МУК 4.1.2545-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств пиклорама в семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 09.09.2009)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 1 декабря 2009 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
9 сентября 2009 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПИКЛОРАМА В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2545-09
1 декабря 2009 года
1. Разработаны: Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Токсикология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 июня 2009 г. № 2).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 9 сентября 2009 г.
4. Введены в действие с 1 декабря 2009 г.
Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в семенах и масле рапса массовой концентрации пиклорама в диапазоне 0,1 — 0,01 мг/кг.
Название действующего вещества по ИСО: пиклорам.
Название по ИЮПАК: 4-амино-3,5,6-трихлорпиридил-2-карбоновая кислота.
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H Cl № O . 6 3 3 2 2
Агрегатное состояние: порошок.
Цвет, запах: бесцветный, со слабым запахом хлора. -2
Давление насыщенного пара: 8,4 x 10 мПа при 25 °C. Коэффициент распределения в системе октанол/вода при 20 °C: K lg P =
ow
1,9 (0,1 н HCl).
Растворимость в воде: 430 мг/л (при 20 °C). В ацетоне — 19,8, ацетонитриле — 1,6, диэтиловом эфире — 1,2 (все в г/кг, при 25 °C).
Пиклорам стабилен в кислотной и щелочной средах с DT при pH 5 — 9 (25 50
°C) в стерильной воде > 30 дней. В водных растворах разрушается под действием солнечной радиации с DT 2,6 дней (при 25 °C).
50
Краткая токсикологическая характеристика. Пиклорам относится к малоопасным веществам по острой пероральной (ЛД (крысы) > 5000 мг/кг), к
50
чрезвычайно опасным веществам по ингаляционной (ЛК (4 ч) для крыс > 35 50 мг/куб. м воздуха) и к малоопасным веществам по накожной (ЛД для 50 кроликов > 2000 мг/кг) токсичности. Умеренно раздражает глаза, слабо раздражает кожу. Не раздражает кожу.
В России установлены следующие гигиенические нормативы:
МДУ мг/кг: семена и масло рапса — 0,01.
Пиклорам — гербицид из группы производных карбоновых кислот системного действия, нарушает ауксиновый обмен, вызывая сильное искривление стеблей и черенков листьев. Применяется для борьбы с двудольными и трудноискореняемыми сорняками в посевах зерновых культур и кукурузы, а также для уничтожения горчака розового и других многолетних сорняков.
Предлагается в России для применения в посевах рапса ярового и озимого с нормой расхода 90 г д.в. на га путем опрыскивания посевов в фазе 3 — 4 листьев культуры.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ ПИКЛОРАМА
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Семена рапса | 0,01 — 0,06 | 50 | 3 | 8 | 10 |
| Масло рапса | 0,01 — 0,06 | 50 | 3 | 8 | 10 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ ПИКЛОРАМА
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| предел обнаружения, мг/кг | диапазон определяемых концентраций, мг/кг | среднее значение определения, % | стандартное отклонение, S, % | доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Семена рапса | 0,01 | 0,01 — 0,06 | 77,0 | 2,4 | +/- 0,9 |
| Масло рапса | 0,01 | 0,01 — 0,06 | 83,5 | 3,1 | +/- 1,2 |
2. Метод измерения
Метод основан на извлечении пиклорама из семян и масла рапса ацетонитрилом, подкисленным концентрированной соляной кислотой до pH = 1, переэкстракции в эфир, содовый раствор с последующим бутилированием и очистки пробы на колонках с флоризилом. Окончательное определение пиклорама проводится методом ГЖХ с использованием детектора по захвату электронов.
