--- title: "\"МУК 4.1.2274-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств глюфосинат аммония и его метаболита в масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания\"" number: "МУК 4.1.2274-07" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2274-07" --- ## "МУК 4.1.2274-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств глюфосинат аммония и его метаболита в масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания" # "МУК 4.1.2274-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств глюфосинат аммония и его метаболита в масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания" (утв. Роспотребнадзором 24.09.2007) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 10 декабря 2007 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
24 сентября 2007 года #### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ГЛЮФОСИНАТ АММОНИЯ** **И ЕГО МЕТАБОЛИТА В МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ** **ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.2274-07**
Дата введения:
10 декабря 2007 года 1. Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии. 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 2 от 21.06.2007). 3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 сентября 2007 г. 4. Введены в действие с 10 декабря 2007 г. 5. Введены впервые. Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации глюфосинат аммония и его метаболита 3-метилфосфино-пропионовой кислоты в масле рапса в диапазоне 0,2 - 2,0 мг/кг. Название вещества по ИСО: Глюфосинат аммоний. Название вещества по ИЮПАК: Аммоний DL-гомоаланин-4-ил-(метил)-фосфинат (I). CH │ 3 - + [O ── P ── CH CH CHCOOH] NH | 2 2 | 4 | | --- | --- | O NH 2 C H N O P 5 15 2 4 Мол. масса: 198,2 Бесцветный кристаллический порошок со слабым специфическим запахом. Температура плавления: 215 °C. Давление паров при 20 °C: < 0,1 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P < 0,1. Растворимость ow (г/куб. дм) при 20 °C: вода - 1370, ацетон - 0,16, этанол - 0,65, этилацетат - 0,14, толуол - 0,14, гексан - 0,2. Вещество стабильно при нормальных условиях хранения, не гидролизуется в умеренно кислых и щелочных средах. Достаточно быстро разрушается в воде и почве: DT в воде = 50 2 - 30 дней, DT в почве = 3 - 20 дней. 50 Краткая токсикологическая характеристика Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс - 1620 - 2000 мг/кг; 50 острая ингаляционная токсичность (LC ) для крыс - 1,26 - 2,9 мг/куб. м 50 воздуха. Глюфосинат аммоний не вызывает раздражения кожи. LC для рыб - 50 710 мг/куб. дм (96 час.). Глюфосинат аммоний не обладает тератогенным, канцерогенным и мутагенным действием. Он нетоксичен для водорослей, дафний, дождевых червей, пчел, птиц и диких животных. Гигиенические нормативы для глюфосинат аммония в России: ДСД - 0,02 мг/кг/сутки; МДУ в растительных маслах - 0,4 мг/кг. Область применения Глюфосинат аммоний (I) - неселективный контактный гербицид с ограниченной системностью, передвигающийся только внутри обработанных листьев. В процессе поступления в растение вещество диссоциирует и в клетках присутствует только глюфосинат свободная кислота (II). Гербицид используется для уничтожения однолетних и многолетних широколистных и злаковых сорняков в парах, посадках плодовых и цитрусовых культур, ягодных кустарниках и виноградниках путем направленного опрыскивания в период активного роста сорных растений, а также на овощных культурах при довсходовом применении препарата. Глюфосинат аммоний применяется также для десикации ботвы картофеля, подсолнечника, клещевины, люцерны и сеникации яровой пшеницы. Применяется в России в качестве десиканта на посевах гороха, подсолнечника, сои, рапса, люцерны и льна-долгунца при норме расхода от 0,15 до 0,35 кг д.в./га. Глюфосинат аммоний в воде и растениях подвергается разрушению, в результате чего образуется 3-метилфосфино-пропионовая кислота (III). Глюфосинат свободная кислота Название по ИЮПАК: DL-гомоаланин-4-ил-(метил)-фосфиновая кислота (II) CH ```text │ 3 HO ── P ── CH CH CHCOOH ││ 2 2 │ ``` O NH 2 C H N O P 5 12 4 Мол. масса: 181,1 Метаболит глюфосинат аммония Название по ИЮПАК: 3-метилфосфино-пропионовая кислота (III) CH │ 3 HO ── P ── CH CH COOH | 2 2 | | --- | O C H O P 4 9 2 4 Мол. масса: 152,1 ## 1. Метрологические характеристики метода При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций. Таблица 1 **МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ** | Определяемое вещество | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Глюфосинат аммоний | От 0,2 до 1,0 | 25 | 2,3 | 6,5 | 10,1 | | 3-метилфосфинопропионовая кислота | От 0,2 до 1,0 | 25 | 2,8 | 7,8 | 12,1 | Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2. Таблица 2
**ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ,**
**ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА**
ДЛЯ n = 20, P = 0,95
Определяемое веществоМетрологические параметры, P = 0,95, n = 20
предел обнаружения, мг/кгдиапазон определяемых концентраций, мг/кгсреднее значение определения, %стандартное отклонение, S, %доверительный интервал среднего результата, %
Масло
Глюфосинат аммоний0,20,2 - 2,087,14,5+/- 4,2
3-метилфосфинопропионовая кислота0,20,2 - 2,087,94,2+/- 3,9
## 2. Метод измерения Методика основана на определении веществ с помощью газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором (ТИД) на фосфорсодержащие вещества. Контроль глюфосинат аммония и его метаболита 3-метилфосфино-пропионовой кислоты в образцах рапсового масла осуществляется по содержанию веществ после экстракции их из анализируемого образца водой, дериватизации веществ с помощью триметилортоацетата в кислой среде и последующей очистки полученных производных на колонке с силикагелем. В результате дериватизации глюфосинат аммоний превращается в метил-4-(метоксиметил)фосфинил-2-ацетамидобутират (IV), а метаболит - в метил-3-(метоксиметил)фосфинил-пропионат (V). Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки. В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается дериватизацией анализируемых веществ, подбором капиллярной колонки и условий программирования ее температуры. ## 3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы ### 3.1. Средства измерений Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с ТИД (СКБ "Хроматэк", Россия) Номер госреестра N 14516-95 Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104 Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,036 г ГОСТ 7328 Колбы мерные вместимостью 2-50-2, 2-100-2, 2-1000-2 [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Меры массы ГОСТ 7328 Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 0,1; 1,0; 5,0; 10,0 куб. см ГОСТ 29227 Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой вместимостью 5 куб. см [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. ### 3.2. Реактивы Глюфосинат аммоний (I), аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,2% (Байер, Германия). Глюфосинат свободная кислота (II), аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,9% (Байер, Германия). 3-метилфосфино-пропионовая кислота (III), аналитический стандарт с содержанием д.в. 97,9% (Байер, Германия). Метил-4-(метоксиметил)фосфино-2-ацетамидобутират (IV), аналитический стандарт с содержанием д.в. 98,9% (Байер, Германия). Метил-3-(метоксиметил)фосфино-пропионат (V), аналитический стандарт с содержанием д.в. 98,8% (Байер, Германия). Аммиак водный (28 - 30% NH ), ч.д.а. ГОСТ 3760 3 Ацетон, х.ч. ТУ 6-09-3513-86 Вода деионизованная ГОСТ 7602 н-Гексан, х.ч. ТУ 6-09-3375 Кислота уксусная ледяная, х.ч. ГОСТ 61-75 Метилацетат, ч. ТУ 6-09-09-300-87 Натрия сульфат, безводный, х.ч. [ГОСТ 4166](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) Спирт метиловый, х.ч. [ГОСТ 6995](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77) Толуол, х.ч. [ГОСТ 5789](https://bukva.ai/docs/gost-5789-78) Триметилортоацетат (98%) (Мерк, Германия) Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией. ### 3.3. Вспомогательные устройства, материалы Азот газообразный (баллон), ос.ч. ГОСТ 9293 Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с ТУ 64-1-2851-78 Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма Branson Instr. Co. (США) или аналогичная Вата медицинская ТУ 9393-001-00302238 Воронки делительные вместимостью 250 куб. см ГОСТ 10054-75 Воронки конусные диаметром 30 - 37 см ГОСТ 25336 Генератор водорода, модель SPE, фирма General Electric (США) или аналогичный Дефлегматор елочный [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) Колбы плоскодонные вместимостью 250 куб. см [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100, 250 куб. см [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) Колонка хроматографическая стеклянная длиной 25 см, внутренним диаметром 8 - 10 мм Компрессор (СКБ "Хроматэк", Россия) N 3456 Плитка электрическая Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi (Швейцария) ТУ 25-11-917-74 Силикагель 60 (0,063 - 0,2 мм) для колоночной хроматографии I степени активности (Мерк, Германия) Стаканы химические вместимостью 100, 500 куб. см ГОСТ 25336 Стекловата Холодильник водяной обратный [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) Шприц для ввода образцов для газового хроматографа вместимостью 10 куб. мм (Hamilton, США) Шприц для отбора проб вместимостью 100 куб. мм (Hamilton, США) Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками. ## 4. Требования безопасности 4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф. 4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004. ## 