МУК 4.1.2083-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств тиаметоксама в семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
(утв. Роспотребнадзором 30.07.2006)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 1 сентября 2006 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
30 июля 2006 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТИАМЕТОКСАМА В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ ПОДСОЛНЕЧНИКА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
1 сентября 2006 года
1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации тиаметоксама в семенах и масле подсолнечника в диапазоне 0,02 — 0,2 и 0,05 — 0,5 мг/кг, соответственно.
Тиаметоксам — действующее вещество инсектицида Круйзер, СК (350 г/л), фирма-производитель Сингента Кроп Протекшн АГ (Швейцария).
3-(2-хлор-тиазол-5-илметил)-5-метил-[1,3,5]оксадиазинан-4-илиден-N-нитроамин (ИЮПАК).
3-[(2-хлор-5-тиазолил)метил]тетрагидро-5-метил-N-нитро-4Н-1,3,5-оксадиазин-4-имин (С.А.).
Структурная формула (не приводится).
C H ClN O S. 8 10 5 3
Белый кристаллический порошок без запаха. Температура плавления: 139,1 -9
°С. Давление паров при 25 °С: 6,6 х 10 Па. Коэффициент распределения н-октанол/вода: К log Р = -0,13. Растворимость (г/л) при 25 °С:
ow
ацетонитрил — 78, ацетон — 42,5, дихлорметан — 43, метанол — 10,2, этилацетат — 5,7, толуол — 0,6, вода — 4,1.
Вещество медленно гидролизуется в водных растворах при pH 5 и 7 (DT = 50 более 1 года) и значительно быстрее при pH 9 (DT = 4,2 дня). 50
В присутствии света в водных фотолитических условиях тиаметоксам быстро деградирует с периодом полураспада 2,3 дня.
Краткая токсикологическая характеристика
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — 1560 мг/кг; острая 50 дермальная токсичность (LD ) для крыс — более 2000 мг/кг; острая 50 ингаляционная токсичность (LC ) для крыс — более 3720 мг/куб. м воздуха. 50
Тиаметоксам не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика. LC для рыб - более 100 мг/л (96 час.).
50
Инсектицид нетоксичен для птиц, дафний, земляных червей, почвенных микроорганизмов и токсичен для пчел.
Гигиенические нормативы для тиаметоксама в России: ПДК в почве — 0,2 мг/кг; ПДК в воде — 0,1 мг/куб. дм; ОБУВ в воздухе рабочей зоны — 0,4 мг/куб. м; МДУ для зерна хлебных злаков, картофеля, огурцов и гороха — 0,05 мг/кг, баклажанов, перца и томатов — 0,2 мг/кг, яблок и груш — 0,1 мг/кг.
Тиаметоксам является системным инсектицидом. Он воздействует на никотиново-ацетилхолиновый рецептор нервной системы насекомых, обладает быстрой желудочной и контактной активностью. Вещество проявляет высокую эффективность против сосущих, грызущих и почвенных насекомых на овощных, зерновых и цветочных культурах, фруктовых и цитрусовых деревьях, хлопчатнике и рисе.
Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Круйзер, СК (350 г тиаметоксама в 1 л препарата). Препарат предназначен для борьбы с почвенными и грызущими насекомыми на посевах подсолнечника, рапса, горчицы и сахарной свеклы путем предпосевной обработки семян при норме расхода препарата до 14 л/т семян.
1. Метрологические характеристики метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, Р = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Семена подсолнечника | от 0,02 до 0,1 вкл. | 50 | 4,0 | 11,1 | 17,2 |
| более 0,1 до 0,2 | 25 | 2,5 | 7,0 | 10,8 | |
| Масло подсолнечника | от 0,05 до 0,1 вкл. | 50 | 3,6 | 10,1 | 15,6 |
| более 0,1 до 0,5 | 25 | 3,3 | 9,4 | 14,6 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.
ДЛЯ n = 20, P = 0,95
| Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20 | |||||
| Анализируемый объект | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/- % |
| Семена подсолнечника | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 82,6 | 3,8 | +/- 3,5 |
| Масло подсолнечника | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 82,1 | 3,9 | +/- 3,6 |
2. Метод измерений
Методика основана на определении тиаметоксама с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором. Контроль тиаметоксама в образцах семян и масла подсолнечника осуществляется по содержанию вещества после экстракции его из матриц ацетонитрилом при ультразвуковой обработке, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне Диапак С8.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым Номер Госреестра детектором с переменной длиной волны (фирма N 16848-03
Knauer, Германия)
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим ГОСТ 7328 пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г
Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2 ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2-го класса точности ГОСТ 29227 вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 куб. см
Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой ГОСТ 1770 вместимостью 5 куб. см
Цилиндры мерные 2-го класса точности ГОСТ 1770 вместимостью 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Тиаметоксам, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 99,3% (Сингента, Швейцария)
Ацетонитрил для хроматографии, хч ТУ 6-09-3534-87 Вода бидистиллированная или деионизованная ГОСТ 6702 н-Гексан, хч ТУ 6-09-3375
Метилен хлористый (дихлорметан), хч ГОСТ 12794
Метиловый спирт (метанол), хч ГОСТ 6995
Натрий сернокислый безводный, хч ГОСТ 4166
Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233
Пропанол-2 (изопропиловый спирт), хч ТУ 6-09-402-75
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма Branson Instr. Co. (США)
Воронки делительные вместимостью 100 куб. см ГОСТ 25336
Воронки конусные диаметром 30 — 37 мм ГОСТ 25336
Дефлегматор елочный ГОСТ 9737
Колба Бунзена вместимостью 250 куб. см ГОСТ 5614
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 50 и ГОСТ 9737 100 куб. см
Колбы плоскодонные вместимостью 250 куб. см ГОСТ 9737
Колонка хроматографическая стеклянная длиной 25 см и внутренним диаметром 8 — 10 мм
Колонка хроматографическая стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая
"БиоХимМак СТ", Москва) ТУ 4215-001-05451931-94 Мельница электрическая лабораторная ТУ 46-22-236-79 Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 10696
Патроны концентрирующие Диапак С8 (0,6 г) (ЗАО «БиоХимМак СТ», Москва) ТУ 4215-002-05451931-94
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi (Швейцария) ТУ 25-11-917-74
Силикагель 60 (0,063 — 0,2 мм) для колоночной хроматографии (Мерк, Германия) I степени активности
Стаканы химические вместимостью 100 и 500 куб. см ГОСТ 25336
Установка для перегонки растворителей
Фильтры бумажные «красная лента» обеззоленные или фильтры из хроматографической бумаги Ватман 3ММ ТУ 6-09-2678-77
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 100 куб. мм, модель Microliter #1710 (Hamilton, США)
Шприц медицинский с разъемом Льюера вместимостью 20 куб. см ГОСТ 22090
Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими веществами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на жидкостном хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 + 5) °С и относительной влажности не более 80%.
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем и концентрирующего патрона Диапак С8.
7.1. Очистка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют. Непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.
7.1.2 Очистка н-гексана
Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания ее в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.
7.1.3 Очистка этилацетата
Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.
7.1.4 Очистка силикагеля
Силикагель 60 (0,063 — 0,20 мм) для колоночной хроматографии встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °С в течение 5 часов.
7.2. Подготовка колонки с силикагелем и концентрирующего патрона Диапак С8 для очистки экстракта
Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 — 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля I степени активности в 20 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 20 куб. см ацетона и 30 куб. см смеси гексан — ацетон (9:1, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в сек., после чего она готова к работе.
Концентрирующий патрон Диапак С8 промывают последовательно с помощью медицинского шприца 10 куб. см ацетонитрила и 10 куб. см смеси ацетонитрил — вода (5:95, по объему) со скоростью 5 куб. см/мин.
7.3. Проверка хроматографического поведения тиаметоксама на колонке с силикагелем
В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора № 1 тиаметоксама с концентрацией 10 мкг/куб. см в метаноле (п. 7.6.2), раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 3 куб. см смеси гексан — ацетон (9:1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.2. Промывают колонку 40 куб. см смеси гексан — ацетон (1:1, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в сек., элюат отбрасывают. Затем колонку промывают 40 куб. см смеси гексан — ацетон (4:6, по объему). Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см метанола, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., вносят 3,5 куб. см подвижной фазы, подготовленной по п. 7.4, перемешивают и анализируют на содержание тиаметоксама по п. 9.5.
7.4. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 330 куб. см метанола, 670 куб. см бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.
7.5. Кондиционирование хроматографической колонки
Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.4) при скорости подачи растворителя 1 куб. см/мин. не менее 2-х часов до установления стабильной базовой линии.
7.6. Приготовление градуировочных растворов
7.6.1. Исходный раствор тиаметоксама для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,010 г тиаметоксама, растворяют в 40 — 50 куб. см метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают.
Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в течение 3-х месяцев.
7.6.2. Раствор тиаметоксама № 1 для градуировки (концентрация 2 мкг/куб. см).
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 2 куб. см исходного раствора тиаметоксама с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.6.1), разбавляют метанолом до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов № 2 — 5.
Для приготовления проб семян и масла с внесением при оценке полноты извлечения тиаметоксама из исследуемых образцов используют изопропанольный раствор тиаметоксама с концентрацией 1 мкг/куб. см.
Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в течение месяца.
7.6.3. Рабочие растворы № 2 — 5 тиаметоксама для градуировки (концентрация 0,02 — 0,2 мкг/куб. см).
В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора № 1 тиаметоксама с концентрацией 2 мкг/куб. см (п. 7.6.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.4, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 5 с концентрацией тиаметоксама 0,02, 0,04, 0,1 и 0,2 мкг/куб. см, соответственно.
Растворы готовят непосредственно перед использованием.
7.7. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость высоты пика (мм) от концентрации тиаметоксама в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.
В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора (п. 7.6.3) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.
8. Отбор и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТом 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».
Пробы семян высушивают до стандартной влажности и хранят в матерчатых или бумажных мешочках при температуре 4 °С. Масло хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °С. В некоторых случаях масло получают из семян подсолнечника экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа. Перед анализом семена размалывают на мельнице.
9. Выполнение определения
9.1. Экстракция тиаметоксама
9.1.1. Семена. Навеску (10 г) размолотых семян подсолнечника помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, приливают 100 куб. см ацетонитрила и помещают в ультразвуковую ванну на 5 минут. Раствор (с осадком) фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Осадок на фильтре промывают 50 куб. см ацетонитрила. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/4 его часть (эквивалентна 2,5 г образца) переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп. 9.2, 9.3 и 9.4.
9.1.2. Масло. Навеску масла (5 г) помещают в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, приливают 30 куб. см ацетонитрила и смесь интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения фаз верхнюю ацетонитрильную фракцию отделяют и собирают в химический стакан вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции масла повторяют, используя 30 куб. см ацетонитрила. Измеряют объем объединенной ацетонитрильной фракции и 1/5 ее часть (эквивалентна 1 г образца) переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп. 9.2, 9.3 и 9.4.
9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
К экстракту, полученному по пп. 9.1.1 и 9.1.2 и помещенному в делительную воронку, приливают 20 куб. см гексана и смесь встряхивают в течение 1 минуты. После разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают, а нижнюю ацетонитрильную фракцию собирают в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. К ацетонитрильному экстракту прибавляют 20 куб. см деионизованной воды, перемешивают и раствор упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (15 — 20 куб. см) при температуре не выше 40 °С. К водному остатку прибавляют 10 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 30 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще два раза, используя по 15 куб. см хлористого метилена. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой безводного сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30°С и подвергают дополнительной очистке на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне Диапак С8 по пп. 9.3 и 9.4.
9.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем
Сухой остаток круглодонной колбе, полученный по 9.2, растворяют в 0,5 куб. см ацетона, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., добавляют 2,5 куб. см гексана, перемешивают, вновь помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.2. Колбу обмывают 5 куб. см смеси гексан — ацетон (1:1, по объему), которые также наносят на колонку. Колонку промывают 35 куб. см смеси гексан — ацетон (1:1, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в сек., элюат отбрасывают. Таметоксам элюируют с колонки 35 куб. см смеси гексан — ацетон (4:6, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °С.
9.4. Очистка на концентрирующем патроне Диапак С8
Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.3, растворяют в 0,2 куб. см ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., добавляют 2,8 куб. см деионизованной воды, перемешивают, вновь помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на концентрирующий патрон Диапак С8, подготовленный по п. 7.2, элюат отбрасывают. Колонку промывают 7 куб. см смеси ацетонитрил — вода (5:95, по объему), элюат отбрасывают. Тиаметоксам элюируют с патрона 3 куб. см смеси ацетонитрил — вода (2:8, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 40 °С. Остаток в колбе растворяют в 1 куб. см метанола, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., вносят 1,5 куб. см подвижной фазы, подготовленной по п. 7.3, перемешивают и анализируют на содержание тиаметоксама по п. 9.5.
9.5. Условия храматографирования
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором (фирма Knauer, Германия)
Колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая в качестве неподвижной фазы Диасфер 110-С18, зернением 5 мкм
Температура колонки: комнатная
Подвижная фаза: метанол — вода (33:67, по объему)
Скорость потока элюента: 0,7 мл/мин.
Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу
Объем вводимой пробы: 20 куб. мм
Время удерживания тиаметоксама: около 5 минут
Линейный диапазон детектирования 0,4 — 4 нг
Альтернативная неподвижная фаза: Диасорб 130-С8 Т (6 мкм)
Время удерживания тиаметоксама: около 4 мин. 40 сек.
Образцы, дающие пики большие чем стандартный раствор с концентрацией 0,2 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
10. Обработка результатов анализа
Содержание тиаметоксама рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
H х А х V
1
где:
X - содержание тиаметоксама в пробе, мг/кг;
H - высота пика образца, мм;
1
Н - высота пика стандарта, мм;
0
А - концентрация стандартного раствора тиаметоксама, мкг/куб. см;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m - масса анализируемой части образца, г (для семян - 2,5 г; для масла
- 1 г).
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r — значение предела повторяемости (таблица 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(Х +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности Р = 0,95,
где:
_
Х - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе „менее нижней границы определения“ менее 0,02 мг/кг <*> для семян и менее 0,05 мг/кг <**> для масла.»
<*> 0,02 мг/кг — предел обнаружения для семян.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки С должна удовлетворять условию: д
С = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,Х л,Х' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,Х л,Х' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
_ _ К = Х' - Х - С , к д _ _ где Х', Х, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
______________________
/ 2 2 К = \/ ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,Х' л,Х Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
таблица 1), %.