---
title: "\"МУК 4.1.2665-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств имазамокса в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.2665-10"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2665-10"
---

## "МУК 4.1.2665-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств имазамокса в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.2665-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств имазамокса в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 октября 2010 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**<br>
2 августа 2010 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИМАЗАМОКСА**
**В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ**
**ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.2665-10**

<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

1 октября 2010 года

1. <a id="p100006"></a>Разработаны Федеральным научным центром гигиены имени Ф.Ф. Эрисмана.
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 N 1).
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 02.08.2010.
4. <a id="p100009"></a>Вводятся в действие с 1 октября 2010 г.
5. <a id="p100010"></a>Введены впервые.

<a id="p100011"></a>Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовых концентраций имазамокса в семенах и масле рапса в диапазоне 0,1 - 1,0 мг/кг.
<a id="p100012"></a>Имазамокс
<a id="p100013"></a>(RS)-2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-5-метоксиметилникотиновая кислота (IUPAC).
<a id="p100014"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100015"></a>    C  H  N O .
     15 19 3 4
<a id="p100016"></a>    Мол. масса 305,3.
<a id="p100017"></a>    Кристаллическое   вещество   белого   цвета   без  запаха.  Температура
                                                                    -2
плавления:  166,0  -  166,7  °С. Давление паров при 20 °С < 1,3 х 10   мПа.
Растворимость  в органических растворителях при 20 °С (г/куб. дм): ацетон -
29,3;  ацетонитрил  -  19,0; гексан - 0,007; дихлорметан - 218,0; метанол -
67,5. Растворимость в воде при 20 °С - 4,16 г/куб. дм. Вещество стабильно к
гидролизу при рН 5, 7 и 9. Быстро подвергается фотолитическому разложению в
воде: DT   - 6,8 ч.
        50
<a id="p100018"></a>    Краткая токсикологическая характеристика:
<a id="p100019"></a>    Острая  пероральная  токсичность  (LD  )  для  крыс - более 5000 мг/кг;
                                         50
острая  дермальная  токсичность  (LD  )  для  кроликов > 4000 мг/кг, острая
                                    50
ингаляционная токсичность (LK  ) для крыс > 6300 мг/куб. м.
                             50
<a id="p100020"></a>Область применения препарата:
<a id="p100021"></a>Имазамокс рекомендуется в качестве гербицида для борьбы с однолетними двудольными и злаковыми сорняками в посевах подсолнечника сои, рапса (опрыскивание в период вегетации).
<a id="p100022"></a>Рекомендуемый МДУ имазамокса в семенах и масле рапса - 0,1 мг/кг.


## 1. <a id="p100023"></a>Метрологические характеристики


<a id="p100024"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100025"></a>Таблица 1

<a id="p100026"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ**


| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , r % | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| Семена рапса | от 0,1 до 1 | 25 | 4,6 | 13 | 15 |
| Масло рапса | от 0,1 до 1 | 25 | 2,6 | 7 | 9 |


<a id="p100030"></a>Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 2.

<a id="p100031"></a>Таблица 2


<table>
<colgroup><col width="10%"><col width="18%"><col width="19%"><col width="16%"><col width="16%"><col width="21%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">Анализируемый объект</td><td colspan="5">Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>Предел обнаружения, мг/кг</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>Полнота извлечения вещества, %</td><td>Стандартное отклонение, S, %</td><td>Доверительный интервал среднего результата, +/-, %</td></tr>
<tr><td>Семена рапса</td><td>0,1</td><td>0,1 - 1,0</td><td>79,4</td><td>4,1</td><td>2,3</td></tr>
<tr><td>Масло рапса</td><td>0,1</td><td>0,1 - 1,0</td><td>93,0</td><td>2,5</td><td>1,4</td></tr>
</table>



## 2. <a id="p100035"></a>Метод измерений


<a id="p100036"></a>Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции из анализируемых проб семян смесью метанол - соляная кислота, масла - ацетонитрил - вода - уксусная кислота, последовательной очистки экстракта семян окислением, перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, затем на патронах Sep Pak Silica, масла - 2-стадийной очистки на концентрирующих патронах С18 Sep Pak.
<a id="p100037"></a>Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
<a id="p100038"></a>В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии имазапира и метазахлора.


