---
title: "\"МУК 4.1.2214-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств имазамокса и имазапира в семенах подсолнечника, сои и растительных маслах при совместном присутствии методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.2214-07"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2214-07"
---

## "МУК 4.1.2214-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств имазамокса и имазапира в семенах подсолнечника, сои и растительных маслах при совместном присутствии методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.2214-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств имазамокса и имазапира в семенах подсолнечника, сои и растительных маслах при совместном присутствии методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 25.05.2007)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 15 августа 2007 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

<div align="center">

25 мая 2007 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИМАЗАМОКСА И ИМАЗАПИРА**
**В СЕМЕНАХ ПОДСОЛНЕЧНИКА, СОИ И РАСТИТЕЛЬНЫХ МАСЛАХ**
**ПРИ СОВМЕСТНОМ ПРИСУТСТВИИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ**
**ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="center">

**МУК 4.1.2214-07**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

<div align="center">

15 августа 2007 года

</div>


1. <a id="p100006"></a>Разработаны Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана.
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 1 от 29.03.2007).
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 25 мая 2007 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены впервые.

<a id="p100010"></a>Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовых концентраций имазамокса и имазапира в семенах подсолнечника и сои, а также растительных маслах в диапазоне 0,1 - 1 мг/кг.
<a id="p100011"></a>Имазамокс и имазапир - действующие вещества препарата ЕВРОЛАЙТНИНГ, ВРК (33 г/л имазамокса + 15 г/л имазапира), фирма-производитель "БАСФ".
<a id="p100012"></a>Имазамокс
<a id="p100013"></a>(RS)-2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-5-метоксиметилникотиновая кислота (IUPAC).
<a id="p100014"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100015"></a>    C  H  N O .
     15 19 3 4
<a id="p100016"></a>    Мол. масса 305,3.
<a id="p100017"></a>    Кристаллическое   вещество   белого   цвета,  без  запаха.  Температура
                                                                    -2
плавления:  166,0  -  166,7  °С. Давление паров при 20 °С < 1,3 х 10   мПа.
Растворимость  в органических растворителях при 20 °С (г/куб. дм): ацетон -
29,3;  ацетонитрил  -  19,0; гексан - 0,007; дихлорметан - 218,0; метанол -
67,5. Растворимость в воде при 20 °С - 4,16 г/куб. дм. Вещество стабильно к
гидролизу при рН 5, 7 и 9. Быстро подвергается фотолитическому разложению в
воде: DT   - 6, 8 ч.
        50
<a id="p100018"></a>    Краткая токсикологическая характеристика:
<a id="p100019"></a>    Острая  пероральная  токсичность (LD  ) для крыс -  более  5000  мг/кг;
                                        50
острая дермальная   токсичность   (LD  )   для   кроликов  >  4000  мг/кг,
                                     50
острая ингаляционная токсичность (LK  ) для крыс > 6300 мг/куб. м.
                                    50
<a id="p100020"></a>Имазапир
<a id="p100021"></a>2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолон-2-ил)никотиновая кислота (IUPAC).
<a id="p100022"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100023"></a>    C  H  N O .
     13 15 3 3
<a id="p100024"></a>Мол. масса 261,3.
<a id="p100025"></a>Порошок от белого до желто-коричневого цвета со слабым запахом уксусной кислоты. Температура плавления 169 - 173 °С. Давление паров при 60 °С: менее 0,013 мПа. Растворимость в органических растворителях при 25 °С (г/100 куб. см): дихлорметан - 8,72; ацетон - 3,39; метанол - 10,5; толуол - 0,18; гексан - 0,00095. Растворимость в воде (г/куб. дм): 9,74 (15 °С); 11,3 (25 °С).
<a id="p100026"></a>    Стабилен  в водной среде при рН 5 - 9 в темноте. Разрушается в растворе
в кислой среде на солнечном свету. DT   6 дней при рН 5 - 9.
                                     50
<a id="p100027"></a>    Константа диссоциации: рК  - 1,9; рК  - 3,6; рК  - 11.
                             1          2          3
<a id="p100028"></a>    Краткая токсикологическая характеристика:
<a id="p100029"></a>    Острая  пероральная  токсичность  (LD  )  для крыс > 5000 мг/кг; острая
                                         50
дермальная   токсичность   (LD  )   для   кроликов  >  2000  мг/кг;  острая
                              50
ингаляционная токсичность (LK  ) для крыс - 1,3 мг/куб. дм.
                             50
<a id="p100030"></a>Область применения препарата
<a id="p100031"></a>Препарат Евролайтнинг, ВРК рекомендуется в качестве гербицида для борьбы с однолетними двудольными и злаковыми сорняками в посевах подсолнечника и сои (опрыскивание в период вегетации).
<a id="p100032"></a>ВМДУ имазамокса в семенах и масле сои - 1 мг/кг. Рекомендуемые ВМДУ имазамокса и имазапира в семенах и масле подсолнечника, имазапира в семенах и масле сои - 1 мг/кг.


