МУК 4.1.2335-08. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств мефеноксама в зерне и соломе зерновых колосовых культур, семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 15.02.2008)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32). Документ введен в действие с 10 апреля 2008 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
15 февраля 2008 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ МЕФЕНОКСАМА В ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2335-08
10 апреля 2008 года
1. Разработаны ГНУ Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 декабря 2007 г. № 3).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 15 февраля 2008 г.
4. Введены в действие с 10 апреля 2008 г.
Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации мефеноксама в зерне колосовых культур, семенах и масле рапса в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг, в соломе зерновых культур в диапазоне 0,1 — 1 мг/кг.
Название вещества по ИСО: Мефеноксам.
Название вещества по ИЮПАК: Метил-N-(метоксиацетил)-N-(2,6-ксилил)-D-аланинат.
Структурная формула (не приводится).
C H NO 15 21 4
(R)-энантиомер металаксила. Вязкая жидкость от бледно-желтого до светло-коричневого цвета. Температура плавления -38,7 °C. Температура кипения: разлагается при 270 °C. Давление паров при 25 °C: 3,3 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 1,71. Растворимость
ow
(г/куб. дм) при 25 °C: вода — 26, н-гексан — 59, смешивается с ацетоном, этилацетатом, метанолом, дихлорметаном, толуолом и н-октанолом.
Вещество устойчиво к фотолизу и гидролизу в кислых и нейтральных условиях (DT > 200 дней). В щелочных условиях (pH 9) DT = 116 дней. 50 50 В биологически активных почвах в аэробных условиях мефеноксам разлагается со средним значением DT = 21 день.
50
Краткая токсикологическая характеристика
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — 667 мг/кг; острая 50 дермальная токсичность (LD ) для крыс — > 2000 мг/кг; острая ингаляционная 50
токсичность (LC ) для крыс - > 2290 мг/куб. м воздуха. LC для рыб -
50 50
100 мг/куб. дм (96 час.). Фунгицид нетоксичен для птиц, пчел и дождевых червей.
Рекомендуемый гигиенический норматив для мефеноксама в зерне хлебных злаков, семенах и масле рапса — 0,1 мг/кг.
Мефеноксам — системный фунгицид защитного и искореняющего действия из класса фениламидов. Ингибирует образование белков в грибах, подавляя синтез рибосомальной РНК. Высокоэффективен против возбудителей фитофтороза картофеля и томатов, мильдью винограда, ложной мучнистой росы и корнееда овощных культур, сахарной свеклы и подсолнечника, увядания растений кукурузы.
Применяется в России в качестве протравителя семян сахарной свеклы и подсолнечника с нормой расхода 0,17 — 1,0 кг д.в./т. Помимо этого, мефеноксам в составе смесевых препаратов с фунгицидами защитного действия используется для двух-трехкратной обработки посевов овощных культур, картофеля и винограда в течение вегетационного периода с нормой расхода 0,1 — 0,2 кг д.в./га.
1. Метрологические характеристики метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/куб. дм, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повповторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Зерно | От 0,05 до 0,1 вкл. | 50 | 2,7 | 7,6 | 11,7 |
| Более 0,1 до 0,5 | 25 | 2,4 | 6,7 | 10,4 | |
| Солома | 0,1 | 50 | 2,1 | 5,9 | 9,1 |
| Более 0,1 до 1,0 | 25 | 1,8 | 5,0 | 7,8 | |
| Семена рапса | От 0,05 до 0,1 вкл. | 50 | 2,5 | 7,0 | 10,8 |
| Более 0,1 до 0,5 | 25 | 2,3 | 6,5 | 10,0 | |
| Масло рапса | От 0,05 до 0,1 вкл. | 50 | 3,2 | 9,0 | 13,9 |
| Более 0,1 до 0,5 | 25 | 2,3 | 6,5 | 10,0 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| предел обнаружения, мг/кг | диапазон определяемых концентраций, мг/кг | среднее значение определения, % | стандартное отклонение S, % | доверительный интервал среднего результа, +/- % | |
| Зерно | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 84,7 | 3,9 | +/- 3,7 |
| Солома | 0,1 | 0,1 — 1,0 | 83,8 | 3,1 | +/- 2,9 |
| Семена рапса | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 84,0 | 3,1 | +/- 2,9 |
| Масло рапса | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 85,0 | 4,0 | +/- 3,7 |
2. Метод измерений
Методика основана на определении вещества с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором (ТИД). Контроль мефеноксама в матрицах осуществляется по содержанию вещества после экстракции его из зерна и соломы ацетоном, а из семян и масла рапса ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с оксидом алюминия и концентрирующем патроне Диапак-диол.