## 3. <a id="p100039"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы



### <a id="p100040"></a>3.1. Средства измерений


<a id="p100041"></a>Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором     Номера Госреестра
с переменной длиной волны фирмы "Agilent" или "Waters"   16193-06, 15311-08
<a id="p100042"></a>Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104-2001
<a id="p100043"></a>Весы лабораторные общего назначения с наибольшим
пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой
погрешности +/- 0,038 г ГОСТ 24104-2001
<a id="p100044"></a>Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-500-2, 2-1000-2 [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100045"></a>Меры массы ГОСТ 7328-2001
<a id="p100046"></a>Пипетки градуированные 2-го класса точности
вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см [ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91)
<a id="p100047"></a>Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой

<div align="center">

вместимостью 5 и 10 куб. см [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)<br>
<a id="p100048"></a>Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью

</div>

25, 50, 100, 250, 500 и 1000 куб. см [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100049"></a>Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


### <a id="p100050"></a>3.2. Реактивы


<a id="p100051"></a>Имазамокс, аналитический стандарт с содержанием
действующего вещества 99,5% (CL-No 299263,
CAS No 114311-32-9), относительная погрешность
аттестованного значения +/- 1,0%
<a id="p100052"></a>Аммоний уксуснокислый (ацетат аммония), хч ГОСТ 3117-78
<a id="p100053"></a>Ацетонитрил для хроматографии, хч                        ТУ 6-09-14-2167-84
<a id="p100054"></a>Вода деионизованная ГОСТ 6709-72
<a id="p100055"></a>н-Гексан для ВЭЖХ                                        ТУ 6-09-06-657-84
<a id="p100056"></a>Калий марганцовокислый (перманганат калия), хч ГОСТ 20490-75
<a id="p100057"></a>Калий углекислый (карбонат калия, поташ)
прокаленный хч [ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76)
<a id="p100058"></a>Кальций хлористый (хлорид кальция),
насыщенный водный раствор, хч [ГОСТ 450-77](https://bukva.ai/docs/gost-450-77)
<a id="p100059"></a>Кислота орто-фосфорная, 85%-ная, хч ГОСТ 6552-80
<a id="p100060"></a>Кислота серная концентрированная, хч ГОСТ 4204-77
<a id="p100061"></a>Кислота соляная, хч ГОСТ 3118-77
<a id="p100062"></a>Кислота уксусная ледяная, хч ГОСТ 61-75
<a id="p100063"></a>Метилен хлористый (дихлорметан), хч [ГОСТ 12794-80](https://bukva.ai/docs/standart-gost-12794-80)
<a id="p100064"></a>Метиловый спирт (метанол), хч [ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77)
<a id="p100065"></a>Натрий сернокислый (сульфат натрия) безводный, хч [ГОСТ 4166-78](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
<a id="p100066"></a>Натрий углекислый (карбонат натрия), 5%-ный водный
раствор, хч ГОСТ 83-79
<a id="p100067"></a>Пропанол-2 (изопропиловый спирт, изопропанол)            ТУ 6-09-4522-77
<a id="p100068"></a>Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид
фосфора)                                                 ТУ 6-09-4173-85
<a id="p100069"></a>Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), хч [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76)
<a id="p100070"></a>Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих выполнения [п. 7.1](#p100115) (очистка растворителей).


