МУК 4.1.2676-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика выполнения измерений остаточного содержания тиаклоприда в зеленой массе, семенах и масле рапса, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 1 октября 2010 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
2 августа 2010 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИКА ВЫПОЛНЕНИЯ ИЗМЕРЕНИЙ ОСТАТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ ТИАКЛОПРИДА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА, ЯГОДАХ И СОКЕ ВИНОГРАДА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
1 октября 2010 года
1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 № 1).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.
1. Назначение и область применения
Настоящий документ устанавливает процедуру измерений массовой доли -1 тиаклоприда в зеленой массе и масле рапса в диапазоне (0,1 — 1,0) млн. -1 (мг/кг), в семенах рапса в диапазоне (0,05 — 0,5) млн. (мг/кг), в ягодах -1 винограда в диапазоне (0,02 — 0,2) млн. (мг/кг), в виноградном соке в -1 диапазоне (0,01 — 0,1) млн. (мг/кг) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Название вещества по ИСО: Тиаклоприд.
Название вещества по ИЮПАК: (Z)-3-(6-хлор-3-пиридилметил)-1,3-тиазолидин-2-илиденцианамид.
Структурная формула (не приводится).
C H ClN S. 10 9 4
Кристаллическое вещество желтоватого цвета без запаха. Температура -7
плавления: 136 °C. Давление паров при 20 °C: 3 x 10 мПа. Коэффициент распределения н-октанол-вода: K log P = 1,25. Растворимость (г/куб. дм)
ow
при 20 °C: ацетон — 64, ацетонитрил — 52, дихлорметан — 150, 2-пропанол — 3, гептан — менее 0,1, вода — 0,185.
Вещество устойчиво к гидролизу и относительно стабильно на свету (DT = > 100 дней).
50
Тиаклоприд относительно слабо передвигается по почвенному профилю и достаточно быстро разрушается в почве в аэробных условиях (DT = 7 - 21
50
день).
Краткая токсикологическая характеристика -1
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — (440 — 840) млн. 50 -1 (мг/кг); острая дермальная токсичность (LD ) для крыс — более 2000 млн. 50 (мг/кг); острая ингаляционная токсичность (LD ) для крыс — (1223 — 2535) 50 мг/куб. м воздуха. Тиаклоприд не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика. LC для рыб 30,5 мг/куб. дм (96 ч). 50 Инсектицид практически нетоксичен для птиц, пчел, земляных червей, водорослей.
В России установлены следующие гигиенические нормативы: -1
ДСД - 0,002 млн. (мг/кг) массы тела человека; МДУ в семенах и масле -1 -1 рапса - 0,1 млн. (мг/кг), в ягодах и соке винограда - 0,05 млн.
(мг/кг).
Тиаклоприд — инсектицид нервно-паралитического действия, эффективно уничтожает тлю, цветоеда, минеров, трипсов, плодожорку, колорадского жука на хлопчатнике, табаке, картофеле, рисе, овощных культурах, цитрусовых, косточковых и семечковых плодовых в течение вегетационного периода.
Применяется в России в качестве инсектицида для обработки яблоневых садов при норме расхода до 200 г д.в./га и одно-, двукратной обработке за сезон.
2. Метрологические характеристики
При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.
| Анализируемый объект | Диапазон измерений содержания тиаклоприда, -1 млн. (мг/кг) | Показатель точности (границы относительной погрешности), +/- дельта, %, при P = 0,95 | Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), сигма , % r | Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), сигма , % R | Предел повторяемости, r, %, P = 0,95, n = 2 | Критическая разность для результатов анализа, полученных в двух лабораториях, CD , % 0,95 (n = n = 2) 1 2 P = 0,95 |
| Ягоды винограда | От 0,020 до 0,10 вкл. | 40 | 8 | 12 | 22 | 29 |
| Св. 0,10 до 0,20 вкл. | 23 | 4 | 6 | 11 | 15 | |
| Сок винограда | От 0,010 до 0,05 вкл. | 45 | 12 | 18 | 33 | 44 |
| Св. 0,05 до 0,10 вкл. | 28 | 6 | 9 | 17 | 22 | |
| Зеленая масса | От 0,10 до 0,5 вкл. | 60 | 12 | 18 | 33 | 44 |
| Св. 0,5 до 1,0 вкл. | 38 | 6 | 9 | 17 | 22 | |
| Семена рапса | От 0,05 до 0,10 вкл. | 50 | 10 | 15 | 28 | 37 |
| Св. 0,10 до 0,5 вкл. | 40 | 6 | 9 | 17 | 22 | |
| Масло рапса | От 0,10 до 0,5 вкл. | 62 | 14 | 21 | 39 | 51 |
| Св. 0,5 до 1,0 вкл. | 30 | 7 | 11 | 19 | 27 |
3. Метод измерений
Метод основан на экстракции тиаклоприда из зеленой массы рапса и ягод винограда раствором водного ацетона, из семян и масла рапса раствором ацетонитрила, из сока винограда раствором хлористого метилена, очистке экстрактов, содержащих тиаклоприд, от коэкстрактивных компонентов перераспределением их в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем с последующим измерением содержания тиаклоприда в очищенных экстрактах на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым детектированием и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.
4. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
4.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф «Breeze» с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны («Waters», США)
Весы лабораторные общего назначения модели ВЛА-200 с наибольшим пределом взвешивания 200 г ГОСТ 24104-2001
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 500 г ГОСТ 24104-2001
Колбы мерные, вместимостью 2-100-2, 2-1000-2 ГОСТ 1770-74
Пипетки градуированные 1-1-2-1; 1-1-2-2; 1-2-2-5; 1-2-2-10 ГОСТ 29227-91
Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-5-0,1; П-2-10-0,2 ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные 1-25; 1-50; 1-100; 1-500; 1-1000 ГОСТ 1770-74
Иономер универсальный ЭВ-74 или аналогичный ГОСТ 22261-91
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа, вместимостью (20 — 100) куб. мм, модель Microliter # 1710 («Hamilton», США)
4.2. Реактивы
основного вещества 99,7% (Байер, Германия)
Ацетон, квалификации ч.д.а. ГОСТ 2603-79
Ацетонитрил для хроматографии, квалификации х.ч. ТУ 6-09-3534-87
Вода бидистиллированная или деионизованная ГОСТ 6709-72
Метилен хлористый (дихлорметан), квалификации х.ч. ГОСТ 12794-80
Натрия хлорид, квалификации х.ч. ГОСТ 4233-77
Натрия сульфат безводный, квалификации х.ч. ГОСТ 4166-76
4.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с ТУ 64-1-2851-78
Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма «Branson Instr. Co.» (США)
Вата медицинская ТУ 9393-001-00302238
Воронки делительные, вместимостью 100 и 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки конусные диаметром 30 — 37 мм ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные на шлифе, вместимостью 10, 50, 100 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы плоскодонные, вместимостью 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Колонка хроматографическая стеклянная, длиной 25 см и внутренним диаметром 8 — 10 мм
Колонка хроматографическая стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetry C18, зернение 5 мкм, «Waters Corporation» (США)
Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 10696-75 Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М ТУ 25-11-917-74
или ротационный вакуумный испаритель B-169 фирмы «Buchi» (Швейцария)
Силикагель 60 (0,063 — 0,2 мм) для колоночной хроматографии («Мерк», Германия)
Стаканы химические, вместимостью 100 и 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с дефлегматором ГОСТ 9737-93 (ИСО 641-75)
Фильтры бумажные «красная лента» обеззоленные или фильтры из хроматографической бумаги ТУ 6-09-2678-77
Гомогенизатор МРТУ 42-1505 Мельница электрическая лабораторная ТУ 46-22-236-79
Центрифуга Т-23 (Janetzki, Германия) или аналогичная
Колба Бунзена, вместимостью 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в разделе 4.
5. Требования безопасности
5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88.
5.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.
5.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
5.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.
6. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на жидкостном хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
7. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия.
Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:
- температура воздуха (20 +/- 5) °C;
- атмосферное давление (84 — 106) кПа;
- относительная влажность воздуха не более 80%.
7.2 Условия хроматографического анализа
Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (45:55).
Скорость потока элюента: 0,5 куб. см/мин.
Чувствительность детектора: 0,002 ед. абсорбции на шкалу.
Объем вводимой пробы: 5 куб. мм.
Время удерживания тиаклоприда: 5,7 мин. +/- 0,2 мин.
Линейный диапазон детектирования: 0,1 — 1,0 нг.
8. Подготовка к выполнению измерений
Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей, приготовление растворов, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, градуировка хроматографа, подготовка колонки с силикагелем.
8.1. Очистка органических растворителей и приготовление растворов
8.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют. Перед применением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом натрия.