Идентификация проводится по времени удерживания. Количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», СИГМА 11140
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности 0,038 г «ACCULAB» V600
Колбы мерные на 25, 50, 100 мл ГОСТ 1770-74
Мерные цилиндры на 10, 25 и 50 мл ГОСТ 1770-74
Микрошприц на 10 мкл ТУ 2.833.106
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 мл ГОСТ 20292-74
Хроматограф газовый «Кристалл 2000м» с детектором по захвату электронов (ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану -14 4 x 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Аналитический стандарт пиклорама с содержанием д.в. более 95% (фирма Дау АгроСаенсес)
Азот особой чистоты ГОСТ 9293-74
Ацетон х.ч. ТУ 6-09-3513-86 Ацетонитрил ТУ 6-09-3534-87
н-Бутанол, х.ч., свежеперегнанный ГОСТ 6006-78
Вода дистиллированная ГОСТ 7602-72 н-Гексан, ч. ТУ 6-09-3375-78 Гелий очищенный марки "А" ТУ 51-940-80
Кислота серная концентрированная, ч. ГОСТ 4204-77
Кислота соляная концентрированная, х.ч. ГОСТ 3118-77
Натрий сернокислый безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрия гидрокарбонат, х.ч. ГОСТ 4201-89
Натрия хлорид, х.ч. ГОСТ 4233-77
Флоризил для колоночной хроматографии с размером частиц 60 — 80 меш, фирма «Агрос Органикс», Бельгия, код 205450010
Стандартный раствор пиклорама в ацетоне — 1 мг/мл (хранить в холодильнике,
срок годности 120 суток).
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1»
Блок нагревательный сухой с регулируемой температурой с пределом 100 °C, Dri-Block, DB-3, фирма Techna (Cambridge) Limited, Великобритания
Ванна ультразвуковая «UNITRA» UNIMA OLSZTYN UM-4
Виалы с тефлоновыми прокладками, Aldrich, cat. № Z27, 702-9
Воронки химические для фильтрования, стеклянные ГОСТ 8613-75 Воронки делительные на 250 мл ГОСТ 10054-75 Вакуумный ротационный испаритель МР-1М ТУ 25-11-917-74
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi или ИР-1М, с водяной баней ТУ 25-11-917-74
на 100 и 250 мл, КПШ-100, КПШ-250 ГОСТ 10394-72 Концентраторы грушевидные (конические) 250 мл ГОСТ 10394-72
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5, (Crosslinked 5% фенилсилоксана и 95% метилсилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирмы Хьюлетт Паккард
Насос диафрагменный FT.19 фирмы KNF Neu Laboport
Мельница лабораторная электрическая
или аналогичная ТУ 46-22-236-84 Стаканы стеклянные на 100 мл ГОСТ 6236-72
Фильтры бумажные «Красная лента» ТУ 6-09-1678-86
Центрифуга MPW-350e с набором полипропиленовых банок емкостью 200 мл MPW Med. instruments
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к определению
7.1. Подготовка колонки, заполненной флоризилом, для очистки проб семян и масла рапса
На дно пластиковой хроматографической колонки (высота 15 см, диаметр 1,5 см) помещают пробочку из стекловаты и заполняют колонку флоризилом на высоту 10 см. На слой флоризила насыпают слой безводного сернокислого натрия толщиной 1,0 см. В день очистки экстракта колонку промывают последовательно 15 куб. см ацетона и 15 куб. см гексана, смывы отбрасывают. После промывки колонка готова к работе.
7.2. Проверка хроматографического поведения пиклорама на колонках с флоризилом
При отработке методики или поступлении новой партии флоризила проводят изучение поведения пиклорама на колонке. В концентратор вносят 1 куб. см стандартного раствор № 3 бутилового эфира пиклорама с концентрацией по пиклораму 0,06 мкг/куб. см, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C. К сухому остатку добавляют 5 куб. см гексана, растворяют содержимое концентратора и наносят на колонку. Промывают колонку 30 куб. см гексана, смыв отбрасывают. Наносят на колонку 10 куб. см смеси гексан:ацетон — 4:1, смыв отбрасывают. Пропускают через колонку 15 куб. см смеси гексан:ацетон — 1:1, отбирая последовательно по 5 куб. см элюента. Каждую фракцию собирают отдельно в концентраторы и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C досуха.
