МУК 4.1.268-96. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Хроматографическое измерение концентраций В-экзотоксина (турингина-1) в воздухе рабочей зоны. Методические указания

(утв. Госкомсанэпиднадзором России 08.06.1996)

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ В-ЭКЗОТОКСИНА (ТУРИНГИНА-1) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

1. Методические указания по измерению концентрации вредных веществ в воздухе рабочей зоны (выпуск 30) разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочно безопасным уровням воздействия (ОБУВ) — санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

2. Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны утверждены и.о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России — заместителем Главного государственного санитарного врача Российской Федерации 8 июня 1996 г.

3. Введены впервые.

4. Методические указания по контролю вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.005-88. ССБТ «Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования», ГОСТа 12.1.016-79. ССБТ «Воздух рабочей зоны. Требования к методикам измерения концентраций вредных веществ» и ГОСТа Р 1.5-92, п. 7.3.

Методические указания одобрены на совместном заседании группы Главного эксперта Федеральной комиссии по санитарно-гигиеническому нормированию «Лабораторно-инструментальное дело и метрологическое обеспечение» и методбюро п/секции «Промышленно-санитарная химия» Проблемной комиссии «Научные основы гигиены труда и профпатологии».

Ответственные исполнители: Г.А. Дьякова, С.И. Муравьева.

Исполнители: Г.А. Дьякова, Н.С. Горячев, Л.Г. Макеева, Г.В. Муравьева, Е.М. Малинина, Е.В. Грыжина, Е.Н. Грицун.

Структурная формула (не приводится).

C H O № P 22 35 19 5

В-экзотоксин (турингин-1) — биологический препарат, применяется в сельском и лесном хозяйстве против колорадского жука, паутинного клеща, хлопковых совок и др. вредителей растений.

Представляет собой порошок от коричневого до светло-бежевого цвета, растворим в воде и не растворим в органических растворителях. Действующим началом турингина является В-экзотоксин, содержание которого в препарате в среднем — +/- 1%. В воздухе находится в виде аэрозоля.

ПДК в воздухе- 1 мг/куб. м.

Характеристика метода

Определение основано на хроматографическом разделении препарата в тонком слое силикагеля (силуфол-UV 254) с последующим спектрометрическим измерением концентраций.

Отбор проб производится с концентрированием на фильтр АФА-ВП-20.

Нижний предел измерения в анализируемой пробе — 3 мкг.

Нижний предел измерения в воздухе — 0,06 мг/куб. м (при отборе 45 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций в воздухе — от 0,06 до 2 мг/куб. м.

Граница суммарной погрешности измерения +/- 20%.

Определению не мешает присутствие полупродуктов производства экзотоксина.

Реактивы, растворы, материалы

Экзотоксин, х.ч.

Пропанол, х.ч. ГОСТ ТУ 6-09-783-76

Ацетон, ч. ГОСТ 2603-79

Дистиллированная вода.

Основной стандартный раствор № 1 готовят растворением 100 мг экзотоксина в 100 мл дистиллированной воды, получают раствор, содержащий 1 мг/мл экзотоксина.

Стандартный раствор № 2 готовят путем разбавления основного стандартного раствора № 1 или растворением 10 мг экзотоксина в 10 мл дистиллированной воды, получают раствор, содержащий 0,1 мг/мл или 100 мг/мл экзотоксина.

Срок хранения растворов — 5 суток.

Приготовление рабочих растворов с содержанием экзотоксина 15,05; 50; 100; 300; 500 мкг/мл — (см. табл.).

Приборы, аппаратура, посуда

Аспирационное устройство с реометром ТУ 64-1-862-77

Фильтры АФА-ВП-20

Фильтродержатели

Фарфоровые чашки диаметром 4 — 5 см

Баня водяная

Колбы мерные вместимостью 50 и 100 мл ГОСТ 1770-74

Микропипетки вместимостью 0,1 — 0,2 мл ГОСТ 20292-74

Микрошприц вместимостью 1 мл

Пластинка для тонкослойной хроматографии размером 150 х 150 мм (ЧСФР) «Силуфол-254»

Хроматографическая пластинка «Силуфол»

Химические стаканы вместимостью 50 мл

Хроматографическая камера размером ГОСТ 1056-63 150 х 200 или 105 х 165 мм

Хроматоскоп

Лампа УФ-света (лямбда = 254 мм)

Центрифужные пробирки

Центрифуга на 3000 об./мин., МЛР-1

Пипетки вместимостью 1, 5, 10 мл ГОСТ 20292-74

Спектрофотометр СФ-26 М.

Отбор пробы воздуха

Воздух со скоростью 15 л/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, закрепленный в фильтродержателе.

Для определения 1/2 ПДК достаточно отобрать 6 л воздуха. После отбора пробы фильтры складывают загрязненной стороной внутрь, помещают в пакеты и доставляют в лабораторию.

Срок хранения отобранных проб — 5 суток.

Условия анализа

Фильтры с отобранной пробой помещают в химический стакан, затем промывают дважды 2 — 3 мл дистиллированной воды, тщательно отжимают фильтр стеклянной палочкой и сливают в фарфоровую чашку, которую устанавливают на водяную баню. Выпаривают содержимое до сухого остатка и растворяют в 0,2 — 0,3 мл воды и всю пробу количественно с помощью микропипетки наносят на стартовую линию хроматографической пластинки в одну точку с помощью микропипетки или микрошприца так, чтобы диаметр пятна не превышал 0,5 см. Остаток в чашке еще 2 раза тщательно смывают по 0,1 мл дистиллированной водой и наносят в центр того же пятна. На стартовую линию той же пластинки в различные точки, расположенные друг от друга на расстоянии 2 см, наносят по 0,2 мл рабочих растворов, содержащих 15, 50, 100, 300 и 500 мкг/мл экзотоксина, что соответствует 3; 10; 20; 60; 100 мкг препарата. Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, которую за 30 мин. до хроматографирования заливают смесью: пропанол, ацетон, вода в соотношении 15:5:1. После поднятия фронта подвижного растворителя на 10 см пластинку вынимают и оставляют на несколько мин. до его испарения. Затем под хроматоскопом обнаруживают зоны локализации препаратов, проявляющихся в виде сине-фиолетовых пятен на голубом фоне с величиной Rf = 0,78 при использовании пластинок «Силуфол»-UV 254. Под УФ-светом (лямбда = 254 нм) зоны локализации препарата проявляется в виде желтоватых пятен на светлом фоне с величиной Rf = 0,68.

Расчет концентраций

Количественное определение проводят путем сравнения площадей пятен стандартных растворов и проб. Между количеством препарата и площадью его пятен на пластинке существует прямая пропорциональная зависимость.

При большом содержании препарата в пробе следует использовать для анализа меньшую часть анализируемого экстракта.

Содержание экзотоксина (С) в воздухе (мг/куб. м) вычисляют по формуле:

                            а х в

С = -----, б х V

где:

а — количество экзотоксина, найденное в анализируемом объеме пробы, мкг;

в — общий объем пробы, мл;

б — объем пробы, взятой для анализа, мл;

V — объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).

Количественная оценка результатов анализа методом УФ-спектрофотометрирования

Полученные на хроматограмме пятна пробы и стандарта снимают осторожно скальпелем и высыпают слой сорбента в центрифужные пробирки. Затем в пробирки добавляют по 4 мл дистиллированной воды и центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 5 — 10 мин.

Недостаточный прозрачный раствор осторожно пипеткой отсасывают в прямоугольные кварцевые кюветы с L = 10 мм и измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 240 нм.

Количественное определение экзотоксина в пробе проводят по калибровочному графику.

Для построения калибровочного графика готовят шкалу стандартов в соответствии с таблицей.

Таблица

№ стандарта	Стандартный р-р № 1, 1 мл — 100 мкг	Стандартный р-р № 2, 1 мл — 1000 мкг	Дистиллированная вода, мл	Рабочие р-ры, мкг/мл	Содержание экзотоксина в анализируемой пробе (0,2 мл), мкг
1	0	-	0	0	0
2	1,5	-	8,5	15	3
3	5,0	-	5,0	50	10
4	-	1	9,0	100	20
5	-	3	7,0	300	60
6	-	5	5,0	500	100

Стандартные растворы наносят на чистую хроматографическую пластинку и обрабатывают аналогично пробам.

Измеряют величину оптической плотности стандартных растворов на спектрофотометре при длине волны 240 мм и по полученным средним данным из пяти определений строят калибровочный график «количество препарата (мкг) — оптическая плотность».

Концентрацию экзотоксина (мг/куб. м) воздуха (Х) вычисляют по формуле:

                              А

Х = -, V

где:

А — количество экзотоксина, найденное в анализируемом объеме пробы по калибровочному графику, мкг;

V — анализируемый объем воздуха, приведенного к нормальным условиям, л.

Методические указания разработаны НИИ гигиены труда и профзаболеваний, г. Ташкент.

Приведение объема воздуха к стандартным условиям проводят по формуле:

                       V  х (273 + 20) х Р
                        t

                     V   = -------------------,
                      ст    (273 + t°) х 760

где:
V  - объем воздуха, отобранного для анализа, л;
 t
Р  -  барометрическое  давление,  мм рт. ст. (760 мм рт. ст. =

101,33 кПа); t° — температура воздуха в месте отбора пробы, °С.

Для удобства расчета V следует пользоваться таблицей ст коэффициентов (Приложение 2). Для приведения объема воздуха к

температуре  20  °С  и  давлению  760 мм рт. ст. (101,33 кПа) надо
умножить V  на соответствующий коэффициент.

      t

Давление Р, кПа/мм рт. ст.
°С	730	734	738	742	746	750	754	758	760	764
-30	1,1582	1,1646	1,1709	1,1772	1,1836	1,1899	1,1963	1,2026	1,2058	1,2122
-26	1,1393	1,1456	1,1519	1,1581	1,1644	1,1705	1,1768	1,1831	1,1862	1,1925
-22	1,1212	1,1274	1,1336	1,1396	1,1458	1,1519	1,1581	1,1643	1,1673	1,1735
-18	1,1036	1,1097	1,1158	1,1218	1,1278	1,1338	1,1399	1,1400	1,1490	1,1551
-14	1,0866	1,0926	1,0986	1,1045	1,1105	1,1164	1,1224	1,1284	1,1313	1,1373
-10	1,0701	1,0760	1,0819	1,0877	1,0986	1,0994	1,1053	1,1112	1,1141	1,1200
-6	1,0540	1,0599	1,0657	1,0714	1,0772	1,0829	1,0887	1,0945	1,0974	1,1032
-2	1,0385	1,0442	1,0499	1,0556	1,0613	1,0669	1,0726	1,0784	1,0812	1,0869
0	1,0309	1,0366	1,0423	1,0477	1,0535	1,0591	1,0648	1,0705	1,0733	1,0789
+2	1,0234	1,0291	1,0347	1,0402	1,0459	1,0514	1,0571	1,0627	1,0655	1,0712
+6	1,0087	1,0143	1,0198	1,0253	1,0309	1,0363	1,0419	1,0475	1,0502	1,0557
+10	0,9944	0,9999	1,0054	1,0108	1,0162	1,0216	1,0272	1,0326	1,0353	1,0407
+14	0,9806	0,9860	0,9914	0,9967	1,0027	1,0074	1,0128	1,0183	1,0209	1,0263
+18	0,9671	0,9725	0,9778	0,9880	0,9884	0,9936	0,9989	1,0043	1,0069	1,0122
+20	0,9605	0,9658	0,9711	0,9783	0,9816	0,9868	0,9921	0,9974	1,0000	1,0053
+22	0,9539	0,9592	0,9645	0,9696	0,9749	0,9800	0,9853	0,9906	0,9932	0,9985
+24	0,9475	0,9527	0,9579	0,9631	0,9683	0,9735	0,9787	0,9839	0,9865	0,9917
+26	0,9412	0,9464	0,9516	0,9566	0,9618	0,9669	0,9721	0,9773	0,9799	0,9851
+28	0,9349	0,9401	0,9453	0,9503	0,9655	0,9605	0,9657	0,9708	0,9734	0,9785
+30	0,9288	0,9339	0,9891	0,9440	0,9432	0,9542	0,9594	0,9645	0,9670	0,9723
+34	0,9167	0,9218	0,9268	0,9318	0,9368	0,9418	0,9468	0,9519	0,9544	0,9595
+38	0,9049	0,9099	0,9149	0,9198	0,9248	0,9297	0,9347	0,9397	0,9421	0,9471

---