Идентификация проводится по времени удерживания пика вещества, количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры колонки.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Газовый хроматограф «Кристалл 2000М» с ТИД (СКБ «Хроматэк», Россия) Номер Госреестра № 14516-95
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,036 г ГОСТ 7328
Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2 ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см ГОСТ 29227
Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой вместимостью 5 куб. см ГОСТ 1770
Цилиндры мерные 2-го класса точности
вместимостью 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Мефеноксам, аналитический стандарт фирмы Сингента (Швейцария) с содержанием д.в. 99,1%
Ацетонитрил для хроматографии, х.ч. ТУ 6-09-3534-87 Вода бидистиллированная или деионизованная ГОСТ 7602 н-Гексан, х.ч. ТУ 6-09-3375
Натрия гидроксид, х.ч. ГОСТ 4328
Натрий сернокислый безводный, х.ч. ГОСТ 4166
Хлористый метилен (дихлорметан), х.ч. ГОСТ 12794
Этиловый эфир уксусной кислоты, ч. ГОСТ 22300
Эфир диэтиловый медицинский ГОСТ 6265
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Азот газообразный (баллон), ос.ч. ГОСТ 9293
Аппарат для встряхивания проб АВУ-1 ТУ 64-1-1081-73
Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма Branson Instr. Co. (США)
Вата медицинская ТУ 9393-001-00302238 Воронка Бюхнера ГОСТ 0147
Воронки делительные вместимостью 100 и 250 куб. см ГОСТ 25336
Воронки конусные диаметром 30 — 37 и 60 мм ГОСТ 25336
Дефлегматор елочный ГОСТ 9737
Колбы плоскодонные вместимостью 250 куб. см ГОСТ 9737
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25, 50, 100 куб. см ГОСТ 9737
Колонка кварцевая капиллярная ZB-1 (типа SE-30) длиной 20 м, внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, фирма Phenomenex (США) или аналогичная
Колонка хроматографическая стеклянная длиной 25 см, внутренним диаметром 8 — 10 мм ГОСТ 9737
Мельница лабораторная электрическая ТУ 46-22-236-84 Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 10696
Оксид алюминия для колоночной хроматографии кислый (Сигма, США), I степени активности
Патроны концентрирующие Диапак-диол (0,6 г) (ЗАО «БиоХимМак СТ», Москва) ТУ 4215-001-05451931-94
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi (Швейцария) ТУ 25-11-917
Стаканы химические вместимостью 50 и 500 куб. см ГОСТ 25336
Установка для перегонки растворителей
Фильтры бумажные «красная лента» обеззоленные или фильтры из хроматографической бумаги Ватман 3ММ ТУ 6-09-2678-77
Центрифуга Т-23 (Janetzki, Германия) или аналогичная
Шприц для ввода образцов для газового хроматографа вместимостью 1 — 10 куб. мм (Hamilton, США)
Шприц медицинский с разъемом Льюера вместимостью 10 куб. см ГОСТ 22090
Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 + 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с оксидом алюминия и концентрирующих патронов Диапак-диол.
7.1. Очистка органических растворителей
7.1.1 Очистка н-гексана.
Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.
7.1.2 Очистка этилацетата.
Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.
7.1.3 Очистка ацетона.
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г KMnO и 2 г K CO ). 4 2 3
7.1.4 Очистка диэтилового эфира.
Растворитель предварительно встряхивают со свежеприготовленным раствором железного купороса, а затем последовательно промывают 0,5%-ным раствором перманганата калия, 5%-ным раствором гидроксида натрия и водой, после чего сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
7.2. Подготовка колонки с оксидом алюминия и концентрирующего патрона Диапак-диол для очистки экстракта
Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 — 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 10 г оксида алюминия V степени активности в 15 куб. см гексана (оксид алюминия V степени активности по Брокману получают добавлением 15% воды к оксиду алюминия I степени активности). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 15 куб. см гексана со скоростью 1 — 2 капли в сек., после чего она готова к работе.
Концентрирующий патрон Диапак-диол промывают последовательно с помощью медицинского шприца 12 куб. см этилацетата и 8 куб. см смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему) со скоростью 5 куб. см/мин.
