---
title: "\"МУК 4.1.2453-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флорасулама в кукурузном масле методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.2453-09"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2453-09"
---

## "МУК 4.1.2453-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флорасулама в кукурузном масле методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.2453-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флорасулама в кукурузном масле методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 02.02.2009)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 29 апреля 2009 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**<br>
2 февраля 2009 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ**
**ФЛОРАСУЛАМА В КУКУРУЗНОМ МАСЛЕ МЕТОДОМ**
**ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="center">

**МУК 4.1.2453-09**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

<div align="center">

29 апреля 2009 года

</div>


1. <a id="p100006"></a>Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России.
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. N 3).
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 февраля 2009 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены в действие с 29 апреля 2009 г.
5. <a id="p100010"></a>Введены впервые.

<a id="p100011"></a>Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации флорасулама в диапазоне 0,025 - 0,25 мг/кг в кукурузном масле.
<a id="p100012"></a>Флорасулам. Название действующего вещества по ИЮПАК:
<a id="p100013"></a>К-(2,6-дифторфенил)-8-фтор-5метокси-1,2,4-триазоло[1,5-с]пиримидин-2-сульфонамид.
<a id="p100014"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100015"></a>    C  H F N SO.
     12 8 3 5
<a id="p100016"></a>    Мол. масса: 359,3.
<a id="p100017"></a>    Агрегатное состояние: порошок.
<a id="p100018"></a>    Цвет, запах: белого цвета.
                          5
<a id="p100019"></a>    Давление паров: 1 х 10  Ра (при 25 °С).
<a id="p100020"></a>    Коэффициент  распределения  октанол - вода: lg K   - 1,00, K   = 10 (pH
                                                    ow          ow
4,0);  lg  K   = -1,22, K   = 0,0603 (pH 7,0); lg K   = -2,06, K   = 0,0087
            ow           ow                        ow           ow
(pH 10,0).
<a id="p100021"></a>    Температура плавления: 193 - 230 °С (с разложением).
<a id="p100022"></a>    Растворимость в воде: 84 мг/л/куб. дм (pH 5,0, 20 °С); 6,36 (pH 7,0, 20
°С); 94,2 г/куб. дм (pH 9,0, 20 °С); в очищенной воде - 121 мг/куб. дм.
<a id="p100023"></a>    Растворим  в органических растворителях (г/куб. дм при 20 °С): ацетон -
123,0, ацетонитрил - 72,1, дихлорметан - 3,75, метанол - 9,81, этилацетат -
15,9,  ксилол  -  227,0  мг/л, н-гептан - 0,019 мг/куб. дм, октанол - 184,0
мг/куб. дм.
<a id="p100024"></a>    Константа диссоциации pKa - 4,54.
<a id="p100025"></a>    Краткая  токсикологическая  характеристика: флорасулам относится к мало
опасным  веществам по острой пероральной (ЛД   для крыс - более 6000 мг/кг)
                                            50
и  накожной  (ЛД    для  кроликов > 2000 мг/кг)  токсичности, но к умеренно
                50
опасным   веществам   (ЛС     для  крыс  составляет  более  5000  мг/м)  по
                         50
ингаляционной токсичности. Побочные отрицательные эффекты не обнаружены.
<a id="p100026"></a>Область применения: флорасулам - гербицид системного действия, проникает в растения через корни и листья, но не проникает в зерно, ингибирует ацетолактатсинтазу - ключевой фермент в пути синтеза изолейцина и валина.
<a id="p100027"></a>Флорасулам вызывает хлороз, обесцвечивание жилок и некроз в течение 2 - 4 недель.
<a id="p100028"></a>В России применяется в качестве гербицида в посевах кукурузы и зерновых культур с нормой расхода 2,5 - 5,0 г/га по д.в. в смеси с другими гербицидами при однократной обработке в фазу кущения или 3 - 4 листьев кукурузы.
<a id="p100029"></a>В России гигиенические нормативы не установлены.