## 1. <a id="p100033"></a>Метрологические характеристики


<a id="p100034"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100035"></a>Таблица 1

<div align="center">

<a id="p100036"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ**

</div>



<table>
<colgroup><col width="15%"><col width="18%"><col width="22%"><col width="19%"><col width="12%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый объект</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>Показатель точности (граница относительной погрешности) +/- дельта, %, Р = 0,95</td><td>Стандартное отклонение повторяемости сигма , % r</td><td>Предел повторяемости r, %</td><td>Предел воспроизводимости R, %</td></tr>
<tr><td colspan="6">имазамокс</td></tr>
<tr><td>Семена сои</td><td>от 0,1 до 1</td><td>25</td><td>5,5</td><td>15</td><td>18</td></tr>
<tr><td>Семена подсолнечника</td><td>от 0,1 до 1</td><td>25</td><td>5,7</td><td>16</td><td>19</td></tr>
<tr><td>Растительное масло</td><td>от 0,1 до 1</td><td>25</td><td>3,7</td><td>10</td><td>12</td></tr>
<tr><td colspan="6">имазапир</td></tr>
<tr><td>Семена сои</td><td>от 0,1 до 1</td><td>25</td><td>5,8</td><td>16</td><td>19</td></tr>
<tr><td>Семена подсолнечника</td><td>от 0,1 до 1</td><td>25</td><td>6,4</td><td>18</td><td>21</td></tr>
<tr><td>Растительное масло</td><td>от 0,1 до 1</td><td>25</td><td>5,8</td><td>16</td><td>19</td></tr>
</table>


<a id="p100046"></a>Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.

<div align="right">

<a id="p100047"></a>Таблица 2

</div>



<table>
<colgroup><col width="15%"><col width="18%"><col width="18%"><col width="14%"><col width="16%"><col width="20%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый</td><td colspan="5">Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>объект</td><td>Предел обнаружения, мг/кг</td><td colspan="2">Диапазон Среднее определяемых значение концентраций, опредемг/кг ления, %</td><td>Стандартное отклонение S, %</td><td>Доверительный интервал среднего результата, +/-, %</td></tr>
<tr><td colspan="6">имазамокс</td></tr>
<tr><td>Семена сои</td><td>0,1</td><td>0,1 - 1</td><td>88,3</td><td>4,0</td><td>5,0</td></tr>
<tr><td>Семена подсолнечника</td><td>0,1</td><td>0,1 - 1</td><td>86,9</td><td>3,9</td><td>4,8</td></tr>
<tr><td>Растительное масло</td><td>0,1</td><td>0,1 - 1</td><td>94,1</td><td>2,6</td><td>3,2</td></tr>
<tr><td colspan="6">имазапир</td></tr>
<tr><td>Семена сои</td><td>0,1</td><td>0,1 - 1</td><td>81,2</td><td>4,2</td><td>5,2</td></tr>
<tr><td>Семена подсолнечника</td><td>0,1</td><td>0,1 - 1</td><td>79,9</td><td>4,5</td><td>5,8</td></tr>
<tr><td>Растительное масло</td><td>0,1</td><td>0,1 - 1</td><td>92,3</td><td>4,3</td><td>5,3</td></tr>
</table>



