---
title: "\"МУК 4.1.2213-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств феназахина в ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.2213-07"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2213-07"
---

## "МУК 4.1.2213-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств феназахина в ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.2213-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств феназахина в ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 25.05.2007)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 15 августа 2007 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

<div align="center">

25 мая 2007 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЕНАЗАХИНА В ЯГОДАХ**
**ВИНОГРАДА И ВИНОГРАДНОМ СОКЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ**
**ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="center">

**МУК 4.1.2213-07**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

<div align="center">

15 августа 2007 года

</div>


1. <a id="p100006"></a>Разработаны Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана.
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 1 от 29.03.2007).
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 25 мая 2007 г.

<div align="center">

4. <a id="p100009"></a>Введены впервые.

</div>


<a id="p100010"></a>Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации феназахина в ягодах винограда и виноградном соке в диапазоне 0,005 - 0,05 мг/кг.
<a id="p100011"></a>Феназахин - действующее вещество препарата ДЕМИТАН, КС (200 г/л), фирма производитель "Кромптон", Англия.
<a id="p100012"></a>4-[2-(4-трет-бутилфенил)этокси]хиназолин (IUPAC).
<a id="p100013"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100014"></a>    C  H  N O
     20 22 2
<a id="p100015"></a>    Мол. масса 306,4.
<a id="p100016"></a>    Белое  кристаллическое  вещество без запаха либо с легким органическим
запахом.  Температура плавления 77,5 - 80 °С. Давление паров при 25 °С: 3,4
     -3
х  10    мПа.  Растворимость в органических растворителях при 25 °С (г/куб.
дм):  хлороформ  -  более  500,  толуол  -  500,  ацетон  -  400,  метанол,
изопропанол - 50, ацетонитрил, гексан - 33. Растворимость в воде при 20 °С:
0,22  мг/куб. дм.  Коэффициент  распределения н-октанол - вода: K   log P =
                                                                 ow
5,51.  Стабильность в водных растворах при действии солнечного света (LD  )
                                                                        50
- 15 дней (рН 7,25 °С).
<a id="p100017"></a>    Краткая токсикологическая характеристика:
<a id="p100018"></a>    Острая   пероральная  токсичность  (LD  )  для  крыс - 134 - 138 мг/кг;
                                          50
острая  дермальная  токсичность  (LD  )  для  кроликов > 5000 мг/кг; острая
                                    50
ингаляционная токсичность (LK  ) для крыс - 1,9 мг/куб. дм.
                             50
<a id="p100019"></a>Область применения препарата
<a id="p100020"></a>Феназахин рекомендуется к применению в качестве акарицида против паутинных и галлообразующих клещей на яблоне, груше и винограде в личных подсобных хозяйствах.
<a id="p100021"></a>МДУ феназахина в винограде 0,01 мг/кг.


## 1. <a id="p100022"></a>Метрологические характеристики


<a id="p100023"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

<div align="right">

<a id="p100024"></a>Таблица 1

</div>


<a id="p100025"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ**


<table>
<colgroup><col width="15%"><col width="19%"><col width="22%"><col width="16%"><col width="14%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый объект</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, Р = 0,95</td><td>Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r</td><td>Предел повторяемости, r, %</td><td>Предел воспроизводимости, R, %</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Виноград (ягоды)</td><td>от 0,005 до 0,01 вкл.</td><td>100</td><td>6,3</td><td>17</td><td>21</td></tr>
<tr><td>более 0,01 до 0,05</td><td>50</td><td>6,0</td><td>17</td><td>20</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Виноградный сок</td><td>от 0,005 до 0,01 вкл.</td><td>100</td><td>5,9</td><td>16</td><td>19</td></tr>
<tr><td>более 0,01 до 0,05</td><td>50</td><td>5,8</td><td>16</td><td>19</td></tr>
</table>


<a id="p100031"></a>Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.

