--- title: "\"МУК 4.1.2019-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств феноксапроп-П-этила по метаболиту феноксапропу-П в капусте, горохе и моркови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии\"" number: "МУК 4.1.2019-05" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2019-05" --- ## "МУК 4.1.2019-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств феноксапроп-П-этила по метаболиту феноксапропу-П в капусте, горохе и моркови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" # "МУК 4.1.2019-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств феноксапроп-П-этила по метаболиту феноксапропу-П в капусте, горохе и моркови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Роспотребнадзором 17.10.2005) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 17 октября 2005 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
17 октября 2005 года
#### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЕНОКСАПРОП-П-ЭТИЛА** **ПО МЕТАБОЛИТУ ФЕНОКСАПРОПУ-П В КАПУСТЕ, ГОРОХЕ И МОРКОВИ** **МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**
**МУК 4.1.2019-05**
Дата введения:
с момента утверждения 1. Подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко. 4. Введены впервые. ## 1. ВВОДНАЯ ЧАСТЬ Фирма-производитель: Байер КропСайенс (Германия). Торговое название: Пума супер, Фуроре Ультра. Действующее вещество: феноксапроп-П-этил. Этил(R)-2-[4-[(6-хлор-2-бензоксазолил)окси]фенокси]пропаноат (С.А.). Структурная формула (не приводится). Эмпирическая формула: C H ClNO . 18 16 5 Молекулярная масса: 361,8. Белое твердое вещество без запаха. Температура плавления: 89 - 91 °С. -4 Давление паров при 20 °С: 5,3 х 10 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 4,58. ow Растворимость (г/л) при 20 °С: ацетон - 200, толуол - 200, этилацетат - более 200, этанол - 24; растворимость в воде 0,7 мг/л. Вещество стабильно в течение 90 дней при 50 °С, не разрушается на свету, нестабильно в нейтральной и особенно щелочной средах: DT = 1000 50 дней (pH 5), 100 дней (pH 7), 2,4 дня (pH 9). Краткая токсикологическая характеристика: Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс 3150 - 4000, для мышей - 50 более 5000 мг/кг, острая дермальная токсичность (LD ) для крыс - более 50 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC ) для крыс - более 1,224 50 мг/л воздуха. Феноксапроп-П-этил не вызывает раздражения кожи. LC для рыб 50 - 0,46 - 0,58 мг/л (96 час.). Феноксапроп-П-этил нетоксичен для пчел, птиц, дождевых червей. Гигиенические нормативы: ОДК в почве - 0,04 мг/кг; ПДК в воде - 0,0003 мг/куб. дм; МДУ в зерне хлебных злаков, моркови, свекле столовой, подсолнечнике (масло) и луке - 0,01, свекле сахарной, сое - 0,05, капусте - 0,02, рапсе, горохе - 0,2 мг/кг. Основной метаболит феноксапроп-П-этила: феноксапроп-П (R)-2-[4-[(6-хлорбензоксазол-2-илокси)]фенокси]пропионовая кислота (ИЮПАК). (R)-2-[4-[(6-хлор-2-бензоксазолил)окси]фенокси]пропановая кислота (С.А.). Структурная формула (не приводится). Эмпирическая формула: C H ClNO . 16 12 5 Молекулярная масса: 333,7. Светло-бежевый порошок со слабым запахом. Температура плавления: 155 - 161 °С. -1 Давление паров при 20 °С: 1,8 х 10 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 1,83 - 0,24 (pH 5 ow - pH 9). Растворимость (г/л) при 20 °С: толуол - 0,5, метанол - 34, этилацетат - 36, ацетон - 80, вода - 0,27 (pH 5,1) и 61 (pH 7,0). Другие физико-химические и токсикологические характеристики феноксапроп-П отсутствуют. Область применения препарата Феноксапроп-П-этил - послевсходовый гербицид системного действия из группы ингибиторов синтеза жирных кислот. Вещество быстро поглощается листьями и хорошо передвигается в акропетальном и базипетальном направлении в различные органы растения. Феноксапроп-П-этил эффективно уничтожает однолетние и многолетние злаковые сорняки в посевах свеклы, моркови, сои, льна, арахиса, хлопчатника, капусты, лука и картофеля, а в комбинации с антидотом используется для этих же целей и на посевах пшеницы, ржи и тритикале. Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Пума-супер, КЭ (100 г феноксапроп-П-этила и 27 г антидота мефенпир-диэтила в 1 л препарата) и Фуроре Ультра, ЭМВ (110 г феноксапроп-П-этила в 1 л препарата) на посевах озимой и яровой пшеницы, свеклы, капусты, подсолнечника, гороха и моркови в качестве послевсходового гербицида при норме расхода 0,8 - 1,2 л/га и однократной обработке за сезон. Феноксапроп-П-этил весьма лабильное вещество и при попадании в воду, почву или растение очень быстро метаболизируется до более устойчивого соединения - (R)-2-[4-[(6-хлорбензоксазол-2-илокси)]фенокси]пропионовой кислоты /феноксапроп-П/. Поэтому контроль за содержанием феноксапроп-П-этила в продукции растительного происхождения ведут по феноксапропу-П. ## 2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЕНОКСАПРОП-П-ЭТИЛА ПО МЕТАБОЛИТУ ФЕНОКСАПРОПУ-П В КАПУСТЕ, ГОРОХЕ И МОРКОВИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип методики Методика основана на определении феноксапропа-П с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после извлечения метаболита из растительного материала водным ацетонитрилом при ультразвуковой обработке, очистке экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки. ##### 2.1.2 Избирательность метода В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания капусты, гороха и моркови. ##### 2.1.3 Метрологическая характеристика метода Таблица
Анализируемый объектМетрологические параметры, P = 0,95, n = 20
Предел обнаружения, мг/кгДиапазон определяемых концентраций, мг/кгСреднее значение определения, %Стандартное отклонение, S, %Относительное отклонение, %Доверительный интервал среднего, %
Капуста0,010,01 - 0,182,93,91,7+/- 3,6
Горох0,050,05 - 0,584,13,71,6+/- 3,4
Морковь0,010,01 - 0,183,34,11,8+/- 3,8