### <a id="p100071"></a>3.3. Вспомогательные устройства, материалы


<a id="p100072"></a>Аллонж прямой с отводом для вакуума
(для работы с концентрирующими патронами)
<a id="p100073"></a>Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с              ТУ 64-1-2851-78
<a id="p100074"></a>Бумажные фильтры "красная лента" обеззоленные
или фильтры из хроматографической бумаги
<a id="p100075"></a>Ватман 3ММ                                        ТУ 2642-001-05015242-07
<a id="p100076"></a>Воронка Бюхнера ГОСТ 9147-80
<a id="p100077"></a>Воронка делительная вместимостью
250 и 500 куб. см [ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
<a id="p100078"></a>Воронки конусные диаметром 30 - 37 и 60 мм ГОСТ 25336-82
<a id="p100079"></a>Груша резиновая                                   ТУ 9398-05-0576-9082-2003
<a id="p100080"></a>Индикаторная бумага универсальная, рН 1 - 10      ТУ 6-09-1181-89
<a id="p100081"></a>Колба Бунзена ГОСТ 25336-82
<a id="p100082"></a>Колбы плоскодонные на шлифе вместимостью
1000 - 2000 куб. см ГОСТ 25336-82
<a id="p100083"></a>Колбы конические (плоскодонные) вместимостью
100, 200 - 250, 400 - 500, 1000 - 2000 куб. см ГОСТ 23932-90
<a id="p100084"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью
100 и 150 куб. см [ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
<a id="p100085"></a>Мельница лабораторная электрическая
<a id="p100086"></a>Мембранные фильтры микропористые марки ММК,
капроновые диаметром 50 мм, размер пор
0,45 мкм                                          ТУ 9471-002-10471723-2003
<a id="p100087"></a>Набор для фильтрации растворителей
через мембрану
<a id="p100088"></a>Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 25336-82
<a id="p100089"></a>Стаканы химические вместимостью
100, 500 куб. см ГОСТ 25336-82
<a id="p100090"></a>Стекловата
<a id="p100091"></a>Стеклянные палочки
<a id="p100092"></a>Патроны для твердофазной экстракции
С18 Sep Pak, Classik (Waters, США),
масса сорбента 360 мг
<a id="p100093"></a>Патроны для твердофазной экстракции
Sep Pak Silica (Waters, США), объем сорбента
2 куб. см
<a id="p100094"></a>Ректификационная колонна с числом
теоретических тарелок 30
<a id="p100095"></a>Ротационный вакуумный испаритель В-169
фирмы Buchi, Швейцария
<a id="p100096"></a>Установка для перегонки растворителей
<a id="p100097"></a>Хроматографическая колонка стальная
длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм,
содержащая Eclipse XDB С18, зернение 5 мкм
<a id="p100098"></a>Хроматографическая колонка стальная длиной
250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм,
содержащая Zorbax SB С8 зернением 5 мкм
<a id="p100099"></a>Шприц для ввода образцов для жидкостного
хроматографа вместимостью 50 - 100 куб. мм
<a id="p100100"></a>Шприцы медицинские с разъемом Льюера
вместимостью 5 и 10 куб. см
<a id="p100101"></a>Центрифуга
<a id="p100102"></a>Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100103"></a>Требования безопасности


<a id="p100104"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.
<a id="p100105"></a>4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.


## 5. <a id="p100106"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100107"></a>К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
<a id="p100108"></a>К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.


## 6. <a id="p100109"></a>Условия измерений


<a id="p100110"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- <a id="p100111"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100112"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100113"></a>Подготовка к выполнению измерений


<a id="p100114"></a>Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, подвижных фаз для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка концентрирующих патронов Sep Pak Silica и С18 Sep Pak.


### <a id="p100115"></a>7.1. Очистка органических растворителей



##### <a id="p100116"></a>7.1.1 Ацетонитрил

<a id="p100117"></a>Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

##### <a id="p100118"></a>7.1.2 Гексан

<a id="p100119"></a>Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

##### <a id="p100120"></a>7.1.3 Хлористый метилен и этилацетат

<a id="p100121"></a>Каждый растворитель промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.


### <a id="p100122"></a>7.2. Приготовление растворов соляной кислоты


<a id="p100123"></a>Для приготовления 1 N раствора в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см, содержащую 300 - 400 куб. см деионизованной воды, помещают 83 куб. см концентрированной соляной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.
<a id="p100124"></a>Для приготовления 0,05; 0,025 и 0,01 N растворов в мерные колбы вместимостью 1000 куб. см помещают соответственно 50, 25 и 10 куб. см 1 N раствора соляной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.


### <a id="p100125"></a>7.3. Приготовление 4 N раствора серной кислоты


<a id="p100126"></a>В мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают 200 - 300 куб. см деионизованной воды, вносят 56 куб. см концентрированной серной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.


