--- title: "\"МУК 4.1.2107-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовой концентрации фенола в биосредах (моча) газохроматографическим методом. Методические указания\"" number: "МУК 4.1.2107-06" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2107-06" --- ## "МУК 4.1.2107-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовой концентрации фенола в биосредах (моча) газохроматографическим методом. Методические указания" # "МУК 4.1.2107-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовой концентрации фенола в биосредах (моча) газохроматографическим методом. Методические указания" (утв. Роспотребнадзором 09.08.2006) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 1 сентября 2006 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
9 августа 2006 года #### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ ФЕНОЛА** **В БИОСРЕДАХ (МОЧА) ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.2107-06**
Дата введения
1 сентября 2006 года
1. Область применения Методические указания по определению концентраций химических веществ в биологических средах предназначены для использования Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, работающими в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды. Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием органических соединений в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды. Методические указания разработаны в соответствии с требованиями [ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) "ГСОЕИ. Методики выполнения измерений", ГОСТ Р 1.5-92 "ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов". Методика анализа обеспечивает выполнение измерений массовой концентрации фенола в моче в диапазоне концентраций: от 0,04 до 0,4 мкг/куб. см с погрешностью 10,0% при доверительной вероятности 0,95. Фенол Молекулярная масса 128,56. C H OH 6 5 Фенол - бесцветные кристаллы с характерным запахом, Т - 181,75 °С. кип. Растворим в воде и органических растворителях. Является сильным нейротоксином, поражает печень, почки, проникает через кожу [[1]](#p100164). 2. Сущность метода Методика основана на предварительном переводе фенола в фенилацетат с помощью уксусного ангидрида в щелочной среде, концентрировании продукта дериватизации из биологического материала (моча) экстракцией метиленхлоридом и последующем газохроматографическом анализе экстракта. Необходимость превращения фенола в производные вызвана тем, что прямой газохроматографический анализ фенолов, особенно следовых количеств, осложнен высокой полярностью фенольных соединений и низким давлением их паров. Улучшить газохроматографические свойства фенола можно путем превращения их в менее полярные соединения. Выполнение измерений массовой концентрации фенола проводят методом газовой хроматографии с использованием пламенно-ионизационного детектора. Определению не мешают о-, м-, п-крезолы, ксиленолы, хлорфенолы в количествах, не превышающих верхнюю границу измеряемых концентраций фенола. Длительность анализа, включая экстракцию пробы, - 20 мин.
3. Средства измерений, вспомогательные
устройства, материалы и реактивы При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными или лучшими метрологическими и техническими характеристиками. #### 3.1 Средства измерений Хроматограф газовый с пламенно-ионизационным детектором Секундомер "Агат" ТУ 25-1894.003-90 Микрошприцы МШ-10 ТУ 2.833.106-00 Весы аналитические ВЛР-200 ГОСТ 24104-01 Разновесы Г -210 ГОСТ 7328-01 2 Линейка измерительная ГОСТ 427-75 Лупа измерительная ГОСТ 25706-83 Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 и 1000 куб. см [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Пипетки вместимостью 5, 10 куб. см [ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91). #### 3.2 Вспомогательные устройства Хроматографическая колонка стеклянная длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм Бидистиллятор стеклянный БС ТУ 25-11.1592-81 Редуктор кислородный ТУ 26-05-236-73 Центрифуга СМ-4, 3000 об./мин. Бюксы стеклянные ГОСТ 25336-82
Воронка делительная ГОСТ 23932-90.
