---
title: "\"МУК 4.1.2022-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств трибенурон-метила в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии\""
number: "МУК 4.1.2022-05"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2022-05"
---

## "МУК 4.1.2022-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств трибенурон-метила в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"

# "МУК 4.1.2022-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств трибенурон-метила в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"

(утв. Роспотребнадзором 17.10.2005)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 17 октября 2005 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

<div align="center">

17 октября 2005 года

</div>



#### <a id="p100159"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТРИБЕНУРОН-МЕТИЛА**
**В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР**
**МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<div align="center">

<a id="p100004"></a>**МУК 4.1.2022-05**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения:

</div>

с момента утверждения

1. <a id="p100005"></a>Подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. <a id="p100007"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100009"></a>Вводная часть


<a id="p100010"></a>Торговое наименование: Коррида СП, Зерномакс ВДГ, Террастар ВДГ, Трибун СТС.
<a id="p100011"></a>Фирмы-регистранты: Агротрейд, ЗАО "Фирма Август", "Агрусхим", Агро Эксперт груп.
<a id="p100012"></a>Действующее вещество: трибенурон-метил.
<a id="p100013"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100014"></a>    Метиловый      эфир      2-[6-метил-4-метокси-1,3,5-триазин-2-ил(метил)
карбомоилсульфамоил]бензойной кислоты (IUPAC).
<a id="p100015"></a>    Метил  2-[[[[(6-метил-4-метокси-1,3,5-триазин-2-ил)метиламино]карбонил]
амино]сульфонил]бензоат (СА).
<a id="p100016"></a>    Брутто-формула: C  H  N O S.
                     15 17 5 6
<a id="p100017"></a>    Мол. масса: 395,4.
<a id="p100018"></a>    Химически  чистый трибенурон-метил представляет собой белые кристаллы с
                                                       -5
температурой плавления 141 °С, давлением паров 5,2 х 10   мРа (25 °С).
<a id="p100019"></a>    Коэффициент  распределения в  системе н-октанол - вода K   lg P  = 0,44
                                                            ow
(pH 7).
<a id="p100020"></a>    Растворимость (г/л) в воде - 0,05 (рН 5), 2,04 (рН 7) при 20 °С
<a id="p100021"></a>    Растворимость  (мг/л)  в:  четыреххлористом  углероде - 3,12, ацетоне -
43,8,  ацетонитриле  - 54,2, метаноле - 3,39, этилацетате - 17,5, гексане -
0,028 (20 °С).
<a id="p100022"></a>    Стабилен  до  45  °С.  При  45  °С  стабилен  при  pH 8 - 10, но быстро
разлагается  при  pH  <  7 и pH > 12. Относительно нестабилен в большинстве
органических растворителей. РКа 5.
<a id="p100023"></a>    Группа  токсичности по ЕРА - III, ВОЗ - III; LD   для крыс - более 5000
                                                   50
мг/кг,  для  кроликов  -  более  2000  мг/кг,  для уток - более 5620 мг/кг;
средний ирритант для глаз, не воздействует на кожу. Мутагенной активности в
стандартных тестах не обнаружено.
<a id="p100024"></a>Область применения: селективный системный гербицид, быстро абсорбируется листьями и корнями и распространяется по растению. Действует путем ингибирования синтеза эфиров аминокислот. Рост растения прекращается практически немедленно после обработки. Растение погибает в течение 7 - 21 дня. ПАВ увеличивают активность трибенурон-метила против широколиственных сорняков. Используется для их контроля на зерновых колосовых культурах при норме расхода 9 - 30 г/га.
<a id="p100025"></a>Гигиенические нормативы для трибенурон-метила в России: Содержание в почве не допускается, ПДК в воде водоемов - 0,06 мг/куб. дм, ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 1,0 мг/куб. м. Содержание трибенурон-метила в зерне зерновых колосовых культур не допускается.


## 2. <a id="p100026"></a>Методика определения трибенурон-метила в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом ВЭЖХ



### <a id="p100027"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100028"></a>2.1.1 Принцип метода

<a id="p100029"></a>Методика основана на определении трибенурон-метила методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его извлечения из образцов органическим растворителем или водно-ацетоновой смесью с последующей очисткой перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и на колонке с силикагелем.

