МУК 4.1.2286-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств имидаклоприда в ягодах красной и черной смородины, семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 28.09.2007)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32). Документ введен в действие с 10 декабря 2007 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека
Г. Г. Онищенко
28 сентября 2007 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИМИДАКЛОПРИДА В ЯГОДАХ КРАСНОЙ И ЧЕРНОЙ СМОРОДИНЫ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2286-07
10 декабря 2007 года
1. Разработаны Всероссийским НИИ защиты растений.
2. Рекомендованы к утверждению комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол № 2 от 21.06.2007).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко.
1. Вводная часть
Торговое наименование: Танрек, Табу.
Фирма производитель: ЗАО Фирма Август.
Действующее вещество: имидаклоприд.
Структурная формула (не приводится).
1-(6-хлор-3-пиридилметил)-N-нитроимидазолидин-2-илиденамин(IUPAC).
1-[(6-хлор-3-пиридинил)метил]-N-нитро-2-имидазолидинимин(CA).
Брутто формула: C H ClN O . 9 10 5 2
Химически чистый имидаклоприд представляет собой бесцветные кристаллы со слабым характерным запахом.
-7 -7 Давление паров 4 х 10 мРа (20 °C), 9 х 10 мРа (25 °C). Коэффициент распределения в системе октанол-вода K lg P = 0,57
ow
(21 °C).
Растворимость (г/л) при 20 °C: в воде — 0,61; дихлорметане — 55; изопропиловом спирте — 1,2; толуоле — 0,68; н-гексане < 0,1.
Стабилен к гидролизу при рН 5 — 11.
Острая пероральная токсичность LD для крыс — 450 мг/кг. Острая 50 дермальная токсичность LD (24 часа) для крыс — более 5000 мг/кг. Не 50 ирритант для глаз и кожи (кролики). Острая ингаляционная токсичность LC 50
(4 часа) для крыс - более 5323 мг/куб. м, 69 мг/куб. м воздуха (аэрозоль). LD (96 часов) для рыб - 211 (237) мг/куб. дм.
50
Имидаклоприд практически не токсичен для птиц, пчел, дождевых червей, водорослей.
Мутагенной и тератогенной активности в стандартных тестах не обнаружено.
Имидаклоприд — системный инсектицид нервно-паралитического действия группы неоникотиноидов. Эффективно уничтожает листовую тлю, белокрылку, минеров, трипсов, колорадского жука, долгоносиков на хлопчатнике, рисе, картофеле, кукурузе, сахарной свекле, овощных культурах, цитрусовых, косточковых и семечковых плодовых в течение вегетационного периода. Может использоваться для обработки как почвы, так и надземных органов растений.
Гигиенические нормативы для имидаклоприда в России: для ягод черной и красной смородины, семян и масла рапса гигиенические нормативы в России не установлены.
2. Методика определения имидаклоприда в ягодах красной и черной смородины, семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Область применения и принцип метода
Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количеств имидаклоприда в ягодах смородины, семенах и масле рапса в диапазоне концентраций 0,01 — 0,1 мг/кг.
Методика основана на определении имидаклоприда методом ВЭЖХ с использованием УФ детектора после его извлечения из образцов водно-ацетоновой смесью или органическим растворителем с последующей очисткой перераспределением между двумя несмешивающимися жидкими фазами, на колонке с силикагелем и на патронах Диапак С-8.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.
| Объект анализа | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, % | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Красная смородина (ягоды) | 0,01 — 0,1 | 50 | 5,1 | 13,3 | 22,2 |
| Черная смородина (ягоды) | 0,01 — 0,1 | 50 | 5,2 | 14,6 | 22,6 |
| Семена рапса | 0,01 — 0,1 | 50 | 5,5 | 15,4 | 23,9 |
| Масло рапса | 0,01 — 0,1 | 50 | 5,6 | 15,7 | 24,3 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.
| Объект анализа | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Красная смородина | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 80,8 | 6,2 | 5,4 |
| Черная смородина | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 81,3 | 6,2 | 5,4 |
| Семена рапса | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 80,5 | 6,4 | 5,6 |
| Масло рапса | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 80,5 | 6,6 | 6,0 |
2.1.3. Избирательность метода
Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографического анализа.