Сухой остаток в концентраторах растворяют в 5 куб. см гексана и вводят в хроматограф 1 куб. мм. По результатам обнаружения пиклорама в каждой фракции определяют объем смеси гексан:ацетон — 1:1, необходимый для полного вымывания пиклорама.
7.3. Приготовление рабочих растворов
7.3.1. Приготовление подкисленного ацетонитрила. Раствор готовят под тягой, строго соблюдая технику безопасности.
В емкость, содержащую 1 куб. дм ацетонитрила, добавляют 10 куб. см 1 н раствора хлороводородной кислоты до pH 1 и перемешивают содержимое.
7.3.2. Приготовление раствора для бутилирования. Раствор готовят под тягой, строго соблюдая технику безопасности.
В мерную колбу объемом 100 мл осторожно приливают 2 мл концентрированной серной кислоты к н-бутанолу. Перемешивают раствор и доводят объем до метки бутанолом. Бутилирующую смесь хранят под тягой в течение одного месяца. Перед приготовлением раствора н-бутанол перегоняют.
7.3.3. Приготовление раствора 4 н раствора серной кислоты. Раствор готовят под тягой, строго соблюдая технику безопасности.
В мерную колбу объемом 1 литр осторожно приливают 112 мл концентрированной серной кислоты к дистиллированной воде. Осторожно перемешивают раствор, добавляют воды, но не до метки. Когда раствор остынет, его доводят водой до метки.
7.3.4. Приготовление раствора 5% гидрокарбоната натрия. В стакан на 500 мл помещают 50 г гидрокарбоната натрия. Доливают около 200 мл воды и растворяют соду при помощи ультразвуковой ванны, помешивая стеклянной палочкой. Раствор переливают в бутылку. При необходимости процедуру повторяют. Раствор в бутылке доводят водой до 1 л.
7.3.5. Приготовление стандартных растворов. 100 мг пиклорама (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор № 1, концентрация 1 мг/мл). Раствор хранится в холодильнике около 120 суток.
Методом последовательного разбавления исходного раствора № 1 ацетоном готовят стандартный раствор № 2 с концентрацией 10,0 мкг/мл, который может храниться в холодильнике не более 30 суток.
Для построения градуировочного графика отбирают 1 мл стандартного раствора № 2 в виал, удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят бутилирование, как указано в разделе 7.4. Получают стандартный раствор № 3 бутилового эфира пиклорама с концентрацией по пиклораму 1,0 мкг/куб. см.
7.4. Бутилирование пиклорама из стандартного раствора
Для приготовления градуировочных растворов отбирают 1 мл стандартного раствора № 2 (концентрация — 10 мкг/куб. см) в виалу и удаляют растворитель током теплого воздуха. К сухому остатку в виале добавляют 1 куб. см 2% раствора концентрированной серной кислоты в бутаноле. Плотно закрывают виалу крышкой и помещают в нагревательный блок для виал, нагретый до 100 °C. Бутилирование проводят в течение 30 мин.
Далее виалу охлаждают до комнатной температуры и добавляют в нее 10 куб. см гексана и 20 — 25 куб. см дистиллированной воды. Смесь интенсивно встряхивают и выстаивают до полного разделения фаз. Верхний гексановый слой используют для приготовления градуировочных растворов, которые применяют при построении градуировочного графика. Концентрация пиклорама в гексановом растворе составляет 1,0 мкг/куб. см (раствор № 3).
7.5. Приготовление градуировочных растворов
Методом последовательного разбавления раствора бутилового эфира пиклорама № 3 гексаном в мерных колбах готовят рабочие растворы с концентрациями по пиклораму: 0,01; 0,02; 0,04; 0,06 мкг/куб. см, которые могут храниться в холодильнике не более 10 суток.