### <a id="p100127"></a>7.4. Приготовление смеси для экстракции проб семян


<a id="p100128"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 600 куб. см метанола, вносят 400 куб. см 0,025 N раствора соляной кислоты, перемешивают.


### <a id="p100129"></a>7.5. Приготовление смеси для экстракции проб растительного масла


<a id="p100130"></a>В колбу вместимостью 1000 - 2000 куб. см помещают 500 куб. см ацетонитрила, вносят 500 куб. см деионизованной воды и 20 куб. см ледяной уксусной кислоты, перемешивают.


### <a id="p100131"></a>7.6. Приготовление 0,05 М раствора уксуснокислого аммония


<a id="p100132"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 3,85 г уксуснокислого аммония, доводят водой до метки, вносят 1 куб. см ледяной уксусной кислоты, перемешивают.


### <a id="p100133"></a>7.7. Приготовление 25%-ного раствора метанола в 0,05 М растворе уксуснокислого аммония


<a id="p100134"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 25 куб. см метанола, доводят до метки 0,05 М раствором уксуснокислого аммония, перемешивают.


### <a id="p100135"></a>7.8. Приготовление 2%-ного раствора уксусной кислоты в этилацетате


<a id="p100136"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 2 куб. см ледяной уксусной кислоты, доводят до метки этилацетатом, перемешивают.


### <a id="p100137"></a>7.9. Приготовление 0,1%-ного раствора марганцовокислого калия


<a id="p100138"></a>В мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают 0,5 г марганцовокислого калия, доводят водой до метки, перемешивают.


### <a id="p100139"></a>7.10. Приготовление 0,1%-ного раствора орто-фосфорной кислоты


<a id="p100140"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 300 - 400 куб. см деионизованной воды, вносят 1 куб. см орто-фосфорной кислоты, доводят водой до метки, перемешивают.


### <a id="p100141"></a>7.11. Подготовка концентрирующих патронов Sep Pak Silica


<a id="p100142"></a>Патрон устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума <*>.

<a id="p100143"></a>

---

<a id="p100144"></a><*> В отсутствие специального аллонжа жидкость продавливают через патрон с помощью поршня медицинского шприца, скорость продавливания раствора не должна превышать 1 - 2 капли в сек.

<a id="p100145"></a>Концентрирующие патроны промывают с помощью медицинского шприца (или разряжения, создаваемого водоструйным насосом) последовательно метанолом, этилацетатом, хлористым метиленом порциями по 5 куб. см со скоростью прохождения растворителя через патрон 1 - 2 капли в сек. Патроны готовят непосредственно перед использованием. Нельзя допускать высыхания верхнего слоя сорбента.


### <a id="p100146"></a>7.12. Подготовка концентрирующих патронов С18 Sep Pak


<a id="p100147"></a>7.12.1. Первая ступень очистки. Концентрирующий патрон промывают с помощью медицинского шприца или разряжения, создаваемого водоструйным насосом, 5 куб. см метанола со скоростью прохождения растворителя через патрон 1 - 2 капли в сек., затем 5 куб. см 0,01 N раствора соляной кислоты.
<a id="p100148"></a>7.12.2. Вторая ступень очистки. Концентрирующий патрон промывают с помощью медицинского шприца или разряжения, создаваемого водоструйным насосом, последовательно гексаном, хлористым метиленом, метанолом, водой, 0,05 N раствором соляной кислоты порциями по 3 куб. см.
<a id="p100149"></a>Патроны готовят непосредственно перед использованием.


### <a id="p100150"></a>7.13. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ



##### <a id="p100151"></a>7.13.1 Измерение по [п. 9.3.1](#p100207).

<a id="p100152"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 200 куб. см ацетонитрила, вносят 800 куб. см 0,1%-ного раствора орто-фосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

##### <a id="p100153"></a>7.13.2 Измерение по [п. 9.3.2](#p100212).

<a id="p100154"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 180 куб. см ацетонитрила, вносят 820 куб. см деионизованной воды, 1 куб. см орто-фосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.