<a id="p100032"></a>Таблица 2


<table>
<colgroup><col width="15%"><col width="14%"><col width="20%"><col width="14%"><col width="18%"><col width="20%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый</td><td colspan="5">Метрологические параметры , Р = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>объект</td><td>Предел обнаружения, мг/кг</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>Среднее значение определения, %</td><td>Стандартное отклонение, S, %</td><td>Доверительный интервал среднего результата, +/-, %</td></tr>
<tr><td>Виноград (ягоды)</td><td>0,005</td><td>0,005 - 0,05</td><td>84,2</td><td>5,7</td><td>7,1</td></tr>
<tr><td>Виноградный сок</td><td>0,005</td><td>0,005 - 0,05</td><td>85,8</td><td>5,5</td><td>6,8</td></tr>
</table>



## 2. <a id="p100036"></a>Метод измерения


<a id="p100037"></a>Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции из анализируемой пробы ягод винограда и виноградного сока - ацетоном, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на колонке с флорисилом.
<a id="p100038"></a>Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки. Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы: 0,25 нг.
<a id="p100039"></a>В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии компонентов препаративной формы, включая манкоцеб.


## 3. <a id="p100040"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы



### <a id="p100041"></a>3.1. Средства измерений


<a id="p100042"></a>Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором     Номер в
с переменной длиной волны (фирмы Waters, США)            Государственном
                                                         реестре средств
                                                         измерений 15311-02
<a id="p100043"></a>Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104
<a id="p100044"></a>Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим ГОСТ 7328
пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой
погрешности +/- 0,038 г
<a id="p100045"></a>Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-500-2, 2-1000-2 [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100046"></a>Меры массы ГОСТ 7328
<a id="p100047"></a>Пипетки градуированные 2-го класса точности [ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91)
вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см
<a id="p100048"></a>Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
вместимостью 5 и 10 куб. см
<a id="p100049"></a>Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
50, 100, 250, 500 и 1000 куб. см
<a id="p100050"></a>Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


### <a id="p100051"></a>3.2. Реактивы


<a id="p100052"></a>Феназахин с содержанием действующего вещества 99,3%
(Дау Агросайнс, Швейцария)
<a id="p100053"></a>Алюминий оксид, активированный, нейтральный для
колоночной хроматографии, 50 - 200 мкм ("Акрос
Органикс", Бельгия)
<a id="p100054"></a>Ацетонитрил для хроматографии, хч                           ТУ-6-09-4326-76
<a id="p100055"></a>Вода бидистиллированная, деионизованная или
перегнанная над KMnO
                    4
<a id="p100056"></a>н-Гексан, хч                                                ТУ-6-09-3375
<a id="p100057"></a>Натрий сернокислый, безводный, хч [ГОСТ 4166](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
<a id="p100058"></a>Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233

<div align="center">

<a id="p100059"></a>Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), ч [ГОСТ 22300](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76)

</div>



### <a id="p100060"></a>3.3. Вспомогательные устройства, материалы


<a id="p100061"></a>Аквадистиллятор [ГОСТ 22340](https://bukva.ai/docs/gost-22340-89)
<a id="p100062"></a>Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с                        ТУ 64-1-2851-78
<a id="p100063"></a>Баня водяная
<a id="p100064"></a>Бумажные фильтры "красная лента", обеззоленные              ТУ 6-09-2678-77
<a id="p100065"></a>Воронки делительные вместимостью 250 куб. см ГОСТ 25336
<a id="p100066"></a>Воронки конусные диаметром 30 - 37 и 60 - 70 мм ГОСТ 25336
<a id="p100067"></a>Гомогенизатор
<a id="p100068"></a>Груша резиновая
<a id="p100069"></a>Колбы плоскодонные вместимостью 100, 150 и 250 куб. см [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
<a id="p100070"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10, 100 [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
и 250 куб. см
<a id="p100071"></a>Мембранные фильтры капроновые диаметром 47 мм
<a id="p100072"></a>Набор для фильтрации растворителей через мембрану
<a id="p100073"></a>Насос водоструйный вакуумный                                ГОСТ 10696
<a id="p100074"></a>Колонка хроматографическая стеклянная длиной 30 см,
внутренним диаметром 8 - 10 мм
<a id="p100075"></a>Ректификационная колонна с числом теоретических
тарелок не менее 50
<a id="p100076"></a>Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi,
<a id="p100077"></a>Швейцария
<a id="p100078"></a>Стаканы химические вместимостью 100 и 400 куб. см ГОСТ 25336
<a id="p100079"></a>Стекловата
<a id="p100080"></a>Стеклянные палочки
<a id="p100081"></a>Термометр контактный ГОСТ 9871
<a id="p100082"></a>Установка для перегонки растворителей
<a id="p100083"></a>Хроматографическая колонка стальная длиной 250 мм,
внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Symmetry(R)
С18, зернением 5 мкм
<a id="p100084"></a>Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа
вместимостью 50 - 100 куб. мм
<a id="p100085"></a>Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100086"></a>Требования безопасности


<a id="p100087"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.
<a id="p100088"></a>4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.


## 5. <a id="p100089"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100090"></a>К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
<a id="p100091"></a>К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.


## 6. <a id="p100092"></a>Условия измерений


<a id="p100093"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- <a id="p100094"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100095"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100096"></a>Подготовка к выполнению измерений


<a id="p100097"></a>Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление раствора хлористого натрия, градуировочных растворов, растворов внесения, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонке.


### <a id="p100098"></a>7.1. Очистка органических растворителей



##### <a id="p100099"></a>7.1.1 Ацетонитрил

<a id="p100100"></a>Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.
<a id="p100101"></a>7.1.2. н-Гексан
<a id="p100102"></a>Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

##### <a id="p100103"></a>7.1.3 Этилацетат

<a id="p100104"></a>Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.


### <a id="p100105"></a>7.2. Приготовление 5%-ного раствора хлористого натрия


<a id="p100106"></a>В мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают 25 г хлористого натрия, растворяют в 300 - 350 куб. см дистиллированной воды, доводя водой до метки, тщательно перемешивают.


### <a id="p100107"></a>7.3. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ


<a id="p100108"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 900 куб. см ацетонитрила, добавляют 100 куб. см бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.


### <a id="p100109"></a>7.4. Кондиционирование хроматографической колонки


<a id="p100110"></a>Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по [п. 7.3](#p100107)) при скорости подачи растворителя 1 куб. см/мин. не менее 2-х часов до установления стабильной базовой линии.


### <a id="p100111"></a>7.5. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения


<a id="p100112"></a>7.5.1. Исходный раствор феназахина в ацетонитриле для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г феназахина, растворяют в 50 - 70 куб. см ацетонитрила, доводят до метки этим же растворителем, тщательно перемешивают. Раствор хранится в морозильной камере в течение месяца.
<a id="p100113"></a>Рабочие градуировочные растворы феназахина готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.
<a id="p100114"></a>7.5.2. Раствор N 1 феназахина для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора феназахина с концентрацией 100 мкг/куб. см [(п. 7.5.1)](#p100112), разбавляют ацетонитрилом до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
<a id="p100115"></a>7.5.3. Рабочие растворы N 2 - 5 для градуировки и внесения (концентрация 0,1 - 1,0 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см [(п. 7.5.2)](#p100114), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по [п. 7.3](#p100107), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией феназахина 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно. Растворы хранятся в холодильнике в течение 10-ти дней.
<a id="p100116"></a>Эти растворы используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения феназахина из исследуемых образцов методом "внесено-найдено".


### <a id="p100117"></a>7.6. Установление градуированных характеристик


<a id="p100118"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ х сек.) от концентрации феназахина в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки N 2 - 5.
<a id="p100119"></a>В инжектор хроматографа вводят 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.4](#p100142). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.


### <a id="p100120"></a>7.7. Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта


<a id="p100121"></a>Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, помещают в колонку 5 г оксида алюминия (постукивая резиновой грушей о стенки колонки для уплотнения сорбента), пропускают через колонку 15 - 20 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1,5 см. Колонка готова к работе.


### <a id="p100122"></a>7.8. Проверка хроматографического поведения феназахина на колонке с оксидом алюминия


<a id="p100123"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,5 куб. см раствора N 1 для градуировки с концентрацией феназахина 10 мкг/куб. см [(п. 7.5.2)](#p100114), растворитель упаривают досуха. Остаток растворяют в 3 куб. см гексана и наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.7](#p100120). Колбу обмывают трижды порциями гексана по 3 куб. см, которые также наносят на колонку. Промывают колонку последовательно порциями по 25 куб. см вначале гексаном, затем смесью гексан - этилацетат (9:1, по объему), элюат отбрасывают.
<a id="p100124"></a>Далее колонку промывают 50 куб. см смеси гексан - этилацетат (7:3, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 2 куб. см подвижной фазы, подготовленной по [п. 7.3](#p100107), анализируют по [п. 9.4](#p100142).
<a id="p100125"></a>Фракции, содержащие феназахин, объединяют и вновь анализируют.
<a id="p100126"></a>Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.
<a id="p100127"></a>Примечание: Проверку хроматографического поведения феназахина следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.


## 8. <a id="p100128"></a>Отбор проб


<a id="p100129"></a>Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными [ГОСТами 25896-83](https://bukva.ai/docs/gost-25896-83) "Виноград свежий столовый, ТУ", 28472-90 "Виноград свежий ручной уборки для консервирования. Требования при заготовках и поставках", [26313-84](https://bukva.ai/docs/standart-gost-26313-84) "Продукты переработки плодов и овощей", "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
<a id="p100130"></a>Отобранные пробы ягод винограда и виноградного сока хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 10-ти дней. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °С.


## 9. <a id="p100131"></a>Выполнение определения



### <a id="p100132"></a>9.1. Экстракция



##### <a id="p100133"></a>9.1.1 Виноград

<a id="p100134"></a>Образец измельченных ягод винограда массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, вносят 75 куб. см ацетонитрила, гомогенизируют в течение 3-х минут, затем помещают на встряхиватель на 30 мин. Экстракт фильтруют через складчатый бумажный фильтр, сливая способом декантирования в колбу для упаривания вместимостью 250 куб. см. Экстракцию пробы повторяют новой порцией ацетонитрила объемом 50 куб. см, встряхивая 20 мин. Экстракт также фильтруют в колбу для упаривания, концентрируют на ротационном вакуумном испарителе (при температура 40 °С) до водного остатка (около 10 куб. см) и подвергают очистке по [п. 9.2](#p100137).

##### <a id="p100135"></a>9.1.2 Виноградный сок

<a id="p100136"></a>К образцу сока массой 20 г в конической колбе (с пришлифованной пробкой) вместимостью 250 куб. см добавляют 75 куб. см ацетонитрила, интенсивно встряхивают в течение 5 мин., помещают в холодильник (4 °С) на 1 час. Экстракт фильтруют через складчатый бумажный фильтр, сливая способом декантирования в колбу для упаривания вместимостью 250 куб. см. Экстракцию пробы повторяют новой порцией ацетонитрила объемом 50 куб. см, встряхивая 2 мин. и выдерживая в холодильнике (4 °С) 30 мин. Экстракт также фильтруют в колбу для упаривания, концентрируют на ротационном вакуумном испарителе (при температура 35 - 40 °С) до водного остатка (около 10 куб. см) и подвергают очистке по [п. 9.2](#p100137).


### <a id="p100137"></a>9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей


<a id="p100138"></a>Водный остаток, полученный по [п. 9.1.1](#p100133) или [9.1.2](#p100135), переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см. Колбу ополаскивают 75 куб. см 5%-ного раствора хлористого натрия, который также переносят в делительную воронку. Вносят в делительную воронку 30 куб. см гексана, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруют через безводный сульфат натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 20 куб. см гексана. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают до объема 3 - 5 см и подвергают дополнительной очистке на колонке по [п. 9.3](#p100139).


### <a id="p100139"></a>9.3. Очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия


<a id="p100140"></a>Остаток в круглодонной колбе, полученный после упаривания [(п. 9.2)](#p100137), наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.6](#p100117). Колбу обмывают трижды порциями гексана по 3 куб. см, которые также наносят на колонку. Промывают колонку последовательно порциями по 25 куб. см вначале гексаном, затем смесью гексан - этилацетат в соотношении 9:1 (по объему), элюат отбрасывают.
<a id="p100141"></a>Феназахин элюируют с колонки 30 куб. см смеси гексан - этилацетат (7:3, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек., собирая элюат в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °С, остаток в колбе растворяют в 1 куб. см подвижной фазы, анализируют содержание феназахина по [п. 9.4](#p100142).


### <a id="p100142"></a>9.4. Условия хроматографирования


<a id="p100143"></a>Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором (фирмы Waters, США)
<a id="p100144"></a>Хроматографическая колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Symmetry С18, зернением 5 мкм
<a id="p100145"></a>Температура колонки: комнатная
<a id="p100146"></a>Скорость потока элюента: 1 куб. см/мин.
<a id="p100147"></a>Рабочая длина волны: 263 нм
<a id="p100148"></a>Объем вводимой пробы: 20 куб. мм
<a id="p100149"></a>Чувствительность: 0,003 ед. абсорбции на шкалу
<a id="p100150"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил - вода (9:1, по объему)
<a id="p100151"></a>Ориентировочное время выхода феназахина: 7,8 - 8,0 мин.
<a id="p100152"></a>Линейный диапазон детектирования 2 - 20 нг.
<a id="p100153"></a>Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой, приготовленной по [п. 7.3](#p100107), не более чем в 50 раз.


## 10. <a id="p100154"></a>Обработка результатов анализа


<a id="p100155"></a>Содержание феназахина в пробе (Х, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                                    С х V
<a id="p100156"></a>                                Х = -----,
                                      m

<a id="p100157"></a>где:
<a id="p100158"></a>С - концентрация феназахина, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;
<a id="p100159"></a>V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
<a id="p100160"></a>m - масса анализируемого образца, г.


## 11. <a id="p100161"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100162"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

                            2 х |Х  - Х | х 100
                                  1    2
<a id="p100163"></a>                            ------------------- <= r,                   (1)
                                 (Х  + Х )
                                   1    2

    где:
    Х , Х  - результаты параллельных определений, мг/кг;
     1   2
 r - значение предела повторяемости [(табл. 1)](#p100025), при этом r = 2,8 сигма .
                                                                        r
<a id="p100164"></a> При невыполнении [условия (1)](#p100163) выясняют причины превышения предела
повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 12. <a id="p100165"></a>Оформление результатов


<a id="p100166"></a>Результат анализа представляют в виде:

              _
<a id="p100167"></a>             (Х +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности Р = 0,95,

    где:
    _
    Х   -   среднее   арифметическое  результатов  определений,  признанных
приемлемыми, мг/кг;
    ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

<a id="p100168"></a>                         ДЕЛЬТА = дельта х Х / 100

    где  дельта  -  граница  относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100025)), %.
<a id="p100169"></a>Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100170"></a>"содержание феназахина в пробе менее 0,005 мг/кг"<*>.

<a id="p100171"></a>

---

<div align="center">

<a id="p100172"></a><*> 0,005мг/кг - предел обнаружения.

</div>



## 13. <a id="p100173"></a>Контроль качества результатов измерений


<a id="p100174"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100175"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100176"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
<a id="p100177"></a>    Величина добавки С  должна удовлетворять условию:
                      д

<a id="p100178"></a>                        С  = ДЕЛЬТА  _ + ДЕЛЬТА  _ ,
                         д         л,Х         л,Х'

    где:
    +/- ДЕЛЬТА  _   (+/- ДЕЛЬТА _ )   -    характеристика       погрешности
              л,Х             л,Х'
(абсолютная  погрешность) результатов  анализа,  соответствующая содержанию
компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания  компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

<a id="p100179"></a>                             ДЕЛЬТА  = +/- 0,84 х ДЕЛЬТА,
                                   л

    где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

<a id="p100180"></a>                           ДЕЛЬТА = дельта х Х / 100

    где дельта - граница  относительной  погрешности  методики  (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100025)), %.
<a id="p100181"></a>    Контрольный параметр процедуры К  рассчитывают по формуле:
                                    к

                                   _    _
<a id="p100182"></a>                              К  = Х' - Х - С ,
                               к             д

        _   _
    где Х', Х , С  - среднее    арифметическое   результатов   параллельных
             д
определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100161)) содержания компонента в
образце    с   добавкой,    испытуемом   образце,   концентрация    добавки
соответственно, мг/кг.
<a id="p100183"></a>    Норматив контроля К рассчитывают но формуле:

                             _____________________
                            /      2            2
<a id="p100184"></a>                      К = \/ ДЕЛЬТА  _  + ДЕЛЬТА  _.
                                   л,Х'         л,Х

<a id="p100185"></a>    Проводят  сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
                                                            к
контроля (К).
<a id="p100186"></a>    Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

<a id="p100187"></a>                              |К | <= К,                                (2)
                                к

процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100188"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100187) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

#### <a id="p100189"></a>13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

<a id="p100190"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

                         2 х |Х  - Х | х 100
                               1    2
<a id="p100191"></a>                         ------------------- <= R,                      (3)
                               (Х  + Х )
                                 1    2

    где:
    Х , Х  - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
     1   2
    R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,

<div align="center">

[таблица 1](#p100025)), %.

</div>



## 14. <a id="p100192"></a>Разработчики


<a id="p100193"></a>ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзор.



<a id="p100194"></a>

---