--- title: "\"МУК 4.1.2480-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дорамектина в пищевых продуктах. Методические указания\"" number: "МУК 4.1.2480-09" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2480-09" --- ## "МУК 4.1.2480-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дорамектина в пищевых продуктах. Методические указания" # "МУК 4.1.2480-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дорамектина в пищевых продуктах. Методические указания" (утв. Роспотребнадзором 02.02.2009) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "О безопасности пищевой продукции" (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 N 880). > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ [введен](#p100002) в действие со 2 февраля 2009 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
2 февраля 2009 года #### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДОРАМЕКТИНА** **В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.2480-09**
Дата введения:
с момента утверждения 1. Разработаны ГУ НИИ питания РАМН. 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. N 3). 3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 февраля 2009 года. 4. Введены в действие с момента утверждения. 5. Введены впервые. Настоящие методические указания устанавливают методику определения дорамектина в мясе сельскохозяйственных животных и продуктах его переработки методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, находящихся в обращении на территории Российской Федерации, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию. Методические указания могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке. ## 1. Краткая характеристика препарата Общепринятое название: дорамектин, ветранал. Название по номенклатуре ИЮПАК: 25-циклогексил-5-O-диметил-25-ди(1-метил-пропил)авермектин. CAS: 117704-25-3. Структурная формула (не приводится). C H O 50 74 14 Мол. масса: 899,11. Физические свойства: белый порошок, без запаха. Хорошо растворим в ацетонитриле. Торговая марка: эндектоцид "Дектомакс" ("Dectomax"). Фирма-производитель: "Pfizer". Форма выпуска: 1% раствор дорамектина в растительном масле. Область применения. "Дектомакс" используется в качестве противопаразитарного средства широкого спектра действия для лечения и профилактики заболеваний крупного рогатого скота, овец и свиней. Средство предназначено для парентерального введения крупному рогатому скоту. ## 2. Методика определения остаточных количеств дорамектина в мясе сельскохозяйственных животных и продуктах его переработки методом высокоэффективной жидкостной хроматографии ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода. Методика основана на определении остаточных количеств дорамектина в пищевых продуктах методом ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием (лямбда = 360 нм, лямбда - 470 нм) после экстракции возб. эм. дорамектина из образца. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки. 2.1.2. Метрологические характеристики метода. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций. Таблица 1
**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДОРАМЕКТИНА**
В ТКАНЯХ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ (P = 0,95, n = 10)
Анализируемый объектМышечная ткань, печень, почки, жир
Диапазон загрязнения, мг/кг0,003 - 0,10,1 - 2,5
Предел обнаружения, мг/кг0,001
Среднее значение степени извлечения, %71,584,6
Стандартное отклонение повторяемости, S , мг/кг (в % от среднего значения) r0,017 (22,6)0,078 (15,6)
Предел повторяемости, r, мг/кг (в % от среднего значения)0,047 (62,6)0,217 (43,4)
Предел относительной погрешности результата анализа, +/- дельта, %25,513,4
### 2.2. Реактивы Ацетонитрил, квалификации для ВЭЖХ Тетрагидрофуран, квалификации ос.ч. Метанол, квалификации для ВЭЖХ н-Гексан, квалификации х.ч. ТУ 6-09-4521 Вода дистиллированная ГОСТ 6709 Натрия гидроокись, квалификации ос.ч. ГОСТ 4328 Аммиак водный (25 - 30% NH OH) квалификации ос.ч. [ГОСТ 24147](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-24147-80) 4 Триэтиламин, >= 99,0% (Sigma), CAS: 121-44-8 Трифторуксусный ангидрид, >= 99,0% (Sigma) Дорамектин (UK-67,994), 91,9%, "Pfizer" ### 2.3. Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы Хроматографическая система, состоящая из жидкостного хроматографа высокого давления, дегазатора, спектрофлюориметрического детектора и системы для сбора и обработки хроматографических данных. Колонка для ВЭЖХ, заполненная октадецилсиликагелем 250 x 4,5 мм, 5 мкм (например Phenomenex Luna C18 или аналогичная) Микрошприц объемом 25 мкл для ВЭЖХ (Hamilton, США) Шприц для инъекций, пластиковый, объемом 25 куб. см Виалы стеклянные с закручивающейся крышкой "для автосамплера" (в крышке окошко, герметично закрытое резиновой вкладкой), объемом 2 - 4 куб. см Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С ТУ 64-1-2451 Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г и погрешностью +/- 0,0001 г ГОСТ 24104 Ротационный испаритель ИР-1М или аналогичный ТУ 25-11-917 Блендер Баллон со сжатым азотом квалификации "ПНГ" ГОСТ 9293 Воронка делительная на 250 куб. см ГОСТ 25336 Колбы мерные наливные 2-50-2, 2-100-2, 1-1000-2 [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Колбы грушевидные с конусом 14/23 вместимостью 100 куб. см ГОСТ 25336 Цилиндры по ГОСТ 1770 вместимостью 100 куб. см Пипетки 4(5)-1-2, 4(5)-2-10, 4(5)-2-25 [ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) Фильтры беззольные ФО-ФС-15 "красная лента" и "синяя лента" ТУ 2642-001-42624157 Допускается использование приборов и посуды с метрологическими характеристиками и реактивов квалификацией не ниже указанных в МУК. ### 2.4. Отбор проб Отбор проб производится в соответствии с [ГОСТ Р 51447-99](https://bukva.ai/docs/gost-r-51447-99) "Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб". Для длительного хранения образцы продуктов замораживаются и хранятся при -18 °C до анализа. Перед анализом образцы тщательно измельчают в гомогенизаторе или блендере. ### 2.5. Подготовка к проведению измерений 2.5.1. Приготовление подвижной фазы и кондиционирование хроматографической колонки. В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 530 куб. см ацетонитрила, 270 куб. см тетрагидрофурана, 200 куб. см дистиллированной воды, тщательно перемешивают и выдерживают до комнатной температуры. Раствор дегазируют. Хроматографическую колонку кондиционируют до минимального дрейфа базовой линии. 2.5.2. Приготовление стандартных растворов дорамектина. 0,050 +/- 0,001 г кристаллического дорамектина количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют в 50 куб. см ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки и тщательно перемешивают. Получают основной стандартный раствор в ацетонитриле с массовой долей дорамектина 0,5 мг/куб. см. Для построения градуировочной кривой методом последовательного разбавления ацетонитрилом готовят рабочие стандартные растворы с содержанием дорамектина 0,100, 0,010, 0,001 и 0,0001 мг/куб. см. Отбирают аликвоты стандартных растворов, упаривают их на ротационном испарителе при температуре не более 40 - 45 °C. Дорамектин переводят во флюоресцирующее производное, хроматографируют в трех повторностях (объем пробы 10 куб. мм). Строят график зависимости средних площадей пиков от концентрации дорамектина в мг/куб. см. Основной и рабочие стандартные растворы дорамектина хранят в стеклянной посуде (мерной колбе) с притертой пробкой в прохладном месте (при температуре около 4 °C). Сроки годности основного раствора 12 месяцев, рабочих - 2 месяца. 2.5.3. Подготовка образца. Измельченный образец, массой 2,5 г, помещают в 20 куб. см ацетонитрила, закрывают емкость пробкой или парафильмом, помещают в теплую (40 - 50 °C) ультразвуковую баню на 20 - 25 мин. Затем охлаждают, переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют при 5 тыс. об./мин. в течение 5 мин. Супернатант декантируют в делительную воронку и обезжиривают двумя порциями гексана по 10 куб. см. Ацетонитрильный экстракт дорамектина собирают в круглодонную колбу и упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 - 45 °C. ##### 2.5.4 Получение флуоресцирующего производного дорамектина А) Приготовление раствора аммиака в метаноле. В виалу (крышка герметичная с резиновой вкладкой, которую можно проколоть иглой) наливают 2 - 3 куб. см метанола, крышку завинчивают. На пластиковый шприц для инъекций надевают иглу, вынимают поршень. Внутрь шприца помещают 4 - 6 гранул сухого гидроксида натрия, наливают водный аммиак и вставляют поршень. Шприц переворачивают вверх иглой, выделяющийся газ вытесняет из иглы воду, на иглу надевают виалу так, чтобы аммиак барботировал через метанол. Поршень шприца придерживают, насыщение