8.1.2 Очистка н-гексана
Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания ее в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.
8.1.3 Очистка ацетона
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 куб. дм ацетона 10 г KMnO и 2 г K CO ). 4 2 3
8.1.4 Очистка силикагеля
Силикагель 60 (0,063 — 0,2 мм) для колоночной хроматографии встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130° в течение 5 часов.
8.1.5 Приготовление раствора ацетон-вода (9:1 по объему)
В мерный цилиндр вместимостью 500 куб. см помещают 50 куб. см бидистиллированной воды, а затем доводят объем раствора до метки ацетоном, подготовленным по 8.1.3.
Срок хранения раствора — 1 неделя.
8.1.6 Приготовление раствора ацетонитрил-вода (9:1 по объему)
В мерный цилиндр вместимостью 500 куб. см помещают 50 куб. см бидистиллированной воды, а затем доводят объем раствора до метки ацетонитрилом, подготовленным по 8.1.1.
Срок хранения раствора — 3 недели.
8.1.7 Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия
В коническую колбу вместимостью 200 куб. см вносят навеску (50 +/- 2) г хлорида натрия, приливают (100 +/- 2) куб. см бидистиллированной воды, перемешивают в течение 5 мин., полученный раствор фильтруют. Фильтрат является насыщенным раствором хлорида натрия. Срок годности раствора — 1 неделя.
8.2. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта
Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 — 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 2 г силикагеля в 20 куб. см смеси гексан-ацетон (8:2, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 0,5 см. Колонку промывают 30 куб. см смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
8.3. Определение объема элюента, необходимого для полного вымывания тиаклоприда из колонки с силикагелем
При отработке методики или поступлении новой партии силикагеля проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания тиаклоприда из колонки с силикагелем.
В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора № 1 тиаклоприда с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см в ацетонитриле и отдувают растворитель током азота. Остаток растворяют в 0,6 куб. см ацетона, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., добавляют 2,4 куб. см гексана, перемешивают и вновь помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по 8.2. Промывают колонку 50 куб. см смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Затем колонку промывают 50 куб. см смеси гексан-ацетон (7:3, по объему), отбирая последовательно по 5 куб. см раствора. Каждую фракцию упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., вносят 1 куб. см подвижной фазы, подготовленной по 8.4, перемешивают, а затем анализируют на содержание тиаклоприда. Условия хроматографирования — в соответствии с 7.2.
По результатам обнаружения тиаклоприда в каждой из фракций определяют объем смеси гексан-ацетон (7:3, по объему), необходимый для полного вымывания тиаклоприда из колонки.
8.4. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 450 куб. см ацетонитрила, 550 куб. см деионизованной воды, раствор перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр, дегазируют.
8.5. Кондиционирование хроматографической колонки
Хроматографическую колонку Symmetry C18 устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют при температуре 27 °C и скорости потока подвижной фазой 0,5 куб. см/мин. не менее часа до установления стабильной базовой линии (дрейф базовой линии в течение 1 часа не более 5%, а уровень шумов не более 2% диапазона выходного сигнала на шкале измерений).
8.6 Приготовление градуировочных растворов
8.6.1 Исходный градуировочный раствор тиаклоприда с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают (0,010 +/- 0,0001) г тиаклоприда, растворяют в 40 — 50 куб. см ацетонитрила, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.
Раствор хранят в морозильной камере при температуре (-18) °C в течение 2-х месяцев.
8.6.2 Градуировочный раствор тиаклоприда с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см (раствор № 1)
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного градуировочного раствора тиаклоприда с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см (8.6.1), разбавляют ацетонитрилом и доводят объем до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов № 2 — 5.
Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше (-18) °C в течение месяца.
8.6.3. Градуировочные растворы тиаклоприда с массовой концентрацией (0,02 — 0,2) мкг/куб. см (растворы № 2 — 5)
В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 0,2, 0,4, 1,0 и 2,0 куб. см градуировочного раствора тиаклоприда с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см (8.6.2), доводят объем до метки подвижной фазой, приготовленной по 8.4, тщательно перемешивают, получают градуировочные растворы № 2 — 5 с массовой концентрацией тиаклоприда 0,02, 0,04, 0,1 и 0,2 мкг/куб. см, соответственно.
Растворы готовят непосредственно перед использованием.
8.7. Градуировка хроматографа
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ x с) от массовой концентрации тиаклоприда в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной градуировки по 4 градуировочным растворам.
