---
title: "\"МУК 4.1.2084-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств тебуконазола в семенах, масле и зеленой массе рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии\""
number: "МУК 4.1.2084-06"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2084-06"
---

## "МУК 4.1.2084-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств тебуконазола в семенах, масле и зеленой массе рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии"

# "МУК 4.1.2084-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств тебуконазола в семенах, масле и зеленой массе рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии"

(утв. Роспотребнадзором 30.07.2006)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 сентября 2006 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**<br>
30 июля 2006 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТЕБУКОНАЗОЛА**
**В СЕМЕНАХ, МАСЛЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ РАПСА МЕТОДОМ**
**КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<div align="center">

<a id="p100005"></a>**МУК 4.1.2084-06**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

<div align="center">

1 сентября 2006 года

</div>


1. <a id="p100006"></a>Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

<div align="center">

4. <a id="p100009"></a>Введены впервые.

</div>


<a id="p100010"></a>Настоящие Методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации тебуконазола в семенах, масле и зеленой массе рапса в диапазоне 0,1 - 1,0 мг/кг.
<a id="p100011"></a>Тебуконазол - действующее вещество фунгицида Фоликур, КЭ (250 г/л), фирма-производитель Байер Кроп Сайенс (Германия).
<a id="p100012"></a>(RS)-1-п-хлорфенил-4,4-диметил-3-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)пентан-3-ол (ИЮПАК)
<a id="p100013"></a>(+/-)-альфа-[2-(4-хлорфенил)этил]-альфа-(1,1-диметилэтил)-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол (С.А.).
<a id="p100014"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100015"></a>    C  H  ClN O.
     16 22   3
<a id="p100016"></a>    Мол. масса: 307,8.
<a id="p100017"></a>    Бесцветное  кристаллическое  вещество.  Температура  плавления: 105 °С.
                                         -3
Давление  паров  при  20  °С:  1,7  х  10    мПа. Коэффициент распределения
н-октанол/вода:  K    log  P  =  3,7.  Растворимость (г/куб. дм) при 20 °С:
                  ow
дихлорметан - более 200,  изопропанол,  толуол - 50 - 100,  гексан -  менее
0,1, вода - 0,036.
<a id="p100018"></a>Вещество устойчиво к гидролизу при pH 5 - 9 и фотолизу.
<a id="p100019"></a>Тебуконазол медленно разрушается в почве и слабо передвигается по почвенному профилю.
<a id="p100020"></a>Краткая токсикологическая характеристика
<a id="p100021"></a>    Острая  пероральная  токсичность  (LD  ) для крыс и мышей - 3000 мг/кг;
                                         50
острая  дермальная  токсичность  (LD  ) для крыс - более 5000 мг/кг; острая
                                    50
ингаляционная  токсичность  (LC  )  для  крыс  -  5100  мг/куб.  м воздуха.
                               50
Тебуконазол вызывает слабое раздражение слизистой оболочки глаз у кроликов.
LC   для рыб - 5,7 мг/куб. дм (96 час.).
  50
<a id="p100022"></a>Фунгицид нетоксичен для птиц, пчел, дождевых червей и водорослей.
<a id="p100023"></a>Рекомендуемый норматив для тебуконазола в семенах и масле рапса - 0,2 мг/кг.
<a id="p100024"></a>Область применения препарата
<a id="p100025"></a>Тебуконазол - системный фунгицид широкого спектра действия с защитным, лечебным и искореняющим эффектом. Эффективен против возбудителей мучнистой росы, ржавчины, септориоза, фузариоза, ринхоспориоза на зерновых злаках, альтернариоза и склеротиниоза на рапсе. Используется как для обработки вегетирующих растений, так и для протравливания семян.
<a id="p100026"></a>Зарегистрирован в России под торговым названием Фоликур, КЭ (250 г/л) в качестве фунгицида для обработки вегетирующих растений зерновых злаков и рапса.

1. <a id="p100027"></a>Метрологические характеристики метода

<a id="p100028"></a>Метрологические характеристики метода представлены в таблицах 1 и [2](#p100036).

