---
title: "\"МУК 4.1.2271-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Фамоксадона в виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.2271-07"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2271-07"
---

## "МУК 4.1.2271-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Фамоксадона в виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.2271-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Фамоксадона в виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 24.09.2007)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 15 декабря 2007 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

24 сентября 2007 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФАМОКСАДОНА В ВИНОГРАДНОМ**
**СОКЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="center">

**МУК 4.1.2271-07**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

15 декабря 2007 года

1. <a id="p100006"></a>Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России.
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-гигиеническому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 2 от 21.06.2007).
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 сентября 2007 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены в действие с 15 декабря 2007 г.
5. <a id="p100010"></a>Введены впервые.

<a id="p100011"></a>Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Фамоксадона в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг в виноградном соке.
<a id="p100012"></a>Название действующего вещества по ИСО: Фамоксадон.
<a id="p100013"></a>Название действующего вещества по ИЮПАК: 3-анилино-5-метил-5-(4-феноксифенил)-2,4-оксазолидиндион.
<a id="p100014"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100015"></a>    Эмпирическая формула: C  H  N O .
                           22 18 2 4
<a id="p100016"></a>    Молекулярная масса: 374,4.
<a id="p100017"></a>    Химически   чистый   Фамоксадон  представляет  собой  светлый  кремовый
порошок.
                            -7
<a id="p100018"></a>    Давление паров: 6,4 х 10   Па при 20 °С.
<a id="p100019"></a>    Температура плавления: 141,3 - 142,3 °С.
<a id="p100020"></a>    Коэффициент  распределения  н-октанол  -  вода: Kow log P = 4,8 (pH 5);
4,65 (pH 7); 5,55 (pH 9).
                                                                         -6
<a id="p100021"></a>    Растворимость  в  воде зависит от реакции среды и составляет 243 х 10
                            -6
г/куб. дм при pH 5; 111 х 10   г/куб. дм при pH 7, при pH 9 вещество быстро
гидролизуется.
<a id="p100022"></a>Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм при 20 °С): ацетон - 274, ацетонитрил - 125, гексан - 0,0476, дихлорметан - 239, метанол - 10, толуол - 13,3, этилацетат - 124, н-октанол - 1,78.
<a id="p100023"></a>Фамоксадон нестабилен в водных растворах. Гидролиз наблюдается в диапазоне pH 5 - 9, и время полураспада составляет 41 день, 2 дня и 93 минуты при pH 5,0; 7,0 и 9,0 соответственно.
<a id="p100024"></a>    Период  полураспада при фотолизе составляет 4,6 дней и 3,9 часов при pH
5   и   7,75   соответственно.  В  почве  в  лабораторных  условиях  период
полуразложения  DT    составлял  6  дней  в  аэробных  условиях  и  28  - в
                  50
анаэробных.  Деградация  происходила  путем  гидроксилирования  и раскрытия
кольца  с образованием производных гликолевой кислоты. Первичная деградация
была микробной и ускорялась под действием света.
<a id="p100025"></a>    Краткая   токсикологическая   характеристика.  Фамоксадон  относится  к
малоопасным  веществам  по  острой  пероральной токсичности (ЛД   крысы - >
                                                               50
5000  мг/кг),  по  дермальной (ЛД   крысы - > 2000 мг/кг) токсичности, но к
                                 50
умеренно  опасным  по  ингаляционной токсичности (ЛД   крысы > 5300 мг/куб.
                                                    50
м).  Не  обладает  генотоксичностью  и онкогенными свойствами, не оказывает
влияния  на  репродуктивную  функцию.  Из  организма крыс Фамоксадон быстро
выводится в неизмененном виде.
<a id="p100026"></a>В России для Фамоксадона установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД 0,01 мг/кг массы тела человека; МДУ в картофеле - 0,05 мг/кг.
<a id="p100027"></a>Область применения. Фамоксадон - фунгицид контактного действия из группы оксазолидиндионов. Является ингибитором митохондриального дыхания, высокоэффективен против широкого спектра патогенных грибов с рекомендуемой нормой расхода 50 - 200 г д.в./га.
<a id="p100028"></a>В России используется в виде смесевых препаратов для борьбы против фитофтороза и альтернариоза на картофеле с нормой расхода 150 г д.в./га, также разрешено применение в личных подсобных хозяйствах против фитофтороза и альтернариоза на картофеле с нормой расхода 15 г/10 л воды. Проходит регистрационные испытания на томатах, винограде и подсолнечнике.