В инжектор хроматографа вводят по 5 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют при условиях 7.2. Каждый раствор хроматографируют дважды. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предел повторяемости r.
По полученным данным строят градуировочную характеристику.
8.8. Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.
Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.
Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие (1)
|S - S |
изм гр
------------ x 100 <= K , (1)
S гр
гр
S , S - значение площади пика тиаклоприда в образце для контроля, изм гр измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно,
усл. ед.;
K - норматив контроля, K = 0,5 x дельта, гр гр
где +/- дельта — границы относительной погрешности, % (табл. 1).
Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.
Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.
9. Отбор, подготовка и хранение проб
Отбор проб производят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТ 10851-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 8988-77 «Масло рапсовое. ТУ», ГОСТ 25896-83 «Виноград свежий столовый», ГОСТ 25892-83Е «Сок виноградный. ТУ».
Пробы зеленой массы и ягод хранят в полиэтиленовой таре в холодильнике не более 1 дня; для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре (-18) °C. Пробы семян подсушивают до влажности (в соответствии ГОСТ 10852-86) и хранят в бумажных или тканевых мешочках в хорошо проветриваемом шкафу. Масло хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре (0 — 4) °C. В некоторых случаях масло получают из семян экстракцией органическими неполярными растворителями. Сок получают из ягод непосредственно перед проведением анализа. Перед анализом ягоды измельчают, семена размалывают на мельнице, зеленую массу измельчают ножницами.
9.1. Экстракция тиаклоприда
9.1.1 Экстракция тиаклоприда из образцов зеленой массы
Образец измельченной ткани массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода (9:1, по объему), перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 30 минут. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 куб. см. Растительный материал повторно экстрагируют 50 куб. см указанной выше смеси в течение 30 минут при встряхивании и суспензию фильтруют. Аликвоту объединенного фильтрата, эквивалентную 2 г растительной ткани, переносят в круглодонную колбу вместимостью 50 куб. см и упаривают до водного остатка (~ 1 куб. см) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C. К водному остатку добавляют 30 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия и проводят очистку экстракта по 9.2.
9.1.2 Экстракция тиаклоприда из семян
Навеску размолотых семян массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетонитрил-вода (9:1, по объему), перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 30 минут. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 куб. см. Растительный материал повторно экстрагируют 50 куб. см указанной выше смеси в течение 30 минут при встряхивании и суспензию фильтруют. Аликвоту объединенного фильтрата, эквивалентную 2 г растительного материала, переносят в круглодонную колбу вместимостью 50 куб. см, добавляют 10 куб. см бидистиллированной воды и упаривают до водного остатка (~ 3 — 5 куб. см) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C. К водному остатку добавляют 30 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия, раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 20 куб. см гексана, интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают, а водную фазу повторно обрабатывают 20 куб. см гексана. Дальнейшую очистку экстракта проводят по 9.2.
9.1.3 Экстракция тиаклоприда из масла
Образец масла массой 10 г вносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, добавляют 30 куб. см ацетонитрила и содержимое интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз переносят ацетонитрильный слой в центрифужную пробирку, а маслянистый остаток еще дважды обрабатывают 25 куб. см ацетонитрила. Объединенный ацетонитрильный экстракт центрифугируют при 6000 об./мин. в течение 10 минут и супернатант декантируют. Аликвоту супернатанта, эквивалентную 2 г масла, переносят в круглодонную колбу вместимостью 50 куб. см, приливают 10 куб. см бидистиллированной воды и образец упаривают до водного остатка (~ 3 — 5 куб. см) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C. К водному остатку добавляют 30 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия и раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку приливают 20 куб. см гексана, интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают, а водную фазу повторно обрабатывают 20 куб. см гексана. Далее проводят очистку экстракта по 9.2.
9.1.4 Экстракция тиаклоприда из ягод
Навеску измельченного растительного материала массой 20 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 куб. см, приливают 100 куб. см смеси ацетон-вода (9:1, по объему) и гомогенизируют 3 минуты при 10000 об./мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Остаток на фильтре промывают 50 куб. см указанной выше смеси. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан вместимостью 500 куб. см, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/10 его часть, эквивалентную 2 г образца, переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают до водного остатка (~ 1 куб. см) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C. К водному остатку добавляют 30 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия и проводят очистку экстракта по 9.2.
9.1.5 Экстракция тиаклоприда из сока
Навеску (10 г) свежевыжатого сока помещают в химический стакан вместимостью 100 куб. см, приливают 30 куб. см бидистиллированной воды, 60 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают, измеряют объем раствора. Отбирают 1/5 объема раствора, эквивалентного 2 г образца, переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Дальнейшую очистку экстракта проводят по 9.2.
9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
Водные экстракты, полученные по (9.1.1 - 9.1.5), переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, приливают 25 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 20 куб. см хлористого метилена. Объединенную органическую фракцию, пропущенную через слой безводного сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по 9.3.
9.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем
Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по 9.2, растворяют в 0,6 куб. см ацетона, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., добавляют 2,4 куб. см гексана, перемешивают, вновь помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по 8.2. Колбу обмывают 5 куб. см смеси гексан-ацетон (8:2, по объему), которые также наносят на колонку. Промывают колонку 40 куб. см смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Тиаклоприд элюируют с колонки 45 куб. см смеси гексан-ацетон (7:3, по объему), отбрасывая первые 5 куб. см элюата и собирая последующие 40 куб. см непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °C. Сухой остаток экстракта сока винограда растворяют в 1 куб. см, ягод винограда — в 2 куб. см, семян рапса — в 5 куб. см, зеленой массы и масла рапса — в 10 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ, подготовленной по 8.4, раствор помещают в ультразвуковую ванну на 1 минуту и анализируют на содержание тиаклоприда по 10.
Полнота извлечения тиаклоприда при проведении всех операций подготовки пробы не менее 83%.
10. Выполнение измерений
10.1. В инжектор хроматографа вводят 5 куб. мм очищенного экстракта анализируемой пробы (9.1 - 9.3), анализируют при условиях 7.2 и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.
10.2. Для каждого образца зеленой массы, ягод винограда, сока винограда, семян рапса, масла рапса повторяют операции по 9.1 - 9.3, 10.1.
11. Обработка результатов измерений
11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используют программу сбора и обработки хроматографической информации «МультиХром для Windows», версия 1.5х.
Альтернативная обработка результатов. -1
Массовую долю тиаклоприда X, млн. , в ягодах винограда, соке винограда, зеленой массе, семенах рапса, масле рапса рассчитывают по
формуле (2):
S x A x V
1
X = -------------, (2) 0,83 x S x m
0
S — площадь пика тиаклоприда в образце, мкВ x с; 1
S — площадь пика тиаклоприда в градуировочном растворе, мкВ x с; 0
A — массовая концентрация градуировочного раствора тиаклоприда, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m - масса анализируемой части образца, соответствующая доле экстракта, использованной для очистки на колонке с силикагелем и последующего
хроматографического определения, г.
11.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости (3).
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений массовой доли тиаклоприда, 1 2
-1
млн. (мг/кг);
r — значение предела повторяемости, % (табл. 1).
Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.
11.3 Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:
_ _
X +/- 0,01 x дельта x X, при P = 0,95,
X — среднее арифметическое значение результатов n определений, -1 признанных приемлемыми по 11.2, млн. (мг/кг);
+/- дельта — границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).
В случае, если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в
журнале: -1
«массовая доля тиаклоприда в зеленой массе менее 0,1 млн. (более -1 1,0 млн. )»; -1
«массовая доля тиаклоприда в масле рапса менее 0,1 млн. (более -1 1,0 млн. )»; -1
«массовая доля тиаклоприда в семенах рапса менее 0,05 млн. (более -1 0,5 млн. )»; -1
«массовая доля тиаклоприда в соке винограда менее 0,01 млн. (более -1 0,1 млн. )»; -1
«массовая доля тиаклоприда в ягодах винограда менее 0,02 млн. (более -1 0,2 млн. )».
Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал тиаклоприда, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 0,2 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой, но не более чем в 10 раз, и анализируют в соответствии с данной методикой. При расчете содержания тиаклоприда учитывают разбавление.
12. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости
12.1 Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:
а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;
б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).
12.2. Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.
12.3. Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях, оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью CD по формуле (4):
0,95
2 x |X - X | x 100
ср1 ср2
----------------------- <= CD , (4)
(X + X ) 0,95
ср1 ср2
X , X - средние значения массовой доли тиаклоприда, полученные в ср1 ср2
-1
первой и второй лабораториях, млн. ;
CD — значение критической разности, % (табл. 1). 0,95
Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.3).
При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.4).
13. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории
Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и показателя правильности по 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.
Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.
Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.
При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.