<a id="p100029"></a>Таблица 1

<a id="p100030"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ**


<table>
<colgroup><col width="12%"><col width="11%"><col width="19%"><col width="12%"><col width="16%"><col width="15%"><col width="16%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый</td><td colspan="6">Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>объект</td><td>Предел обнаружения, мг/кг</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>Среднее значение определения, %</td><td>Стандарное отклонение, S, %</td><td>Относительное отклонение, DS, %</td><td>Доверительный интервал среднего, %</td></tr>
<tr><td>Зеленая масса</td><td>0,1</td><td>0,1 - 1,0</td><td>82,2</td><td>2,9</td><td>1,3</td><td>+/- 2,9</td></tr>
<tr><td>Семена</td><td>0,1</td><td>0,1 - 1,0</td><td>85,9</td><td>4,1</td><td>1,8</td><td>+/- 3,8</td></tr>
<tr><td>Масло</td><td>0,1</td><td>0,1 - 1,0</td><td>84,5</td><td>3,9</td><td>1,8</td><td>+/- 3,7</td></tr>
</table>


<a id="p100035"></a>Таблица 2

<div align="center">

<a id="p100036"></a>**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕБУКОНАЗОЛА**

</div>

В МОДЕЛЬНЫХ МАТРИЦАХ (n = 5)


<table>
<colgroup><col width="12%"><col width="31%"><col width="25%"><col width="32%"></colgroup>
<tr><td>Матрица</td><td>Внесено тебуконазола, мг/кг</td><td>Открыто тебуконазола, %</td><td>Доверительный интервал среднего, %</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Зеленая масса</td><td>0,1</td><td>81,3</td><td>+/- 2,6</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>83,0</td><td>+/- 2,5</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Семена</td><td>0,1</td><td>82,7</td><td>+/- 3,6</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>84,4</td><td>+/- 3,4</td></tr>
<tr><td>0,5</td><td>86,5</td><td>+/- 2,9</td></tr>
<tr><td>1,0</td><td>89,8</td><td>+/- 2,8</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Масло</td><td>0,1</td><td>80,4</td><td>+/- 3,5</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>84,6</td><td>+/- 3,5</td></tr>
<tr><td>0,5</td><td>85,6</td><td>+/- 2,6</td></tr>
<tr><td>1,0</td><td>87,5</td><td>+/- 2,4</td></tr>
</table>


2. <a id="p100048"></a>Метод измерений

<a id="p100049"></a>Методика основана на определении вещества с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором (ТИД). Контроль тебуконазола в матрицах осуществляется по содержанию вещества после экстракции его из зеленой массы водным ацетоном, из семян и масла ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем.
<a id="p100050"></a>Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. <a id="p100051"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и материалы


#### <a id="p100052"></a>3.1 Средства измерений


<a id="p100053"></a>Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с ТИД                 Номер Госреестра
(СКБ "Хроматэк", Россия)                                   N 14516-95
<a id="p100054"></a>Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104
<a id="p100055"></a>Весы лабораторные общего назначения с наибольшим ГОСТ 7328
пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой
погрешности +/- 0,036 г
<a id="p100056"></a>Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2 [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100057"></a>Меры массы ГОСТ 7328
<a id="p100058"></a>Пипетки градуированные 2-го класса точности [ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91)
вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см
<a id="p100059"></a>Пробирки градуированные с пришлифованной [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)

<div align="center">

пробкой вместимостью 5 куб. см<br>
<a id="p100060"></a>Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)<br>
25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см

</div>

<a id="p100061"></a>Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100062"></a>3.2 Реактивы


<a id="p100063"></a>Тебуконазол, аналитический стандарт фирмы Байер (Германия) с содержанием д.в. 99,8%.
<a id="p100064"></a>Ацетон, чда ГОСТ 2603-79
<a id="p100065"></a>Ацетонитрил, хч                                             ТУ 6-09-3534-87
<a id="p100066"></a>Вода бидистиллированная                                     ГОСТ 6702
<a id="p100067"></a>н-Гексан, хч                                                ТУ 6-09-3375
<a id="p100068"></a>Метилен хлористый (дихлорметан), хч [ГОСТ 12794](https://bukva.ai/docs/standart-gost-12794-80)

<div align="center">

<a id="p100069"></a>Натрий сернокислый безводный, хч [ГОСТ 4166](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)<br>
<a id="p100070"></a>Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233<br>
<a id="p100071"></a>Этиловый эфир уксусной кислоты, ч [ГОСТ 22300](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76)

</div>

<a id="p100072"></a>Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.


#### <a id="p100073"></a>3.3 Вспомогательные устройства, материалы


<a id="p100074"></a>Азот газообразный (баллон), осч ГОСТ 9293
<a id="p100075"></a>Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с                   ТУ 64-1-2851-78
<a id="p100076"></a>Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма
<a id="p100077"></a>Branson Instr. Co. (США)
<a id="p100078"></a>Вата медицинская                                       ТУ 9393-001-00302238
<a id="p100079"></a>Воронка Бюхнера ГОСТ 0147
<a id="p100080"></a>Воронки делительные вместимостью 100 и 250 куб. см ГОСТ 25336
<a id="p100081"></a>Воронки конусные диаметром 30 - 37 и 60 мм ГОСТ 25336
<a id="p100082"></a>Генератор водорода, модель SPE, фирма General
Electric (США) или аналогичный
Дефлегматор елочный [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
<a id="p100083"></a>Колба Бунзена                                          ГОСТ 5614
<a id="p100084"></a>Колбы плоскодонные вместимостью 250 куб. см [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
<a id="p100085"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100 куб. см [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
<a id="p100086"></a>Колонка кварцевая капиллярная ZB-1
длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм,
толщина пленки 0,5 мкм, неподвижная
фаза SE-30, фирма Phenomenex (США)
или аналогичная
<a id="p100087"></a>Колонка хроматографическая стеклянная длиной 25 см, [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
внутренним диаметром 8 - 10 мм
<a id="p100088"></a>Компрессор (СКБ "Хроматэк", Россия)
<a id="p100089"></a>Мельница электрическая лабораторная                    ТУ 46-22-236
<a id="p100090"></a>Насос водоструйный вакуумный                           ГОСТ 10696
<a id="p100091"></a>Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или             ТУ 25-11-917
ротационный вакуумный испаритель В-169
фирмы Buchi (Швейцария)
<a id="p100092"></a>Силикагель 60 (0,063 - 0,2 мм) для колоночной
хроматографии (Мерк, Германия) I степени активности
<a id="p100093"></a>Стаканы химические вместимостью 100 и 500 куб. см
<a id="p100094"></a>Стекловата
<a id="p100095"></a>Установка для перегонки растворителей
<a id="p100096"></a>Фильтры бумажные "красная лента" обеззоленные          ТУ 6-09-2678-77
или фильтры из хроматографической бумаги Ватман 3ММ
<a id="p100097"></a>Шприц для ввода образцов для газового
хроматографа вместимостью 1 - 10 куб. мм
(Hamilton, США)
<a id="p100098"></a>Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками.

<div align="center">

4. <a id="p100099"></a>Требования безопасности

</div>


<a id="p100100"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
<a id="p100101"></a>4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. <a id="p100102"></a>Требования к квалификации операторов

<a id="p100103"></a>К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на газовом хроматографе.
<a id="p100104"></a>К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. <a id="p100105"></a>Условия измерений

<a id="p100106"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- <a id="p100107"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 + 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100108"></a>выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. <a id="p100109"></a>Подготовка к выполнению измерений

<a id="p100110"></a>Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем.


#### <a id="p100111"></a>7.1 Очистка органических растворителей



##### <a id="p100112"></a>7.1.1 Очистка н-гексана

<a id="p100113"></a>Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

##### <a id="p100114"></a>7.1.2 Очистка этилацетата

<a id="p100115"></a>Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.

##### <a id="p100116"></a>7.1.3 Очистка ацетона

<a id="p100117"></a>    Ацетон  перегоняют над перманганатом калия и поташом  (на  1 л  ацетона
10 г KMnO  и 2 г K CO ).
         4        2  3

##### <a id="p100118"></a>7.1.4 Очистка силикагеля

<a id="p100119"></a>Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °С в течение 3 часов.


#### <a id="p100120"></a>7.2 Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта


<a id="p100121"></a>Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 3 г силикагеля I степени активности в 15 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 20 куб. см гексана со скоростью 1 - 2 капли в сек., после чего она готова к работе.


#### <a id="p100122"></a>7.3 Проверка хроматографического поведения

тебуконазола на колонке с силикагелем

<a id="p100123"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора N 1 тебуконазола с концентрацией 10 мкг/куб. см в этилацетате [(п. 7.5.2)](#p100129). Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 куб. см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по [п. 7.2](#p100120). Промывают колонку 50 куб. см смеси гексан:этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек., элюат отбрасывают. Затем колонку с силикагелем промывают 60 куб. см смеси гексан:этилацетат (2:8, по объему). Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание тебуконазола по [п. 9.4](#p100150).


#### <a id="p100124"></a>7.4 Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки


<a id="p100125"></a>Капиллярную кварцевую колонку ZB-1 (типа SE-30) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 280 °С и скорости газа-носителя 2 куб. см/мин. в течение 8 - 10 часов.


#### <a id="p100126"></a>7.5 Приготовление градуировочных растворов


<a id="p100127"></a>7.5.1. Исходный раствор тебуконазола для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,010 г тебуконазола, растворяют в 40 - 50 куб. см этилацетата, доводят этилацетатом до метки, тщательно перемешивают.
<a id="p100128"></a>Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в течение 3-х месяцев.
<a id="p100129"></a>7.5.2. Раствор тебуконазола N 1 для градуировки (концентрация 10 мкг/кую. см).
<a id="p100130"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора тебуконазола с концентрацией 100 мкг/куб. см [(п. 7.5.1)](#p100127), разбавляют этилацетатом до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов N 2 - 5.
<a id="p100131"></a>Для приготовления проб семян и зеленой массы с внесением при оценке полноты извлечения тебуконазола из исследуемых образцов используют ацетоновый раствор тебуконазола с концентрацией 10 мкг/куб. см, а для приготовления проб масла - раствор тебуконазола в изопропаноле с концентрацией 10 мкг/куб. см.
<a id="p100132"></a>Градуировочный раствор N 1, а также ацетоновый и изопропанольный растворы тебуконазола хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в течение месяца.
<a id="p100133"></a>7.5.3. Рабочие растворы N 2 - 5 тебуконазола для градуировки (концентрация 0,2 - 2,0 мкг/куб. см).
<a id="p100134"></a>В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 2,0; 4,0; 10,0 и 20,0 куб. см градуировочного раствора N 1 тебуконазола с концентрацией 10 мкг/куб. см [(п. 7.5.2)](#p100129), доводят до метки этилацетатом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией тебуконазола 0,2; 0,4; 1,0 и 2,0 мкг/куб. см соответственно. Растворы готовят непосредственно перед использованием.


#### <a id="p100135"></a>7.6 Установление градуировочной характеристики


<a id="p100136"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость высоты пика (мВ) от концентрации тебуконазола в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.
<a id="p100137"></a>В инжектор хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора [(п. 7.5.3)](#p100133) и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.4](#p100150). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

8. <a id="p100138"></a>Отбор и хранение проб

<a id="p100139"></a>Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными [ГОСТом 10852-86](https://bukva.ai/docs/3979) "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб".
<a id="p100140"></a>Пробы зеленой массы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более одного дня; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре -18 °С до анализа. Пробы семян высушивают до стандартной влажности и хранят в холодильнике при температуре не выше 4 °С. Масло хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °С. В некоторых случаях масло получают из семян рапса экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.

<div align="center">

9. <a id="p100141"></a>Выполнение определения

</div>



#### <a id="p100142"></a>9.1 Экстракция тебуконазола


<a id="p100143"></a>9.1.1. Зеленая масса. Образец измельченного растительного материала массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон:вода (7:3, по объему) и суспензию перемешивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 50 куб. см смеси ацетон:вода (7:3, по объему). Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/4 его часть (эквивалентную 5 г образца) переносят в круглодонную колбу. Далее проводят очистку экстракта по [п. 9.2](#p100146).
<a id="p100144"></a>9.1.2. Семена. Образец размолотых семян массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и помещают на аппарат для встряхивания на 1 час. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 30 куб. см ацетонитрила. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/2 его часть (эквивалентную 5 г образца) переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 10 куб. см гексана, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз нижний ацетонитрильный слой фильтруют в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см через слой ваты, помещенный в конусную воронку. Вату на фильтре промывают 10 куб. см ацетонитрила, которые объединяют с фильтратом. Объединенную ацетонитрильную фракцию упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С и подвергают очистке на колонке по [п. 9.3](#p100148).
<a id="p100145"></a>9.1.3. Масло. К образцу масла массой 5 г, помещенного в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и колбу помещают на встряхиватель на 30 мин. Верхний ацетонитрильный слой декантируют в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см через слой ваты, помещенной в конусную воронку. К оставшемуся в колбе маслу приливают 25 куб. см ацетонитрила и операцию экстракции повторяют. После декантации ацетонитрильного слоя вату промывают 10 куб. см ацетонитрила, которые объединяют с фильтратом. Объединенную ацетонитрильную фазу, пропущенную через вату, переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, добавляют 15 куб. см гексана и воронку интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой собирают в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С и подвергают очистке на колонке по [п. 9.3](#p100148).


#### <a id="p100146"></a>9.2 Очистка экстракта перераспределением

<div align="center">

в системе несмешивающихся растворителей

</div>


<a id="p100147"></a>Экстракт, полученный по [п. 9.1.1](#p100143) и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (8 - 10 куб. см) при температуре не выше 40 °С. К водному остатку прибавляют 15 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 30 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После разделения фаз нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 30 и 20 куб. см хлористого метилена. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.


#### <a id="p100148"></a>9.3 Очистка экстракта на колонке с силикагелем


<a id="p100149"></a>Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по [пп. 9.1.2](#p100144), [9.1.3](#p100145) и [9.2](#p100146)., растворяют в 0,6 куб. см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., добавляют 2,4 куб. см гексана, перемешивают, вновь помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.2](#p100120). Колбу обмывают 3 куб. см смеси гексан:этилацетат (8:2, по объему), которые также наносят на колонку. Промывают колонку 40 куб. см смеси гексан:этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек., элюат отбрасывают. Тебуконазол элюируют с колонки 50 куб. см смеси гексан:этилацетат (2:8, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С. Остаток в колбе растворяют в 2,5 куб. см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание тебуконазола по п. 9.4.


#### <a id="p100150"></a>9.4 Условия хроматографирования


<a id="p100151"></a>    Газовый  хроматограф  "Кристалл  2000М"  с  термоионным  детектором  на
                                                                   -14
азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше 2,82 х 10    г/с.
<a id="p100152"></a>Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, длина 30 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма Phenomenex (США).
<a id="p100153"></a>Температура термостата испарителя - 270 °С, детектора - 330 °С, термостата колонки (программа: от 180 °С (1 мин.) со скоростью 25°/мин. до 240 °С (0 мин.); со скоростью 5°/мин. до 255 °С (4 мин.); со скоростью 25°/мин. до 270 °С (2 мин.)
<a id="p100154"></a>Расход газов: газа-носителя (азот) - 3,5 куб. см/мин.; водорода и воздуха к ТИД - 12,2 и 200 куб. см /мин. соответственно.
<a id="p100155"></a>Деление потока: 1:2.
<a id="p100156"></a>Время удерживания тебуконазола: около 8 мин.
<a id="p100157"></a>Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.
<a id="p100158"></a>Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 2,0 нг.
<a id="p100159"></a>Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю высоту хроматографического пика тебуконазола.
<a id="p100160"></a>Образцы, дающие пики большие чем стандартный раствор с концентрацией 2,0 мкг/куб. см, разбавляют этилацетатом.

<div align="center">

10. <a id="p100161"></a>Обработка результатов анализа

</div>


<a id="p100162"></a>Содержание тубоконазола рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                                  Н  х А х V
                                   1
<a id="p100163"></a>                              Х = ----------,
                                    Н  х m
                                     0

    где:
    Х - содержание тебуконазола в пробе, мг/кг;
    Н  - высота пика образца, мВ;
     1
    Н  - высота пика стандарта, мВ;
     0
    А - концентрация стандартного раствора тебуконазола, мкг/куб. см;
    V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
    m - масса анализируемой части образца (г)/для зеленой  массы,  зерна  и
масла 5 г.

11. <a id="p100164"></a>Контроль погрешности измерений

<a id="p100165"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

<div align="center">

12. <a id="p100166"></a>Разработчики

</div>


<a id="p100167"></a>ГНУ ВНИИ фитопатологии.



<a id="p100168"></a>

---