---
title: "\"МУК 4.1.2284-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств индоксакарба в воде, почве, яблоках, ягодах винограда, яблочном и виноградном соках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.2284-07"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2284-07"
---

## "МУК 4.1.2284-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств индоксакарба в воде, почве, яблоках, ягодах винограда, яблочном и виноградном соках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.2284-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств индоксакарба в воде, почве, яблоках, ягодах винограда, яблочном и виноградном соках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 09.10.2007)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 9 декабря 2007 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

9 октября 2007 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИНДОКСАКАРБА В ВОДЕ, ПОЧВЕ,**
**ЯБЛОКАХ, ЯГОДАХ ВИНОГРАДА, ЯБЛОЧНОМ И ВИНОГРАДНОМ СОКАХ**
**МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="center">

**МУК 4.1.2284-07**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

9 декабря 2007 года

1. <a id="p100006"></a>Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России.
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-гигиеническому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 2 от 21.06.2007).
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 9 октября 2007 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены в действие с 9 декабря 2007 г.
5. <a id="p100010"></a>Введены впервые.

<a id="p100011"></a>Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Индоксакарба в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг в яблоках, ягодах винограда, яблочном и виноградном соке, 0,01 - 0,1 мг/кг в почве и 0,005 - 0,05 мг/куб. дм в воде.
<a id="p100012"></a>Фирма производитель: Дюпон де Немур Интернешнл С.А.
<a id="p100013"></a>Торговое название: Авант.
<a id="p100014"></a>Название действующего вещества по ИСО: Индоксакарб.
<a id="p100015"></a>Название по ИЮПАК: (S)-N-[7-хлоро-2,3,4а,5-тетрагидро-4а-(метоксикарбонил)индено=[1,2-е][1,3,4]оксадиазин-2-илкарбонил]-4'-(трифторметокси)карбанилат.
<a id="p100016"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100017"></a>    Эмпирическая формула: C  H  ClF N O .
                           22 17   3 3 7
<a id="p100018"></a>Молекулярная масса: 527,8.
<a id="p100019"></a>Агрегатное состояние: порошок.
<a id="p100020"></a>Цвет, запах: белого цвета.
                                       -5
<a id="p100021"></a>    Давление насыщенного пара: 2,5 х 10   мПа (25 °С).
<a id="p100022"></a>    Коэффициент распределения в системе октанол/вода при 25 °С: K   log Р =
                                                                 ow
4,65.
<a id="p100023"></a>Температура плавления: 88,1 °С.
<a id="p100024"></a>Растворимость в воде: 0,2 мг/куб. дм. Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм при 20 °С): ацетон - более 250, ацетонитрил - 139, метанол - 103, н-октанол - 14,5.
<a id="p100025"></a>    Гидролитически  стоек в кислой и нейтральной среде с ДТ   более 30 дней
                                                           50
(pH 5), 38 дней (pH 7), но быстро разрушается в щелочном растворе (ДТ   - 1
                                                                     50
день при pH 9).
<a id="p100026"></a>    Индоксакарб среднестоек в почве и малоподвижен.
<a id="p100027"></a>    Краткая   токсикологическая  характеристика:  Индоксакарб  относится  к
опасным  веществам  по  острой пероральной (ЛД   для крыс - 268 мг/кг) и по
                                              50
ингаляционной  (ЛК    для  крыс  - 2000 мг/куб. м воздуха) и к мало опасным
                  50
веществам  по  накожной  (ЛД    для  кроликов > 5000 мг/кг) токсичности. Не
                            50
вызывает покраснения кожи и глаз у кроликов.
<a id="p100028"></a>В России гигиенические нормативы не установлены.
<a id="p100029"></a>Область применения: Индоксакарб - инсектицид из класса оксадиазинов контактного и кишечного действия, блокирует натриевые каналы нервных клеток. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отряда Lepidoptera.
<a id="p100030"></a>Проходит регистрационные испытания в России под торговым названием Авант, КС, 150 г/л в качестве инсектицида для борьбы с вредителями яблоневых садов и виноградников с нормой расхода 0,4 - 0,5 л/га и 5-ю обработками за сезон.


## 1. <a id="p100031"></a>Метрологическая характеристика метода


<a id="p100032"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100033"></a>Таблица 1

<a id="p100034"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ ИНДОКСАКАРБА**


<table>
<colgroup><col width="16%"><col width="22%"><col width="19%"><col width="16%"><col width="12%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый объект</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, Р = 0,95</td><td>Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r</td><td>Предел повторяемости, r, %</td><td>Предел воспроизводимости, R, %</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Вода</td><td>0,005 - 0,01</td><td>100</td><td>3,5</td><td>9,8</td><td>11,7</td></tr>
<tr><td>Более 0,01 - 0,05</td><td>50</td><td>4,0</td><td>11,2</td><td>13,4</td></tr>
<tr><td>Почва</td><td>0,01 - 0,1 вкл.</td><td>50</td><td>5,0</td><td>14,0</td><td>20,0</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Яблоки</td><td>0,02 - 0,1 вкл.</td><td>50</td><td>5,0</td><td>14,0</td><td>20,0</td></tr>
<tr><td>Более 0,1 - 0,2</td><td>25</td><td>3,5</td><td>9,8</td><td>11,7</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Яблочный сок</td><td>0,02 - 0,1</td><td>50</td><td>3,5</td><td>9,8</td><td>11,7</td></tr>
<tr><td>0,1 - 0,2</td><td>25</td><td>4,0</td><td>11,2</td><td>13,4</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Ягоды винограда</td><td>0,02 - 0,1 вкл.</td><td>50</td><td>4,0</td><td>11,2</td><td>13,4</td></tr>
<tr><td>Более 0,1 - 0,2</td><td>25</td><td>5,0</td><td>14,0</td><td>20,0</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Виноградный сок</td><td>0,02 - 0,1 вкл.</td><td>50</td><td>3,5</td><td>9,8</td><td>11,7</td></tr>
<tr><td>Более 0,1 - 0,2</td><td>25</td><td>4,0</td><td>11,2</td><td>13,4</td></tr>
</table>


<a id="p100047"></a>Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.

<a id="p100048"></a>Таблица 2

<div align="center">

<a id="p100049"></a>**ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ,**

</div>

**ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ ИНДОКСАКАРБА**


<table>
<colgroup><col width="22%"><col width="18%"><col width="19%"><col width="12%"><col width="11%"><col width="19%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">Анализируемый объект</td><td colspan="5">Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>Предел обнаружения, мг/кг (мг/куб. дм)</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>Среднее значение определения, %</td><td>Стандартное отклонение, S, %</td><td>Доверительный интервал среднего результата, +/-, %</td></tr>
<tr><td>Вода</td><td>0,005</td><td>0,005 - 0,05</td><td>89,2</td><td>4,4</td><td>1,8</td></tr>
<tr><td>Почва</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>85,8</td><td>3,0</td><td>1,2</td></tr>
<tr><td>Яблоки</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>85,5</td><td>2,9</td><td>1,2</td></tr>
<tr><td>Яблочный сок</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>90,8</td><td>2,3</td><td>1,0</td></tr>
<tr><td>Ягоды винограда</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>89,2</td><td>2,1</td><td>0,9</td></tr>
<tr><td>Виноградный сок</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>89,7</td><td>2,1</td><td>0,9</td></tr>
</table>



## 2. <a id="p100057"></a>Метод измерений


<a id="p100058"></a>Метод основан на определении Индоксакарба с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистке перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах на основе силикагеля (Диапак Нитрил и Диапак С16).
<a id="p100059"></a>Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.
<a id="p100060"></a>В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.


## 3. <a id="p100061"></a>Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы



### <a id="p100062"></a>3.1. Средства измерений


<a id="p100063"></a>Весы аналитические "OHAUS", СИГМА 11140.
<a id="p100064"></a>Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г "ACCULAB" V600.
<a id="p100065"></a>Колбы мерные на 25, 50 и 100 куб. дм, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74).
<a id="p100066"></a>Микрошприц для жидкостного хроматографа на 50 - 100 куб. мм.
<a id="p100067"></a>Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74).
<a id="p100068"></a>Хроматограф жидкостной Уотерс 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или другой аналогичного типа, номер госрегистрации 15311-02.
<a id="p100069"></a>Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74).
<a id="p100070"></a>Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.


### <a id="p100071"></a>3.2. Реактивы


<a id="p100072"></a>Индоксакарб, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 99,6% (фирма Дюпон де Немур Интернешнл, С.А.).
<a id="p100073"></a>Ацетон, осч., ТУ 2633-00-4-11291058-94.
<a id="p100074"></a>Ацетонитрил, осч., УФ-205 нм, ТУ 6-09-2167-84.
<a id="p100075"></a>Вода бидистиллированная, деионизированная, ГОСТ 7602-72.
<a id="p100076"></a>Гексан, х.ч. д/спектроскопии, ТУ 6-09-06-657-84.
<a id="p100077"></a>Калий марганцовокислый, ч.д.а., ГОСТ 20490-75.
<a id="p100078"></a>Кальций хлористый, х.ч., ГОСТ 4161-76.
<a id="p100079"></a>Натрий сернокислый, безводный, х.ч., [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76).
<a id="p100080"></a>Натрий хлористый, х.ч., ГОСТ 4233-77.
<a id="p100081"></a>Эфир диэтиловый, ГОСТ 6265-74.
<a id="p100082"></a>Концентрирующие патроны Диапак Нитрил (0,6 г), ТУ 4215-002-05451931-94.
<a id="p100083"></a>Концентрирующие патроны Диапак С16 (0,6 г), ТУ 4215-002-05451931-94.
<a id="p100084"></a>Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.


### <a id="p100085"></a>3.3. Вспомогательные устройства и материалы


<a id="p100086"></a>Аллонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами Диапак С, Диапак Нитрил и Диапак С16.
<a id="p100087"></a>Аппарат для встряхивания проб "SKLO UNION TYP LT1".
<a id="p100088"></a>Банки с крышками для экстракции на 250 мл, полипропилен, кат. N 3120-0250, NALGENE.
<a id="p100089"></a>Ванна ультразвуковая "UNITRA" UNIMA OLSZTYN UM-4.
<a id="p100090"></a>Воронки химические для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.
<a id="p100091"></a>Воронки делительные на 250 куб. см, ГОСТ 10054-75.
<a id="p100092"></a>Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi или ИР-1М, ТУ 25-11-917-74 с водяной баней.
<a id="p100093"></a>Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 куб. см, КПШ-100, КПШ-250, ГОСТ 10394-72.
<a id="p100094"></a>Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм с внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetry Shield RP18, зернение 5 мкм, фирма Уотерс.
<a id="p100095"></a>Колбы конические плоскодонные объемом 250, 500 и 1000 куб. см, ГОСТ 9737-70.
<a id="p100096"></a>Концентраторы грушевидные и круглодонные объемом 100 и 250 куб. см, ГОСТ 10394-75.
<a id="p100097"></a>Насос диафрагменный FT.19 фирмы KNF Neu Laboport.
<a id="p100098"></a>Предколонка хроматографическая стальная, Symmetry С18 длиной 20 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма Уотерс.
<a id="p100099"></a>Стаканы стеклянные объемом 100 - 500 куб. см, ГОСТ 25366-80Е.
<a id="p100100"></a>Установка для перегонки растворителей.
<a id="p100101"></a>Фильтры бумажные "красная лента", ТУ-6-09-1678-86.
<a id="p100102"></a>Фильтры для очистки растворителей диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм, фирма Уотерс.
<a id="p100103"></a>Центрифуга MPW-350е с набором полипропиленовых банок емкостью 200 мл.
<a id="p100104"></a>Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100105"></a>Требования безопасности


<a id="p100106"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
<a id="p100107"></a>4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.


## 5. <a id="p100108"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100109"></a>К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
<a id="p100110"></a>К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.


## 6. <a id="p100111"></a>Условия измерений


<a id="p100112"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- <a id="p100113"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100114"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100115"></a>Подготовка к выполнению определений


<a id="p100116"></a>Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак С, Диапак С16 и Диапак Нитрил для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на патронах, построение калибровочной кривой.


### <a id="p100117"></a>7.1. Подготовка органических растворителей



##### <a id="p100118"></a>7.1.1 Очистка ацетона

<a id="p100119"></a>Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия (А. Гордон, Р. Форд, Спутник химика, Москва, 1976 г., с. 438 - 439).

##### <a id="p100120"></a>7.1.2 Очистка ацетонитрила

<a id="p100121"></a>Ацетонитрил перегоняют.

##### <a id="p100122"></a>7.1.3 Очистка гексана

<a id="p100123"></a>Гексан встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают бледно-розовым раствором перманганата калия до тех пор, пока раствор не перестанет обесцвечиваться, затем промывают водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (А. Гордон, Р. Форд, Спутник химика, Москва, 1976 г., с. 441).

##### <a id="p100124"></a>7.1.4 Очистка бидистиллированной воды

<a id="p100125"></a>Бидистиллят кипятят в течение 6 часов с марганцовокислым калием, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.

##### <a id="p100126"></a>7.1.5 Очистка диэтилового эфира

<a id="p100127"></a>Диэтиловый эфир перегоняют.


### <a id="p100128"></a>7.2. Приготовление растворов для проведения анализа



##### <a id="p100129"></a>7.2.1 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ

<a id="p100130"></a>Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанные ацетонитрил и очищенную воду.
<a id="p100131"></a>В плоскодонную колбу объемом 1 куб. дм помещают 700 куб. см ацетонитрила и 300 куб. см очищенной воды. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 куб. см/мин. в течение 5 минут, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 минуту.

##### <a id="p100132"></a>7.2.2 Приготовление градуировочных растворов


###### <a id="p100133"></a>7.2.2.1 Стандартный раствор с концентрацией Индоксакарба 200,0 мкг/куб. см

<a id="p100134"></a>Взвешивают 10 мг Индоксакарба в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.

###### <a id="p100135"></a>7.2.2.2 Стандартный раствор с концентрацией Индоксакарба 10,0 мкг/куб. см

<a id="p100136"></a>Из стандартного раствора Индоксакарба с концентрацией 200,0 мг/куб. см отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании.
<a id="p100137"></a>7.2.2.3. Стандартные растворы Индоксакарба с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см для построения калибровочной кривой и внесения в растительные образцы, воду и почву
<a id="p100138"></a>Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см, и используют эти растворы для хроматографического исследования.


### <a id="p100139"></a>7.3. Установление градуировочной характеристики


<a id="p100140"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Индоксакарба в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.
<a id="p100141"></a>В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.6](#p100198). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений (рисунок 1 - не приводится).


### <a id="p100142"></a>7.4. Подготовка концентрирующих патронов Диапак Нитрил и Диапак С16 для очистки экстрактов



##### <a id="p100143"></a>7.4.1 Подготовка концентрирующего патрона Диапак Нитрил для очистки экстракта

<a id="p100144"></a>Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин.
<a id="p100145"></a>Патрон Диапак Нитрил устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
<a id="p100146"></a>Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 10 куб. см смеси гексан - ацетон в соотношении 9:2. Элюат отбрасывают.
<a id="p100147"></a>Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

###### <a id="p100148"></a>7.4.1.1 Проверка хроматографического поведения Индоксакарба на концентрирующем патроне Диапак Нитрил

<a id="p100149"></a>Из стандартного раствора Индоксакарба в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в круглодонную колбу объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100150"></a>Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 куб. см гексана, смесь перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Тот же концентратор обмывают двумя порциями по 10 куб. см смеси гексан - ацетон в соотношении 9:2 и последовательно вносят на патрон. Элюаты после прохождения каждой порции собирают в отдельные концентраторы, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Индоксакарб, объединяют их и рассчитывают объем растворителя, необходимого для вымывания вещества из патрона.

##### <a id="p100151"></a>7.4.2 Подготовка концентрирующего патрона Диапак С16 для очистки экстракта

<a id="p100152"></a>Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. При работе на патронах Диапак С16 используют очищенную воду.
<a id="p100153"></a>Патрон Диапак С16 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
<a id="p100154"></a>Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 7:3 и 20 куб. см воды. Элюат отбрасывают.
<a id="p100155"></a>Нельзя допускать высыхания поверхности патрона!

###### <a id="p100156"></a>7.4.2.1 Проверка хроматографического поведения Индоксакарба на концентрирующем патроне Диапак С16

<a id="p100157"></a>Из стандартного раствора Индоксакарба в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в круглодонную колбу объемом 100 куб. см и добавляют туда 9 куб. см воды, перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
<a id="p100158"></a>Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:4 и вносят на патрон. Элюат выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
<a id="p100159"></a>Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:2 и вносят на патрон. Элюат выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют.
<a id="p100160"></a>Исходный концентратор обмывают двумя порциями по 10 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 7:3 и вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Индоксакарб, объединяют их и рассчитывают объем растворителя, необходимого для вымывания вещества из патрона.


### <a id="p100161"></a>7.5. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии


<a id="p100162"></a>Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с предколонкой Symmetry С18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25 °С и скорости потока подвижной фазы 1 куб. см/мин. 3 - 4 часа.


## 8. <a id="p100163"></a>Отбор проб и хранение


<a id="p100164"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N [2051-79](https://bukva.ai/docs/2051-79) от 21.08.79), а также в соответствии с [ГОСТ Р 51592-2000](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-51592-2000) "Вода. Общие требования к отбору проб", [ГОСТ 1743.01-83](https://bukva.ai/docs/gost-17-4-3-01-83) "Почвы. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 26950-89 "Почвы. Отбор проб", [ГОСТ 25896-83](https://bukva.ai/docs/gost-25896-83) "Виноград свежий столовый. ТУ", ГОСТ 25892-83Е "Сок виноградный натуральный. ТУ", [ГОСТ 27572-87](https://bukva.ai/docs/gost-27572-87) "Яблоки свежие для промышленной переработки. ТУ", ГОСТ 656-79 "Соки плодовые и ягодные натуральные".
<a id="p100165"></a>Пробы воды и соков хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре +4 °С не более 10 суток. Пробы винограда и яблок хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °С не более суток. Для длительного хранения пробы яблок и винограда замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °С до 2-х лет.
<a id="p100166"></a>Пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.


## 9. <a id="p100167"></a>Проведение определений



### <a id="p100168"></a>9.1. Вода



##### <a id="p100169"></a>9.1.1 Экстракция

<a id="p100170"></a>Пробу воды объемом 100 куб. см помещают в делительную воронку объемом 250 куб. см, прибавляют 5 г сухого хлорида натрия и интенсивно встряхивают до полного растворения соли.
<a id="p100171"></a>Затем в ту же делительную воронку помещают 30 мл гексана и интенсивно встряхивают 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой помещают в химический стакан объемом 150 куб. см, верхний гексановый слой собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Водную фазу возвращают в делительную воронку и экстрагируют Индоксакарб еще двумя порциями гексана объемом по 30 куб. см в тех же условиях. Гексановый экстракт объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, собирая его через слой безводного сульфата натрия. Осушитель затем обмывают 10 куб. см гексана, смыв, объединяют с основным экстрактом, и экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой экстракт очищают на концентрирующих патронах Диапак С16.

##### <a id="p100172"></a>9.1.2 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С16

<a id="p100173"></a>Сухой остаток, полученный по [9.1.1](#p100169), растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 куб. см воды, смесь перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:4 и вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:2 и вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 7:3 и вносят на патрон. Элюат собирают в чистый концентратор и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 - 5 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.


### <a id="p100174"></a>9.2. Почва



##### <a id="p100175"></a>9.2.1 Экстракция

<a id="p100176"></a>Образец почвы массой 20 г помещают в центрифужный флакон объемом 200 куб. см, прибавляют 50 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 9:1 и помещают в ультразвуковую ванну на 5 минут. Затем банку встряхивают 5 минут на механическом встряхивателе при комнатной температуре, и содержимое банки центрифугируют 4 минуты при скорости 4000 об./мин. Супернатант фильтруют через фильтр "красная лента" в колбу объемом 250 мл с 5 г сухого хлорида натрия.
<a id="p100177"></a>К остатку в центрифужном флаконе прибавляют 50 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 9:1, перемешивают содержимое флакона до гомогенного состояния стеклянной палочкой и повторяют экстракцию в ранее описанных условиях. Супернатанты объединяют в конической колбе с хлоридом натрия, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 минут. Затем содержимое колбы (без нерастворившейся соли) переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см и выдерживают 5 минут. Выделившуюся нижнюю водную фазу отбрасывают, а верхнюю ацетонитрильную собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

##### <a id="p100178"></a>9.2.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

<a id="p100179"></a>К сухому остатку в концентраторе, полученному по [п. 9.2.1](#p100175), прибавляют 3 куб. см ацетона и обмывают стенки колбы. Туда же прибавляют 100 мл дистиллированной воды, 5 г сухого хлорида натрия и перемешивают до полного растворения соли. Затем содержимое концентратора переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см, прибавляют туда 30 куб. см гексана и встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой помещают в химический стакан объемом 150 куб. см, а верхний гексановый слой собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Водный слой возвращают в делительную воронку и повторяют экстракцию двумя порциями гексана объемом по 30 куб. см. Гексановые фракции объединяют в концентраторе, осушитель обмывают 10 куб. см гексана, объединяют с основным экстрактом и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Водную фазу отбрасывают. Сухой остаток растворяют в 2 мл ацетона и очищают на концентрирующих патронах Диапак Нитрил.

##### <a id="p100180"></a>9.2.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Нитрил и Диапак С16

<a id="p100181"></a>Сухой остаток, полученный по [п. 9.2.2](#p100178), растворяют в 2 куб. см ацетона, обмывая стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 куб. см гексана, смесь перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси гексан - ацетон в соотношении 9:2 и также вносят на патрон. Элюаты собирают, объединяют, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, растворяют в 1 куб. см ацетонитрила и подвергают дальнейшей очистке на патронах Диапак С16, как указано в [п. 9.1.2](#p100172). После очистки элюат выпаривают досуха, растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.


### <a id="p100182"></a>9.3. Яблоки



##### <a id="p100183"></a>9.3.1 Экстракция

<a id="p100184"></a>Образец измельченных плодов яблок массой 10 г помещают в коническую колбу объемом 250 куб. см, прибавляют 50 куб. см ацетонитрила и помещают в ультразвуковую ванну на 5 минут. Затем экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см с 5 г сухого хлорида натрия. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя по 50 куб. см ацетонитрила. Экстракты объединяют в конической колбе с хлоридом натрия, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 минут. Затем содержимое колбы (без нерастворившейся соли) переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см и выдерживают 5 минут. Выделившуюся нижнюю водную фазу отбрасывают, а верхнюю ацетонитрильную собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

##### <a id="p100185"></a>9.3.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

<a id="p100186"></a>К сухому остатку в концентраторе, полученному по [п. 9.3.1](#p100183), прибавляют 3 куб. см ацетона и обмывают стенки колбы. Туда же прибавляют 100 мл дистиллированной воды, 5 г сухого хлорида натрия и перемешивают до полного растворения соли. Затем содержимое концентратора переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см, прибавляют туда 30 куб. см диэтилового эфира и встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (эфир) с эмульсией собирают в концентратор объемом 250 куб. см. Водный слой возвращают в делительную воронку. Экстракцию повторяют двумя порциями диэтилового эфира объемом по 30 куб. см в тех же условиях. Объединенный эфирный экстракт упаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

##### <a id="p100187"></a>9.3.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Нитрил и Диапак С16

<a id="p100188"></a>Очистку экстракта проводят по [п. 9.2.3](#p100180).


### <a id="p100189"></a>9.4. Ягоды винограда


<a id="p100190"></a>Экстракцию, очистку экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на концентрирующих патронах Диапак Нитрил и Диапак С16 проводят так же, как описано в [пп. 9.3.1](#p100183), [9.3.2](#p100185) и [9.3.3](#p100187) (яблоки).


### <a id="p100191"></a>9.5. Яблочный и виноградный соки



##### <a id="p100192"></a>9.5.1 Экстракция

<a id="p100193"></a>Образец виноградного сока объемом 10 куб. см помещают в делительную воронку объемом 250 куб. см. Туда же прибавляют 5 г сухого хлорида натрия, 100 куб. см дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения соли. Индоксакарб экстрагируют 30 куб. см диэтилового эфира, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (эфир) с эмульсией собирают в химический стакан объемом 150 куб. см. Водный слой возвращают в делительную воронку. Экстракцию повторяют двумя порциями диэтилового эфира объемом по 30 куб. см в тех же условиях. Эфирный экстракт с эмульсией объединяют в химическом стакане объемом 150 куб. см.

##### <a id="p100194"></a>9.5.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

<a id="p100195"></a>Эфирный экстракт возвращают в делительную воронку, прибавляют туда же 100 мл дистиллированной воды и интенсивно встряхивают 2 минуты. После полного разделения фаз нижний водный слой отбрасывают, а верхний эфирный слой собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия, осушитель обмывают 10 куб. см эфира, объединяют с основным экстрактом и упаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл ацетона и очищают на концентрирующих патронах Диапак Нитрил и Диапак С16.

##### <a id="p100196"></a>9.5.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Нитрил и Диапак С16

<a id="p100197"></a>Очистку экстракта на концентрирующих патронах Диапак Нитрил и Диапак С16 проводят так же, как описано в [пп. 9.3.1](#p100183), [9.3.2](#p100185) и [9.3.3](#p100187) (яблоки).


### <a id="p100198"></a>9.6. Условия хроматографирования


<a id="p100199"></a>Хроматограф "Waters" или другой с аналогичными характеристиками с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны.
<a id="p100200"></a>Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 4,6 мм х 25 см, зернением 5 мкм.
<a id="p100201"></a>Предколонка стальная Symmetry С18, 3,9 мм х 2 см, зернением 5 мкм.
<a id="p100202"></a>Температура колонки: 25 °С.
<a id="p100203"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил - вода в соотношении 70:30.
<a id="p100204"></a>Длина волны: 300 нм.
<a id="p100205"></a>Время удерживания Индоксакарба - 9,07 - 9,44 мин.
<a id="p100206"></a>Чувствительность: 0,005 ед. оптической плотности на шкалу.
<a id="p100207"></a>Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.
<a id="p100208"></a>Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.


## 10. <a id="p100209"></a>Обработка результатов


<a id="p100210"></a>Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа Millenium 3.05.01.
<a id="p100211"></a>Альтернативная обработка результатов.
<a id="p100212"></a>Содержание Индоксакарба рассчитывают по формуле:

                               Sпр х А х V
<a id="p100213"></a>                          Х = ------------- х Р,
                              100 х Sст х m

<a id="p100214"></a>где:
<a id="p100215"></a>Х - содержание Индоксакарба в пробе, мг/кг или мг/куб. дм;
<a id="p100216"></a>Sст - высота (площадь) пика стандарта, мм;
<a id="p100217"></a>Sпр - высота (площадь) пика образца, мм;
<a id="p100218"></a>А - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
<a id="p100219"></a>V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
<a id="p100220"></a>m - масса анализируемого образца, г (куб. см);
<a id="p100221"></a>Р - содержание Индоксакарба в аналитическом стандарте, %.


## 11. <a id="p100222"></a>Контроль погрешности измерений


<a id="p100223"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6.2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".


## 12. <a id="p100224"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100225"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

                         2 х |Х  - Х | х 100
                               1    2
<a id="p100226"></a>                         ------------------- <= r,                      (1)
                              (Х  + Х )
                                1    2

    где:
    Х , Х  - результаты параллельных определений, мг/кг;
     1   2
 r - значение предела повторяемости ([таблица 1](#p100034)), при этом r = 2,8
сигма .
     r
<a id="p100227"></a>При невыполнении [условия (1)](#p100226) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 13. <a id="p100228"></a>Оформление результатов


<a id="p100229"></a>    Результат анализа представляют в виде:

               _
<a id="p100230"></a>              (Х +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности Р = 0,95,

    где:
    _
    Х   -   среднее   арифметическое  результатов  определений,  признанных
приемлемыми, мг/кг;
    ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

                                          _
<a id="p100231"></a>                        ДЕЛЬТА = дельта х Х / 100,

<a id="p100232"></a>дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100034)), %.
<a id="p100233"></a>В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100234"></a>"содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг" <*>.

<a id="p100235"></a>

---

<a id="p100236"></a><*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения.


## 14. <a id="p100237"></a>Контроль качества результатов измерений


<a id="p100238"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100239"></a>14.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100240"></a>14.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
<a id="p100241"></a>    Величина добавки С  должна удовлетворять условию:
                      д

<a id="p100242"></a>                       С  = ДЕЛЬТА  _ + ДЕЛЬТА  _ ,
                        д         л,Х         л,Х'

    где  +/-   ДЕЛЬТА  _  (+/-  ДЕЛЬТА  _ )  -  характеристика  погрешности
                     л,Х              л,Х'
(абсолютная погрешность) результатов  анализа,  соответствующая  содержанию
компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания  компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

<a id="p100243"></a>                        ДЕЛЬТА  = +/- 0,84 ДЕЛЬТА,
                              л

    где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

                                          _
<a id="p100244"></a>                        ДЕЛЬТА = дельта х Х / 100,

    дельта   -   граница  относительной  погрешности  методики  (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100034)), %.
<a id="p100245"></a>    Результат контроля процедуры К  рассчитывают по формуле:
                                  к

                                 _    _
<a id="p100246"></a>                            К  = Х' - Х - С ,
                             к             д

         _    _
    где  Х',  Х,  С   -  среднее  арифметическое  результатов  параллельных
                   д
определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100222)) содержания компонента в
образце   с   добавкой,   испытуемом   образце   и   концентрация   добавки
соответственно, мг/кг.
<a id="p100247"></a>    Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

                             ____________________
                            /     2           2
<a id="p100248"></a>                      К = \/ДЕЛЬТА  _ + ДЕЛЬТА  _.
                                  л,Х'        л,Х

<a id="p100249"></a>    Проводят  сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
                                                            к
контроля (К).
<a id="p100250"></a>    Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

<a id="p100251"></a>                                |К | <= К,                              (2)
                                  к

процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100252"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100251) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении [условия (2)](#p100251) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
<a id="p100253"></a>14.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
<a id="p100254"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

                         2 х |Х  - Х | х 100
                               1    2
<a id="p100255"></a>                         ------------------- <= R,                      (3)
                              (Х  + Х )
                                1    2

    где:
    Х , Х  - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
     1   2
    R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
[таблица 1](#p100034)), %.



<a id="p100256"></a>

---