2.2. Реактивы и материалы
Азот газообразный высокой чистоты, ТУ 6-16-40-14-88.
Ацетон, ос.ч., ТУ 6-09-3513-86.
Ацетонитрил для ВЭЖХ, «В-230НМ» или х.ч., ТУ 6-09-3534-87.
Бумажные фильтры «красная лента», ТУ 6.09-1678-86.
Вода бидистиллированная, деионизированная, ГОСТ 6709-79.
Дихлорметан, х.ч., ТУ 6-09-3716-80.
Имидаклоприд, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,9% (Sigma-Aldrich).
Калий углекислый, х.ч., ГОСТ 4221-76.
Калия перманганат, ГОСТ 20490-75.
Кальция хлорид, х.ч., ГОСТ 4161-77.
Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77.
Натрий двууглекислый, ГОСТ 83-79.
Натрий сернокислый безводный, ч., ГОСТ 4166-76, свежепрокаленный.
Натрия гидроксид, х.ч., ГОСТ 4328-77.
н-Гексан, х.ч., ТУ 2631-003-05807999-98, свежеперегнанный.
Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил-вода (20:80, по объему).
Силикагель для колоночной хроматографии 60 (0,040 — 0,063 mm) (Merck, Германия).
Фосфора пентоксид, ч., МРТУ 6-09-5759-69.
Элюент № 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан-этилацетат (50:50, по объему).
Элюент № 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан-этилацетат (10:90, по объему).
Этиловый эфир уксусной кислоты, ч.д.а., ГОСТ 22300-76.
2.3. Приборы и посуда
Жидкостный хроматограф «Альянс» фирмы «Waters» с УФ детектором (Waters 2487) с дегазатором и автоматическим пробоотборником или аналогичный.
Колонка Symmetry C-18, (250 x 4,6) мм, 5 мкм (Waters).
Предколонка Waters Symmetry C-18.
Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 24104-2001 или аналогичные.
Гомогенизатор, МРТУ 42-1505-63.
Установка ультразвуковая «Серьга», ТУ 3.836.008.
Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная зерновая ЛМЗ, ТУ 1-01-0593-79.
Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74 или аналогичный.
pH-метр универсальный ЭВ-74, ГОСТ 22261-76.
Насос водоструйный, МРТУ 42 861-64.
Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС, ГОСТ 25336-82Е.
Колбы круглодонные на шлифах КШ10 и КШ250 29-32 ТС, ГОСТ 25336-82Е.
Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25336-82.
Воронки делительные ВД-3-500, ГОСТ 8613-75.
Цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 500 и 1000 куб. см, ГОСТ 1770-74.
Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 и 1000 куб. см, ГОСТ 1770-74Е.
Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5, 10 куб. см, ГОСТ 29169-91.
Колонки стеклянные (25 х 1) см.
2.4. Отбор и хранение проб
Отбор проб ягод смородины производится в соответствии с ГОСТ 6829-89 «Смородина черная свежая. Требования при заготовке, поставках и реализации». Пробы ягод смородины хранят до анализа в морозильной камере при температуре не выше -18 °C в течение 6 месяцев. Отбор проб семян рапса производится в соответствии с ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». Семена хранят при комнатной температуре в полотняных мешочках, перед анализом доводят до стандартной влажности и измельчают. Масло рапса хранят в холодильнике при температуре 0 — 4 °C в герметично закрытой стеклянной таре в течение 6 месяцев.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 куб. см растворителя упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 1 куб. см и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.