##### <a id="p100030"></a>2.1.2 Метрологическая характеристика метода

<a id="p100031"></a>Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 и [2](#p100040).

<div align="right">

<a id="p100032"></a>Таблица 1

</div>


<a id="p100033"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА**


| Объект анализа | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % (для каждого объекта n = 24) | Относительное стандартное отклонение S, % | Доверительный интервал среднего, n = 24, Р = 0,95 |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| Вода | 0,002 | 0,002 - 0,02 | 86,0 | 6,45 | 5,65 |
| Почва | 0,01 | 0,01 - 0,1 | 86,6 | 6,08 | 5,33 |
| Солома зерновых колосовых | 0,04 | 0,04 - 0,4 | 83,3 | 6,85 | 6,00 |
| Зерно зерновых колосовых | 0,01 | 0,01 - 0,1 | 85,2 | 6,59 | 5,78 |


<div align="right">

<a id="p100039"></a>Таблица 2

</div>


<div align="center">

<a id="p100040"></a>**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРИБЕНУРОН-МЕТИЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ,**<br>
**ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР**

</div>

(n = 6 ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)


<table>
<colgroup><col width="20%"><col width="15%"><col width="18%"><col width="23%"><col width="23%"></colgroup>
<tr><td>Среда</td><td>Внесено, мг/кг</td><td>Найдено, мг/кг</td><td>Стандартное отклонение, +/-</td><td>Полнота определения, %</td></tr>
<tr><td>1</td><td>2</td><td>3</td><td>4</td><td>5</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Вода</td><td>0,002</td><td>0,00176</td><td>0,00013</td><td>88,0</td></tr>
<tr><td>0,004</td><td>0,00342</td><td>0,00032</td><td>85,5</td></tr>
<tr><td>0,01</td><td>0,00851</td><td>0,00061</td><td>85,1</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,01706</td><td>0,00104</td><td>85,3</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>86,0</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Почва</td><td>0,01</td><td>0,00876</td><td>0,00063</td><td>87,6</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,01688</td><td>0,0013</td><td>84,4</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,0437</td><td>0,0027</td><td>87,4</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0871</td><td>0,0061</td><td>87,1</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>86,6</td></tr>
<tr><td>Солома зерновых</td><td>0,04</td><td>0,03312</td><td>0,0033</td><td>82,8</td></tr>
<tr><td rowspan="3">колосовых</td><td>0,08</td><td>0,0668</td><td>0,0056</td><td>83,5</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,1650</td><td>0,0133</td><td>82,5</td></tr>
<tr><td>0,4</td><td>0,3376</td><td>0,022</td><td>84,4</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>83,3</td></tr>
<tr><td>Зерно зерновых</td><td>0,01</td><td>0,0865</td><td>0,00059</td><td>86,5</td></tr>
<tr><td rowspan="3">колосовых</td><td>0,02</td><td>0,0171</td><td>0,00141</td><td>85,5</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,0423</td><td>0,0031</td><td>84,6</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0842</td><td>0,0072</td><td>84,2</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>85,2</td></tr>
</table>



##### <a id="p100051"></a>2.1.3 Избирательность метода

<a id="p100052"></a>Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.


### <a id="p100053"></a>2.2. Реактивы и материалы


<a id="p100054"></a>Ацетон, о.с.ч., ТУ 6-09-3513-86.
<a id="p100055"></a>Ацетонитрил для ВЭЖХ, "В-230НМ" или х.ч., ТУ 6-09-3534-87.
<a id="p100056"></a>Бумажные фильтры "красная лента", ТУ 6.091678-86.
<a id="p100057"></a>Вода бидистиллированная, деионизированная, ГОСТ 6709-72.
<a id="p100058"></a>Дихлорметан, х.ч., ТУ 6-09-3716-80.
<a id="p100059"></a>Калий углекислый, х.ч., [ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76).
<a id="p100060"></a>Калий фосфорнокислый 2-замещенный, 3-водный, ч.д.а., [ГОСТ 2493-75](https://bukva.ai/docs/standart-gost-2493-75).
<a id="p100061"></a>Калия перманганат, ГОСТ 20490-75.
<a id="p100062"></a>Кальция хлорид, х.ч., ГОСТ 4161-77.
<a id="p100063"></a>Кислота ортофосфорная, имп. (Ferak, Германия) или х.ч., ГОСТ 6552-80; 2 М и 0,005 М водные растворы.
<a id="p100064"></a>Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77.
<a id="p100065"></a>Трибенурон-метил, аналитический стандарт с содержанием д.в. 98,2% (Sigma-Aldrich).
<a id="p100066"></a>Натрий двууглекислый, ГОСТ 83-79.
<a id="p100067"></a>Натрий сернокислый безводный, ч., [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76), свежепрокаленный.
<a id="p100068"></a>Натрия гидроксид, х.ч., ГОСТ 4328-77.
<a id="p100069"></a>н-Гексан, х.ч., ТУ 2631-003-05807999-98, свежеперегнанный.
<a id="p100070"></a>Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил - 0,005 М ортофосфорная кислота (45:55, по объему).
<a id="p100071"></a>Силикагель для колоночной хроматографии 60 (0,040 - 0,063 mm) (Merck, Германия).
<a id="p100072"></a>Стекловата.
<a id="p100073"></a>Фосфора пентоксид, ч., МРТУ 6-09-5759-69.
<a id="p100074"></a>Элюент N 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан - этилацетат (50:50, по объему).
<a id="p100075"></a>Элюент N 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан - этилацетат (30:70, по объему).
<a id="p100076"></a>Этиловый эфир уксусной кислоты, ч.д.а., [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76).


### <a id="p100077"></a>2.3. Приборы и посуда


<a id="p100078"></a>Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы "Waters" с УФ-детектором (Waters 2487) с дегазатором и автоматическим пробоотборником или другой с аналогичными техническими характеристиками.
<a id="p100079"></a>Колонка Symmetry C-18, (250 x 4,6) мм, 5 мкм (Waters).
<a id="p100080"></a>Предколонка Waters Symmetry C-18.
<a id="p100081"></a>Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е, или аналогичные.
<a id="p100082"></a>Установка ультразвуковая "Серьга", ТУ 3.836.008.
<a id="p100083"></a>Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная зерновая ЛМЗ, ТУ 1-01-0593-79.
<a id="p100084"></a>Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный.
<a id="p100085"></a>Бидистиллятор.
<a id="p100086"></a>рН-метр универсальный ЭВ-74, ГОСТ 22261-76.
<a id="p100087"></a>Насос водоструйный, МРТУ 42 861-64.
<a id="p100088"></a>Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.
<a id="p100089"></a>Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС, ГОСТ 10384-72.
<a id="p100090"></a>Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25336-82.
<a id="p100091"></a>Воронки делительные ВД-3-500, ГОСТ 8613-75.
<a id="p100092"></a>Воронка Бюхнера и колба Бунзена, ГОСТ 25336.
<a id="p100093"></a>Цилиндры мерные на 100, 250 и 1000 куб. см, ГОСТ 1774-74.
<a id="p100094"></a>Колбы мерные на 25, 50, 100 и 1000 куб. см, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74).
<a id="p100095"></a>Пипетки на 1, 2, 5, 10 куб. см, ГОСТ 22292-74.
<a id="p100096"></a>Колонки стеклянные (25 х 1) см.


### <a id="p100097"></a>2.4. Отбор проб


<a id="p100098"></a>Отбор проб производится в соответствии с [ГОСТ Р 50436-92](https://bukva.ai/docs/gost-r-50436-92) (ИСО 950-79) "Зерновые. Отбор проб зерна"; [ГОСТ 28168-89](https://bukva.ai/docs/gost-28168-89) "Почвы. Отбор проб"; [ГОСТ Р 51592-2000](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-51592-2000) "Вода. Общие требования к отбору проб".


### <a id="p100099"></a>2.5. Подготовка к определению



##### <a id="p100100"></a>2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей

<a id="p100101"></a>    Перед   началом  работы  рекомендуется  проверить  чистоту  применяемых
органических  растворителей.  Для  этого  100  мл  растворителя упаривают в
ротационном  вакуумном испарителе при температуре +40 °С до объема 1,0 мл и
хроматографируют.  При  обнаружении  мешающих  определению примесей очистку
растворителей  производят в соответствии с общепринятыми методиками. Гексан
и  хлористый  метилен  встряхивают  с небольшими порциями концентрированной
серной  кислоты  до  прекращения  окрашивания  свежей порции кислоты, затем
промывают  водой,  2%-ным  раствором гидроксида натрия и снова водой, после
чего  его  сушат над гидроксидом натрия и перегоняют. Ацетон перегоняют над
перманганатом  калия  и  поташом (на 1 л ацетона  10 г KMnO   и 2 г K CO ).
                                                           4         2  3
Ацетонитрил   сушат   над  пентоксидом  фосфора  и  перегоняют;  отогнанный
растворитель   повторно   перегоняют   над  углекислым  калием.  Этилацетат
промывают  равным объемом 5%-ного раствора двууглекислого натрия, сушат над
хлористым кальцием и перегоняют.

##### <a id="p100102"></a>2.5.2 Кондиционирование колонки

<a id="p100103"></a>Перед началом анализа колонку (Symmetry С-18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 мл/мин.) до стабилизации нулевой линии в течение 1 - 2 часов.

##### <a id="p100104"></a>2.5.3 Приготовление растворов

<a id="p100105"></a>    Для приготовления 2 М раствора ортофосфорной кислоты 200 г 98% (или 225
г  87%)  кристаллической  H PO   помещают  в  мерную  колбу  объемом  1  л,
                           3  4
растворяют  в  600  мл  дистиллированной  воды  и  доводят  объем  до метки
дистиллированной водой.
<a id="p100106"></a>    Для  приготовления  0,005 М раствора ортофосфорной  кислоты  2,5 мл 2 М
раствора   H PO   вносят  в  мерную  колбу  на  1  л  и  доводят  до  метки
            3  4
деионизированным бидистиллятом.
<a id="p100107"></a>    Для  приготовления  0,1 М раствора K HPO  22,8 г кристаллического калия
                                        2   4
фосфорнокислого  двузамещенного трехводного помещают в мерную колбу на 1 л,
растворяют при перемешивании в 600 мл дистиллированной воды и доводят объем
раствора до метки.
<a id="p100108"></a>    Для  приготовления  0,2 М раствора K HPO  45,6 г кристаллического калия
                                        2   4
фосфорнокислого  двузамещенного трехводного помещают в мерную колбу на 1 л,
растворяют при перемешивании в 600 мл дистиллированной воды и доводят объем
раствора до метки.
<a id="p100109"></a>Для получения 50%-го водного ацетона в колбе емкостью 1 л смешивают 500 мл ацетона с 500 мл дистиллированной воды, используя мерные цилиндры.
<a id="p100110"></a>Для получения 90%-го водного ацетона в колбе емкостью 1 л смешивают 900 мл ацетона со 100 мл дистиллированной воды, используя мерные цилиндры.
<a id="p100111"></a>Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 45:55 по объему, используя мерные цилиндры.
<a id="p100112"></a>Для приготовления элюента N 1 в колбе на 1000 мл смешивают 500 мл н-гексана и 500 мл этилацетата. Для приготовления элюента N 2 в колбе на 1000 мл смешивают 300 мл н-гексана и 700 мл этилацетата.
<a id="p100113"></a>Приготовление градуировочных растворов: Берут точную навеску трибенурон-метила (50 мг), переносят в мерную колбу на 100 мл, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки (исходный раствор аналитического стандарта). Градуировочные растворы с концентрациями 0,1, 0,2, 0,5, 1,0 и 2,0 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы - ацетонитрил: 0,005 М ортофосфорная кислота (45:55, по объему).
<a id="p100114"></a>Трибенурон-метил относительно нестабилен в большинстве органических растворителей и довольно быстро разлагается при pH < 7, поэтому исходный раствор аналитического стандарта можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С не более 1 недели, градуировочные растворы (при тех же условиях) - в течение 4 часов.
<a id="p100115"></a>При изучении полноты определения трибенурон-метила используют ацетонитрильные растворы вещества. Растворы внесения с концентрациями 0,1 и 1,0 мкг/мл готовят из исходного раствора с концентрацией 0,5 мг/мл методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.
<a id="p100116"></a>При изучении хроматографического поведения трибенурон-метила на колонке с силикагелем раствор с концентрацией 10 мкг/мл готовят из исходного раствора аналитического стандарта с концентрацией 0,5 мг/мл. Для этого 1 мл этого раствора помещают в мерную колбу объемом 50 мл и доводят объем раствора до метки ацетонитрилом.

##### <a id="p100117"></a>2.5.4 Построение градуировочного графика

<a id="p100118"></a>Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация трибенурон-метила в растворе) в хроматограф вводят по 50 мкл градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации трибенурон-метила в градуировочном растворе (мкг/мл).

##### <a id="p100119"></a>2.5.5 Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

<a id="p100120"></a>В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 30 мл смеси гексан - этилацетат (50:50, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 50 мл элюента N 2 и 50 мл элюента N 1 со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

##### <a id="p100121"></a>2.5.6 Проверка хроматографического поведения трибенурон-метила на колонке с силикагелем

<a id="p100122"></a>В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл раствора трибенурон-метила с концентрацией 10 мкг/мл, приготовленного по [п. 2.5.3](#p100104). Отдувают растворитель током азота, остаток растворяют в 5 мл элюента N 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 мл элюента N 1 и также вносят на колонку. Промывают колонку 25 мл элюента N 1, затем 70 мл элюента N 2 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ [(п. 2.5.3)](#p100104) и анализируют на содержание трибенурон-метила по [п. 2.6.6](#p100138). Фракции, содержащие трибенурон-метил, объединяют и вновь анализируют по п. 2.6.6. Рассчитывают содержание трибенурон-метила в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.
<a id="p100123"></a>Примечание: параметры удерживания трибенурон-метила и сопутствующих экстрактивных веществ могут меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.


### <a id="p100124"></a>2.6. Проведение определения



##### <a id="p100125"></a>2.6.1 Определение трибенурон-метила в пробах воды

<a id="p100126"></a>    К образцу предварительно отфильтрованной воды объемом 100 мл  добавляют
2,28 г  К НРО  и  перемешивают  до  растворения  соли.  Полученный  раствор
         2   4
переносят в делительную воронку емкостью 250 мл, промывают трижды хлористым
метиленом  порциями  по  40  мл, встряхивая каждый раз в течение 2 - 3 мин.
Нижний   органический   слой   отбрасывают,   водную  фазу  подкисляют  2 М
ортофосфорной  кислотой  до  рН  3  (контроль  рН-метром) и без промедления
экстрагируют трибенурон-метил хлористым метиленом трижды порциями по 50 мл,
встряхивая  каждый раз в течение 2 - 3 мин. Объединенный экстракт фильтруют
через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10 - 15 мл
хлористого  метилена. После этого экстракт выпаривают досуха на ротационном
испарителе  при  температуре  не  выше  40 °С. При  необходимости  проводят
дополнительную очистку экстракта на колонке с силикагелем по [пункту 2.6.5](#p100136).
<a id="p100127"></a>Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 50 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.

##### <a id="p100128"></a>2.6.2 Извлечение трибенурон-метила из проб почвы

<a id="p100129"></a>Образец воздушно-сухой почвы массой 20 г помещают в коническую колбу емкостью 250 мл с притертой пробкой, добавляют 100 мл 90%-го водного ацетона и экстрагируют в течение 15 мин. на ультразвуковой бане. Суспензию фильтруют на стеклянной воронке через бумажный фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют с 50 мл 90%-ного водного ацетона. Объединенные экстракты упаривают до водного остатка (10 - 15 мл) на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С.
<a id="p100130"></a>    Водный   остаток  переносят  в  делительную  воронку  объемом  250  мл,
добавляют 90 мл 0,1 М  раствора K HPO .   Дальнейшую    очистку   экстракта
                                 2   4
проводят по [пункту 2.6.4](#p100133).

##### <a id="p100131"></a>2.6.3 Извлечение  трибенурон-метила  из  проб соломы и зерна зерновых

колосовых культур, семян и соломы льна
<a id="p100132"></a>    Навеску  измельченной  на  ножевой  мельнице  соломы или размолотого на
лабораторной  мельнице  зерна   массой  20  г  помещают  в коническую колбу
емкостью  250  мл  и  экстрагируют трибенурон-метил 100 мл 50%-ного водного
ацетона  на  ультразвуковой установке в течение 15 мин. Суспензию фильтруют
через  бумажный  фильтр  "красная  лента"  на  воронке  Бюхнера. Экстракцию
повторяют.  В  случае  соломы из объединенного экстракта отбирают аликвоту,
соответствующую 5 г матрицы. Объединенный экстракт упаривают на ротационном
испарителе  при температуре бани не выше 40 °С до полного удаления ацетона.
Объем водного остатка доводят до 100 мл дистиллированной водой, добавляют к
нему 50  мл 0,2 М раствора K HPO . Дальнейшую очистку экстракта проводят по
                            2   4
пункту 2.6.4.

##### <a id="p100133"></a>2.6.4 Очистка экстрактов

<a id="p100134"></a>Полученные по [п. п. 2.6.2](#p100128) и [2.6.3](#p100131) водные экстракты промывают в делительной воронке объемом 500 мл трижды хлористым метиленом порциями по 30 мл (нижний органический слой отбрасывают) и трижды гексаном порциями по 50 мл (верхний органический слой отбрасывают), встряхивая делительную воронку каждый раз в течение 1 - 2 минут. Водную фазу подкисляют 2 М ортофосфорной кислотой до рН 3 (контроль рН-метром) и без промедления экстрагируют трибенурон-метил хлористым метиленом трижды по 50 мл, встряхивая воронку каждый раз в течение 2 - 3 мин. Верхний водный слой отбрасывают. Объединенную органическую фазу фильтруют через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10 - 15 мл хлористого метилена. Полученный раствор выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по [пункту 2.6.5](#p100136).
<a id="p100135"></a>Внимание! Отделение водного слоя следует производить только после полного расслоения жидкостей в делительной воронке. В случае образования сравнительно стойких эмульсий для сокращения времени расслоения можно добавить в делительную воронку: на стадии промывки экстрактов гексаном и хлористым метиленом - небольшое количество (до 10 мл) этилового спирта, а на стадии переэкстракции - насыщенный раствор хлорида натрия (15 - 20 мл).

##### <a id="p100136"></a>2.6.5 Очистка на колонке с силикагелем

<a id="p100137"></a>Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по [п. п. 2.6.2](#p100128) и [2.6.3](#p100131) экстрактов почвы и растительного материала, количественно переносят двумя порциями по 5 мл смеси гексан:этилацетат (50:50, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку [(п. 2.5.5)](#p100119). Промывают колонку 25 мл элюента N 1, который отбрасывают. Трибенурон-метил элюируют 70 мл элюента N 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 250 мл. Раствор выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 50 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.

##### <a id="p100138"></a>2.6.6 Условия хроматографирования

<a id="p100139"></a>Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы Waters с УФ-детектором (Waters 2487).
<a id="p100140"></a>Рабочая длина волны 223 нм.
<a id="p100141"></a>Предколонка Waters Symmetry С-18 для защиты аналитической колонки.
<a id="p100142"></a>Колонка Symmetry С-18 (250 х 4,6) мм, 5 мкм (Waters, USA). Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,005 М раствор ортофосфорной кислоты в соотношении 45:55. Скорость потока 1 мл/мин.
<a id="p100143"></a>Время удерживания трибенурон-метила 9,3 +/- 0,2 мин.
<a id="p100144"></a>Объем вводимой пробы 50 мкл.
<a id="p100145"></a>Линейный диапазон детектирования 0,1 - 2,0 мкг/мл.

##### <a id="p100146"></a>2.6.7 Обработка результатов анализа

<a id="p100147"></a>Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание трибенурон-метила в образце воды, почвы или пробах растительного происхождения (Х, мг/кг) вычисляют по формуле:

                                  S  х С х V
                                   2
<a id="p100148"></a>                              Х = ----------,
                                    S  х Р
                                     1

    где:
    S - площадь пика трибенурон-метила в градуировочном растворе, кв. мм;
     1
    S - площадь пика трибенурон-метила в анализируемой пробе, кв. мм;
     2
    V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, куб.
мл;
    Р - навеска анализируемого образца, г (для воды - объем, куб. мл);
    С - концентрация градуировочного раствора трибенурон-метила, мкг/мл.
<a id="p100149"></a>Содержание остаточных количеств трибенурон-метила в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.
<a id="p100150"></a>Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор трибенурон-метила 2 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.


## 3. <a id="p100151"></a>Требования техники безопасности.


<a id="p100152"></a>При работе с реактивами соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005-88).
<a id="p100153"></a>При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.


## 4. <a id="p100154"></a>Контроль погрешности измерений.


<a id="p100155"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".


## 5. <a id="p100156"></a>Разработчики


<a id="p100157"></a>ВНИИ защиты растений, Санкт-Петербург.



<a id="p100158"></a>

---