7.6. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации пиклорама в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,01; 0,02; 0,04; 0,06 мкг/см.
В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.
По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ от концентрации пиклорама в растворе в мкг/куб. см.
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79) а также в соответствии с ГОСТ 8988-77 «Масло рапсовое. ТУ», ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».
Семена рапса, подсушенные до стандартной влажности, хранят в тканевых мешочках, в сухом, защищенном от света месте при комнатной температуре не более 6-ти месяцев. Влажные семена замораживают и хранят в морозильной камере при -14 °C до 1 года.
Пробы масла хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 — 4 °C в течение 10 суток.
Для исследовательских целей допускается получение масла в лаборатории из проб семян методом экстракции горячим растворителем при температуре не выше 40 °C.
9. Проведение определения
9.1. Семена рапса
9.1.1. Экстракция. Навеску размолотых семян рапса 10 г помещают в центрифужную банку объемом 250 куб. см, добавляют 50 куб. см подкисленного ацетонитрила и проводят экстракцию на ультразвуковой ванне в течение 10 мин. По окончании экстракции пробу центрифугируют 10 мин при 4000 об./мин. Фильтруют экстракт в концентратор емкостью 250 куб. см через воронку с бумажным фильтром. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 30 куб. см подкисленного ацетонитрила, используя ультразвуковую ванну каждый раз по 5 мин. Объединенный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C до капель масла.
К масляному остатку в концентраторе добавляют 5 куб. см ацетона, омывают концентратор и помещают на 5 мин. на ультразвуковую ванну. В концентратор двумя порциями добавляют 100 куб. см воды, ополаскивают стенки концентратора и переносят в делительную воронку.
9.1.2. Очистка методом перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями. Добавляют в воронку 5 г хлорида натрия, растворяют его путем встряхивания. Водную фазу подкисляют 4 н раствором серной кислоты до pH 1 (2 куб. см), добавляют 50 куб. см эфира и интенсивно встряхивают смесь в течение 1 — 2 мин. После разделения слоев нижний водный слой сливают в тот же концентратор, а верхний эфирный собирают в плоскодонную колбу емкостью 100 куб. см. Водную фракцию возвращают в делительную воронку. Экстракцию повторяют еще трижды, используя для этого каждый раз 30 куб. см эфира. После этого водную фракцию отбрасывают, эфир переливают в ту же делительную воронку.
К эфиру в воронку добавляют 50 куб. см 5% раствора гидрокарбоната натрия, интенсивно встряхивают смесь в течение 1 — 2 мин. После разделения слоев нижний слой соды собирают в плоскодонную колбу на 100 куб. см. Экстракцию повторяют еще раз, используя 50 куб. см раствора гидрокарбоната натрия. Эфир отбрасывают.
Объединенный содовый экстракт переносят обратно в делительную воронку, дают отстояться, отбрасывают отстоявшийся эфир. После этого экстракт в делительной воронке подкисляют 4 н раствором серной кислоты до pH 1 (2 куб. см). Смесь дегазируют. (Осторожно! Возможно разбрызгивание раствора!)
Приливают 50 куб. см эфира, интенсивно встряхивают смесь в течение 1 — 2 мин. После разделения слоев нижний водный слой собирают в плоскодонную колбу, а верхний эфирный переносят в чистый концентратор емкостью 250 куб. см, пропуская через воронку с безводным сульфатом натрия. Содовую фракцию возвращают в делительную воронку. Экстракцию повторяют еще трижды, используя для этого каждый раз 30 куб. см эфира. Эфирные экстракты объединяют в концентраторе и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C досуха. Сухой остаток переносят одной порцией 3 куб. см ацетона и тремя порциями по 5 куб. см диэтилового эфира в виалу и высушивают током теплого воздуха. Проводят бутилирование, как указано в п. 9.1.1.
9.1.3. Бутилирование. К сухому остатку в виале добавляют 1 куб. см 2% раствора концентрированной серной кислоты в бутаноле. Плотно закрывают виалу крышкой и помещают в блок для виал, нагретый до 100 °C. Бутилирование проводят в течение 30 мин. Далее виалу охлаждают до комнатной температуры, добавляют 10 куб. см гексана, 20 — 25 куб. см дистиллированной воды. Смесь интенсивно встряхивают.
9.1.4. Очистка экстракта на колонке с флоризилом. После разделения слоев из верхнего гексанового слоя пипеткой отбирают аликвоту 5 куб. см и наносят на колонку с флоризилом, подготовленную, как указано в разделе 7.1. Промывают колонку 30 куб. см гексана, смыв отбрасывают. Наносят на колонку 10 куб. см смеси гексан:ацетон — 4:1, смыв отбрасывают. Пропускают через колонку 15 куб. см смеси гексан:ацетон — 1:1, собирая элюат в концентратор емкостью 100 куб. см. Содержимое концентратора выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C досуха.
Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 куб. см гексана и вводят в хроматограф 1 куб. мм.
9.2. Масло рапса
Навеску масла 10 г растворяют в 100 куб. см гексана и переносят в делительную воронку. Добавляют в делительную воронку 50 мл подкисленного ацетонитрила и встряхивают смесь в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний (ацетонитрильный) слой собирают в концентратор 250 куб. см. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 30 куб. см ацетонитрила, встряхивая смесь каждый раз по 2 мин. Объединенный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C до капель масла.
Далее проводят очистку пробы с последующим бутилированием и очисткой на колонке с флоризилом, как указано в разделах 9.1.2; 9.1.3 и 9.1.4.
9.3. Условия хроматографирования
Высокоэффективный газовый хроматограф «Кристалл 2000м» с детектором по -14 захвату электронов (ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану 4 x 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки.
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая HP-1, Methyl Siloxane, длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.
Температура детектора — 340 °C, испарителя — 260 °C, программированный нагрев колонки с 220 °C (выдержка 2 мин.) по 10 °C/мин. до 260 °C (выдержка 5 мин.).
Газ 1: тип регулятора расхода газа РРГ 11, режим нормальный, скорость 25 см/с, давление 137,6 кПа.
Газ 2 (гелий) — 75 куб. см/мин.: расход 0,5 куб. см/мин., сброс 1:150.
Газ 3 (азот, поддув детектора) — 45 куб. см/мин.
Абсолютное время удерживания пиклорама — 5 мин. 2 сек. +/- 2%.
Линейность детектирования сохраняется в пределах — 0,01 — 0,06 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор с концентрацией пиклорама 0,06 мкг/куб. см, соответственно разбавляют.
Количественное определение пиклорама проводят по методу абсолютной калибровки посредством сравнения с хроматограммами стандартных растворов пиклорама с концентрацией 0,01 — 0,06 мкг/куб. см.
10. Обработка результатов анализа
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программа сбора и обработки хроматографической информации «Хроматэк Аналитик», версия 1.20.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание пиклорама рассчитывают по формуле:
S x A x V x D
ПР
X = --------------- x P, 100 x S x m СТ
где: X — содержание пиклорама в пробе, мг/кг; S — высота (площадь) пика стандарта, мВ; СТ S — высота (площадь) пика образца, мВ; ПР A — концентрация стандартного раствора, мкг/мл; V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; D — коэффициент аликвоты (= 2); m — масса анализируемого образца, г; P — содержание пиклорама в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X и X - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
X +/- ДЕЛЬТА мг/кг при вероятности P = 0,95,
где: _ X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг. _ дельта x X
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае, если содержание компонента меньше нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг» <*>
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д п,X п,X' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности п,X п,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта x X
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры K рассчитывают по формуле: к
_ _ K = X' - X - C , к д _ _ где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
______________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ . п,X' п,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
|K | <= K, (2) к процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
табл. 1), %.
14. Разработчики
Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева.
Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов».