МУК 4.1.2380-08. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств лямбда-цигалотрина в яблочном и виноградном соках методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 02.07.2008)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32). Документ введен в действие со 2 сентября 2008 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
2 июля 2008 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЛЯМБДА-ЦИГАЛОТРИНА В ЯБЛОЧНОМ И ВИНОГРАДНОМ СОКАХ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2380-08
2 сентября 2008 года
1. Разработаны Российским Государственным Аграрным Университетом — МСХА имени К.А. Тимирязева.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-гигиеническому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 апреля 2008 г. № 1).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 июля 2008 г.
4. Введены в действие с 2 сентября 2008 г.
Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации лямбда-Цигалотрина в соке яблок и винограда в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.
Название действующего вещества по ИСО: лямбда-Цигалотрин.
Название по ИЮПАК: (S,R)-альфа-циано-3-феноксибензил(1R,1S)-цис-3-(2-хлор-3,3,3-трифторпропенил)-2,2-диметилциклопропанкарбоксилат (1:1).
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H ClF NO . 23 19 3 3
Давление насыщенного пара: 0,001 мПа при 20 °С.
Коэффициент распределения в системе октанол/вода при 20 °С: K log P = 7.
ow
Растворимость в воде при 20 °С — 0,005 мг/куб. дм (pH 6,5).
Растворимость в органических растворителях г/куб. дм: ацетоне, гексане, метаноле, толуоле, этилацетате > 500.
Устойчив на свету. Стабилен при хранении в течение 6 месяцев при температуре 15 - 25 °С. Период полураспада в почве - ДТ = 4 - 12 недель.
50
Краткая токсикологическая характеристика: лямбда-Цигалотрин относится к опасным веществам по острой пероральной (ЛД (крысы) — 56 — 79 мг/кг), 50 ингаляционной (ЛК (4 час.) для крыс > 0,06 мг/л воздуха) и к малоопасным 50 веществам по накожной (ЛД для крыс — 1293 — 1507 мг/кг, для кроликов > 50 2000 мг/кг) токсичности. Побочные отрицательные эффекты не обнаружены.
В России установлены следующие гигиенические нормативы:
ДСД для человека — 0,002 мг/кг/сут.;
МДУ (мг/кг) в яблочном и виноградном соках не установлен.
Лямбда-Цигалотрин — инсектицид контактного и кишечного действия из группы синтетических пиретроидов, обладающий слабым репеллентным эффектом.
Применяется для подавлении развития вредителей из отрядов жесткокрылых, перепончатокрылых, прямокрылых, двукрылых и чешуекрылых (имаго и личинки), а также отдельных видов клещей в посевах зерновых и овощных культур, кукурузы, хлопчатника, на плантациях картофеля, технических, ягодных и плодовых культур при норме расхода 5 — 20 г д.в. на га в период вегетации культур до двух обработок за сезон.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, Р = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Сок яблок | 0,01 — 0,1 | 50 | 4 | 11 | 13 |
| Сок винограда | 0,01 — 0,1 | 50 | 3 | 9 | 11 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ,
ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА
ДЛЯ ЛЯМБДА-ЦИГАЛОТРИНА
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20 | ||||
| Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Сок яблок | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 90,5 | 3,5 | +/- 1,5 |
| Сок винограда | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 92,9 | 3,2 | +/- 1,4 |
Метод основан на определении лямбда-Цигалотрина методом капиллярной ГЖХ с использованием детектора по захвату электронов после экстракции его из матрицы органическим растворителем и перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями.
Идентификация проводится по времени удерживания. Количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.
3.1 Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», СИГМА 11140.
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г «ACCULAB» V600.
Колбы мерные на 25, 50, 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.
Микрошприц на 10 куб. мм, ТУ 2.833.106.
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см, ГОСТ 20292-74.
Стаканы химические стеклянные на 100 куб. см, ГОСТ 25336-82Е.
Хроматограф газовый HP6890 Series GC System с детектором по захвату электронов (ЭЗД), регистрационный номер в государственном реестре средств измерения № 201/978.
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см, ГОСТ 1770-74.
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2 Реактивы
Аналитический стандарт лямбда-Цигалотрина с содержанием не менее 95% д.в.
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Ацетон, х.ч., ТУ 6-09-3513-86.
Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.
н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.
Гелий очищенный марки «А», ТУ 51-940-80.
Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.
Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.
Стандартный раствор лямбда-Цигалотрина в гексане — 1 мг/куб. см (хранить в холодильнике, срок годности 120 суток).
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой классификации.
3.3 Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1».
Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. № 3120-0250, NALGENE.
Виалы с тефлоновыми прокладками, Aldrich, cat. № Z27, 702-9.
Воронки химические для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.
Воронки делительные на 250 куб. см, ГОСТ 10054-75.
Испаритель ротационный Rotavapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма Буши.
Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 куб. см, КПШ-100, КПШ-250, ГОСТ 10394-72.
Концентраторы грушевидные (конические) 250 куб. см, ГОСТ 10394-72.
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая Rtx(R)-1 (100% диметилполисилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирмы Restek.
Насос диафрагменный FT.19 фирмы KNF Neu Laboport.
Фильтры бумажные «Красная лента», ТУ 6-09-1678-86.
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7.1 Приготовление рабочих растворов
7.1.1 Приготовление стандартных растворов.
100 мг лямбда-Цигалотрина (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют навеску в н-гексане и доводят объем до метки гексаном (стандартный раствор № 1, концентрация 1 мг/куб. см). Раствор хранится в холодильнике около 120 суток.
Методом последовательного разбавления исходного раствора № 1 гексаном готовят стандартный раствор № 2 с концентрацией 10,0 мкг/куб. см, который может храниться в холодильнике не более 30 суток.
Методом последовательного разбавления исходного раствора № 2 гексаном готовят рабочие растворы лямбда-Цигалотрина с концентрацией 0,01; 0,02; 0,05; 0,1 мкг/куб. см для построения калибровочного графика, которые могут храниться в холодильнике не более 10 суток.
Методом последовательного разбавления исходного раствора № 1 ацетоном готовят рабочий раствор лямбда-Цигалотрина с концентрацией 0,1 мкг/куб. см для внесения в сок при отработке и апробации методики, который можно храниться в холодильнике не более 10 суток.
7.2 Построение градуировочного графика
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации лямбда-Цигалотрина в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 0,01; 0,02; 0,05; 0,1 мкг/куб. см.
В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.
По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади хроматографического пика в Hz от концентрации лямбда-Цигалотрина в растворе в мкг/куб. см (рисунок 1 — не приводится).
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 25892-83 «Виноградный сок, ТУ», ГОСТ 659-79 «Соки плодовые и ягодные натуральные. ТУ».
Пробы сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре +4 °С не более 10 суток.
9.1 Сок яблок и винограда
9.1.1 Экстракция
Навеску 10 г сока разводят 20 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия и помещают в полипропиленовую банку. К навеске прибавляют 50 куб. см ацетонитрила и помещают на аппарат для встряхивания проб на 10 минут. Затем пробу переносят в делительную воронку и после разделения слоев нижний водный слой собирают в полипропиленовую банку, а верхний ацетонитрильный в концентратор емкостью 250 куб. см. Повторяют экстракцию еще два раза, используя по 30 куб. см ацетонитрила.
Объединенный ацетонитрильный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 30 °С досуха.
9.1.2 Счистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
К сухому остатку в концентратор добавляют 5 куб. см ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора, туда же приливают 50 куб. см дистиллированной воды, перемешивают и переносят водную фазу в делительную воронку на 250 куб. см. В концентратор добавляют еще раз 50 куб. см дистиллированной воды, тщательно обмывают стенки и переносят водную фазу в ту же делительную воронку. Добавляют 5 г хлорида натрия и встряхивают воронку до полного растворения осадка.
Добавляют к водной фазе 30 куб. см гексана и интенсивно встряхивают смесь в течение 1 — 2 мин. После разделения слоев нижний водный слой собирают в тот же концентратор, а верхний (гексановый) собирают в чистый концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Водную фракцию возвращают в делительную воронку и экстрагируют лямбда-Цигалотрин еще дважды, используя для этого каждый раз 30 куб. см гексана. Объединенный гексановый экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 25 — 30 °С.
Сухой остаток растворяют в 10 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.2 Условия хроматографирования
Хроматограф газовый HP6890 Series GC System с детектором по захвату электронов (ЭЗД) в модификации с электронным управлением пневмонической системы (ЭУПС).
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая Rtx(R)-1 (100% диметилполисилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.
Температура детектора — 300 °С, поток обдува анода (азот) — 6,0 см /мин., поток поддува — 59,0 куб. см/мин.
Температура испарителя — 260 °С, режим Split, тип газа — гелий, давление 20,32 psi, деление потока 5:1, split поток 5,0 куб. см/мин.
Программированный нагрев колонки с 220 °С (выдержка 1 мин.) по 10 град./мин. до 260 °С (выдержка 7 мин.), режим — постоянное давление, поток колонки 1,0 мл/мин., средняя скорость 31 см/сек.
Абсолютное время удерживания лямбда-Цигалотрина — 9,03 мин. +/- 2%.
Линейность детектирования сохраняется в пределах — 0,01 — 0,1 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор с концентрацией лямбда-Цигалотрина 0,1 мкг/куб. см, соответственно разбавляют.
Количественное определение лямбда-Цигалотрина проводят по методу абсолютной калибровки посредством сравнения с хроматограммами стандартных растворов лямбда-Цигалотрина с концентрацией 0,01 — 0,1 мкг/куб. см.
10. Обработка результатов анализа
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа HP GC ChemStation Rev. A.06.03RUS.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание лямбда-Цигалотрина рассчитывают по формуле:
Sпр х А х V
Х = ------------- х Р, 100 х Sст х m
Х — содержание лямбда-Цигалотрина в пробе, мг/кг;
Sст — высота (площадь) пика стандарта, Hz;
Sпр — высота (площадь) пика образца, Hz;
А — концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m — масса анализируемого образца, г;
Р — содержание лямбда-Цигалотрина в аналитическом стандарте, %.
параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r — значение предела повторяемости (таблица 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
Результат анализа представляют в виде:
_
(Х +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности Р = 0,95,
где:
_
Х - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг. ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг» <*>.
<*> 0,01 мг/кг — предел обнаружения.
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6.2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки С должна удовлетворять условию: д
С = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,Х л,Х' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,Х л,Х' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
_ _ К = Х' - Х - С , к д _ _ где Х', Х, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,Х' л,Х Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= R. (3)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
таблица 1), %.