<div align="center">

<a id="p100029"></a>**1. МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА**

</div>


<a id="p100030"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

<div align="right">

<a id="p100031"></a>Таблица 1

</div>


<div align="center">

<a id="p100032"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ ФАМОКСАДОНА**

</div>



| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, Р = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| Виноградный | 0,02 - 0,10 | 50 | 4 | 11,2 | 13,3 |
| сок | 0,1 - 0,2 | 25 | 3 | 8,4 | 10,0 |


<a id="p100036"></a>Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.

<div align="right">

<a id="p100037"></a>Таблица 2

</div>


<div align="center">

<a id="p100038"></a>**ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ,**<br>
**ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ ФАМОКСАДОНА**

</div>



<table>
<colgroup><col width="22%"><col width="11%"><col width="19%"><col width="14%"><col width="16%"><col width="19%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">Анализируемый объект</td><td colspan="5">Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>Предел обнаружения, мг/кг</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>Среднее значение определения, %</td><td>Стандартное отклонение, S, %</td><td>Доверительный интервал среднего результата, +/-, %</td></tr>
<tr><td>Виноградный сок</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>83,8</td><td>4,26</td><td>1,7</td></tr>
</table>


<div align="center">

<a id="p100041"></a>**2. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ**

</div>


<a id="p100042"></a>Методика основана на определении Фамоксадона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистке перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах Диапак С16 и Диапак Амин.
<a id="p100043"></a>Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.
<a id="p100044"></a>В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

<div align="center">

<a id="p100045"></a>**3. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ,**<br>
**ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ**

</div>



#### <a id="p100046"></a>3.1 Средства измерений


<a id="p100047"></a>Весы аналитические "OHAUS", СИГМА 11140.
<a id="p100048"></a>Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г "ACCULAB" V600.
<a id="p100049"></a>Колбы мерные на 25, 50 и 100 куб. см, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74).
<a id="p100050"></a>Микрошприц для жидкостного хроматографа на 50 - 100 куб. мм.
<a id="p100051"></a>Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74).
<a id="p100052"></a>Хроматограф жидкостной Уотерс 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или другой аналогичного типа, номер госрегистрации 15311-02.
<a id="p100053"></a>Цилиндры мерные на 10, 25, 50, 100, 500 куб. см, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74).
<a id="p100054"></a>Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100055"></a>3.2 Реактивы


<a id="p100056"></a>Фамоксадон, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 97,7% (фирма Дюпон де Немур Интернэшнл, С.А).
<a id="p100057"></a>Ацетон, осч., ТУ 2633-00-4-11291058-94.
<a id="p100058"></a>Ацетонитрил осч., УФ-205 нм, ТУ 6-09-2167-84.
<a id="p100059"></a>Вода бидистиллированная, деионизированная, ГОСТ 7602-72.
<a id="p100060"></a>Гексан, х.ч. для спектроскопии, ТУ 6-09-06-657-84.
<a id="p100061"></a>Калий марганцовокислый, ч.д.а., ГОСТ 20490-75.
<a id="p100062"></a>Кальций хлористый, х.ч., ГОСТ 4161-76.
<a id="p100063"></a>Кислота ортофосфорная, 85%, Fluka, каталожный номер 79621.
<a id="p100064"></a>Натрий сернокислый, безводный, х.ч., [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76).
<a id="p100065"></a>Натрий хлористый, х.ч., ГОСТ 4233-77.
<a id="p100066"></a>Патроны концентрирующие Диапак С16 (0,6 г), ТУ 4215-002-05451931-94.
<a id="p100067"></a>Патроны концентрирующие Диапак Амин (0,6 г), ТУ 4215-002-05451931-94.
<a id="p100068"></a>Эфир диэтиловый, ГОСТ 6265-74.
<a id="p100069"></a>Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100070"></a>3.3 Вспомогательные устройства и материалы


<a id="p100071"></a>Аллонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами Диапак С16 и Диапак Амин.
<a id="p100072"></a>Аппарат для встряхивания проб "SKLO UNION TYP LT1".
<a id="p100073"></a>Банки с крышками для экстракции на 250 мл, полипропилен, кат. N 3120-0250, NALGENE.
<a id="p100074"></a>Ванна ультразвуковая "UNITRA" UNIMA OLSZTYN UM-4.
<a id="p100075"></a>Воронки химические для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.
<a id="p100076"></a>Воронки делительные на 250 куб. см, ГОСТ 10054-75.
<a id="p100077"></a>Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi или ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, с водяной баней.
<a id="p100078"></a>Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 куб. см, КПШ-100, КПШ-250, ГОСТ 10394-72.
<a id="p100079"></a>Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetry Shield RP18, зернение 5 мкм, фирма Уотерс.
<a id="p100080"></a>Колбы конические плоскодонные объемом 250, 500 и 1000 куб. см, ГОСТ 9737-70.
<a id="p100081"></a>Концентраторы грушевидные и круглодонные объемом 100 и 250 куб. см, ГОСТ 10394-75.
<a id="p100082"></a>Насос диафрагменный FT.19 фирмы KNF Neu Laboport.
<a id="p100083"></a>Предколонка хроматографическая стальная, Symmetry С18 длиной 20 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма Уотерс.
<a id="p100084"></a>Стаканы стеклянные объемом 100 - 500 куб. см, ГОСТ 25366-80Е.
<a id="p100085"></a>Установка для перегонки растворителей.
<a id="p100086"></a>Фильтры бумажные, "красная лента", ТУ-6-09-1678-86.
<a id="p100087"></a>Фильтры для очистки растворителей диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм, фирма Уотерс.
<a id="p100088"></a>Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

<div align="center">

<a id="p100089"></a>**4. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ**

</div>


<a id="p100090"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
<a id="p100091"></a>4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

<div align="center">

<a id="p100092"></a>**5. ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРОВ**

</div>


<a id="p100093"></a>К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
<a id="p100094"></a>К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

<div align="center">

<a id="p100095"></a>**6. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ**

</div>


<a id="p100096"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- <a id="p100097"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100098"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

<div align="center">

<a id="p100099"></a>**7. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ОПРЕДЕЛЕНИЙ**

</div>


<a id="p100100"></a>Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак С16 и Диапак Амин для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на патронах, построение калибровочной кривой.


#### <a id="p100101"></a>7.1 Подготовка органических растворителей



##### <a id="p100102"></a>7.1.1 Очистка ацетона

<a id="p100103"></a>Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия. (А. Гордон, Р. Форд Спутник химика, Москва, 1976 г., с. 438 - 439).

##### <a id="p100104"></a>7.1.2 Очистка гексана

<a id="p100105"></a>Гексан встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают бледно-розовым раствором перманганата калия до тех пор, пока раствор не перестанет обесцвечиваться, затем промывают водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (А. Гордон, Р. Форд Спутник химика, Москва, 1976 г., с. 441).

##### <a id="p100106"></a>7.1.3 Очистка диэтилового эфира

<a id="p100107"></a>Диэтиловый эфир сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

##### <a id="p100108"></a>7.1.4 Очистка бидистиллированной воды

<a id="p100109"></a>Бидистиллят кипятят в течение 6 часов с марганцовокислым калием, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.


#### <a id="p100110"></a>7.2 Приготовление растворов для проведения анализа



##### <a id="p100111"></a>7.2.1 Приготовление растворов для жидкостной хроматографии

<a id="p100112"></a>Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанные ацетонитрил и очищенную воду.

###### <a id="p100113"></a>7.2.1.1 Приготовление 3,1 мМ раствора ортофосфорной кислоты

<a id="p100114"></a>В мерную колбу объемом 2,0 куб. дм помещают 500 куб. см очищенной воды и 0,42 куб. см концентрированной (85%) ортофосфорной кислоты, перемешивают, доводят до метки очищенной водой и еще раз перемешивают.

