МУК 4.1.2292-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изопропилфенацина в воде методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 30.10.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2292-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изопропилфенацина в воде методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2292-07. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2292-07
(утв. Роспотребнадзором 10.10.2007)
Примечание
Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32). Документ введен в действие с 25 декабря 2007 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
10 октября 2007 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИЗОПРОПИЛФЕНАЦИНА В ВОДЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2292-07
25 декабря 2007 года
1. Разработаны Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (Т.В. Юдина, Н.Е. Федорова, В.Н. Волкова).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 21.06.2007 № 2).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 10 октября 2007 г.
4. Введены в действие с 25 декабря 2007 г.
Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воде массовой концентрации изопропилфенацина в диапазоне 0,0002 — 0,004 мг/куб. дм.
2-(альфа-фенил-изопропилфенил)-ацетил)-индан-1,3-дион (IUPAC)
Структурная формула — не приводится.
Твердое вещество желто-оранжевого цвета. Температура плавления 148 °C, кипения - более 350 °C. Плотность 1,21 г/куб. см. Хорошо растворим в большинстве органических растворителей (ацетоне, этаноле, диэтиловом эфире
и др.). Практически не растворим в воде — 0,3 мг/куб. дм.
Агрегатное состояние в воздушной среде — аэрозоль и пары.
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — более 1,6 +/- 50 0,2 мг/кг, мышей — 3,4 +/- 0,5 мг/кг.
Изопропилфенацин — ротентицид класса индандионов, обладающий антикоагулянтной активностью, рекомендуется для борьбы с грызунами в открытом грунте (осень, зима, весна) на зимующих культурах (зерновые, пастбищные травы, древесные, кустарниковые насаждения и др.), в защищенном грунте на всех культурах независимо от сезона. Применяется в виде приманки.
ОДУ изопропилфенацина в воде водоемов — 0,0008 мг/куб. дм.
1. Метрологические характеристики
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (куб. дм) | Показатель точности (граница относительной погрешности) +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Вода | От 0,004 до 0,001 вкл. | 100 | 4,2 | 12 | 15 |
| Менее 0,001 до 0,0002 | 150 | 5,4 | 15 | 19 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА
| Анализируемый | Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20 | ||||
| объект | предел обнаружения, мг/куб. дм | диапазон определяемых концентраций, мг/куб. дм | среднее значение определения, % | стандартное отклонение, S, % | доверительный интервал среднего результата, +/-, % |
| Вода | 0,0002 | 0,0002 — 0,004 | 91,3 | 3,8 | 2,7 |
2. Метод измерений
Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции из анализируемой пробы воды дихлорметаном и последующей очистки экстракта на патроне для твердофазной экстракции Sep-Pak Silica.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф Номер в Государственном с ультрафиолетовым детектором с переменной реестре средств измерений
длиной волны (фирмы Waters, США) 15311-02
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104
Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2 и 2-1000-2 ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2 класса точности ГОСТ 29227 вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см
Пробирки градуированные вместимостью ГОСТ 1770 5 или 10 куб. см
Цилиндры мерные 2 класса точности ГОСТ 1770 вместимостью 10, 50, 100 и 1000 куб. см
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Изопропилфенацин, аналитический стандарт с содержанием основного вещества (сумма изомеров) 94,6% (ЗАО «Щелково Агрохим»)
Ацетонитрил для хроматографии, х.ч. ТУ-6-09-4326-76
Вода бидистиллированная, деионизованная ГОСТ 6709 или перегнанная над KMnO 4
Натрий сернокислый безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Кислота ортофосфорная, х.ч., 85% ГОСТ 6552
Метилен хлористый (дихлорметан), х.ч. ГОСТ 12794
Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат) ГОСТ 4166 эталонный
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аллонж прямой с отводом для вакуума (для работы с концентрирующими патронами)
Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)
Бумажные фильтры «красная лента», обеззоленные ТУ 6-09-2678-77
Воронки делительные вместимостью 1000 куб. см ГОСТ 25336
Воронки конусные диаметром 30 — 37 и 60 мм ГОСТ 25336
Колбы плоскодонные вместимостью ГОСТ 9737 200 — 250 куб. см
Колбы круглодонные на шлифе, вместимостью ГОСТ 9737 10, 100 и 250 куб. см
Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм
Патроны для твердофазной экстракции типа Sep-Pak Plus Silica Cartridges (масса сорбента 690 г)
Пробирки центрифужные ГОСТ 25336
Ротационный вакуумный испаритель В-169 ТУ 25-11-917-74 фирмы Buchi, Швейцария
Стаканы химические вместимостью ГОСТ 25336 50 и 100 куб. см
Установка для перегонки растворителей
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Хроматографическая колонка стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Symmetry(R) C18, зернением 5 мкм
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50 — 100 куб. мм
Шприц медицинский с разъемом Льюера ГОСТ 22090
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка патронов для твердофазной экстракции, проверка хроматографического поведения вещества на них, отбор проб.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.
7.1.2 Очистка этилацетата
Этилацетат промывают последовательно 5% водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.
7.1.3 Очистка н-Гексана
Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.
7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 890 куб. см ацетонитрила, 110 куб. см бидистиллированной или деионизованной воды и 1 куб. см ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
7.3. Кондиционирование хроматографической колонки
Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 1,0 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.
7.4. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения
7.4.1 Исходный раствор изопропилфенацина для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см)
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,01 г изопропилфенацина, добавляют 50 — 70 куб. см ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
Растворы № 1 — 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.
7.4.2 Раствор № 1 изопропилфенацина для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/куб. см)
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора изопропилфенацина с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.4.1), разбавляют ацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено».
7.4.3. Рабочие растворы № 2 — 5 изопропилфенацина для градуировки (концентрация 0,05 — 1,0 мкг/куб. см)
В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 0,5; 1,0; 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 5 с концентрацией изопропилфенацина 0,05; 0,1; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см, соответственно.
Растворы хранятся в холодильнике в течение недели.
7.5. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость суммы площадей 2 пиков орто- и параизомеров изопропилфенацина (мкВ х с) от концентрации вещества в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки № 2 — 5.
В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.5.1. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков изомеров действующего вещества, рассчитывают сумму площадей орто- и параизомеров изопропилфенацина.
Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2 растворов для градуировки различной концентрации. Если значения площадей отличаются более чем на 10% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.
7.6. Приготовление 2% раствора уксусной кислоты в этилацетате
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 50 — 70 куб. см этилацетата, вносят 2 куб. см ледяной уксусной кислоты, доводят до метки этилацетатом, тщательно перемешивают.
7.7. Подготовка концентрирующего патрона Sep-Pak Plus Silica для очистки экстракта
Патрон Sep-Pak Plus Silica устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом Льюера объемом не менее 10 куб. см, используемый в качестве емкости для элюента.
Концентрирующий патрон промывают последовательно 5 куб. см этилацетата, затем 5 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему). Процедуру проводят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин., при этом нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
Примечание: В отсутствии специального аллонжа, жидкость продавливают через патрон с помощью шприца, скорость продавливания раствора не должна превышать 1 — 2 капли в сек.
7.8. Проверка хроматографического поведения изопропилфенацина на концентрирующем патроне Sep-Pak Plus Silica
В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,2 куб. см градуировочного раствора № 1 изопропилфенацина (п. 7.4.2), растворитель упаривают досуха при температуре не выше 35 °C, остаток растворяют в 2 куб. см этилацетата, помещают на 30 с в ультразвуковую баню. Затем в колбу добавляют 2 куб. см гексана, смесь тщательно перемешивают и вносят на концентрирующий патрон, подготовленный по п. 7.7. Колбу обмывают 5 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) и также вносят на патрон. Патрон дополнительно промывают 15 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему), 20 куб. см смеси этих же растворителей в объемном соотношении 3:7, затем 20 куб. см этилацетата. Скорость прохождения раствора через патрон не должна превышать 1 — 2 капли в сек. Элюат отбрасывают.
Изопропилфенацин элюируют с патрона 25 куб. см 2% уксусной кислоты в этилацетате (п. 7.6), собирая 5 порций элюата по 5 куб. см каждая непосредственно в круглодонные колбы. Растворы в колбах упаривают досуха при температуре не выше 35 °C. Остаток в каждой колбе растворяют в 2 куб. см подвижной фазы (приготовленной по п. 7.2) и анализируют содержание изопропилфенацина по п. 9.3. Фракции, содержащие изопропилфенацин, объединяют и вновь анализируют. Рассчитывают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюента.
Примечание: Проверку хроматографического поведения изопропилфенацина следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии патронов и растворителей.
8. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79).
Пробы воды анализируют в день отбора, при необходимости хранят в холодильнике при температуре 4 — 6 °C в течение 10 недель. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18 °C.
Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр.
9. Выполнение определения
9.1. Экстракция
Образец анализируемой воды объемом 500 куб. см помещают в делительную воронку вместимостью 1000 куб. см, добавляют 75 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний органический слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см, фильтруя его через 2 см слой безводного сульфата натрия, помещенный в конусную химическую воронку диаметром 60 мм, снабженную бумажным фильтром «красная лента». Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды порциями этилацетата по 50 куб. см. Отстоявшийся слой хлористого метилена (нижняя фаза) фильтруют в колбу с ранее полученным экстрактом.
Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C, подвергают очистке в соответствии с п. 9.2.
9.2. Очистка экстракта
Сухой остаток в колбе, полученный по п. 9.1, растворяют в 2 куб. см этилацетата, помещают на 30 с в ультразвуковую баню. Затем в колбу добавляют 2 куб. см гексана, смесь тщательно перемешивают и вносят на концентрирующий патрон Sep-Pak Plus Silica, подготовленный по п. 7.7. Колбу обмывают 5 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) и также вносят на патрон. Патрон дополнительно промывают 15 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему), 20 куб. см смеси этих же растворителей в объемном соотношении 3:7, затем 20 куб. см этилацетата. Скорость прохождения раствора через патрон не должна превышать 1 — 2 капли в сек. Элюат отбрасывают.
Изопропилфенацин элюируют с патрона 20 куб. см 2% уксусной кислоты в этилацетате (п. 7.6), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °C. Остаток в колбе растворяют в 2 куб. см подвижной фазы (приготовленной по п. 7.2) и анализируют содержание изопропилфенацина по п. 9.3.
9.3. Условия хроматографирования
Измерения выполняют при следующих режимных параметрах.
Жидкостной хроматограф «Breeze» с ультрафиолетовым детектором (фирма Waters, США).
Хроматографическая колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Symmetry(R) С18, зернением 5 мкм.
Температура колонки: комнатная.
Подвижная фаза: ацетонитрил-вода-ортофосфорная кислота (89:11:0,1, по объему).
Скорость потока элюента: 1,0 куб. см/мин.
Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу.
Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.
Ориентировочное время выхода изопропилфенацина:
Линейный диапазон детектирования: 1 — 20 нг.
Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор изопропилфенацина с концентрацией 1 мкг/куб. см, разбавляют (не более чем в 50 раз) подвижной фазой для ВЭЖХ (подготовленной по п. 7.2).
10. Обработка результатов анализа
Содержание изопропилфенацина в пробе рассчитывают по формуле:
A x W
X — содержание изопропилфенацина в пробе, мг/куб. дм;
A — концентрация изопропилфенацина, найденная по градуировочному графику, в соответствии с величиной суммы площадей хроматографических пиков орто- и параизомеров, мкг/куб. см;
W — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
V — объем анализируемого образца воды, куб. см.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений, мг/куб. дм;
1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА) мг/куб. дм при вероятности P = 0,95,
где: _ X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/куб. дм; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/куб. дм;
X
где сигма — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,0002 мг/куб. дм» <*>.
<*> 0,0002 мг/куб. дм — предел обнаружения.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C => ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА __, д л, X л, X' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА __) - характеристика погрешности л, X л, X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно) мг/куб. дм, при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/куб. дм;
X
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
__ _ K = X' - X - C , к д __ _ где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/куб. дм.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
-----------------------.
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА __ + ДЕЛЬТА _ л, X' л, X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в
условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R)
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/куб. дм;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
табл. 1), %.