<div align="center">

1. <a id="p100030"></a>Метрологическая характеристика метода

</div>


<a id="p100031"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

<div align="right">

<a id="p100032"></a>Таблица 1

<a id="p100033"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ ФЛОРАСУЛАМА**

</div>



<table>
<colgroup><col width="15%"><col width="22%"><col width="20%"><col width="16%"><col width="12%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый объект</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95</td><td>Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r</td><td>Предел повторяемости, r, %</td><td>Предел воспроизводимости, R, %</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Кукурузное масло</td><td>0,02 - 0,1 вкл.</td><td>50</td><td>4,0</td><td>11,2</td><td>13,4</td></tr>
<tr><td>более 0,1 - 0,2</td><td>25</td><td>5,0</td><td>14,0</td><td>20,0</td></tr>
</table>


<a id="p100037"></a>Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

<div align="right">

<a id="p100038"></a>Таблица 2

</div>


<div align="center">

<a id="p100039"></a>**ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ,**

</div>

**ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ ФЛОРАСУЛАМА**


<table>
<colgroup><col width="16%"><col width="12%"><col width="21%"><col width="13%"><col width="18%"><col width="21%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый</td><td colspan="5">Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>объект</td><td>Предел обнаружения, мг/кг</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>Среднее значение определения, %</td><td>Стандартное отклонение, S, %</td><td>Доверительный интервал среднего результата, +/-, %</td></tr>
<tr><td>Кукурузное масло</td><td>0,025</td><td>0,025 - 0,25</td><td>82,2</td><td>3,2</td><td>0,72</td></tr>
</table>


<div align="center">

2. <a id="p100042"></a>Метод измерений

</div>


<a id="p100043"></a>Метод основан на определении флорасулама с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистке перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, последующего метилирования и очистки метальных производных на концентрирующих патронах, содержащих обращенную фазу С8.
<a id="p100044"></a>Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение методом абсолютной калибровки.
<a id="p100045"></a>В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

<div align="center">

3. <a id="p100046"></a>Средства измерений, реактивы, вспомогательные<br>
устройства и материалы

</div>



#### <a id="p100047"></a>3.1 Средства измерений


<a id="p100048"></a>Весы аналитические "OHAUS", Е 11140
<a id="p100049"></a>Весы лабораторные общего назначения
с наибольшим пределом взвешивания до 600 г
и пределом допустимой погрешности
+/- 0,038 г "ACCULAB" V600
<a id="p100050"></a>Колбы мерные на 25, 50 и 100 куб. см [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100051"></a>Микрошприц для жидкостного хроматографа
на 50 - 100 мм
<a id="p100052"></a>Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74)
<a id="p100053"></a>Хроматограф жидкостной Уотерс 510 с
ультрафиолетовым детектором с изменяемой
длиной волны и чувствительностью не ниже
0,005 единиц адсорбции на шкалу или
другой аналогичного типа                      Номер госрегистрации 15311-02
<a id="p100054"></a>Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100055"></a>Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100056"></a>3.2 Реактивы


<a id="p100057"></a>Флорасулам, аналитический стандарт
с содержанием д.в. 99,2%, фирма
Дау Агросайенсис
<a id="p100058"></a>Ацетон, осч                                   ТУ 2633-00-4-11291058-94
<a id="p100059"></a>Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм                   ТУ 6-09-2167-84
<a id="p100060"></a>Вода бидистиллированная деионизированная      ГОСТ 7602-72
<a id="p100061"></a>Гексан, хч, д/спектроскопии                   ТУ 6-09-06-657-84
<a id="p100062"></a>Гелий, осч                                    ГОСТ 20461-75
<a id="p100063"></a>Калий марганцовокислый, чда ГОСТ 20490-75
<a id="p100064"></a>Кислота серная концентрированная, ч ГОСТ 4204-77
<a id="p100065"></a>Метил йодистый (перегоняют и перегнанный
реактив хранят в темной посуде в
холодильнике в течение 2 месяцев)             МРТУ 6-09-6513-70
<a id="p100066"></a>Натрий сернокислый безводный, хч [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
<a id="p100067"></a>Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233-77
<a id="p100068"></a>Триэтиламин (перегоняют и перегнанный
реактив хранят в темной посуде в
холодильнике в течение 2 месяцев)             ГОСТ
<a id="p100069"></a>Эфир диэтиловый                               ГОСТ 6265-74
<a id="p100070"></a>Концентрирующие патроны Диапак С8 (0,6 г)     ТУ 4215-002-05451931-94
<a id="p100071"></a>Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100072"></a>3.3 Вспомогательные устройства и материалы


<div align="center">

<a id="p100073"></a>Аллонж прямой с отводом для вакуума для<br>
работы с концентрирующими патронами