### <a id="p100155"></a>7.14. Кондиционирование хроматографической колонки


<a id="p100156"></a>Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по [п. 7.13.1](#p100151) или [7.13.2](#p100153)) при скорости подачи растворителя соответственно 0,8 или 1 куб. см/мин. не менее 2-х часов до установления стабильной базовой линии.


### <a id="p100157"></a>7.15. Приготовление градуировочных растворов


<a id="p100158"></a>7.15.1. Исходный раствор имазамокса для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см).
<a id="p100159"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г имазамокса, растворяют в 50 - 70 куб. см метанола, доводят до метки этим же растворителем, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.
<a id="p100160"></a>Градуировочные растворы N 2 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.
<a id="p100161"></a>7.15.2. Растворы N 1 имазамокса для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см).
<a id="p100162"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1,0 куб. см исходного раствора имазамокса с концентрацией 100 мкг/куб. см [(п. 7.15.1)](#p100158), доводят до метки метанолом, тщательно перемешивают.
<a id="p100163"></a>Раствор хранится в холодильнике не более месяца.
<a id="p100164"></a>7.15.3. Рабочие растворы N 2 - 5 имазамокса для градуировки (концентрация 0,1 - 1,0 мкг/куб. см).
<a id="p100165"></a>В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,0; 5,0 и 10 куб. см раствора N 1 имазамокса с концентрацией 10 мкг/куб. см [(п. 7.15.2)](#p100161), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по [п. 7.13.1](#p100151) или [7.13.2](#p100153), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией имазамокса 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно.
<a id="p100166"></a>Растворы хранятся в холодильнике не более 5-ти дней.


### <a id="p100167"></a>7.16. Приготовление растворов внесения для оценки полноты извлечения имазамокса из образцов



##### <a id="p100168"></a>7.16.1 Исходный раствор (концентрация 100 мкг/куб. см).

<a id="p100169"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г имазамокса, растворяют в 50 - 70 куб. см изопропилового спирта, доводят им же до метки, тщательно перемешивают.
<a id="p100170"></a>7.16.2. Основной раствор имазамокса для внесения (концентрация 10 мкг/куб. см).
<a id="p100171"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10,0 куб. см исходного раствора имазамокса с концентрацией 100 мкг/куб. см [(п. 7.16.1)](#p100168), доводят до метки изопропанолом, тщательно перемешивают.
<a id="p100172"></a>Раствор хранится в холодильнике не более месяца.
<a id="p100173"></a>Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено".


### <a id="p100174"></a>7.17. Установление градуировочной характеристики


<a id="p100175"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площадей пиков (mAU х сек.) от концентрации имазамокса в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки N 2 - 5.
<a id="p100176"></a>В инжектор хроматографа вводят 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.3.1](#p100207) или [9.3.2](#p100212). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.
<a id="p100177"></a>Градуировочную характеристику проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значение площади отличается более чем на 10% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.


## 8. <a id="p100178"></a>Отбор и хранение проб


<a id="p100179"></a>Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными [ГОСТами 10852-86](https://bukva.ai/docs/3979) "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб", 10583-76 "Рапс. Требования при заготовках и поставках", 52062-2003 "Масло растительное. Правила приемки и методы отбора проб", [8988-2002](https://bukva.ai/docs/standart-gost-8988-2002) "Масло рапсовое. Технические условия", "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (N 2051-79 от 21.08.79).
<a id="p100180"></a>Семена подсушивают в темноте до постоянного веса и хранят в тканевых мешочках в сухом, защищенном от света месте при комнатной температуре не более 6-ти месяцев. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °С.
<a id="p100181"></a>Пробы масла (помещенные в стеклянные флаконы) хранят в холодильнике в темноте.
<a id="p100182"></a>Перед анализом образцы семян измельчают.


## 9. <a id="p100183"></a>Выполнение определения



### <a id="p100184"></a>9.1. Семена рапса



##### <a id="p100185"></a>9.1.1 Экстракция

<a id="p100186"></a>Образец измельченных семян массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 400 куб. см на шлифе, добавляют 200 куб. см смеси для экстракции (метанол - 0,025 N раствор соляной кислоты, 60:40, по объему), приготовленной по [п. 7.4](#p100127), интенсивно перемешивают в течение 5 мин.
<a id="p100187"></a>Пробам дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр "красная лента", осадок на фильтре промывают 25 куб. см метанола. Отфильтрованный экстракт переносят в мерный цилиндр вместимостью 250 куб. см с пришлифованной пробкой, перемешивают, измеряют объем раствора, 1/5 его часть, эквивалентную 4 г семян (около 40 куб. см), переносят в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до объема 8 - 10 куб. см. Очищают окислением, перераспределением в системе несмешивающихся растворителей по п. 9.1.2, затем на концентрирующих патронах Sep Pak Silica по [п. 9.1.3](#p100192).

##### <a id="p100188"></a>9.1.2 Очистка экстракта окислением и перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

<a id="p100189"></a>Остаток в колбе, полученный по [п. 9.1.1](#p100185), с помощью 30 куб. см деионизованной воды переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, колбу дополнительно обмывают 20 куб. см воды, которую также переносят в воронку. Вносят в воронку 10 куб. см 4 N серной кислоты, доводя рН до 1 - 2 (контроль по индикаторной бумаге).
<a id="p100190"></a>Добавляют в воронку 15 куб. см 0,1%-ного водного раствора марганцовокислого калия, встряхивают 1 мин. Затем в делительную воронку с водным раствором вносят 15 куб. см дихлорметана, интенсивно встряхивают в течение 1 мин., после полного разделения фаз нижний дихлорметановый слой переносят в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 150 куб. см, фильтруя через слой безводного (около 1 см) сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в химическую воронку. Экстракцию имазамокса повторяют еще дважды порциями дихлорметана объемом 15, затем 10 куб. см. Для полного разделения фаз содержимое воронки должно отстояться 10 - 15 мин. Следы дихлорметана в водной фазе недопустимы, поскольку это снижает полноту извлечения вещества.
<a id="p100191"></a>Объединенный дихлорметановый экстракт, пропущенный через слой сульфата натрия, упаривают до объема 10 - 15 куб. см и дополнительно очищают на концентрирующем патроне Sep Pak Silica по п. 9.1.3.

##### <a id="p100192"></a>9.1.3 Очистка экстракта семян рапса на концентрирующих патронах Sep Pak Silica

<a id="p100193"></a>Полученный по [п. 9.1.2](#p100188) раствор вносят с помощью медицинского шприца или разряжения, создаваемого водоструйным насосом, на концентрирующий патрон Sep Pak Silica (подготовленный по [п. 7.11](#p100141)) со скоростью пропускания раствора 1 - 2 капли в сек. Колбу ополаскивают 2 куб. см хлористого метилена, который также наносят на патрон. После нанесения пробы патрон промывают 5 куб. см смеси хлористый метилен - этилацетат (1:1, по объему), затем 5 куб. см этилацетата, элюат отбрасывают. Вещества элюируют с патрона 15 куб. см 2%-ного раствора уксусной кислоты в этилацетате, собирая элюат в круглодонную колбу, упаривают при температуре не выше 40 °С досуха. Остаток растворяют в 4 куб. см подвижной фазы, подготовленной по [п. 7.13.1](#p100151) или [7.13.2](#p100153), и анализируют содержание имазамокса по [п. 9.3.1](#p100207) или [9.3.2](#p100212).


### <a id="p100194"></a>9.2. Масло



##### <a id="p100195"></a>9.2.1 Экстракция

<a id="p100196"></a>Образец масла массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 200 - 250 куб. см, растворяют в 100 куб. см гексана, переносят в делительную воронку вместимостью 500 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси для экстракции (смесь ацетонитрил - вода, 1:1, с добавлением 2% ледяной уксусной кислоты), приготовленной по [п. 7.5](#p100129). Воронку интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой осторожно декантируют через бумажный фильтр, помещенный в конусную воронку, в мерный цилиндр вместимостью 250 куб. см с пришлифованной пробкой, доливают водой до 200 куб. см. Раствор перемешивают и помещают в холодильник (4 - 6 °С) на 20 - 30 мин. (раствор при этом мутнеет). Измеряют объем раствора, 1/5 его часть, эквивалентную 4 г масла (около 40 куб. см), переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до объема 8 - 10 куб. см. Очищают на концентрирующих патронах С18 Sep Pak по п. 9.2.2.

##### <a id="p100197"></a>9.2.2 Очистка экстракта на концентрирующих патронах С18 Sep Pak

<a id="p100198"></a>Раствор в колбе, полученный по [п. 9.2.1](#p100195), вносят с помощью медицинского шприца или разряжения, создаваемого водоструйным насосом, на концентрирующий патрон С18 Sep Pak, подготовленный по [п. 7.12.1](#p100147), со скоростью пропускания раствора 1 - 2 капли в сек. После нанесения пробы патрон промывают 5 куб. см 0,01 N раствора соляной кислоты, элюат отбрасывают. Вещество элюируют с патрона 9 куб. см 25%-ного раствора метанола в 0,05 М растворе уксуснокислого аммония (приготовленного по [п. 7.7](#p100133)), собирая элюат в круглодонную колбу, упаривают его при температуре не выше 40 °С до объема около 3 куб. см.
<a id="p100199"></a>Полученный раствор вносят с помощью медицинского шприца или разряжения, создаваемого водоструйным насосом, на концентрирующий патрон С18 Sep Pak, подготовленный по [п. 7.12.2](#p100148). Колбу ополаскивают дважды по 1 куб. см деионизованной воды, растворы также вносят на патрон. Скорость прохождения раствора через патрон не должна превышать 1 - 2 капли в сек.
<a id="p100200"></a>Промывают патрон 3 куб. см деионизованной воды, затем 3 куб. см гексана. Гексан продавливают до нижнего края сорбента. Элюаты отбрасывают. Имазамокс элюируют с патрона 15 куб. см хлористого метилена, собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 4 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ (приготовленной по [п. 7.13.1](#p100151) или [7.13.2](#p100153)), центрифугируют (фильтруют через слой стекловаты, помещенный в конусную химическую воронку) и анализируют содержание имазамокса по [п. 9.3.1](#p100207) или [9.3.2](#p100212).


### <a id="p100201"></a>9.3. Условия хроматографирования


<a id="p100202"></a>Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны.
<a id="p100203"></a>Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.
<a id="p100204"></a>Рабочая длина волны: 240 нм и 254 нм <*>.

<a id="p100205"></a>

---

<a id="p100206"></a><*> Хроматографирование пробы при 2-х длинах волн увеличивает надежность идентификации вещества.

<a id="p100207"></a>9.3.1. Хроматографическая колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Eclipse XDB С18, зернение 5 мкм
<a id="p100208"></a>Температура колонки: 25 °С.
<a id="p100209"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,1%-ная орто-фосфорная кислота (20:80, по объему).
<a id="p100210"></a>Скорость потока элюента: 0,8 куб. см/мин.
<a id="p100211"></a>Ориентировочное время выхода имазамокса: 7,0 - 7,2 мин.
<a id="p100212"></a>9.3.2. Хроматографическая колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Zorbax SB С8 зернением 5 мкм
<a id="p100213"></a>Температура колонки: комнатная.
<a id="p100214"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил - вода - орто-фосфорная кислота (18:72:0,1, по объему).
<a id="p100215"></a>Скорость потока элюента: 1,0 куб. см/мин.
<a id="p100216"></a>Ориентировочное время выхода имазамокса: 14,4 - 14,8 мин.
<a id="p100217"></a>Линейный диапазон детектирования 2 - 20 нг.
<a id="p100218"></a>Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площади пиков вещества (в mAU х сек.), находят среднее значение, с помощью градуировочной характеристики определяют концентрацию имазамокса в хроматографируемом растворе.
<a id="p100219"></a>Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой, приготовленной по [п. 7.13.1](#p100151) или [7.13.2](#p100153), не более чем в 50 раз.


