---
title: "\"МУК 4.1.2116-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовой концентрации стирола в пробах крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.2116-06"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2116-06"
---
## "МУК 4.1.2116-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовой концентрации стирола в пробах крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
# "МУК 4.1.2116-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовой концентрации стирола в пробах крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 09.08.2006)
> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 сентября 2006 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
9 августа 2006 года
#### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
**ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ СТИРОЛА В ПРОБАХ КРОВИ**
**МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**
**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.2116-06**
1 сентября 2006 года
1. Область применения
Методические указания по определению концентрации стирола в крови предназначены для использования Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, работающими в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды.
Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием стирола в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды.
Методические указания разработаны в соответствии с требованиями [ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) "ГСОЕИ. Методики выполнения измерений", ГОСТ Р 1.5-92 "ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов". Методика выполнения измерений обеспечивает определение стирола в диапазоне концентраций 0,1 - 5,0 мкг/куб. см с погрешностью, не превышающей 23%, при доверительной вероятности Р = 0,95.
C H CHCH Мол. масса 103,7.
6 5 2
Стирол (винилбензол, фенилэтилен) - бесцветная жидкость с резким запахом. Температура кипения: 145 °С, плотность 0,9059. Растворяется в большинстве органических растворителей, растворимость в воде 0,032% по объему (20 °С) [[1]](#p100139). Стирол оказывает общетоксическое, сенсибилизирующее, эмбриотропное, раздражающее действия, отрицательно влияет на ЦНС, обладает кумулятивным эффектом [[2]](#p100140).
2. Сущность метода
Методика основана на извлечении стирола из крови экстракцией гексаном и анализе экстракта на жидкостном хроматографе.
Измерение концентрации стирола выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием УФ-детектора.
Нижний предел измерения - 0,001 мкг.
Определению не мешают фенол, бензол, толуол, этилбензол, ксилолы, карбоновые кислоты.
Длительность анализа, включая пробоподготовку, - 20 мин.
3.
Средства измерений, вспомогательные устройства,
**РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ**
**ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ КОНЦЕНТРАЦИИ СТИРОЛА В КРОВИ**
| Номер раствора | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| Объем раствора А, куб. мм (С = 0,01 мг/куб. см) | 20,0 | 40,0 | 100,0 | - | - | - |
| Объем раствора Б, куб. мм (С = 0,10 мг/куб. см) | - | - | - | 20,0 | 50,0 | 100,0 |
| Массовая концентрация стирола в крови, мг/куб. дм | 0,1 | 0,2 | 0,5 | 1,0 | 2,5 | 5,0 |
Режим работы хроматографа:
колонка стеклянная длиной 150 мм и внутренним диаметром 3,3 мм,
заполненная сорбентом Separon SGX С ;
18
подвижная фаза - ацетонитрил/вода в соотношении 60:40;
скорость подвижной фазы - 0,6 куб. см/мин.;
длина волны УФ-детектора - 254 нм;
время выхода стирола в заданных условиях - 6 мин.
Градуировочную характеристику устанавливают с помощью градуировочного
коэффициента, который рассчитывают по формуле:
n
SUM C / S
i=1 i i
K = -----------,
n
где:
C - заданная концентрация стирола в градуировочной смеси, мг куб./дм;
i
S - среднее значение трех измерений площади пика, кв. мм или единицы
i
оптической плотности (е.о.п.);
n - количество градуировочных смесей (n = 6).
Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии реактивов.
#### 7.5 Отбор проб
Отбор проб венозной крови в объеме 4 куб. см производят в тщательно вымытую стеклянную пробирку с притертой пробкой, в которую предварительно вносят 0,1 куб. см раствора гепарина. Срок хранения проб в холодильнике - не более 2-х суток.
8. Выполнение измерений
Проводят два параллельных измерения образца крови: 2 куб. см крови помещают в делительную воронку, в которую добавляют 40 куб. см дистиллированной воды, 0,2 куб. см 10%-го раствора щелочи NaOH и 2 куб. см гексана. Перемешивают содержимое воронки экстрактором со скоростью 2500 об./мин. в течение 45 с. После расслоения жидкостей переносят гексановый экстракт в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют в течение 5 мин. при скорости 1500 об./мин. Аликвотную часть экстракта в количестве 10 куб. мм вводят в колонку хроматографа и анализируют в рабочем режиме хроматографа, указанном в [п. 7.4.4](#p100081).
Идентификация хроматографического пика стирола проводится путем сопоставления времен удерживания хроматографических пиков в стандартном растворе стирола и в анализируемой пробе.
9. Вычисление результатов измерения
Концентрацию стирола в крови (мг/куб. дм) вычисляют по формуле:
Х = S х K,
i
где:
Х - концентрация стирола в анализируемой пробе, мг/куб. дм;
S - площадь пика стирола на хроматограмме, кв. мм или е.о.п.;
i
K - градуировочный коэффициент.
За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух
параллельных определений Х , Х , расхождение между которыми не должно
max min
превышать значения предела повторяемости r [(табл. 2)](#p100112).
n
_
Результат измерения представляют в виде (Х +/- ДЕЛЬТА) мг/куб. дм,
где:
Х + Х
_ _ max min
Х - средний результат анализа, мг/куб. дм, Х = -----------;
2
ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мг/куб. дм, при Р = 0,95, равная:
_
сигма х Х
ДЕЛЬТА = ---------,
100
где сигма - относительное значение характеристики погрешности, %.
10. Внутренний контроль качества результатов измерений
Внутренний контроль качества (ВКК) результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость), точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве результатов измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом [МИ 2335-2003](https://bukva.ai/docs/mi-2335-2003) "ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".
Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с нормативами, не превышающими значений, приведенных в табл. 2 и [3](#p100116).
Таблица 2
**ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ**
**ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р = 0,95**
| Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мг/куб. дм | Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r , % n | Предел внутрилабораторной воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории, но в разных условиях), R , % _ Хl |
| --- | --- | --- |
| Стирол, от 0,1 до 5,0 вкл. | 26,5 | 27,6 |
Таблица 3
**ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТОЧНОСТИ,**
**ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ**
| Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мг/куб. дм (мкг/куб. см) | Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), сигма , % R | Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), сигма , % R | Показатель точности (границы относительной погрешности при вероятности Р = 0,95), +/- дельта, % |
| --- | --- | --- | --- |
| Стирол, от 0,1 до 5,0 вкл. | 10,0 | 13,5 | 23,0 |
#### 10.1 Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Определяют содержание исследуемого соединения в градуировочных растворах, которые соответствует началу, середине и концу диапазона измерений. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданным и измеренным значением концентраций не превышает 5%.
#### 10.2 Контроль повторяемости
Относительное расхождение между результатами двух измерений,
выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении
образцов одной и той же рабочей пробы с использованием одних и тех же
средств измерений и реактивов в течение возможно минимального интервала
времени, не должно превышать значения предела повторяемости r [(табл. 2)](#p100112).
n
Повторяемость результатов параллельных определений признают
удовлетворительной, если выполняется условие:
r Х + Х
n max min
Х - Х <= --- х -----------,
max min 100 2
где:
r - значение предела повторяемости, %;
n
Х , Х - максимальный и минимальный результаты двух параллельных
max min
измерений содержания i-го вещества, мг/куб. дм.
Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
#### 10.3 Контроль воспроизводимости
Внутренний контроль качества воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и т.д.). Воспроизводимость результатов контрольных измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:
R _ _
_ Х + Х
_ _ Хl 1 2
|Х - Х | <= --- х -------,
1 2 100 2
где:
_
Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных
1
измерений, мг/куб. дм;
_
Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных
2
измерений, полученный в других условиях, мг/куб. дм;
R
_ - значение предела внутрилабораторной воспроизводимости, % (табл.
Хl
[2](#p100112)).
_ _
Расхождение между результатами измерений Х и Х , полученных в разных
1 2
условиях, не должно превышать значений показателя воспроизводимости R
_
Хl
при доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в [табл. 2](#p100112).
Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
#### 10.4 Контроль точности
Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении
результата контрольной процедуры, равного разности между результатом
контрольного измерения содержания определяемого компонента в пробе, с
_ _
известной добавкой (Х'), в рабочей пробе без добавки (Х) и величиной
добавки С (добавка должна составлять не менее 40% от содержания
д
анализируемого компонента в рабочей пробе) с нормативом точности К.
Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется
условие:
_ _
|Х' - Х - С | = K ,
д k
где:
_
Х' - средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных
измерений, мг/куб. дм;
_
Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, мг/куб. дм;
С - величина добавки к пробе, мг/куб. дм.
д
_____________________________
/дельта _ 2 дельта _ 2
K = 0,84 х \/(------ х Х) + (------ х Х') .
100 100
Качество контрольной процедуры признают удовлетворительным при
выполнении условия: K <= K.
k
При превышении норматива контроля точности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.
Периодичность контроля воспроизводимости и точности регламентируется в руководстве по качеству лаборатории.
Литература
1. Химическая энциклопедия/Под. ред. Н.С. Зефирова. М.: "Большая российская энциклопедия", 1995. Т. 4.
2. Лазарев Н.В. Вредные вещества в промышленности. Органические вещества: Справочник. М.: "Химия", 1976. Т. 1. С. 113 - 117.
Методические указания разработаны Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С. Уланова, Т.Д. Карнажицкая).
---