</div>

Диапак С8
<a id="p100074"></a>Аппарат для встряхивания проб
**"SKLO UNION TYP LT1"**
<a id="p100075"></a>Ванна ультразвуковая "UNITRA"
**UNIMA OLSZTYNUM-4**
<a id="p100076"></a>Воронки химические для фильтрования
стеклянные                                    ГОСТ 8613-75
<a id="p100077"></a>Воронки делительные на 250 куб. см            ГОСТ 10054-75
<a id="p100078"></a>Испаритель ротационный Rota Vapor R110
Buchi или ИР-1М с водяной баней               ТУ 25-11-917-74
<a id="p100079"></a>Колбы конические плоскодонные на 100
и 250 куб. см, КПШ-100, КПШ-250               ГОСТ 10394-72
<a id="p100080"></a>Колонка хроматографическая стальная длиной
250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм,
Symmetry Shield RP18, зернение 5 мкм,
фирма Уотерс
<a id="p100081"></a>Колбы конические плоскодонные объемом
250, 500 и 1000 куб. см                       ГОСТ 9737-70
<a id="p100082"></a>Концентраторы грушевидные и круглодонные
объемом 100 и 250 куб. см                     ГОСТ 10394-75
<a id="p100083"></a>Насос диафрагменный FT.19 фирмы
KNF Neu Laboport
<a id="p100084"></a>Предколонка хроматографическая стальная
Symmetry С18 длиной 20 мм, внутренним
диаметром 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма
Уотерс
<a id="p100085"></a>Стаканы стеклянные объемом 100 - 500
куб. см                                       ГОСТ 25366-80Е
<a id="p100086"></a>Установка для перегонки растворителей
<a id="p100087"></a>Фильтры бумажные "красная лента" ТУ-6-09-1678-86
<a id="p100088"></a>Фильтры для очистки растворителей диаметром
20 мм с отверстиями пор 20 мкм, фирма Уотерс
<a id="p100089"></a>Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. <a id="p100090"></a>Требования безопасности

<a id="p100091"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
<a id="p100092"></a>4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

5. <a id="p100093"></a>Требования к квалификации операторов

<a id="p100094"></a>К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
<a id="p100095"></a>К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. <a id="p100096"></a>Условия измерений

<div align="center">

<a id="p100097"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

</div>

- <a id="p100098"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100099"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. <a id="p100100"></a>Подготовка к выполнению определений

<a id="p100101"></a>Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак С8 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на патронах, построение калибровочной кривой.


#### <a id="p100102"></a>7.1 Подготовка органических растворителей


<a id="p100103"></a>7.1.1. Очистка ацетона. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия (А. Гордон, Р. Форд. Спутник химика. Москва, 1976, с. 438 - 439).

##### <a id="p100104"></a>7.1.2 Очистка ацетонитрила. Ацетонитрил перегоняют.

<a id="p100105"></a>7.1.3. Очистка гексана. Гексан встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают бледно-розовым раствором перманганата калия до тех пор, пока раствор не перестанет обесцвечиваться, затем промывают водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (А. Гордон, Р. Форд. Спутник химика. Москва, 1976, с. 441).
<a id="p100106"></a>7.1.4. Очистка бидистиллированной воды. Бидистиллят кипятят в течение 6 часов с марганцовокислым калием, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.

##### <a id="p100107"></a>7.1.5 Очистка диэтилового эфира. Диэтиловый эфир перегоняют.



#### <a id="p100108"></a>7.2 Приготовление растворов для проведения анализа


<a id="p100109"></a>7.2.1. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ. Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанные ацетонитрил и очищенную воду.
<a id="p100110"></a>В плоскодонную колбу объемом 1 куб. дм помещают 450 куб. см ацетонитрила и 500 куб. см очищенной воды. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 см/мин. в течение 5 мин., после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.

##### <a id="p100111"></a>7.2.2 Приготовление градуировочных растворов.

<a id="p100112"></a>7.2.2.1. Стандартный раствор с концентрацией флорасулама 1,0 мг/куб. см. Взвешивают 50 мг флорасулама в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
<a id="p100113"></a>7.2.2.2. Стандартный раствор с концентрацией флорасулама 10,0 мкг/куб. см. Из стандартного раствора флорасулама с концентрацией 1,0 мг/куб. см отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании.
<a id="p100114"></a>7.2.2.3. Стандартные растворы флорасулама с концентрацией 2,5; 1,0; 0,5 и 0,25 мкг/куб. см для внесения в образцы масла. Методом последовательного разведения ацетоном готовят растворы, содержащие по 2,5; 1,0; 0,5 и 0,25 мкг/куб. см, и используют эти растворы для внесения в образцы масла.
<a id="p100115"></a>Для хроматографического исследования стандарт подвергают процедурам очистки на концентрирующих патронах и метилированию, чтобы нивелировать потери, возникающие при этих манипуляциях при очистке фортифицированных проб. Эти операции проводят каждый раз при анализе очередной партии образцов.
<a id="p100116"></a>7.2.2.4. Метилирование стандартов. В круглодонную колбу объемом 100 куб. см помещают 1 куб. см стандартного раствора флорасулама в ацетонитриле с концентрацией 10,0 мкг/куб. см. Туда же добавляют последовательно 100 мкл триэтиламина и 100 мкл йодистого метила, помещают смесь в ультразвуковую ванну на 5 с и выдерживают при температуре 22 - 25 °С в течение часа. По истечении этого времени смесь упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе (на стенках колбы образуются белые кристаллы).
<a id="p100117"></a>К сухому остатку добавляют 10 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия, тщательно обмывают стенки концентратора и переносят раствор в делительную воронку. Концентратор обмывают 10 куб. см диэтилового эфира, переносят его в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз в воронке верхний слой (диэтиловый эфир) собирают в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Экстракцию диэтиловым эфиром повторяют еще 2 раза, используя по 10 куб. см растворителя. Экстракт объединяют и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100118"></a>Сухой остаток подвергают очистке на патроне Диапак С8, элюат выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 10 куб. см ацетонитрила (получают метилированный стандарт с концентрацией 1,0 мкг/куб. см). Далее методом последовательного разведения ацетонитрилом получают стандартные растворы с концентрацией 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.


#### <a id="p100119"></a>7.3 Установление градуировочной характеристики


<a id="p100120"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации метилированного производного флорасулама в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.
<a id="p100121"></a>В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.2](#p100143). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.


#### <a id="p100122"></a>7.4 Подготовка концентрирующих патронов

<div align="center">

Диапак С8 для очистки экстрактов

</div>


<a id="p100123"></a>7.4.1. Подготовка концентрирующего патрона Диапак С8 (0,6 г) для очистки экстракта. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов не должна превышать 2 - 2,5 куб. см/мин.
<a id="p100124"></a>Патрон Диапак С8 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
<a id="p100125"></a>Кондиционирование: патрон промывают последовательно 5 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:1 и 10 куб. см очищенной воды. Элюат отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности картриджа.
<a id="p100126"></a>7.4.2. Проверка хроматографического поведения метилированного стандарта флорасулама на концентрирующем патроне Диапак С8. Из раствора метилированного стандарта флорасулама в ацетонитриле, содержащего 2 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см и помещают в концентратор объемом 100 куб. см. Добавляют туда же 9 куб. см очищенной воды, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Патрон промывают 10 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:5, элюат собирают, упаривают досуха при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Далее патрон промывают последовательно 4 порциями по 5 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:1, элюат после внесения каждой порции упаривают досуха при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие метилированный флорасулам, и объединяют их.


#### <a id="p100127"></a>7.5 Подготовка и кондиционирование колонки

<div align="center">

для жидкостной хроматографии

</div>


<a id="p100128"></a>Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с предколонкой Symmetry С18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25 °С и скорости потока подвижной фазы 1 куб. см/мин. 3 - 4 ч.

<div align="center">

8. <a id="p100129"></a>Отбор проб и хранение

</div>


<a id="p100130"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" N [2051-79](https://bukva.ai/docs/2051-79) от 21.08.79, а также в соответствии с [ГОСТ 8808-91](https://bukva.ai/docs/gost-8808-91) "Масло кукурузное, ТУ".
<a id="p100131"></a>Пробы масла кукурузы хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 - 4 °С не более 30 дней.

<div align="center">

9. <a id="p100132"></a>Проведение определений

</div>



#### <a id="p100133"></a>9.1 Кукурузное масло


<a id="p100134"></a>9.1.1. Экстракция. Пробу масла весом 10 г помещают в химический стакан объемом 100 куб. см, прибавляют туда же 20 куб. см гексана, тщательно перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Химический стакан обмывают последовательно двумя порциями гексана объемом 20 и 10 куб. см и смывы переносят в ту же делительную воронку.
<a id="p100135"></a>Затем в делительную воронку с гексановым раствором масла помещают 30 куб. см ацетонитрила и интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой помещают в химический стакан объемом 200 куб. см, верхний гексановый слой оставляют в делительной воронке. Флорасулам экстрагируют еще тремя порциями ацетонитрила объемом по 30 куб. см в тех же условиях. Ацетонитрильный экстракт объединяют в химическом стакане объемом 200 куб. см.
<a id="p100136"></a>9.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Ацетонитрильный экстракт, полученный по [п. 9.1.1](#p100134), переносят в чистую делительную воронку объемом 250 куб. см, туда же прибавляют 50 куб. см гексана и интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают через слой безводного сульфата натрия толщиной 1 см в концентратор объемом 250 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Гексан отбрасывают.
<a id="p100137"></a>9.1.3. Метилирование. Сухой экстракт, полученный по [п. 9.1.2](#p100136), растворяют в 1 куб. см ацетонитрила. Туда же добавляют последовательно 100 мкл триэтиламина и 100 мкл йодистого метила, помещают смесь в ультразвуковую ванну на 5 с и выдерживают при температуре 22 - 25 °С в течение часа. По истечении этого времени смесь упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе (на стенках колбы образуются белые кристаллы).
<a id="p100138"></a>К сухому остатку добавляют 10 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия, тщательно обмывают стенки концентратора и переносят раствор в делительную воронку. Концентратор обмывают 10 куб. см диэтилового эфира, переносят его в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз в воронке верхний слой (диэтиловый эфир) собирают в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Экстракцию диэтиловым эфиром повторяют еще 2 раза, используя по 10 куб. см растворителя. Экстракт объединяют и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

<a id="p100139"></a>

---

<a id="p100140"></a><*> Повторное упаривание и перерастворение образца неприемлемо, так как при этом уменьшается содержание метилированного производного флорасулама в пробе.


##### <a id="p100141"></a>9.1.4 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С8.

<a id="p100142"></a>Сухой остаток после метилирования растворяют в 1,0 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9,0 куб. см воды, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон Диапак С8. Патрон промывают 10 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:5. Элюат отбрасывают. Флорасулам элюируют с картриджа 15 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:1, элюат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2,5 куб. см ацетонитрила и аликвоту объемом 20 куб. мм вводят в хроматограф.


#### <a id="p100143"></a>9.2 Условия хроматографирования


<a id="p100144"></a>Хроматограф "Waters" или другой с аналогичными характеристиками с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны.
<a id="p100145"></a>Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 4,6 мм х 25 см, зернением 5 мкм. Предколонка стальная Symmetry С18, 3,9 мм х 2 см, зернением 5 мкм. Температура колонки: 25 °С.
<a id="p100146"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил - вода в соотношении 45:50. Длина волны 260 нм.
<a id="p100147"></a>Время удерживания флорасулама - 12,1 - 12,5 мин. Чувствительность - 0,003 ед. оптической плотности на шкалу. Объем вводимой пробы - 20 куб. мм. Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.

<div align="center">

10. <a id="p100148"></a>Обработка результатов

</div>


<a id="p100149"></a>Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа "Agilent Chemstation".
<a id="p100150"></a>Альтернативная обработка результатов.
<a id="p100151"></a>Содержание флорасулама рассчитывают по формуле:

                               S   х А х V
                                ПР
<a id="p100152"></a>                          Х = ------------- х Р,
                              100 х S   х m
                                     СТ

    где:
    Х - содержание флорасулама в пробе, мг/кг;
    S   - высота (площадь) пика стандарта, мм;
     СТ
    S   - высота (площадь) пика образца, мм;
     ПР
    А - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
    V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
    m - масса анализируемого образца, г (см);
    Р - содержание флорасулама в аналитическом стандарте, %.

<div align="center">

11. <a id="p100153"></a>Проверка приемлемости результатов

</div>

параллельных определений

<a id="p100154"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

                         2 х |Х  - Х | х 100
                               1    2
<a id="p100155"></a>                         ------------------- <= r,                      (1)
                              (Х  + Х )
                                1    2

    где:
    Х , Х  - результаты параллельных определений, мг/кг;
     1   2
 r - значение предела повторяемости [(табл. 1)](#p100033), при этом r =
2,8 сигма .
         r
<a id="p100156"></a>При невыполнении [условия (1)](#p100155) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

<div align="center">

12. <a id="p100157"></a>Оформление результатов

</div>


<a id="p100158"></a>Результат анализа представляют в виде:

                _
<a id="p100159"></a>               (Х +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности P = 0,95,


    где:
    _
    Х   -   среднее   арифметическое  результатов  определений,  признанных
приемлемыми, мг/кг;
    ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

                                             Х
<a id="p100160"></a>                          ДЕЛЬТА = дельта х ---,
                                            100

    где  дельта  -  граница  относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100033)), %.
<a id="p100161"></a>В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100162"></a>"содержание вещества в пробе менее 0,025 мг/кг" <*>.

<a id="p100163"></a>

---

<a id="p100164"></a><*> 0,025 мг/кг - предел обнаружения.

<div align="center">

13. <a id="p100165"></a>Контроль качества результатов измерений

</div>


<a id="p100166"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100167"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100168"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
<a id="p100169"></a>    Величина добавки С  должна удовлетворять условию:
                      д

<a id="p100170"></a>                       С  = ДЕЛЬТА  _ + ДЕЛЬТА  _ ,
                        д         л,Х         л,Х'

    где   +/-  ДЕЛЬТА  _  (+/-  ДЕЛЬТА  _ )  -  характеристика  погрешности
                     л,Х              л,Х'
(абсолютная  погрешность)  результатов  анализа, соответствующая содержанию
компонента  в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

<a id="p100171"></a>                        ДЕЛЬТА  = +/- 0,84 ДЕЛЬТА,
                              л

    где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

                                             Х
<a id="p100172"></a>                          ДЕЛЬТА = дельта х ---,
                                            100

    где дельта - граница  относительной  погрешности  методики  (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100033)), %.
<a id="p100173"></a>    Результат контроля процедуры К  рассчитывают по формуле:
                                  к

                                  _    _
<a id="p100174"></a>                             К  = Х' - Х - С ,
                              к             д

         _    _
    где  Х',  Х,  С   -  среднее  арифметическое  результатов  параллельных
                   д
определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100153)), содержания компонента в
образце   с   добавкой,   испытуемом   образце   и   концентрация   добавки
соответственно, мг/кг.
<a id="p100175"></a>    Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

                              _____________________
                             /     2            2
<a id="p100176"></a>                       К = \/ДЕЛЬТА  _  + ДЕЛЬТА  _.
                                   л,Х'         л,Х

<a id="p100177"></a>    Проводят  сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
                                                            к
контроля (К).
<a id="p100178"></a>    Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

<a id="p100179"></a>                                |К | <= К,                              (2)
                                  к

    процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100180"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100179) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
<a id="p100181"></a>13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
<a id="p100182"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

                         2 х |Х  - Х | х 100
                               1    2
<a id="p100183"></a>                         ------------------- <= R,                      (3)
                              (Х  + Х )
                                1    2

    где:
    Х , Х  - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
     1   2
    R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
[табл. 1](#p100033)), %.





<div align="right">

<a id="p100184"></a>Приложение

</div>


<div align="center">

<a id="p100185"></a>**ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ФЛОРАСУЛАМА ИЗ КУКУРУЗНОГО МАСЛА**<br>
**(5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)**

</div>



<table>
<colgroup><col width="18%"><col width="18%"><col width="18%"><col width="12%"><col width="16%"><col width="19%"></colgroup>
<tr><td>Среда</td><td>Предел обнаружения, мг/кг (дм)</td><td>Среднее значение определения, мг/кг (дм)</td><td>Полнота определения, %</td><td>Стандартное отклонение, SD, %</td><td>Доверительный интервал среднего результата, SE, %</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Кукурузное масло</td><td>0,025</td><td>0,021</td><td>84</td><td>2,2</td><td>0,96</td></tr>
<tr><td>0,050</td><td>0,042</td><td>84</td><td>3,5</td><td>1,55</td></tr>
<tr><td>0,100</td><td>0,081</td><td>81</td><td>2,9</td><td>1,31</td></tr>
<tr><td>0,250</td><td>0,199</td><td>79,6</td><td>2,1</td><td>0,93</td></tr>
</table>




<a id="p100191"></a>

---