5. Требования к квалификации операторов К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе. К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории. ## 6. Условия измерений При выполнении измерений соблюдают следующие условия: - процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 + 5) °C и относительной влажности не более 80%; - выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору. ## 7. Подготовка к выполнению измерений Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем. ### 7.1. Очистка органических растворителей ##### 7.1.1 Очистка н-гексана Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом. ##### 7.1.2 Очистка метилацетата Метилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия, перегоняют. ##### 7.1.3 Очистка силикагеля Силикагель встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °C в течение 5 часов. ### 7.2. Приготовление 0,015 М раствора водного аммиака В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 10 куб. см водного аммиака (содержит 28 - 30% NH ), добавляют 500 куб. см деионизованной воды, 3 перемешивают и доводят водой до метки. ### 7.3. Подготовка колонки с силикагелем В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 10 - 12 мм помещают тампон из стекловаты и в колонку (при открытом кране) медленно выливают суспензию 5 г силикагеля 1 степени активности в 10 куб. см метилацетата. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 10 куб. см метилацетата со скоростью 1 - 2 капли в сек., после чего она готова к работе. ### 7.4. Проверка хроматографического поведения глюфосинат аммония и его метаболита на колонке с силикагелем В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают по 0,5 куб. см градуировочного раствора N 1 дериватов глюфосинат аммония и метаболита с концентрацией 10 мкг/куб. см в метилацетате [(п. 7.6.2)](#p100133), раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 3 куб. см метилацетата. Раствор наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.3](#p100123). Промывают колонку 30 куб. см смеси метилацетат-метанол (95:5, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек., элюат отбрасывают. Затем колонку промывают 60 куб. см смеси метилацетат-метанол (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 0,5 - 1 куб. см. Раствор переносят в градуированную пробирку вместимостью 5 куб. см, колбу промывают 1 куб. см метилацетата, который также переносят в пробирку. Доводят метилацетатом объем в пробирке до 3 куб. см и анализируют на содержание дериватов по [п. 9.4](#p100155). *Примечание.* При использовании новой партии сорбента или растворителей проводится проверка хроматографического поведения дериватов глюфосинат аммония и его метаболита. ### 7.5. Подготовка и кондиционирование Капиллярную кварцевую колонку ZB-50 (типа OV-17) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 270 °C и скорости газа-носителя 2 куб. см/мин. в течение 8 - 10 часов. ### 7.6. Приготовление градуировочных растворов 7.6.1. Исходные растворы дериватов глюфосинат аммония и его метаболита (3-метилфосфино-пропионовая кислота) для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 13,9 мг метил-4-(метоксиметил)фосфинил-2-ацетамидобутирата (IV, дериват глюфосинат аммония) или 10 мг метил-3-(метоксиметил)фосфинил-пропионата (V, дериват метаболита), растворяют в 40 - 50 куб. см метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Растворы хранят в холодильнике в течение 6 месяцев. 7.6.2. Раствор смеси дериватов глюфосинат аммония и его метаболита N 1 для градуировки (концентрация каждого вещества 10 мкг/куб. см в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят по 10 куб. см исходных растворов дериватов глюфосинат аммония и метаболита с концентрацией 10 мг/куб. см [(п. 7.6.1)](#p100131), разбавляют метилацетатом до метки. Градуировочный раствор N 1 хранят в холодильнике в течение 3 месяцев. 7.6.3. Рабочие растворы N 2 - 5 смеси дериватов глюфосинат аммония и его метаболита для градуировки (концентрация каждого вещества 0,1 - 1,0 мкг/куб. см в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора N 1 смеси дериватов глюфосинат аммония и метаболита с концентрацией 10 мкг/куб. см [(п. 7.6.2)](#p100133), доводят до метки метилацетатом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией глюфосинат аммония и метаболита 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/куб. см. Растворы хранят в холодильнике в течение месяца. ### 7.7. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ x сек.) от концентрации глюфосинат аммония или его метаболита в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 рабочим растворам дериватов веществ для градуировки. В инжектор хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого рабочего градуировочного раствора [(п. 7.6.3)](#p100135) и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.4](#p100155). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. ### 7.8. Приготовление растворов для фортификации Отвешивают 50,45 мг глюфосинат аммония в мерную колбу вместимостью 50 куб. см, добавляют 30 - 35 куб. см 0,015 М раствора водного аммиака, перемешивают до полного растворения вещества и доводят объем этим же растворителем до метки. Концентрация глюфосинат аммония в растворе (A) составляет 1 мг/куб. см в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота. Раствор A хранят в холодильнике не более месяца. Отвешивают 42 мг 3-метилфосфино-пропионовой кислоты в мерную колбу вместимостью 50 куб. см, добавляют 30 - 35 куб. см 0,015 М раствора водного аммиака, перемешивают до полного растворения вещества и доводят объем этим же растворителем до метки. Концентрация метаболита в растворе (B) составляет 1 мг/куб. см в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота. Раствор B хранят в холодильнике не более месяца. Переносят в мерную колбу вместимостью 50 куб. см по 0,5 куб. см растворов A и B и доливают ацетоном до метки, перемешивают. Концентрация глюфосинат аммония и его метаболита в растворе (C) составляет 10 мкг/куб. см в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота. Раствор хранят в холодильнике не более месяца. Раствор C используют для приготовления проб рапсового масла с внесением при оценке полноты извлечения глюфосинат аммония и его метаболита из исследуемых образцов. ## 8. Отбор и хранение проб Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N [2051-79](https://bukva.ai/docs/2051-79) от 21.08.79) и правилами, определенными [ГОСТом 10852-86](https://bukva.ai/docs/3979) "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб" и [ГОСТом 8988-77](https://bukva.ai/docs/gost-8988-77) "Масло рапсовое. ТУ". Пробы рапсового масла хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 - 4 °C. ## 9. Выполнение определения ### 9.1. Экстракция глюфосинат аммония и метаболита Навеску (5 г) масла помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, приливают 20 куб. см гексана, перемешивают и добавляют 80 куб. см деионизованной воды. Эмульсию перемешивают в течение 30 минут на аппарате для встряхивания и затем переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см. Колбу ополаскивают 10 куб. см деионизованной воды, которые переносят в делительную воронку. После разделения фаз пропускают нижний водный слой через стеклянный фильтр с тампоном из хлопковой ваты в чистую делительную воронку вместимостью 250 куб. см. К водной фазе приливают 20 куб. см гексана и эмульсию встряхивают в течение 2 минут. После разделения фаз водный слой фильтруют через бумажный фильтр в мерный цилиндр. Измеряют объем раствора, отбирают 1/2 объема этой фракции (эквивалентна 2,5 г образца) в грушевидную колбу вместимостью 100 куб. см и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Дальнейшую дериватизацию и очистку проводят по п. п. 9.2 и [9.3](#p100153). ### 9.2. Дериватизация К сухому остатку (из [п. 9.1](#p100148)) приливают 3 куб. см ледяной уксусной кислоты, перемешивают и колбу помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Затем в колбу добавляют 12 куб. см триметилортоацетата и несколько стеклянных кипелок и снова помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 4,5 часов на электроплитке. К охлажденной реакционной смеси трижды добавляют по 15 куб. см толуола и каждый раз упаривают содержимое на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 1 - 2 куб. см. Дальнейшую очистку дериватов проводят по [п. 9.3](#p100153). Примечание: При проведении дериватизации посуда и реактивы должны быть сухими. ### 9.3. Очистка на колонке с силикагелем К раствору дериватов глюфосинат аммония и метаболита в круглодонной колбе, полученного по [п. 9.2](#p100150), добавляют 2 куб. см смеси метилацетат-метанол (95:5, по объему) и раствор переносят на колонку с силикагелем, подготовленную по [п. 7.3](#p100123). Колбу обмывают дважды порциями по 2 куб. см смеси метилацетат-метанол (95:5, по объему), которые также наносят на колонку. Промывают колонку 30 куб. см смеси метилацетат-метанол (95:5, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек., элюат отбрасывают. Дериваты метаболита и глюфосинат аммония элюируют с колонки 50 куб. см смеси метилацетат-метанол (8:2, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Элюат упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 0,5 - 1 куб. см. Раствор переносят в градуированную пробирку вместимостью 5 куб. см, колбу обмывают дважды порциями по 1,5 куб. см метилацетата, которые также переносят в пробирку. Доводят метилацетатом объем в пробирке до 5 куб. см и анализируют на содержание дериватов глюфосинат аммония и метаболита по п. 9.4. ### 9.4. Условия хроматографирования Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с термоионным детектором на фосфорсодержащие вещества с пределом детектирования (по фосфору в метафосе) -14 не выше 2,82 x 10 г/куб. см. Колонка капиллярная кварцевая ZB-50 (типа OV-17), длина 30 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, фирма Phenomenex (США). Температура детектора - 300 °C, испарителя - 240 °C, колонки (программа: 150 °C - 2 мин.; 5°/мин. до 180 °C - 0 мин.; 12°/мин. до 250 °C - 4 мин.; 20°/мин. до 270 °C - 4 мин.). Расход газов: газа-носителя (азот) - 2,7 куб. см/мин.; поддув детектора - 25 куб. см/мин.; водорода и воздуха в ТИД - 11,2 и 200 куб. см/мин., соответственно. Деление потока: 1:2. Объем вводимой пробы - 1 куб. мм. Время удерживания метил-3-(метоксиметил)фосфинил-пропионата: 7 мин. 15 сек. Время удерживания метил-4-(метоксиметил)фосфинил-2-ацетамидобутирата: 16 мин. 05 сек. Линейный диапазон детектирования - 0,1 - 1 нг. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют метилацетатом. ## 10. Обработка результатов анализа Содержание глюфосинат аммония (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота) рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле: H x A x V 1 X = ----------, H x m 0 где: X - содержание глюфосинат аммония в пробе, мг/кг; H - площадь пика образца, мВ x с; 1 H - площадь пика стандарта, мВ x с; 0 A - концентрация стандартного раствора деривата глюфосинат аммония (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота), мкг/куб. см; V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см; m - масса анализируемой части образца, г (для масла - 2,5 г). Содержание 3-метилфосфино-пропионовой кислоты (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота) рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле: H x A x V 1 X = ----------, H x m 0 где: X - содержание 3-метилфосфино-пропионовой кислоты в пробе, мг/кг; H - площадь пика образца, мВ x с; 1 H - площадь пика стандарта, мВ x с; 0 A - концентрация стандартного раствора деривата метаболита (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота), мкг/куб. см; V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см; m - масса анализируемой части образца, г (для масла - 2,5 г). Результаты определения глюфосинат аммония и 3 метилфосфино-пропионовой кислоты суммируют и сравнивают с утвержденным значением МДУ для матрицы. ## 11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1): 2 x |X - X | x 100 1 2 ------------------- <= r, (1) (X + X ) 1 2 где: X , X - результаты параллельных определений, мг/кг; 1 2 r - значение предела повторяемости [(таблица 1)](#p100037), при этом r = 2,8 сигма . r При невыполнении [условия (1)](#p100176) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ. ## 12. Оформление результатов Результат анализа представляют в виде: _ (X +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности P = 0,95, где: _ X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг; ДЕЛЬТА = дельта x X / 100, дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100037)), %. В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" менее 0,2 мг/кг <*>. ---
<*> 0,2 мг/кг - предел обнаружения глюфосинат аммония и метаболита.
## 13. Контроль качества результатов измерений Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений". 13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. 13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок. Величина добавки С должна удовлетворять условию: д С = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом: ДЕЛЬТА = +/- 0,84 ДЕЛЬТА, л где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг; ДЕЛЬТА = дельта x X / 100, дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100037)), %. Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к _ _ К = X' - X - С , к д _ _ где X', X, С - среднее арифметическое результатов параллельных д определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100174)) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг. Норматив контроля К рассчитывают по формуле: _____________________ / 2 2 К = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом к контроля (К). Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию: |К | <= К, (2) к процедуру анализа признают удовлетворительной. При невыполнении [условия (2)](#p100207) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению. 13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости. Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R): 2 x (X - X | x 100 1 2 ------------------- <= R, (3) (X + X ) 1 2 где: X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг; 1 2 R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
[таблица 1](#p100037)), %.
## 14. Разработчики ВНИИ фитопатологии. ---