МУК 4.1.2682-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тетраконазола в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 1 октября 2010 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
2 августа 2010 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТЕТРАКОНАЗОЛА В БОТВЕ И КОРНЕПЛОДАХ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.2682-10
1 октября 2010 года
1. Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийского НИИ защиты растений, Санкт-Петербург.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 № 1).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.
4. Введены в действие с 1 октября 2010 г.
Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в корнеплодах сахарной свеклы массовой концентрации тетраконазола в диапазоне концентраций 0,025 — 0,25 мг/кг, в ботве свеклы — 0,05 — 0,5 мг/кг.
Название действующего вещества по ICO: Тетраконазол.
Название по IUPAC: (RS)2-(2,4-дихлорфенил)-3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил) пропил-1,1,2,2-тетрафторэтиловый эфир.
Структурная формула: (не приводится).
Брутто формула: C H Cl F N O. 13 11 2 4 3
Химически чистый тетраконазол представляет собой бесцветную вязкую жидкость, разлагается при 240 °C до кипения, давление паров 0,18 мРа, показатель преломления 1,432 (20 °C).
Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода K lg P = 3/56 ow (20 °C).
Растворимость: в воде 156 мг/л (pH 7, 20 °C); хорошо растворим в 1,2-дихлорэтане, ацетоне, метаноле.
Стабилен в разбавленных водных растворах с pH 5 — 9.
ЛД для крыс 1248 мг/кг. Класс токсичности по ВОЗ — II. 50
Область применения: фунгицид широкого спектра действия, применяется для борьбы против септориоза, разного вида ржавчины, пиреноспороза, мучнистой росы, окаймленной пятнистости листьев в виде 12,5% водной эмульсии.
Гигиенические нормативы для тетраконазола в сахарной свекле не установлены.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.
| Объект анализа | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, % | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Корнеплоды | 0,025 — 0,1 | 50 | 5,4 | 15,1 | 16,6 |
| Корнеплоды | 0,1 — 0,25 | 25 | 4,8 | 13,4 | 14,8 |
| Ботва | 0,05 — 0,1 | 50 | 5,3 | 14,8 | 16,3 |
| Ботва | 0,1 — 0,5 | 25 | 5,2 | 14,6 | 16,0 |
Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ТЕТРАКОНАЗОЛА, СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ,
ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА
ДЛЯ n = 20, P = 0,95
| Анализируемый объект | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Корнеплоды свеклы | 0,025 | 0,025 — 0,25 | 82,4 | 4,8 | 4,4 |
| Ботва свеклы | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 81,5 | 5,2 | 4,7 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.
Методика основана на определении тетраконазола методом газожидкостной хроматографии с использованием электронозахватного детектора (ДЭЗ или ДПР) после его извлечения из образцов органическим растворителем, очистке путем перераспределения между двумя жидкими фазами и при необходимости на патронах с силикагелем 60. Идентификация тетраконазола проводится по времени удерживания, количественное определение — методом абсолютной калибровки.
Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.
3.1 Средства измерения
Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные ГОСТ 24104-2001
Весы технические ВЛКТ-500 ГОСТ 24104-80
Газовый хроматограф Цвет-550 М или аналогичный с детектором постоянной скорости рекомбинации (ДПР или ДЭЗ) и стеклянной насадочной колонкой длиной 1 или 2 м; внутренним диаметром 3 мм или хроматограф «Кристалл 2000М» с ДЭЗ
Колбы мерные на 25, 50, 100 куб. см ГОСТ 23932-90
Микрошприц МШ-10, МШ-10М ТУ 2-833-106
Пипетки градуированные ГОСТ 29227-91
Цилиндры мерные на 50 и 100 куб. см ГОСТ 23932-90
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2 Реактивы
Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72
н-Гексан, ч., свежеперегнанный ТУ 6-09-3375-78 1,2-Дихлорэтан, х.ч. ТУ 6-09-3716-80
Насадка для аналитической колонки: 5% XE-60 на хроматоне N-Super (0,16 — 0,20 мм), имп.
Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., свежепрокаленный ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, х.ч. ГОСТ 4233-77
Силикагель для колоночной хроматографии 60 (0,040 — 0,063 mm) (Merck, Германия)
Тетраконазол с содержанием основного компонента 99,38%
Элюент № 1 — гексан:ацетон (80:20 по объему)
Элюент № 2 — гексан:ацетон (60:40 по объему)
Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.