2.5.2. Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку (Symmetry C-18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 куб. см/мин.) до стабилизации нулевой линии в течение 1 — 2 часов.
2.5.3. Приготовление растворов
Для получения 75%-го водного ацетона в колбе емкостью 1 куб. дм смешивают 750 куб. см ацетона и 250 куб. см дистиллированной воды, используя мерные цилиндры.
Для приготовления 0,05 М раствора K CO 6,9 г карбоната калия помещают 2 3 в мерную колбу емкостью 1000 куб. см, растворяют при перемешивании
в 600 куб. см дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки.
Для приготовления 1 М раствора NaOH 40 г едкого натра помещают в мерную колбу емкостью 1000 куб. см, растворяют при перемешивании в 600 куб. см дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки.
Для приготовления 0,02 М раствора NaOH 20 куб. см 1 М раствора едкого натра помещают в мерную колбу емкостью 1000 куб. см и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.
Гексан насыщают ацетонитрилом, встряхивая 500 куб. см гексана со 100 куб. см ацетонитрила в делительной воронке объемом 1000 куб. см и отделяя после расслаивания жидкостей верхний гексановый слой.
Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с водой в соотношении 20:80 по объему, используя мерные цилиндры.
Для приготовления элюента № 1 в колбе на 1000 куб. см смешивают 500 куб. см н-гексана и 500 куб. см этилацетата. Для приготовления элюента № 2 в колбе на 1000 куб. см смешивают 100 куб. см н-гексана и 900 куб. см этилацетата.
Приготовление стандартного и градуировочных растворов
Берут точную навеску имидаклоприда (50 мг), переносят в мерную колбу на 100 куб. см, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки. (Стандартный раствор с концентрацией 0,5 мг/куб. см). Градуировочные растворы с концентрациями 0,1, 0,2, 0,5, 1,0 и 2,0 мкг/куб. см готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы — смесь ацетонитрил — вода (20:80, по объему).
Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 — 4 °C в течение 1 месяца, градуировочные растворы — в течение суток.
При изучении полноты извлечения имидаклоприда из ягод черной и красной смородины используют ацетонитрильные растворы вещества. Растворы внесения с концентрациями 0,1 и 1,0 мкг/куб. см готовят из стандартного раствора с концентрацией 0,5 мг/куб. см методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом. При изучении полноты извлечения имидаклоприда из семян и масла рапса используют растворы вещества в изопропиловом спирте. Растворы внесения с концентрациями 0,1 и 1,0 мкг/куб. см готовят из стандартного раствора с концентрацией 0,5 мг/куб. см методом последовательного разбавления по объему изопропиловым спиртом.
2.5.4. Построение градуировочного графика
Для построения градуировочного графика (площадь пика — концентрация имидаклоприда в растворе) в хроматограф вводят по 20 куб. мм градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации имидаклоприда в градуировочном растворе (мкг/куб. см).
2.5.5. Подготовка патрона Диапак С-8 для очистки экстракта
Концентрирующий патрон Диапак С-8 промывают последовательно с помощью шприца 50 куб. см ацетона и затем 50 куб. см воды со скоростью 5 куб. см/мин. После чего он готов к работе.
2.5.6. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 30 куб. см смеси гексан-этилацетат (50:50, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 30 куб. см элюента № 2 и 30 куб. см элюента № 1 со скоростью 1 — 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
2.5.7. Проверка хроматографического поведения имидаклоприда на колонке с силикагелем
В круглодонную колбу емкостью 10 куб. см отбирают 0,1 куб. см стандартного раствора имидаклоприда с концентрацией 10 мкг/куб. см. Отдувают растворитель током теплого воздуха (температура не выше 40 °C), остаток растворяют в 5 куб. см элюента № 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 куб. см элюента № 1 и также вносят на колонку. Промывают колонку 120 куб. см элюента № 1, которые отбрасывают, затем 100 куб. см элюента № 2 со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 куб. см каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.3) и анализируют на содержание имидаклоприда по п. 2.6.7.