## 10. <a id="p100220"></a>Обработка результатов анализа


<a id="p100221"></a>Содержание имазамокса в пробе (Х, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                                  С х К х V
<a id="p100222"></a>                              Х = ---------,
                                      m

<a id="p100223"></a>С - концентрация имазамокса, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;
<a id="p100224"></a>V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
<a id="p100225"></a>m - масса анализируемого образца, г.
<a id="p100226"></a>К = 5 с учетом объема экстракта, взятого для анализа.


## 11. <a id="p100227"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100228"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

                         2 х |Х  - Х | х 100
                               1    2
<a id="p100229"></a>                         ------------------- <= r,                      (1)
                              (Х  + Х )
                                1    2

    где:
    Х , Х  - результаты параллельных определений, мг/кг;
     1   2
 r - значение предела повторяемости [(табл. 1)](#p100026), при этом r = 2,8 сигма .
                                                                         r
<a id="p100230"></a>При невыполнении [условия (1)](#p100229) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 12. <a id="p100231"></a>Оформление результатов


<a id="p100232"></a>Результат анализа представляют в виде:

              _
<a id="p100233"></a>             (Х +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности P = 0,95,

    где:
    _
    Х   -   среднее   арифметическое  результатов  определений,  признанных
приемлемыми, мг/кг;
    ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

<a id="p100234"></a>                        ДЕЛЬТА = дельта х Х / 100,

    где дельта - граница  относительной  погрешности  методики  (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100026)), %.
<a id="p100235"></a>Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100236"></a>"содержание имазамокса в пробе менее 0,1 мг/кг" <*>.

<a id="p100237"></a>

---

<div align="center">

<a id="p100238"></a><*> 0,1 мг/кг - предел обнаружения.

</div>



## 13. <a id="p100239"></a>Контроль качества результатов измерений


<a id="p100240"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100241"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100242"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
<a id="p100243"></a>    Величина добавки С  должна удовлетворять условию:
                      д

<a id="p100244"></a>                       С  >= ДЕЛЬТА  _ + ДЕЛЬТА  _ ,
                        д          л,Х         л,Х'

    где    +/- ДЕЛЬТА  _ (+/- ДЕЛЬТА  _ )  -   характеристика   погрешности
                     л,Х            л,Х'
(абсолютная погрешность) результатов  анализа,  соответствующая  содержанию
компонента в испытуемом образце (расчетному  значению содержания компонента
в образце с добавкой), мг/кг, при этом:

<a id="p100245"></a>                        ДЕЛЬТА  = +/- 0,84 ДЕЛЬТА,
                              л

    где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

<a id="p100246"></a>                        ДЕЛЬТА = дельта х Х / 100,

    где дельта - граница  относительной  погрешности  методики  (показатель
точности в соответствии с диапазоном определяемых концентраций, [табл. 1](#p100026)),
%.
<a id="p100247"></a>    Контрольный параметр процедуры (К ) рассчитывают по формуле:
                                     к

                                  _    _
<a id="p100248"></a>                             К  = Х' - Х - С ,
                              к             д

          _    _
    где   Х',  Х,   С  - среднее  арифметическое  результатов  параллельных
                     д
определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100227)) содержания компонента в
образце    с    добавкой,    испытуемом   образце,   концентрация   добавки
соответственно, мг/кг.
<a id="p100249"></a>    Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

                              _____________________
                             /     2            2
<a id="p100250"></a>                       К = \/ДЕЛЬТА  _  + ДЕЛЬТА  _.
                                   л,Х'         л,Х

<a id="p100251"></a>    Проводят  сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
                                                            к
контроля (К).
<a id="p100252"></a>    Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

<a id="p100253"></a>                                |К | <= К,                              (2)
                                  к

    процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100254"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100253) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

#### <a id="p100255"></a>13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

<a id="p100256"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

                         2 х |Х  - Х | х 100
                               1    2
<a id="p100257"></a>                         ------------------- <= R,                      (3)
                              (Х  + Х )
                                1    2

    где:
    Х , Х  - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
     1   2
    R - предел воспроизводимости (в соответствии с  диапазоном определяемых

<div align="center">

концентраций, [табл. 1](#p100026)), %.

</div>



## 14. <a id="p100258"></a>Разработчики


<a id="p100259"></a>ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора.



<a id="p100260"></a>

---