3.3 Вспомогательные устройства
Ванна ультразвуковая УЗВ/100 ТН
Воронки лабораторные В-75-110 ГОСТ 25336-82
Воронки делительные ВД-3-500 ГОСТ 8613-75 Насос водоструйный ГОСТ 10696-75
Капиллярная кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой НР-35, толщина слоя 0,25 мкм
Колбы плоскодонные на шлифах КШ 500 29/32 ТС ГОСТ 25336-82Е
Колбы круглодонные на шлифах КШ 50 29-32 ТС ГОСТ 25336-82
Концентрирующие патроны, заполненные силикагелем 60 (0,040 — 0,063 mm), Merck
Насос водоструйный ГОСТ 10696-75
Пробирки с притертыми пробками на 10, 20 куб. см ГОСТ 25336-82
Ротационный вакуумный испаритель Buchi R-200/205 (Швейцария)
Фильтры бумажные «красная лента» и материалы ТУ 6.091678-86
Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не ниже указанных.
4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.
4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».
5. Требования к квалификации операторов
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 14.
При выполнении измерений выполняют следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха 20 +/- 5 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
Отбор образцов свеклы для анализа проводят в соответствии с ГОСТ 1722-85 «Свекла столовая свежая, заготовляемая и поставляемая». Для длительного хранения образцы свеклы (ботва и корнеплоды) помещают в герметично закрытый двойной полиэтиленовый пакет и хранят в морозильной камере с температурой -18 °C.
8.1 Кондиционирование колонки
Готовую насадку (5% XE-60 на хроматоне N-Super) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют в токе азота при температуре 250 °C в течение 8 — 10 часов.
Капиллярную колонку перед анализом кондиционируют в токе азота при температуре 250 °C до установления нулевой линии.
8.2 Приготовление растворов
8.2.1 Приготовление насыщенного раствора хлористого натрия
В коническую колбу на 250 куб. см наливают 150 куб. см дистиллированной воды и насыпают в нее хлористый натрий при постоянном помешивании до тех пор, пока не образуется нерастворимый остаток хлористого натрия. Колбу выдерживают в течение 30 мин., периодически помешивая раствор. Если осадок растворился, добавляют еще хлористого натрия до образования нерастворимого остатка.
8.2.2 Приготовление градуировочных растворов
8.2.2.1 Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/куб. см
Точную навеску тетраконазола (50 +/- 0,5 мг) помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см, растворяют в ацетоне и доводят до метки. Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 — 4 °C в течение 6 месяцев.
Градуировочные растворы с концентрациями 0,5, 0,25, 0,1 и 0,05 мкг/куб. см готовят из основного раствора методом последовательного разбавления гексаном по объему.
8.2.2.2. Раствор № 1 с концентрацией 0,5 мкг/куб. см: в мерную колбу на 100 куб. см пипеткой вносят 1 куб. см основного раствора и доводят до метки гексаном. Затем 10 куб. см полученного раствора пипеткой переносят в мерную колбу на 100 куб. см и вновь доводят до метки гексаном.
8.2.2.3. Раствор № 2 с концентрацией 0,25 мкг/куб. см: в мерную колбу на 100 куб. см вносят пипеткой 50 куб. см раствора № 1 и доводят до метки гексаном.
8.2.2.4. Раствор № 3 с концентрацией 0,1 мкг/куб. см: в мерную колбу на 100 куб. см вносят пипеткой 20 куб. см раствора № 1 и доводят до метки гексаном.
8.2.2.5. Раствор № 4 с концентрацией 0,05 мкг/куб. см: в мерную колбу на 100 куб. см вносят пипеткой 10 куб. см раствора № 1 и доводят до метки гексаном.
Градуировочные растворы хранятся в холодильнике в течение 1 месяца.
При определении полноты извлечения для внесения в образец корнеплодов используют растворы тетраконазола в ацетоне.
8.3 Построение градуировочной характеристики
Для построения градуировочного графика в хроматограф вводят по 1 куб. мм каждого из градуировочных растворов (3 параллельных определения для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты или площади пика от концентрации тетраконазола в градуировочном растворе (мкг/куб. см).
Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:
|C - C |
к
-------- x 100 <= лямбда , C контр.
C — аттестованное значение массовой концентрации тетраконазола в градуировочном растворе;
C — результат контрольного измерения массовой концентрации к тетраконазола в градуировочном растворе;
лямбда — норматив контроля градуировочного коэффициента, %. контр. (лямбда = 10% при P = 0,95). контр.
Отбор образцов свеклы для анализа проводят в соответствии с ГОСТ 1722-85 «Свекла столовая свежая, заготовляемая и поставляемая». Для длительного хранения (до 12 мес.) образцы свеклы (ботва и корнеплоды) упаковывают в двойной полиэтиленовый пакет, герметично заклеивают и помещают в морозильную камеру с температурой -18 °C.