###### <a id="p100115"></a>7.2.1.2 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ

<a id="p100116"></a>В плоскодонную колбу объемом 1 куб. дм помещают 650 куб. см ацетонитрила и 350 куб. см 3,1 мМ раствора ортофосфорной кислоты в очищенной воде. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 куб. см/мин. в течение 5 минут, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 минуту.

##### <a id="p100117"></a>7.2.2 Приготовление градуировочных растворов


###### <a id="p100118"></a>7.2.2.1 Стандартный раствор с концентрацией Фамоксадона 1,0 мг/куб. см

<a id="p100119"></a>Взвешивают 100 мг Фамоксадона в мерной колбе объемом 100 куб. см. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
<a id="p100120"></a>7.2.2.2. Стандартный раствор с концентрацией Фамоксадона 10,0 мкг/куб. см.
<a id="p100121"></a>Из стандартного раствора Фамоксадона с концентрацией 1,0 мг/куб. см отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании.
<a id="p100122"></a>7.2.2.3. Стандартные растворы Фамоксадона с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см для построения калибровочной кривой и внесения в образцы сока
<a id="p100123"></a>Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см и используют эти растворы для хроматографического исследования.


#### <a id="p100124"></a>7.3 Установление градуировочной характеристики


<a id="p100125"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Фамоксадона в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.
<a id="p100126"></a>В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.2](#p100163). Измеряют площадь пиков, рассчитывают среднее значение площади пика для каждой концентрации и строят график зависимости площади пика от концентрации Фамоксадона. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений (рисунок 1 - не приводится).


#### <a id="p100127"></a>7.4 Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16

<div align="center">

и Диапак Амин для очистки экстрактов

</div>



##### <a id="p100128"></a>7.4.1 Подготовка концентрирующего патрона Диапак Амин для очистки экстракта

<a id="p100129"></a>Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин.
<a id="p100130"></a>Патрон Диапак Амин устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
<a id="p100131"></a>Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 10 куб. см смеси гексан - ацетон в соотношении 1:1 и 10 гексана. Элюат отбрасывают.
<a id="p100132"></a>Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

###### <a id="p100133"></a>7.4.1.1 Проверка хроматографического поведения Фамоксадона на концентрирующем патроне Диапак Амин

<a id="p100134"></a>Из стандартного раствора Фамоксадона в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в круглодонную колбу объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона, помещают на 10 секунд в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 куб. см гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
<a id="p100135"></a>Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси гексан - ацетон в соотношении 9:1 и двумя порциями по 5 куб. см смеси гексан - ацетон в соотношении 9:1 и последовательно вносят на патрон. Элюаты после прохождения каждой порции собирают в отдельные концентраторы, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Фамоксадон, объединяют их и рассчитывают объем растворителя, необходимого для вымывания вещества из патрона.

##### <a id="p100136"></a>7.5.2 Подготовка концентрирующего патрона Диапак С16 для очистки экстракта

<a id="p100137"></a>Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. При работе на патронах Диапак С16 используют очищенную воду.
<a id="p100138"></a>Патрон Диапак С16 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
<a id="p100139"></a>Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:1 и 20 куб. см воды. Элюат отбрасывают.
<a id="p100140"></a>Нельзя допускать высыхания поверхности патрона!

###### <a id="p100141"></a>7.5.2.1 Проверка хроматографического поведения Фамоксадона на концентрирующем патроне Диапак С16

<a id="p100142"></a>Из стандартного раствора Фамоксадона в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в круглодонную колбу объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетонитрила и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 куб. см воды, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
<a id="p100143"></a>Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:4 и смесь вносят на патрон. Элюат выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Концентратор вновь обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:2 и смесь вносят на патрон. Элюат выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют.
<a id="p100144"></a>Исходный концентратор еще раз обмывают двумя порциями по 10 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:1 и вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Фамоксадон, объединяют их и рассчитывают объем растворителя, необходимого для вымывания вещества из патрона.