## 2. <a id="p100057"></a>Метод измерений


<a id="p100058"></a>Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции анализируемых проб семян подсолнечника и сои смесью метанол-соляная кислота, растительного масла - ацетонитрил-вода-уксусная кислота, последовательной 2-стадийной очистки на концентрирующих патронах C18 Sep Pak. Экстракт семян подсолнечника дополнительно очищают на патронах Sep Pak Silica.
<a id="p100059"></a>Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
<a id="p100060"></a>В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии компонентов препаративной формы.


## 3. <a id="p100061"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы



### <a id="p100062"></a>3.1. Средства измерений


<a id="p100063"></a>Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором с     Номер Госреестра
переменной длиной волны (фирмы Perkin-Elmer, США)          15945-97
<a id="p100064"></a>Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104
<a id="p100065"></a>Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим ГОСТ 7328
пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой
погрешности +/- 0,038 г
<a id="p100066"></a>Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-500-2, 2-1000-2 [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100067"></a>Меры массы ГОСТ 7328
<a id="p100068"></a>Пипетки градуированные 2-го класса точности [ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91)
вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см
<a id="p100069"></a>Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
вместимостью 5 и 10 куб. см
<a id="p100070"></a>Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
50, 100, 250, 500 и 1000 куб. см
<a id="p100071"></a>Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


### <a id="p100072"></a>3.2. Реактивы



<a id="p100073"></a>Имазамокс, аналитический стандарт с содержанием
действующего вещества 98,0% (ф. БАСФ, Германия)
<a id="p100074"></a>Имазапир, аналитический стандарт с содержанием
действующего вещества 99,4% (ф. БАСФ, Германия)
<a id="p100075"></a>Аммоний уксуснокислый, хч ГОСТ 3117
<a id="p100076"></a>Ацетонитрил для хроматографии, хч                           ТУ 6-09-4326-76
<a id="p100077"></a>Вода деионизованная
<a id="p100078"></a>н-Гексан, для ВЭЖХ                                          ТУ 6-09-4521-77
<a id="p100079"></a>Кислота орто-фосфорная, хч, 85% ГОСТ 6552
<a id="p100080"></a>Кислота соляная, хч ГОСТ 3118
<a id="p100081"></a>Кислота уксусная ледяная, хч ГОСТ 61
<a id="p100082"></a>Метилен хлористый (дихлорметан), хч [ГОСТ 12794](https://bukva.ai/docs/standart-gost-12794-80)
<a id="p100083"></a>Метиловый спирт (метанол), хч [ГОСТ 6995](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77)
<a id="p100084"></a>Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), хч [ГОСТ 22300](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76)
<a id="p100085"></a>Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.


### <a id="p100086"></a>3.3. Вспомогательные устройства, материалы


<a id="p100087"></a>Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с                        ТУ 64-1-2851-78
<a id="p100088"></a>Бумажные фильтры "красная лента", обеззоленные или          ТУ 6-09-2678-77
фильтры из хроматографической бумаги Ватман 3ММ
<a id="p100089"></a>Воронка Бюхнера ГОСТ 25336
<a id="p100090"></a>Воронка делительная вместимостью 500 куб. см
<a id="p100091"></a>Воронки конусные диаметром 30 - 37 и 60 мм ГОСТ 25336
<a id="p100092"></a>Груша резиновая
<a id="p100093"></a>Индикаторная бумага, универсальная
<a id="p100094"></a>Колба Бунзена ГОСТ 25336
<a id="p100095"></a>Колбы плоскодонные вместимостью 100, 250, 400 - [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
500 куб. см
<a id="p100096"></a>Колбы грушевидные на шлифе вместимостью 100 - 150 куб. см [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
<a id="p100097"></a>Мембранные фильтры капроновые диаметром 47 мм
<a id="p100098"></a>Набор для фильтрации растворителей через мембрану
<a id="p100099"></a>Насос водоструйный вакуумный                                ГОСТ 10696
<a id="p100100"></a>Стаканы химические вместимостью 100, 500 куб. см ГОСТ 25336
<a id="p100101"></a>Стекловата
<a id="p100102"></a>Стеклянные палочки
<a id="p100103"></a>Патроны для твердофазной экстракции C18 Sep Pak,
Classik (Waters, США), масса сорбента 360 мг
<a id="p100104"></a>Патроны для твердофазной экстракции Sep Pak Silica
(Waters, США), объем сорбента 2 куб. см
<a id="p100105"></a>Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi,
Швейцария
<a id="p100106"></a>Установка для перегонки растворителей
<a id="p100107"></a>Хроматографическая колонка стальная длиной 25 см,
внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Кромасил 100
С18, зернением 7 мкм
<a id="p100108"></a>Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа
вместимостью 50 - 100 куб. мм
<a id="p100109"></a>Шприцы медицинские с разъемом Льюера вместимостью 5 и ГОСТ 22090
10 куб. см
<a id="p100110"></a>Центрифуга
<a id="p100111"></a>Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100112"></a>Требования безопасности


<a id="p100113"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.
<a id="p100114"></a>4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.


## 5. <a id="p100115"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100116"></a>К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
<a id="p100117"></a>К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.


## 6. <a id="p100118"></a>Условия измерений


<a id="p100119"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- <a id="p100120"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100121"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100122"></a>Подготовка к выполнению измерений


<a id="p100123"></a>Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, подвижных фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка концентрирующих патронов C18 Sep Pak и Sep Pak Silica.


### <a id="p100124"></a>7.1. Очистка органических растворителей



##### <a id="p100125"></a>7.1.1 Ацетонитрил

<a id="p100126"></a>Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

##### <a id="p100127"></a>7.1.2 Гексан

<a id="p100128"></a>Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

##### <a id="p100129"></a>7.1.3 Хлористый метилен и этилацетат

<a id="p100130"></a>Каждый растворитель промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.


### <a id="p100131"></a>7.2. Приготовление растворов соляной кислоты


<a id="p100132"></a>Для приготовления 1 N раствора в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см, содержащую 300 - 400 куб. см деионизованной воды, помещают 83 куб. см концентрированной соляной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.
<a id="p100133"></a>Для приготовления 0,05, 0,025 и 0,01 N растворов в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают соответственно 50, 25 и 10 куб. см 1 N раствора соляной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.


### <a id="p100134"></a>7.3. Приготовление смеси для экстракции проб семян


<a id="p100135"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 600 куб. см метанола, вносят 400 куб. см 0,025 N раствора соляной кислоты, перемешивают.


### <a id="p100136"></a>7.4. Приготовление смеси для экстракции проб растительного масла


<a id="p100137"></a>В колбу вместимостью 1000 - 1500 куб. см помещают 500 куб. см ацетонитрила, вносят 500 куб. см деионизованной воды и 20 куб. см ледяной уксусной кислоты, перемешивают.


### <a id="p100138"></a>7.5. Приготовление 0,05 М раствора ацетата аммония


<a id="p100139"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 3,85 г уксуснокислого аммония, доводят водой до метки, вносят 1 куб. см ледяной уксусной кислоты, перемешивают.


### <a id="p100140"></a>7.6. Приготовление 25% раствора метанола в 0,05 М растворе ацетата аммония


<a id="p100141"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 25 куб. см метанола, доводят до метки 0,05 М раствором уксуснокислого аммония, перемешивают.


### <a id="p100142"></a>7.7. Приготовление 2% раствора уксусной кислоты в этилацетате


<a id="p100143"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 2 куб. см ледяной уксусной кислоты, доводят до метки этилацетатом, перемешивают.


### <a id="p100144"></a>7.8. Подготовка концентрирующих патронов C18 Sep Pak


<a id="p100145"></a>7.8.1. Первая ступень очистки. Концентрирующий патрон промывают с помощью медицинского шприца 5 куб. см метанола со скоростью прохождения растворителя через патрон 1 - 2 капли в сек., затем 5 куб. см 0,01 N раствора соляной кислоты.
<a id="p100146"></a>7.8.2. Вторая ступень очистки. Концентрирующий патрон промывают с помощью медицинского шприца последовательно гексаном, хлористым метиленом, метанолом, водой, 0,05 N раствором соляной кислоты порциями по 3 куб. см.
<a id="p100147"></a>Патроны готовят непосредственно перед использованием.


### <a id="p100148"></a>7.9. Подготовка концентрирующих патронов Sep Pak Silica


<a id="p100149"></a>Концентрирующий патрон промывают с помощью медицинского шприца последовательно метанолом, этилацетатом, хлористым метиленом порциями по 5 куб. см.
<a id="p100150"></a>Патроны готовят непосредственно перед использованием. Нельзя допускать высыхания верхнего слоя сорбента.


### <a id="p100151"></a>7.10. Подготовка подвижных фаз для ВЭЖХ



##### <a id="p100152"></a>7.10.1 Для определения имазамокса и имазапира в семенах сои, растительных маслах, имазамокса - семенах подсолнечника

<a id="p100153"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 220 куб. см ацетонитрила, 780 куб. см деионизованной воды, 1 куб. см орто-фосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

##### <a id="p100154"></a>7.10.2 Для определения имазапира в семенах подсолнечника

<a id="p100155"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 160 куб. см ацетонитрила, 20 куб. см метанола, 820 куб. см деионизованной воды, 1 куб. см орто-фосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.


### <a id="p100156"></a>7.11. Кондиционирование хроматографической колонки


<a id="p100157"></a>Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по [п. 7.10.1](#p100152) или [7.10.2](#p100154)) при скорости подачи растворителя 1 куб. см/мин. не менее 2-х часов до установления стабильной базовой линии.


### <a id="p100158"></a>7.12. Приготовление градуировочных растворов


<a id="p100159"></a>7.12.1. Исходные растворы имазамокса и имазапира для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г имазамокса (имазапира), растворяют в 50 - 70 куб. см метанола, доводят до метки этим же растворителем, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.
<a id="p100160"></a>Градуировочные растворы N 2 - 5 действующих веществ готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходных растворов.
<a id="p100161"></a>7.12.2. Растворы N 1 имазамокса и имазапира для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1,0 куб. см исходного раствора имазамокса или имазапира с концентрацией 100 мкг/куб. см [(п. 7.12.1)](#p100159), доводят до метки метанолом, тщательно перемешивают.
<a id="p100162"></a>Растворы хранятся в холодильнике не более месяца.
<a id="p100163"></a>7.12.3. Рабочие растворы N 2 - 5 имазамокса и имазапира для градуировки (концентрация 0,1 - 1 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0, 2,5, 5,0 и 10 куб. см растворов N 1 имазамокса и имазапира с концентрацией 10 мкг/куб. см [(п. 7.12.2)](#p100161), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по [п. 7.10.1](#p100152), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией имазамокса и имазапира 0,1, 0,25, 0,5 и 1,0 мкг/куб. см, соответственно.
<a id="p100164"></a>Растворы хранятся в холодильнике не более 5-ти дней.


### <a id="p100165"></a>7.13. Приготовление растворов внесения для оценки полноты извлечения имазамокса и имазапира из образцов


<a id="p100166"></a>7.13.1. Исходные растворы (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г имазамокса (имазапира), растворяют в 50 - 70 куб. см изопропилового спирта, доводят им же до метки, тщательно перемешивают.
<a id="p100167"></a>7.13.2. Основной раствор имазамокса и имазапира для внесения (концентрация каждого действующего вещества 10 мкг/куб. см).
<a id="p100168"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают по 10,0 куб. см исходных растворов имазапира и имазамокса с концентрацией 100 мкг/куб. см [(п. 7.13.1)](#p100166), доводят до метки изопропанолом, тщательно перемешивают.
<a id="p100169"></a>Раствор хранится в холодильнике не более месяца.
<a id="p100170"></a>Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено".


### <a id="p100171"></a>7.14. Установление градуировочных характеристик


<a id="p100172"></a>Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площадей пиков (отн. единицы) от концентрации имазамокса и имазапира в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки N 2 - 5.
<a id="p100173"></a>В инжектор хроматографа вводят 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.3.1](#p100203) или [9.3.2](#p100207). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.


## 8. <a id="p100174"></a>Отбор и хранение проб


<a id="p100175"></a>Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными [ГОСТами 10852-86](https://bukva.ai/docs/3979) "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб", [17109-88](https://bukva.ai/docs/gost-17109-88) "Соя. Требования при заготовках и поставках", [22391-89](https://bukva.ai/docs/gost-22391-89) "Подсолнечник. Требования при заготовках и поставках", "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N [2051-79](https://bukva.ai/docs/2051-79) от 21.08.79).
<a id="p100176"></a>Семена подсушивают в темноте до постоянного веса и хранят в тканевых мешочках в сухом, защищенном от света месте при комнатной температуре не более 6-ти месяцев. Измельченные пробы зерна (аналитические образцы массой 20 г) замораживают и хранят при температуре -18 °С.
<a id="p100177"></a>Пробы масла (помещенные в стеклянные флаконы) хранят в холодильнике в течение 3-х месяцев.
<a id="p100178"></a>Перед анализом образцы подсушенных семян измельчают.


## 9. <a id="p100179"></a>Выполнение определения



### <a id="p100180"></a>9.1. Семена сои и подсолнечника



##### <a id="p100181"></a>9.1.1 Экстракция

<a id="p100182"></a>Образец измельченных семян массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 400 куб. см на шлифе, добавляют 200 куб. см смеси для экстракции (метанол-0,025 N раствор соляной кислоты, 60:40, по объему), приготовленной по [п. 7.3](#p100134), интенсивно перемешивают в течение 5 мин.
<a id="p100183"></a>Пробам дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр "красная лента", осадок на фильтре промывают 25 куб. см метанола. Отфильтрованный экстракт переносят в мерный цилиндр вместимостью 250 куб. см с пришлифованной пробкой, перемешивают, измеряют объем раствора, 1/5 его часть, эквивалентную 4 г семян (около 40 куб. см), переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до объема 8 - 10 куб. см. Очищают на концентрирующих патронах C18 Sep Pak по [п. 9.1.2.1](#p100185).

##### <a id="p100184"></a>9.1.2 Очистка экстракта


###### <a id="p100185"></a>9.1.2.1 Очистка экстракта на концентрирующих патронах C18 Sep Pak

<a id="p100186"></a>Раствор в колбе, полученный по [п. 9.1.1](#p100181), вносят с помощью медицинского шприца на концентрирующий патрон C18 Sep Pak, подготовленный по [п. 7.8.1](#p100145), со скоростью пропускания раствора 1 - 2 капли в сек. После нанесения пробы патрон промывают 5 куб. см 0,01 N раствора соляной кислоты, элюат отбрасывают. Вещества элюируют с патрона 9 куб. см 25%-ного раствора метанола в 0,05 М растворе ацетата аммония (приготовленного по [п. 7.6](#p100140)), собирая элюат в круглодонную колбу, упаривают его при температуре не выше 40 °С до объема около 3 куб. см.
<a id="p100187"></a>Полученный раствор вносят с помощью медицинского шприца на концентрирующий патрон C18 Sep Pak, подготовленный по [п. 7.8.2](#p100146). Колбу ополаскивают дважды по 1 куб. см деионизованной воды, растворы также вносят на патрон. Скорость прохождения раствора через патрон не должна превышать 1 - 2 капли в сек.
<a id="p100188"></a>Промывают патрон 3 куб. см деионизованной воды, затем 3 куб. см гексана. Гексан продавливают до нижнего края сорбента. Элюаты отбрасывают. Имазапир и имазамокс элюируют с патрона 15 куб. см хлористого метилена, собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. При анализе проб семян сои и растительных масел раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 4 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ (приготовленной по [п. 7.10.1](#p100152)), центрифугируют (фильтруют через слой стекловаты, помещенный в конусную химическую воронку) и анализируют содержание имазамокса и имазапира по [п. 9.3.1](#p100203).
<a id="p100189"></a>При анализе семян подсолнечника пробу дополнительно очищают на концентрирующем патроне Sep Pak Silica по п. 9.1.2.2.

###### <a id="p100190"></a>9.1.2.2 Очистка экстракта семян подсолнечника на концентрирующих патронах Sep Pak Silica

<a id="p100191"></a>Полученный по [п. 9.1.2.1](#p100185) раствор вносят с помощью медицинского шприца на сухой концентрирующий патрон Sep Pak Silica (подготовленный по [п. 7.9](#p100148)) со скоростью пропускания раствора 1 - 2 капли в сек. Колбу ополаскивают 2 куб. см хлористого метилена, который также наносят на патрон. После нанесения пробы патрон промывают 5 куб. см смеси хлористый метилен-этилацетат (1:1, по объему), затем 5 куб. см этилацетата, элюат отбрасывают. Вещества элюируют с патрона 15 куб. см 2%-ного раствора уксусной кислоты в этилацетате, собирая элюат в круглодонную колбу, упаривают при температуре не выше 40 °С досуха. Остаток растворяют в 4 куб. см подвижной фазы, подготовленной по [п. 7.10.1](#p100152), и анализируют содержание имазамокса по [п. 9.3.1](#p100203), имазапира - [9.3.2](#p100207).


### <a id="p100192"></a>9.2. Масло



##### <a id="p100193"></a>9.2.1 Экстракция

<a id="p100194"></a>Образец масла массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 200 - 250 куб. см, растворяют в 100 куб. см гексана, переносят в делительную воронку вместимостью 500, добавляют 100 куб. см смеси для экстракции (смесь ацетонитрил-вода, 1:1, с добавлением 2% ледяной уксусной кислоты), приготовленной по [п. 7.4](#p100136). Воронку интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой осторожно декантируют через бумажный фильтр, помещенный в конусную воронку, в мерный цилиндр вместимостью 250 куб. см с пришлифованной пробкой, доливают водой до 200 куб. см. Раствор перемешивают и помещают в холодильник (4 - 6 °С) на 20 - 30 мин. (раствор при этом мутнеет). Измеряют объем раствора, 1/5 его часть, эквивалентную 4 г масла (около 40 куб. см), переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до объема 8 - 10 куб. см. Очищают на концентрирующих патронах C18 Sep Pak по [п. 9.1.2.1](#p100185).


### <a id="p100195"></a>9.3. Условия хроматографирования


<a id="p100196"></a>Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором (фирмы Perkin-Elmer, США)
<a id="p100197"></a>Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100 С18, зернением 7 мкм.
<a id="p100198"></a>Температура колонки: комнатная
<a id="p100199"></a>Скорость потока элюента: 1 куб. см/мин.
<a id="p100200"></a>Рабочая длина волны: 240 нм
<a id="p100201"></a>Объем вводимой пробы: 20 мм
<a id="p100202"></a>Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу.

##### <a id="p100203"></a>9.3.1 Определение имазамокса и имазапира в семенах сои, растительных маслах, имазамокса - семенах подсолнечника

<a id="p100204"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил-вода-орто-фосфорная кислота (22:78:0,1, по объему)
<a id="p100205"></a>    Ориентировочное время выхода имазапира: 4,5 - 4,8 мин.
<a id="p100206"></a>                                 имазамокса: 7,4 - 7,6 мин.

##### <a id="p100207"></a>9.3.2 Определение имазапира в семенах подсолнечника

<a id="p100208"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил-метанол-вода-орто-фосфорная кислота (16:2:82:0,1, по объему)
<a id="p100209"></a>Ориентировочное время выхода имазапира: около 8 мин.
<a id="p100210"></a>Линейный диапазон детектирования 2 - 20 нг.
<a id="p100211"></a>Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой, приготовленной по [п. 7.10.1](#p100152), не более чем в 50 раз.


## 10. <a id="p100212"></a>Обработка результатов анализа


<a id="p100213"></a>Содержание имазамокса и имазапира в пробе (Х, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                                  С х К х V
<a id="p100214"></a>                              Х = ---------,
                                      m

<a id="p100215"></a>где:
<a id="p100216"></a>С - концентрация имазамокса (имазапира), найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;
<a id="p100217"></a>V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
<a id="p100218"></a>m - масса анализируемого образца, г;
<a id="p100219"></a>К = 5, с учетом объема экстракта, взятого для анализа.


## 11. <a id="p100220"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100221"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

                            2 х |Х  - Х | х 100
                                  1    2
<a id="p100222"></a>                            ------------------- <= r,                   (1)
                                 (Х  + Х )
                                   1    2

    где:
    Х , Х  - результаты параллельных определений, мг/кг;
     1   2
 r - значение предела повторяемости [(таблица 1)](#p100036), при этом
r = 2,8 сигма .
             r

<a id="p100223"></a> При невыполнении условия [(1)](#p100222) выясняют причины превышения предела
повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 12. <a id="p100224"></a>Оформление результатов


<a id="p100225"></a>Результат анализа представляют в виде:
              _
<a id="p100226"></a>             (Х +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности Р = 0,95,

    где:
    _
    Х - среднее арифметическое результатов определений, признанных
    приемлемыми, мг/кг;
    ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

<a id="p100227"></a>ДЕЛЬТА = дельта х Х / 100,

<a id="p100228"></a>где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100036)), %.
<a id="p100229"></a>Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100230"></a>"содержание имазамокса (имазапира) в пробе менее 0,1 мг/кг" <*>.

<a id="p100231"></a>

---

<a id="p100232"></a><*> 0,1 мг/кг - предел обнаружения.


## 13. <a id="p100233"></a>Контроль качества результатов измерений


<a id="p100234"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100235"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100236"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
<a id="p100237"></a>    Величина добавки С   должна удовлетворять условию:
                      д

<a id="p100238"></a>                        С  = ДЕЛЬТА  _ + ДЕЛЬТА  _ ,
                         д         л,Х         л,Х'


    где  +/- ДЕЛЬТА  _   (+/- ДЕЛЬТА  _ )   -  характеристика   погрешности
                   л,Х              л,Х'
(абсолютная погрешность) результатов  анализа,  соответствующая содержанию
компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания  компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

<a id="p100239"></a>                             ДЕЛЬТА  = +/- 0,84 ДЕЛЬТА,
                                   л

    где  ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

<a id="p100240"></a>                           ДЕЛЬТА = дельта х Х / 100,

    где  дельта - граница  относительной  погрешности  методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100036)), %.
<a id="p100241"></a>    Контрольный параметр процедуры К  рассчитывают по формуле:
                                    к
                                   _    _
<a id="p100242"></a>                              К  = Х' - Х - С ,
                               к             д

         _   _
    где  Х', Х, С  - среднее    арифметическое   результатов   параллельных
                 д
определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100220)) содержания компонента в
образце с  добавкой,    испытуемом    образце,    концентрация     добавки,
соответственно, мг/кг.
<a id="p100243"></a>    Норматив контроля К рассчитывают но формуле:

                             ______________________
                            /      2            2
<a id="p100244"></a>                      К = \/ ДЕЛЬТА  _  + ДЕЛЬТА  _.
                                   л,Х'         л,Х

<a id="p100245"></a>    Проводят  сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
                                                            к
контроля (К).
<a id="p100246"></a>    Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

<a id="p100247"></a>                              |К | <= К,                                (2)
                                к

процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100248"></a>При невыполнении условия [(2)](#p100247) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

#### <a id="p100249"></a>13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

<a id="p100250"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

                         2 х |Х  - Х | х 100
                               1    2
<a id="p100251"></a>                         ------------------- <= R,                      (3)
                               (Х  + Х )
                                 1    2

    где:
    Х , Х  - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
     1   2
    R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
[таблица 1](#p100036)), %.


## 14. <a id="p100252"></a>Разработчики


<a id="p100253"></a>ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзор.



<a id="p100254"></a>

---