10.1 Определение тетраконазола в ботве
и корнеплодах свеклы
Навеску ботвы 10 +/- 0,1 г или корнеплодов 20 +/- 0,1 г измельчают, помещают в коническую колбу и заливают 50 — 100 куб. см ацетона, таким образом, чтобы проба была полностью покрыта раствором, и экстрагируют тетраконазол в ультразвуковой ванне в течение 15 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр «красная лента». Остаток на фильтре промывают дважды ацетоном порциями по 25 куб. см. Объединенный фильтрат упаривают на ротационном испарителе до водного остатка при температуре не выше 40 °C. Остаток переносят в делительную воронку, добавляют 80 куб. см дистиллированной воды и 25 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия. Тетраконазол переэкстрагируют в 1,2-дихлорэтан.
Для этого в воронку добавляют 100 куб. см 1,2-дихлорэтана и встряхивают воронку в течение 1 — 2 мин. После разделения фаз органическую фазу отбирают в круглодонную колбу через слой безводного сульфата натрия (20 г). 1,2-дихлорэтан выпаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 10 куб. см гексана (на УЗ-бане в течение 2 мин.) и хроматографируют.
При обнаружении на хроматограмме мешающих определению тетраконазола примесей проводят дополнительную очистку на патронах с силикагелем 60 (п. 10.2).
10.2 Очистка проб на патронах с силикагелем 60
Твердофазную экстракцию проводят на концентрирующем патроне, заполненном 0,5 г силикагеля 60 с размером частиц 0,040 — 0,063 мм. Патрон промывают 1 куб. см ацетона и 2,5 куб. см гексана.
Сухой остаток, полученный при упаривании очищенных по п. 10.1 экстрактов, количественно переносят двумя порциями по 1 куб. см гексана в патрон. Промывают патрон последовательно двумя порциями по 2,5 куб. см гексана и 4 куб. см элюента 1 (гексан:ацетон 80:20). Фильтрат и промывки отбрасывают. Тетраконазол элюируют 3 куб. см элюента 2 (гексан:ацетон 60:40). Элюат собирают в грушевидную колбу и упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 10 куб. см гексана и 1 куб. мм вводят в испаритель хроматографа.
10.3 Условия хроматографирования
Газовый хроматограф Цвет-550 М или аналогичный с детектором постоянной скорости рекомбинации (ДПР или ДЭЗ) и стеклянной насадочной колонкой, длиной 1 или 2 м и внутренним диаметром 3 мм, заполненной хроматоном N-Super с 5% XE-60. Температура колонки 210 °C, испарителя 230 °C,
10
детектора 310 °C. Шкала электрометра 8 х 10 . Скорость потока газа-носителя 40 куб. см/мин. Дозируемый объем 1 куб. мм.
Альтернативные условия хроматографирования: газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с ДЭЗ и капиллярной кварцевой колонкой длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, с неподвижной фазой НР-35, толщина слоя 0,25 мкм. Температура колонки программируется от 150 °C (1,5 мин.) до 200 °C со скоростью 25 °C/мин., далее со скоростью 5 °C/мин. до 250 °C (5 мин.). Температура испарителя 250 °C, детектора 320 °C. Расход газа-носителя (азот) через колонку 1,08 куб. см/мин., Г - 30 куб. см/мин., Г - 30 куб. 2 3
см/мин. Дозируемый объем 1 куб. мм.
Время удерживания тетраконазола 11 мин. 17 сек. +/- 5 сек.
11. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание тетраконазола в образце ботвы или корнеплодов свеклы (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
H x C x V
2
H — высота (площадь) пика тетраконазола в стандартном растворе, мм 1 (мв x сек.);
H — высота (площадь) пика тетраконазола в анализируемой пробе, мм 2 (мв x сек.);
V — объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, куб. см;
P — навеска анализируемого образца, г;
C — концентрация стандартного раствора тетраконазола, мкг/куб. см.
Содержание остаточных количеств тетраконазола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.
При получении зашкаленных пиков анализируемый экстракт разбавляют гексаном.
параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг; 1 2
r — значение предела повторяемости (r = 2,8 сигма ). r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности P = 0,95,
X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе „менее нижней границы определения“ (например: менее 0,025 или 0,05 мг/кг <*>).»
<*> 0,025 и 0,05 мг/кг — пределы обнаружения в корнеплодах и ботве свеклы, соответственно.
14. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
14.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
14.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА , д л,X л,X' где: +/- ДЕЛЬТА (+/- ДЕЛЬТА ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой, соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг:
дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %. Результат контроля процедуры K рассчитывают по формуле: к
K = X'- X - C , к д где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 12) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА . л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
14.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг; 1 2 R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном
концентраций), %.
ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург.
Методика прошла апробацию в ФГУ «Санкт-Петербургский НИИ лесного хозяйства».
Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации № 01.5.04.637) и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2010.06930).