#### <a id="p100145"></a>7.6 Подготовка и кондиционирование колонки

<div align="center">

для жидкостной хроматографии

</div>


<a id="p100146"></a>Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с предколонкой Symmetry C18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25 °С и скорости потока подвижной фазы 1 куб. см/мин. 3 - 4 часа.

<div align="center">

<a id="p100147"></a>**8. ОТБОР ПРОБ И ХРАНЕНИЕ**

</div>


<a id="p100148"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также с ГОСТ 25892-83 "Виноградный сок, ТУ".
<a id="p100149"></a>Пробы соков хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре +4 °С не более 10 суток.

<div align="center">

<a id="p100150"></a>**9. ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЙ**

</div>



#### <a id="p100151"></a>9.1 Виноградный сок



##### <a id="p100152"></a>9.1.1 Экстракция

<a id="p100153"></a>Образец виноградного сока массой 10 г помещают в делительную воронку объемом 250 куб. см, прибавляют 100 мл дистиллированной воды, 10 г сухого хлорида натрия, 50 мл диэтилового эфира и интенсивно встряхивают воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой помещают в коническую колбу объемом 250 куб. см, а верхний эфирный слой с эмульсией - в химический стакан объемом 200 куб. см. Затем водный слой возвращают в делительную воронку и повторяют экстракцию еще 2 раза в тех же условиях, используя по 30 куб. см диэтилового эфира. Эфирный экстракт объединяют в химическом стакане, а водную фазу отбрасывают.

##### <a id="p100154"></a>9.1.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

<a id="p100155"></a>Эфирный экстракт возвращают в делительную воронку, прибавляют туда же 100 мл дистиллированной воды, 10 г сухого хлорида натрия и интенсивно встряхивают воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой отбрасывают, а верхний эфирный собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 мл диэтилового эфира, смыв объединяют с основным экстрактом и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

##### <a id="p100156"></a>9.1.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Амин и Диапак С16


###### <a id="p100157"></a>9.1.3.1 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Амин

<a id="p100158"></a>Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона, помещают на 10 секунд в ультразвуковую ванну и обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 куб. см гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Концентратор тщательно обмывают двумя порциями смеси гексан - ацетон в соотношении 9:1 по 10 и 5 куб. см и также вносят на патрон. Элюаты собирают, объединяют, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

###### <a id="p100159"></a>9.1.3.2 Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак С16

<a id="p100160"></a>Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетонитрила и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 куб. см воды, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат отбрасывают.
<a id="p100161"></a>Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:4 и смесь вносят на патрон. Элюат отбрасывают.
<a id="p100162"></a>Исходный концентратор еще раз обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:2 и смесь вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 20 куб. см смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:1 и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 - 5 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.


#### <a id="p100163"></a>9.2 Условия хроматографирования


<a id="p100164"></a>Хроматограф "Waters" или другой с аналогичными характеристиками с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны.
<a id="p100165"></a>Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 4,6 мм х 25 см, зернением 5 мкм.
<a id="p100166"></a>Предколонка стальная Symmetry С18, 3,9 мм х 2 см, зернением 5 мкм.
<a id="p100167"></a>Температура колонки: 25 °С.
<a id="p100168"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил - 3,1 мМ ортофосфорная кислота в соотношении 65:35.
<a id="p100169"></a>Длина волны 245 нм.
<a id="p100170"></a>Время удерживания Фамоксадона 10,6 - 11,06 мин.
<a id="p100171"></a>Чувствительность 0,003 ед. оптической плотности на шкалу.
<a id="p100172"></a>Объем вводимой пробы 20 куб. мм.
<a id="p100173"></a>Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.
<a id="p100174"></a>После хроматографирования каждой пробы следует промывать колонку не менее 3 минут.

<div align="center">

<a id="p100175"></a>**10. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ**

</div>


<a id="p100176"></a>Содержание Фамоксадона рассчитывают по формуле:

                               Sпр х A х V
<a id="p100177"></a>                          X = ------------- х P,
                              100 х Sст х m

<a id="p100178"></a>где:
<a id="p100179"></a>X - содержание Фамоксадона в пробе, мг/кг или мг/куб. дм;
<a id="p100180"></a>Sст - высота (площадь) пика стандарта, мм;
<a id="p100181"></a>Sпр - высота (площадь) пика образца, мм;
<a id="p100182"></a>A - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
<a id="p100183"></a>V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
<a id="p100184"></a>m - масса анализируемого образца, г (куб. см);
<a id="p100185"></a>P - содержание Фамоксадона в аналитическом стандарте, %.

<div align="center">

<a id="p100186"></a>**11. КОНТРОЛЬ ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ**

</div>


<a id="p100187"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

<div align="center">

<a id="p100188"></a>**11. ПРОВЕРКА ПРИЕМЛЕМОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ**<br>
**ПАРАЛЛЕЛЬНЫХ ОПРЕДЕЛЕНИЙ**

</div>


<a id="p100189"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

                         2 х |X  - X | х 100
                               1    2
<a id="p100190"></a>                         ------------------- <= r,                      (1)
                              (X  + X )
                                1    2

    где:
    X , X  - результаты параллельных определений, мг/кг;
     1   2
 r - значение предела повторяемости [(таблица 1)](#p100032), при этом r = 2,8
сигма .
     r
<a id="p100191"></a>При невыполнении [условия (1)](#p100190) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

<div align="center">

<a id="p100192"></a>**12. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ**

</div>


<a id="p100193"></a>Результат анализа представляют в виде:

              _
<a id="p100194"></a>             (X +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности Р = 0,95,

    где:
    _
    X   -   среднее   арифметическое  результатов  определений,  признанных
приемлемыми, мг/кг;
    ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

                                          _
                        ДЕЛЬТА = дельта х X / 100,

<a id="p100195"></a>дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100032)), %.
<a id="p100196"></a>В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100197"></a>"содержание вещества в пробе менее 0,02 мг/кг" <*>.

<a id="p100198"></a>

---

<a id="p100199"></a><*> 0,02 мг/кг - предел обнаружения.

<div align="center">

<a id="p100200"></a>**13. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ**

</div>


<a id="p100201"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6.2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100202"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100203"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
<a id="p100204"></a>Величина добавки С  должна удовлетворять условию:
                  д

<a id="p100205"></a>                          С  = ДЕЛЬТА  _ + ДЕЛЬТА  _ ,
                           д         л,X         л,X'

    где   +/-   ДЕЛЬТА  _ (+/-  ДЕЛЬТА  _ )  -  характеристика  погрешности
                      л,X             л,X'
(абсолютная погрешность) результатов  анализа,  соответствующая  содержанию
компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания  компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

<a id="p100206"></a>                        ДЕЛЬТА  = +/- 0,84 ДЕЛЬТА,
                              л

    где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

                                          _
<a id="p100207"></a>                        ДЕЛЬТА = дельта х X / 100,

    где  дельта  -  граница  относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100032)), %.
<a id="p100208"></a>    Результат контроля процедуры К  рассчитывают по формуле:
                                  к

                                 _    _
<a id="p100209"></a>                            К  = X' - X - С ,
                             к             д

          _     _
    где   X',   X,   С  - среднее арифметическое  результатов  параллельных
                      д
определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100188)) содержания компонента в
образце   с   добавкой,   испытуемом   образце   и   концентрация   добавки
соответственно, мг/кг.
<a id="p100210"></a>    Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

                              _____________________
                             /     2            2
<a id="p100211"></a>                       К = \/ДЕЛЬТА  _  + ДЕЛЬТА  _.
                                   л,X'         л,X

<a id="p100212"></a>    Проводят  сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
                                                            к
контроля (К).
<a id="p100213"></a>    Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

<a id="p100214"></a>                              |К | <= К,                                (2)
                                к

процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100215"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100214) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
<a id="p100216"></a>13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
<a id="p100217"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

                         2 х |X  - X | х 100
                               1    2
<a id="p100218"></a>                         ------------------- <= R,                      (3)
                              (X  + X )
                                1    2

    где:
    X , X  - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
     1   2
    R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
[таблица 1](#p100032)), %.



<a id="p100219"></a>

---