происходит в течение 0,5 - 1 мин. Перед каждым анализом рекомендуется готовить свежий раствор аммиака в метаноле. Б) Получение флуоресцирующего производного дорамектина. К остатку после упаривания аликвоты стандартного образца или пробы добавляют 0,15 куб. см ацетонитрила, 0,1 куб. см триэтиламина и 0,05 куб. см трифторуксусного ангидрида, смесь перемешивают и отдувают в токе азота на водяной бане. К оставшемуся в колбе маслянистому содержимому добавляют 0,25 куб. см свежеприготовленного 2 М раствора аммиака в метаноле, снова отдувают в токе азота на водяной бане, добавляют к содержимому 0,4 куб. см ацетонитрила (объем пробы V = 0,5 куб. см). пр Аликвоту раствора образца V (от 0,005 до 0,02 куб. см) вводят в х хроматограф. ### 2.6. Выполнение измерений Условия хроматографического анализа. Хроматографическая колонка: колонка для ВЭЖХ, заполненная октадецилсиликагелем (например Phenomenex Luna C18, 250 х 4,5 мм, 5 мкм). Подвижная фаза: ацетонитрил - 53%, тетрагидрофуран - 27%, вода - 20% об. Скорость подачи элюента: 1,0 куб. см/мин. Детектирование: флюориметрическое, лямбда = 360 нм, лямбда - возб. эм. 470 нм. Объем вводимой пробы 5 - 20 куб. мм. Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,1 - 125 нг дорамектина. Абсолютное время удерживания дорамектина в приведенных условиях - 14,5 +/- 0,1 мин. Хроматограмма образца сала, добавка дорамектина составляет 10 мкг/кг. Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза, вычисляют среднюю площадь пика, соответствующего дорамектину. ### 2.7. Обработка результатов измерения 2.7.1. Калибровка хроматографа и построение градуировочной кривой. Отбирают аликвоты стандартных растворов, упаривают их на ротационном испарителе при температуре не более 40 - 45 °C. Дорамектин переводят во флюоресцирующее производное, хроматографируют в трех повторностях (объем пробы 10 куб. мм) [(п. 2.6)](#p100080). Строят график зависимости средних площадей пиков от концентрации дорамектина в мг/куб. см. Градуировку во всем диапазоне измеряемых концентраций проводят при смене колонки и/или предколонки; при замене стандартного образца и/или реактивов после проведения ремонта; после длительного простоя хроматографа (2 недели и более). 2.7.2. Оформление результатов. Содержание дорамектина можно рассчитать по градуировочному графику или методом внешнего стандарта. В последнем случае для расчетов используют стандартный раствор, площадь пика которого наиболее близка к площади пика дорамектина в образце. Для расчета по методу внешнего стандарта используют формулу: V x V x C x S обр ст ст х X = 400 ---------------------, V x S х ст где: X - содержание дорамектина в пробе, мг/кг; C - содержание дорамектина в стандартном растворе, мг/куб. см; ст S - площадь пика дорамектина в анализируемом образце; х S - площадь пика стандарта; ст V - объем аликвоты стандартного раствора дорамектина, куб. см; ст V - объем образца (0,5 куб. см); обр V - объем образца, введенный в хроматограф (0,005 - 0,02 куб. см). х ## 3. Оперативный контроль результатов измерений #### 3.1 Контроль повторяемости результатов определения За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости: 2 x |X - X | x 100 1 2 ------------------- <= дельта, (X + X ) 1 2 где: X , X - результаты параллельных определений, мг/кг; 1 2 дельта - предел относительной погрешности [(табл. 1)](#p100030), в %. При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ. ## 4. Требования техники безопасности При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф. ## 5. Требования к квалификации операторов Работу по указанной методике могут исполнять высококвалифицированные специалисты в области газожидкостной хроматографии и санитарной химии. Исполнители должны быть проинструктированы об основных мерах техники безопасности при работе с веществами 1 - 2 класса опасности, органическими растворителями, а также с правилами безопасности при работе в химической лаборатории [(п. 3)](#p100096). ## 6. Условия измерений Помещение лаборатории должно соответствовать санитарным правилам проектирования, оборудования, эксплуатации и содержания производственных и лабораторных помещений, предназначенных для проведения работ с веществами 1 - 2 класса опасности, органическими растворителями. Аналитическая лаборатория должна быть оснащена вентиляционной системой согласно ГОСТ 12.4.021. ---