7.3. Проверка хроматографического поведения мефеноксама на колонке с оксидом алюминия
В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,2 куб. см градуировочного раствора № 1 мефеноксама с концентрацией 10,0 мкг/куб. см в этилацетате (п. 7.5.2). Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 куб. см смеси гексан-диэтиловый эфир (9:1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с оксидом алюминия, подготовленную по п. 7.2. Промывают колонку 20 куб. см смеси гексан-диэтиловый эфир (8:2, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в сек., элюат отбрасывают. Затем колонку с силикагелем промывают 30 куб. см смеси гексан-диэтиловый эфир (1:1, по объему). Фракционно (по 5 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание мефеноксама по п. 9.5. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый объем элюирующего агента.
7.4. Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки
Капиллярную кварцевую колонку ZB-1 (типа SE-30) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 280 °C и скорости газа-носителя 2 куб. см/мин. в течение 8 — 10 часов.
7.5. Приготовление градуировочных растворов
7.5.1. Исходный раствор мефеноксама для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см).
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,010 г мефеноксама, растворяют в 40 куб. см этилацетата, доводят объем раствора этим же растворителем до метки, тщательно перемешивают.
Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °C в течение 3-х месяцев.
7.5.2. Раствор мефеноксама № 1 для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см).
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10,0 куб. см исходного раствора мефеноксама с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.5.1), разбавляют этилацетатом до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов № 2 — 5.
Для приготовления проб зерна, соломы, семян и масла с внесением при оценке полноты извлечения мефеноксама из исследуемых образцов используют ацетоновый раствор мефеноксама с концентрацией 5 мкг/куб. см.
Градуировочный раствор № 1 и ацетоновый раствор мефеноксама хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °C в течение месяца.
7.5.3. Рабочие растворы № 2 — 5 мефеноксама для градуировки (концентрация 0,25 — 2,5 мкг/куб. см).
В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 2,5, 5,0, 12,5 и 25,0 куб. см градуировочного раствора № 1 мефеноксама с концентрацией 10,0 мкг/куб. см (п. 7.5.2), доводят до метки этилацетатом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 5 с концентрацией мефеноксама 0,25, 0,5, 1,25 и 2,5 мкг/куб. см, соответственно.
Растворы готовят непосредственно перед использованием.
7.6. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ x с) от концентрации мефеноксама в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.
В инжектор хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора (п. 7.5.3) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.
8. Отбор и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТом Р 50436-92 «Зерновые. Отбор проб зерна», ГОСТом 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб» и ГОСТом 8988-77 «Масло рапсовое. ТУ».
Пробы зерна, семян и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
Пробы масла рапса хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 — 4 °C. В некоторых случаях масло получают из семян рапса экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.
9. Выполнение определения
9.1. Экстракция и очистка
9.1.1. Зерно, солома. Образец размолотого зерна (10 г) или соломы (5 г) помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, приливают 20 куб. см дистиллированной воды и спустя 5 минут 60 куб. см ацетона. Суспензию перемешивают в течение 45 минут на аппарате для встряхивания и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 40 куб. см ацетона. Экстракт и промывную жидкость объединяют и переносят в круглодонную колбу. Далее проводят очистку экстракта по пп. 9.2, 9.3 и 9.4.
9.1.2. Семена. Образец размолотых семян массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 70 куб. см ацетонитрила и помещают на аппарат для встряхивания на 1 час. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 30 куб. см ацетонитрила. Объединенный ацетонитрильный экстракт переносят в круглодонную колбу, куда добавляют 30 куб. см деионизованной воды. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп. 9.2, 9.3 и 9.4.
9.1.3. Масло. Образец масла массой 5 г переносят в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и колбу помещают на аппарат для встряхивания на 30 минут. Верхний ацетонитрильный слой декантируют в химический стакан, а к оставшемуся в колбе маслу приливают 30 куб. см ацетонитрила и операцию экстракции повторяют. Объединенную ацетонитрильную фазу переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют 10 мин. при 10000 g. Декантируют ацетонитрильный слой в круглодонную колбу через слой ваты, помещенной в конусную воронку. После декантации вату промывают 10 куб. см ацетонитрила, которые объединяют с фильтратом. Объединенную ацетонитрильную фазу упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C и остаток дополнительно очищают по пп. 9.3 и 9.4.
9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
Экстракты, полученные по пп. 9.1.1 и 9.1.2 и помещенные в круглодонные колбы, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка при температуре не выше 40 °C. К водному остатку прибавляют 15 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 30 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз нижний органический слой сливают в делительную воронку вместимостью 250 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 20 куб. см хлористого метилена. Объединенную дихлорметановую фракцию переносят в делительную воронку, приливают 50 куб. см 0,1 № раствора NaOH и смесь интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп. 9.3 и 9.4.
9.3. Очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия
Сухой остаток экстрактов зерна, соломы и семян в круглодонной колбе, полученный по п. 9.2, растворяют в 3 куб. см смеси гексан-диэтиловый эфир (9:1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.2. Колбу обмывают 2 куб. см смеси гексан-диэтиловый эфир (9:1, по объему), которые также наносят на колонку. Промывают колонку 15 куб. см смеси гексан-диэтиловый эфир (9:1, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в сек., элюат отбрасывают. Мефеноксам элюируют с колонки 25 куб. см смеси гексан-диэтиловый эфир (1:1, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °С.
Остаток экстракта масла в круглодонной колбе, полученный по п. 9.1.3, растворяют в 2 куб. см смеси гексан-диэтиловый эфир (9:1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.2. Колбу обмывают 1 куб. см смеси гексан-диэтиловый эфир (9:1, по объему), которые также наносят на колонку. Промывают колонку 10 куб. см смеси гексан-диэтиловый эфир (9:1, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в сек., элюат отбрасывают. Мефеноксам элюируют с колонки 12 куб. см смеси гексан-диэтиловый эфир (8:2, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 50 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °C.
9.4. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак-диол
Остаток экстракта зерна, семян, соломы или масла в круглодонной колбе, полученный по п. 9.3, растворяют при помощи ультразвуковой ванны в 2 куб. см смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему) и переносят в подготовленный концентрирующий патрон Диапак-диол (п. 7.2). Патрон промывают 0,5 куб. см смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему), элюат отбрасывают. Мефеноксам элюируют 3,5 куб. см смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему) в круглодонную колбу вместимостью 25 куб. см. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 40 °C. Остаток экстрактов зерна, семян и соломы в колбе растворяют в 2 куб. см, а масла — в 1 куб. см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание мефеноксама по п. 9.5.
9.5. Условия хроматографирования
Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с термоионным детектором на азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше
-14
2,82 x 10 г/куб. см.
Колонка капиллярная кварцевая ZB-1 (типа SE-30), длина 18 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, фирма Phenomenex (США)
Температура термостата испарителя — 260 °C, детектора — 300 °C, термостата колонки (программа: от 140 °C (1 мин.) со скоростью 20°/мин. до 190 °C (0 мин.); со скоростью 5°/мин. до 230 °C (0 мин.); со скоростью 20°/мин. до 260 °C (5 мин.).
Расход газов: газа-носителя (азот) — 3,0 куб. см/мин.; водорода и воздуха к ТИД — 12,3 и 200 куб. см/мин., соответственно.
Время удерживания мефеноксама: 5 мин. 12 сек. — 5 мин. 15 сек.
Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.
Линейный диапазон детектирования: 0,25 — 2,5 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика мефеноксама.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/куб. см, разбавляют этилацетатом.
10. Обработка результатов анализа
Содержание мефеноксама рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
H x A x V
1
где: X — содержание мефеноксама в пробе, мг/кг; H — площадь пика образца, мВ x с; 1 H — площадь пика стандарта, мВ x с; 0 A — концентрация стандартного раствора мефеноксама, мкг/куб. см; V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см; m — масса анализируемого образца (г).
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг (куб. дм);
1 2
r — значение предела повторяемости (таблица 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА), мг/кг (куб. дм), при вероятности P = 0,95,
где: _ X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг (куб. дм); ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг (куб. дм);
дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе „менее нижней границы определения“»
менее 0,05 мг/кг для зерна, семян и масла <*>
менее 0,1 мг/кг для соломы <**>.
<*> 0,05 мг/кг — предел обнаружения для зерна колосовых культур, семян и масла рапса.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки С должна удовлетворять условию: д
С = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг (куб. дм), при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг (куб. дм);
дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
_ _ К = X' - X - С , к д _ _ где X', X, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг (куб. дм).
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R)
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях,
1 2
мг/кг (куб. дм); R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
таблица 1), %.