Фракции, содержащие имидаклоприд, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п. 2.6.7. Рассчитывают содержание имидаклоприда в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.
Примечание: параметры удерживания имидаклоприда и сопутствующих экстрактивных веществ могут меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
2.5.8. Проверка хроматографического поведения диквата на патроне Диапак С-8
В мерную колбу емкостью 100 куб. см отбирают 1,0 куб. см стандартного раствора имидаклоприда с концентрацией 0,1 мг/куб. см, растворитель удаляют в токе азота и доводят объем до метки дистиллированной водой и наносят на приготовленный по п. 2.5.6 патрон. Как только уровень жидкости достигнет верхнего края патрона, его промывают 50 куб. см дистиллированной воды, патрон подсушивают током азота со скоростью 150 куб. см/мин. в течение 15 мин. и затем смывают имидаклоприд 70 куб. см ацетона. Отбирают фракции по 10 куб. см каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.3) и анализируют на содержание имидаклоприда по п. 2.6.7. Суммируя результаты, рассчитывают содержание имидаклоприда в элюате, определяя полноту вымывания вещества из патрона и необходимый для очистки экстракта объем элюента.
2.5.9. Подготовка приборов и средств измерения
Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.
2.6. Проведение определения
2.6.1. Извлечение имидаклоприда из ягод черной и красной смородины
Образец предварительно гомогенизированных ягод черной смородины помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см с притертой пробкой, добавляют 100 куб. см 75%-го водного ацетона и экстрагируют в течение 15 мин. на ультразвуковой бане. Суспензию фильтруют на стеклянной воронке через бумажный фильтр «красная лента». Осадок с фильтра количественно переносят назад в колбу и экстракцию повторяют с 50 куб. см 75%-ного водного ацетона. Объединенные экстракты испаряют до водного остатка (30 — 35 куб. см) на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C, доводят объем экстракта до 100 куб. см дистиллированной водой.
Дальнейшую очистку экстракта проводят по пункту 2.6.5 (ягоды красной смородины) или 2.6.4 (ягоды черной смородины).
2.6.2. Извлечение имидаклоприда из семян рапса
Навеску размолотых на лабораторной мельнице семян рапса массой 20 г помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см, приливают 100 куб. см ацетонитрила и экстрагируют в течение 15 мин. на ультразвуковой бане. Суспензию фильтруют на стеклянной воронке через бумажный фильтр «красная лента». Осадок с фильтра количественно переносят назад в колбу и экстракцию повторяют с 50 куб. см ацетонитрила. Объединенные экстракты выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 100 куб. см дистиллированной воды, выдерживая его в течение 15 мин. на ультразвуковой ванне. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пункту 2.6.5.
2.6.3. Извлечение имидаклоприда из масла рапса
Образец масла массой 20 г растворяют в 100 куб. см гексана, насыщенного ацетонитрилом, помещают раствор в делительную воронку объемом 250 куб. см и переэкстрагируют имидаклоприд трижды ацетонитрилом, порциями по 50 куб. см, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 — 3 минут и собирая нижний ацетонитрильный слой. Объединенный экстракт промывают дважды гексаном порциями по 20 куб. см, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 — 3 минут. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 100 куб. см дистиллированной воды, выдерживая его в течение 15 мин. на ультразвуковой ванне. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пункту 2.6.5.
2.6.4. Очистка экстрактов на патронах Диапак С-8
Полученный по п. 2.6.1 раствор количественно переносят в подготовленный по п. 2.5.5 патрон Диапак С-8. Колбу обмывают еще 5 куб. см дистиллированной воды и также переносят на патрон (не допускать пересыхания патрона!). Патрон промывают 50 куб. см дистиллированной воды. Патрон подсушивают в токе азота со скоростью 150 куб. см/мин. в течение 15 мин. Имидаклоприд смывают 50 куб. см ацетона. Элюат собирают, выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 100 куб. см дистиллированной воды, выдерживая его в течение 15 мин. на ультразвуковой ванне. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пункту 2.6.5.
2.6.5. Очистка экстрактов
Полученные по п. п. 2.6.1 - 2.6.4 водные экстракты промывают в делительной воронке объемом 250 куб. см трижды гексаном порциями по 30 куб. см (верхний органический слой отбрасывают), встряхивая делительную воронку каждый раз в течение 1 — 2 минут. Водную фазу экстрагируют трижды хлористым метиленом порциями по 30 куб. см, встряхивая делительную воронку каждый раз в течение 2 — 3 мин. и собирая нижний органический слой <*>. Объединенный экстракт промывают в делительной воронке дважды 0,02 М раствором NaOH порциями по 30 куб. см, пропускают через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10 — 15 куб. см хлористого метилена. После этого экстракт выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пункту 2.6.6 <**>.
<*> В случае образования сравнительно стойких эмульсий для сокращения времени расслоения можно добавить в делительную воронку: на стадии промывки экстрактов гексаном — небольшое количество (до 5 куб. см) этилового спирта, а на стадии переэкстракции — насыщенный раствор хлорида натрия (15 — 20 куб. см).
<**> В случаях, когда очистка экстрактов контрольных проб дает удовлетворительные результаты дополнительную очистку на колонке с силикагелем можно исключить.
Внимание! Отделение водного слоя следует производить только после полного расслоения жидкостей в делительной воронке.
2.6.6. Очистка на колонке с силикагелем
Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. 2.6.5 экстрактов, количественно переносят двумя порциями смеси гексан-этилацетат (50:50, по объему) по 5 куб. см в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 120 куб. см элюента № 1. Элюат отбрасывают. Имидаклоприд элюируют 70 куб. см элюента № 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 250 куб. см. Раствор выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 куб. мм раствора вводят в жидкостный хроматограф.
2.6.7. Условия хроматографирования
Жидкостный хроматограф «Альянс» фирмы Waters с УФ детектором (Waters 2487) или другой с аналогичными характеристиками.
Предколонка Waters Symmetry C-18 для защиты аналитической колонки.
Колонка Symmetry C-18 (250 х 4,6) мм, 5 мкм (Waters, USA).
Подвижная фаза: ацетонитрил-вода в соотношении 20:80. Скорость потока 1 куб. см/мин. Время удерживания имидаклоприда 11,9 +/- 0,2 мин.
Объем вводимой пробы 20 куб. мм.
Линейный диапазон детектирования 0,1 — 2,0 мкг/куб. см.
2.6.8. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание имидаклоприда в образцах ягод красной и черной смородины, семенах и масле рапса (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
S x C x V
2
где: S — площадь пика имидаклоприда в стандартном растворе, кв. мм; 1 S — площадь пика имидаклоприда в анализируемой пробе, кв. мм; 2 V — объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, куб. см; P — навеска анализируемого образца, г; C — концентрация стандартного раствора имидаклоприда, мкг/куб. см.
Содержание остаточных количеств имидаклоприда в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор имидаклоприда 2 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
3. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r - значение предела повторяемости (r = 2,8 сигма ).
r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
4. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде: _
(X +/- ДЕЛЬТА), мг/кг при вероятности P = 0,95,
где: _ X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе „менее нижней границы определения“ (например: менее 0,005 мг/кг*, где * — 0,005 мг/кг — предел обнаружения).»
5. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
5.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
5.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА , д л,X л,X' где +/- ДЕЛЬТА (+/- ДЕЛЬТА ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой, соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг:
дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
К = X' - X - C , к д где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА . л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
5.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном
концентраций), %.
6. Требования техники безопасности
При проведении работы необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1005-88).
При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.
Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.
7. Требования к квалификации оператора
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 5.
8. Разработчики
Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург.