 10852-86) и хранят в холодильнике при температуре 4 °C.
9.1. Экстракция мезосульфурон-метила
9.1.1. Экстракция мезосульфурон-метила из образцов воды
Приготовление раствора гидроксида натрия с молярной концентрацией 1 моль/куб. дм. Навеску (4 +/- 0,1) г NaOH в конической колбе растворяют в 40 — 60 куб. см дистиллированной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят до метки дистиллированной водой. Срок хранения раствора 1 месяц.
К образцу предварительно отфильтрованной воды объемом 100 куб. см добавляют 2,28 г K HPO x 3H O, перемешивают до растворения соли, доводят 2 4 2 pH раствора до 9 с помощью раствора гидроксида натрия с молярной концентрацией 1 моль/куб. дм, контролируя щелочность раствора с помощью иономера. Полученный раствор переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, приливают 25 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После расслоения органическую фазу отбрасывают, а водную фракцию еще дважды обрабатывают порциями хлористого метилена объемом 15 и 10 куб. см. Водную фракцию переносят в химический стакан, подкисляют раствором ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 2 моль/куб. дм до pH 3, контролируя кислотность раствора с помощью иономера. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 250
куб. см, приливают 25 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в
течение 2-х минут. После разделения слоев органическую фазу собирают. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 15 и 10 куб. см хлористого метилена. Объединенную органическую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на роторном испарителе досуха при температуре 40 °C. Сухой остаток растворяют в 5 куб. см
подвижной фазы для ВЭЖХ (8.5) и анализируют на содержание мезосульфурон-метила по 10.
9.1.2. Экстракция мезосульфурон-метила из образцов почвы
Навеску (20 г) воздушно-сухой почвы помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, приливают 80 куб. см смеси ацетонитрил-раствор NaHCO с молярной концентрацией 0,06 моль/куб. дм (1:1, по объему),
3
встряхивают в течение 30 мин. на аппарате для встряхивания. Суспензию помещают в ультразвуковую ванну на 3 мин., центрифугируют 5 мин. при 6000 об./мин. и супернатант фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. К остатку почвы в центрифужной пробирке приливают 40 куб. см смеси ацетонитрил-раствор NaHCO с молярной концентрацией 0,06
3
моль/куб. дм (1:1, по объему), перемешивают, центрифугируют и супернатант фильтруют через бумажный фильтр. Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до водного остатка объемом не более 30 куб. см. К водному остатку добавляют деионизованную
воду до объема 40 куб. см. Дальнейшую очистку экстракта проводят по 9.2.
9.1.3. Экстракция мезосульфурон-метила из образцов зерна
Образец размолотого зерна массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода (90:10, по объему) и помещают на встряхиватель на 30 мин. Суспензию обрабатывают в ультразвуковой ванне в течение 3 мин. и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Растительные остатки переносят в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 50 куб. см смеси ацетон-вода (90:10, по объему), помещают на встряхиватель на 30 мин. и фильтруют. Объединенный экстракт упаривают до водного остатка (около 5 куб. см) на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. К водному остатку добавляют раствор K HPO с молярной концентрацией 0,1 моль/куб. дм до 2 4
объема 50 куб. см и проводят очистку по 9.2.
9.1.4. Экстракция мезосульфурон-метила из образцов зеленой массы и соломы
Образец измельченной зеленой массы или размолотой соломы массой 10 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода (90:10, по объему) и гомогенизируют 3 мин. при 10000 об./мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Растительные остатки
переносят в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 50 куб. см смеси ацетон-вода (90:10, по объему), помещают на встряхиватель на 30 мин. и фильтруют. Объединенный экстракт упаривают до водного остатка (около
5 куб. см) на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. К
водному остатку добавляют раствор K HPO с молярной концентрацией 0,1
2 4
моль/куб. дм до объема 50 куб. см и проводят очистку по 9.2.
9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
Водные экстракты, полученные по 9.1.2, 9.1.3 и 9.1.4, переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, приливают 25 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После расслоения органическую фазу отбрасывают, а водную фракцию еще дважды обрабатывают 15 и 10 куб. см хлористого метилена. Водную фракцию переносят в химический стакан, подкисляют раствором ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 2 моль/куб. дм до pH 3, контролируя кислотность раствора с помощью иономера. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, приливают 25 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения слоев органическую фазу фильтруют через слой безводного сульфата натрия в мерный цилиндр вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 15 и 10 куб. см хлористого метилена. Измеряют объем объединенной органической фазы и его часть, эквивалентную 2 г почвы и зерна, либо 1 г зеленой массы и соломы, переносят в круглодонную колбу вместимостью 25 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по 9.3.
9.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем
Сухой остаток в колбе, полученный по 9.2, растворяют в 3 куб. см смеси ацетон-этилацетат (1:1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по 8.7. Колбу обмывают 2 куб. см смеси ацетон-этилацетат (1:1, по объему), которые также наносят на колонку. Колонку промывают 45 куб. см смеси ацетон-этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Мезосульфурон-метил элюируют с колонки 100 куб. см смеси ацетон-этилацетат (7:3, по объему), элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Сухой остаток экстрактов почвы и зерна растворяют в 1 куб. см, зеленой массы и соломы — в 2,5 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ, подготовленной по 8.5, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание мезосульфурон-метила по 10.
Полнота извлечения мезосульфурон-метила при проведении всех операций подготовки пробы не менее 79% для образцов почвы, зерна, зеленой массы и соломы и не менее 91% для образцов воды.
10. Выполнение измерений
10.1. В инжектор хроматографа вводят 5 куб. мм очищенного экстракта анализируемой пробы (9.1.1 - 9.1.4), анализируют при условиях (7.2) и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.
10.2. Для каждого образца воды, почвы, зеленой массы, зерна и соломы повторяют операции по 9.1 - 9.3, 10.1.
11. Обработка результатов измерений
11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используют программное обеспечение «Breeze».
Альтернативная обработка результатов.
По градуировочной характеристике находят значение массовой концентрации мезосульфурон-метила в экстрактах, C, мкг/куб. см.
Массовую концентрацию мезосульфурон-метила X, мг/куб. дм, в образцах воды рассчитывают по формуле (2):
C x V
экстр
X = ------------. (2) 0,91 x V воды
-1
Массовую долю мезосульфурон-метила X, млн. , в образцах почвы, зерна, зеленой массы и соломы рассчитывают по формуле (3):
C x V
экстр
C — значение массовой концентрации мезосульфурон-метила в экстракте, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, экстр куб. см;
m - масса анализируемой части образца, соответствующая доле экстракта, использованной для очистки на колонке с силикагелем и последующего
хроматографического определения, г;
V — объем анализируемой части образца воды, взятой на экстракцию, воды куб. см;
0,79 и 0,91 — коэффициент извлечения мезосульфурон-метила, учитывающий все процедуры подготовки пробы.
11.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие
приемлемости (4):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (4)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений массовой концентрации 1 2 -1 (доли) мезосульфурон-метила, млн. ;
r — значение предела повторяемости, % (табл. 1).
Если условие (4) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.
11.3 Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:
_ _
X +/- 0,01 x дельта x X, при P = 0,95,
X — среднее арифметическое значение результатов n определений, -1 признанных приемлемыми по 11.2, млн. ;
+/- дельта — границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).
В случае, если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в
журнале:
"массовая концентрация мезосульфурон-метила в воде менее 0,001 мг/куб. дм (более 0,01 мг/куб. дм)"; -1 "массовая доля мезосульфурон-метила в почве менее 0,01 млн. (более
-1
0,1 млн. )"; -1 "массовая доля мезосульфурон-метила в зеленой массе менее 0,05 млн.
-1
(более 0,5 млн. )"; -1 "массовая доля мезосульфурон-метила в зерне менее 0,01 млн. (более
-1
0,1 млн. )"; -1 "массовая доля мезосульфурон-метила в соломе менее 0,05 млн. (более
-1
0,5 млн. )».
Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал мезосульфурон-метила, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 0,2 мкг/куб. см, разбавляют, но не более чем в 10 раз, и анализируют в соответствии с данной методикой. При расчете содержания мезосульфурон-метила учитывают разбавление.
12. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости
12.1 Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:
а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;
б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).
12.2. Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.
12.3. Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью CD по формуле (5):
0,95
2 x |C - C | x 100
ср1 ср2
----------------------- <= CD , (5)
(C + C ) 0,95
ср1 ср2
C , C - средние значения массовой концентрации (доли), полученные ср1 ср2 -1 в первой и второй лабораториях, мг/куб. дм (млн. ).
CD — значение критической разности, % (табл. 1). 0,95
Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.3).
При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.4).
13. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории
Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 («Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений»), используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и показателя правильности по 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.
Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.
Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.
При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.
14. Разработчики
ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 692-92-20.