#### 3.3 Материалы Гелий в баллоне ТУ 51-940-80 Водород технический [ГОСТ 3022-80](https://bukva.ai/docs/usloviya-gost-3022-80) Воздух в баллоне ГОСТ 17433-80. #### 3.4 Реактивы 3% OV-1 на хроматоне N-супер фракции 0,16 - 0,20 мм - неподвижная фаза для заполнения хроматографической колонки Фенол, чда ТУ 6-09-5303-86 Нафталин, хч ТУ 6-09-2200-77 Натрия карбонат, чда ГОСТ 83-79 Уксусный ангидрид, ч МРТУ 6-09-5708-68 Ацетон, осч ТУ 2633-004-11291058-94 Метиленхлорид, хч ТУ 6-09-2662-77 Серная кислота, осч [ГОСТ 14262-78](https://bukva.ai/docs/standart-gost-14262-78) Калия дихромат, чда ГОСТ 4220-75. #### 3.5 Растворы Раствор калия дихромата, 3%-й. 4. Требования к безопасности 4.1. При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76. 4.2. При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях" (утверждены МЗ СССР 20.12.82) и "[Правила](https://bukva.ai/docs/pravila-ustroystva-i-bezopasnoy-ekspluatatsii) устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением" (утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87). 4.3. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88. 4.4. При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора. 5. Требования к квалификации оператора К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы на газовом хроматографе и в химической лаборатории, прошедшие соответствующий инструктаж, освоившие метод в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности. 6. Условия измерений #### 6.1 При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия: - температура воздуха (20 +/- 5) °С; - атмосферное давление 630 - 800 мм рт. ст.; - влажность воздуха не более 80% при температуре 25 °С. 6.2. Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору. 7. Подготовка к выполнению измерений Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, подготовка хроматографической колонки, приготовление аттестованных смесей, установление градуировочной характеристики. #### 7.1 Подготовка посуды Используемую посуду замочить на 1 ч в свежеприготовленном 3%-м растворе дихромата калия в серной кислоте (3 г дихромата калия на 100 куб. см концентрированной серной кислоты), отмыть в проточной водопроводной воде, ополоснуть бидистиллированной водой и просушить при температуре 120 °С. #### 7.2 Подготовка хроматографической колонки Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой, устанавливают в хроматограф и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (гелий) с расходом 30 куб. см/мин. при температуре 250 °С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе. #### 7.3 Приготовление аттестованных смесей Для построения градуировочного графика собирают мочу, не содержащую исследуемого компонента, и готовят серию рабочих аттестованных растворов. Исходный аттестованный раствор фенола. В мерную колбу объемом 25 куб. см, содержащую ацетон в объеме 15 куб. см, вводят 10 мг фенола и объем доводят до метки ацетоном. Весовое содержание определяемого вещества в исходном аттестованном растворе составляет 400 мкг/куб. см. Срок хранения - 5 ч. Исходный аттестованный раствор нафталина. В мерную колбу объемом 25 куб. см, содержащую ацетон в объеме 15 куб. см, вводят 10 мг нафталина и объем доводят до метки ацетоном. Весовое содержание определяемого вещества в исходном аттестованном растворе составляет 400 мкг/куб. см. Срок хранения - 3 дня. #### 7.4 Определение градуировочных коэффициентов фенола по отношению к внутреннему стандарту Рабочий аттестованный раствор. В мерную колбу объемом 50 куб. см, содержащую 30 куб. см мочи, вносят объемы исходных аттестованных растворов фенола и нафталина согласно табл. 1. Содержимое колбы доводят до метки мочой. Таблица 1
**РАБОЧИЕ АТТЕСТОВАННЫЕ РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ**
**ГРАДУИРОВОЧНЫХ КОЭФФИЦИЕНТОВ ФЕНОЛА ПО ОТНОШЕНИЮ**
**К ВНУТРЕННЕМУ СТАНДАРТУ** | Номер смеси | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Фенол, объем исходного аттестованного раствора (400 мкг/куб. см), куб. см | 0,005 | 0,01 | 0,02 | 0,025 | 0,04 | 0,05 | | Концентрация фенола, мкг/куб. см | 0,04 | 0,08 | 0,16 | 0,20 | 0,32 | 0,40 | | Нафталин, объем исходного аттестованного раствора (400 мкг/куб. см), куб. см | 0,10 | 0,09 | 0,07 | 0,05 | 0,03 | 0,02 | | Концентрация нафталина, мкг/куб. см | 0,80 | 0,72 | 0,56 | 0,40 | 0,24 | 0,16 | Для определения градуировочных коэффициентов в делительную воронку объемом 250 куб. см вносят 50 куб. см рабочего аттестованного раствора и добавляют 2 г кристаллического карбоната натрия. Плавным покачиванием перемешивают содержимое воронки, затем вводят в воронку 0,3 куб. см уксусного ангидрида и встряхивают в течение 0,5 мин. для перевода фенола в уксуснокислый эфир. Продукт ацилирования дважды экстрагируют метиленхлоридом порциями по 2,5 куб. см в течение 2 мин. Экстракты центрифугируют в течение 10 мин. После удаления белка объединенные органические вытяжки помещают в бюксу и упаривают под ИК-лампой до 1 куб. см. В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 10 мм каждого экстракта рабочего аттестованного раствора и анализируют в условиях: температура термостата колонок - 110 °С; температура испарителя - 170 °С; температура детектора - 170 °С; расход газа-носителя (гелий) - 30 куб. см/мин.; скорость диаграммной ленты - 240 мм/ч; время удерживания ацетата фенола - 3 мин. 20 с; нафталина - 6 мин. На полученной хроматограмме определяют высоты или площади пиков определяемого компонента и внутреннего стандарта и по средним результатам из 6 серий рассчитывают градуировочные коэффициенты. Значение градуировочного коэффициента К вычисляют по формуле: i/ст S х Q ст i К = --------, i/ст S х Q i ст где: S , S - площади пиков исследуемого компонента (фенилацетата) и i ст внутреннего стандарта (нафталина), кв. мм; Q , Q - количество исследуемого компонента (фенилацетата) и i ст внутреннего стандарта (нафталина), мкг. По результатам 7 измерений определяется среднее значение градуировочного коэффициента К и строится градуировочный график в i/ст координатах градуировочный коэффициент - отношение площадей пиков S / S . i ст Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии реактивов. #### 7.5 Отбор проб Отбор проб мочи в объеме не менее 200 куб. см производят в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы. 8. Выполнение измерений Пробу мочи в объеме 50 куб. см помещают в делительную воронку объемом 250 куб. см, добавляют внутренний стандарт - нафталин 0,1 куб. см (исходный аттестованный раствор 400 мкг/куб. см) и 2 г кристаллического карбоната натрия. Плавным покачиванием перемешивают содержимое воронки, затем вводят в воронку 0,3 куб. см уксусного ангидрида и встряхивают в течение 0,5 мин. для перевода фенола в уксуснокислый эфир. Продукт ацилирования дважды экстрагируют метиленхлоридом порциями по 2,5 куб. см в течение 2 мин. Экстракты объединяют и центрифугируют в течение 10 мин. После удаления белка объединенные органические вытяжки помещают в бюксу и упаривают под ИК-лампой до 1 куб. см. Полученный экстракт хроматографируют и проводят количественное определение анализируемого соединения в подготовленной пробе методом внутреннего стандарта. Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб мочи. Условия выполнения измерений аналогичны условиям при установлении градуировочной характеристики ([п. 7.4](#p100074)). 9. Вычисление результатов измерений На хроматограмме рассчитывают площади пиков фенилацетата и внутреннего стандарта (нафталина). За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух параллельных измерений Х , Х , расхождение между которыми не должно max min превышать значения предела повторяемости r ([табл. 3](#p100131)). n Расчет концентрации фенола (мкг/куб. см) в биопробе вычисляют по формуле: S х m х К i ст i/ст Х = ----------------, S х V ст где: X - концентрация фенола в биопробе, мкг/куб. см; S , S - площади пиков фенилацетата и нафталина, кв. мм; i ст К - градуировочный коэффициент (устанавливается по градуировочному i/ст графику - К - S / S ); i/ст i ст m - навеска нафталина, мкг; ст V - объем пробы, куб. см. Результат измерения представляют в виде: _ (Х +/- ДЕЛЬТА), мкг/куб. см, где: Х + Х _ _ max min Х - средний результат анализа, мкг/куб. см, Х = -----------, 2 при условии: r Х + Х n max min Х - Х <= --- х -----------, max min 100 2 где: Х - максимальный результат из 2-х параллельных измерений; max Х - минимальный результат из 2-х параллельных измерений; min r - значение предела повторяемости, %; n ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. см, при Р = 0,95, равная: _ дельта х Х ДЕЛЬТА = ----------, 100 где: дельта - относительное значение характеристики погрешности, % (табл. [2](#p100127)). 10. Внутренний контроль качества результатов измерений Внутренний контроль качества (ВКК) результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость), точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом [МИ 2335-2003](https://bukva.ai/docs/mi-2335-2003) "ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа". Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в табл. 2 и [3](#p100131). Таблица 2
**ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ**
**ТОЧНОСТИ, ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ** | Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мкг/куб. см | Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), дельта , % r | Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), дельта , % R_ Хl | Показатель точности (границы относительной погрешности при вероятности Р = 0,95), +/- дельта, % | | --- | --- | --- | --- | | Фенол, от 0,04 до 0,40 вкл. | 6,9 | 2,9 | 10,0 | Таблица 3
**ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ**
**ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р = 0,95** | Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мкг/куб. см | Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r , % n | Предел внутрилабораторной воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории, но в разных условиях), R_ , % Хl | | --- | --- | --- | | Фенол, от 0,04 до 0,40 вкл. | 10,3 | 8,0 | #### 10.1 Контроль стабильности градуировочной характеристики Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят раз в квартал в анализируемой серии измерений. Определяют содержания исследуемых соединений в градуировочных растворах, которые соответствуют началу, середине и концу градуировочного интервала. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданным и измеренным значением концентраций не превышает 5%. #### 10.2 Контроль повторяемости Относительное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении образцов одной и той же рабочей пробы с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов в течение возможно минимального интервала времени, не должно превышать значения предела повторяемости r , ([табл. 3](#p100131)). n Повторяемость результатов параллельных измерений признают удовлетворительной, если: r Х + Х n max min Х - Х <= --- х -----------, max min 100 2 где: r - значение предела повторяемости, %; n Х - максимальный результат из 2-х параллельных измерений; max Х - минимальный результат из 2-х параллельных измерений. min Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их. #### 10.3 Контроль воспроизводимости Внутренний контроль воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и т.д.). Воспроизводимость результатов контрольных измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие: _ _ R_ Х + Х _ _ Хl 1 2 |Х - Х | <= --- х -------, 1 2 100 2 где: _ Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных 1 измерений, мкг/куб. см; _ Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных 2 измерений, полученный в других условиях, мкг/куб. см; R_ - значение предела внутрилабораторной воспроизводимости, % (табл. Хl [3](#p100131)). _ _ Расхождение между результатами измерений Х , и Х , полученными в разных 1 2 условиях, не должно превышать значений показателя воспроизводимости R_ , Хl при доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в [табл. 3](#p100131). Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их. #### 10.4 Контроль точности Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении результата контрольной процедуры, равного разности между результатом _1 контрольного измерения содержания фенола в пробе с известной добавкой (Х ) _ в рабочей пробе без добавки (Х) и величиной добавки С (добавка должна д составлять не менее 40% от содержания фенола в рабочей пробе) с нормативом точности К. Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие: _1 _ |Х - Х - С | = К , д k где: _1 Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных измерений, мкг/куб. см; _ Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, мкг/куб. см; С - величина добавки к пробе, мкг/куб. см. д _____________________________ /дельта _ 2 дельта _1 2 К = 0,84 х \/(------ х Х) + (------ х Х ) . 100 100 Качество контрольной процедуры признают удовлетворительной при выполнении условия: К <= К. k При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, устраняют их и процедуру контроля повторяют. Периодичность контроля исполнения процедуры ВКК регламентируют в руководстве по качеству лаборатории. Литература 1. Бандман А.Л., Войтенко Г.А., Волкова Н.В. и др. Вредные химические вещества. Углеводороды. Галогенпроизводные углеводородов: Справ. изд./Под ред. В.А. Филова и др. Л.: "Химия", 1990. Методические указания разработаны Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С. Уланова, Т.В. Нурисламова, Н.А. Попова). ---