### 2.2. Реактивы, растворы, материалы Феноксапроп-П с содержанием д.в. 99,1% (АгрЭво, Германия) Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-82 Вода бидистиллированная, ГОСТ 7602-72 Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78 Железо (II) сернокислое, хч, [ГОСТ 4148-78](https://bukva.ai/docs/gost-4148-78) Калия перманганат, хч, ГОСТ 20490-75 Калий углекислый, хч, [ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76) Кальция хлорид, хч, ГОСТ 4161-77 Кислота ортофосфорная, 87%, хч, ГОСТ 6552-80 Кислота серная, хч, ГОСТ 4204-77 Кислота хлористоводородная, хч, ГОСТ 3118-77 Натрия гидроксид, хч, ГОСТ 4328-77 Натрия сульфат безводный, хч, [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) Натрий углекислый, хч, ГОСТ 83-63 Натрия хлорид, хч, ГОСТ 4233-77 Спирт метиловый, хч, [ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77) Фосфора пентаксид, ч, МРТУ 6-09-5759-69 Этилацетат, [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) Эфир диэтиловый, ГОСТ 6265-74 Элюент N 1 для колоночной хроматографии: смесь этилацетат - метанол (7:3, по объему) Элюент N 2 для колоночной хроматографии: смесь этилацетат - метанол (6:4, по объему) Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил - вода - ортофосфорная кислота (54:45,9:0,1, по объему) Силикагель для адсорбционной хроматографии (Вельм, Германия) 1 степени активности или силикагель КСК (60 - 100 меш) Стекловата Фильтры бумажные, синяя лента, ТУ 6-09-1678 ### 2.3. Приборы, аппаратура, посуда Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирм Altex (США), Knauer (Германия) или аналогичный Хроматографическая колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, заполненная Диасфером-110-С18 или Диасорбом 130-С16 Т (ЗАО БиоХимМак, РФ; 119899, Москва, Ленинские горы) Шприц для ввода образцов в жидкостной хроматограф Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19401-74 Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75 Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73 Гомогенизатор, МРТУ 42-1505-63, или аналогичный Иономер ЭВ-74, ГОСТ 22261-76, или аналогичный Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79, или аналогичная Ротационный испаритель тип ИР-1М, ТУ 25-11-917-76 Баня ультразвуковая, модель D-50, Branson Instr. Co., США, или аналогичная Баня водяная, ТУ 46-22-603-75 Воронка Бюхнера, ГОСТ 0147-73 Воронки делительные вместимостью 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82 Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75 Колба Бунзена, ГОСТ 5614-75 Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 9737-70 Колбы конические с притертыми пробками вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82 Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 и 1000 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Колбы грушевидные вместимостью 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 25336-82 Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, [ГОСТ 20292-74Е](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74) Пробирки градуированные с притертыми пробками вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 10515-75 Цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 250 и 500 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) ### 2.4. Отбор проб Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы зерна гороха подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °С не более трех месяцев. Кочаны и корнеплоды хранят в стеклянной посуде в холодильнике при температуре не выше 4 °С не более двух дней; при длительном хранении (не более трех месяцев) пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С. Перед анализом зерно размалывают на мельнице, сегменты кочанов и корнеплодов измельчают ножом. ### 2.5. Подготовка к определению ##### 2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем гексан последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют. Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора углекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют. Диэтиловый эфир (1 л) предварительно встряхивают с 20 мл свежеприготовленного раствора железного купороса (30 г сульфата железа в 55 мл воды с добавлением 1,5 г концентрированной серной кислоты). Затем диэтиловый эфир последовательно промывают 0,5%-ным раствором перманганата калия, 5%-ным раствором гидроксида натрия и водой, после чего сушат над хлористым кальцием и перегоняют. Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием. ##### 2.5.2 Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ При подготовке подвижной фазы для ВЭЖХ отмеряют 540 мл ацетонитрила, переносят в колбу на 1000 мл, добавляют 459 мл бидистиллированной воды и 1 мл ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют и дегазируют. ##### 2.5.3 Кондиционирование колонки Промыть колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил - вода - ортофосфорная кислота (54:45,9:0,1, по объему) в течение 30 минут при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. Включить детектор и подождать стабилизации базовой линии (15 - 30 минут). ##### 2.5.4 Приготовление стандартных растворов Основной стандартный раствор феноксапропа-П с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,1% д.в., в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике при температуре -12 °С не более месяца. Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,01; 0,02; 0,05 и 0,10 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора метаболита соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100116) непосредственно в день проведения анализа. При изучении полноты открывания феноксапропа-П в модельных матрицах используются ацетонитрильные растворы вещества. ##### 2.5.5 Построение калибровочного графика Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 20 мкл рабочего стандартного раствора феноксапропа-П с концентрацией 0,01; 0,02; 0,05; 0,10 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации метаболита в растворе в мкг/мл. ##### 2.5.6 Подготовка колонки с силикагелем В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 0,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию: 5 г силикагеля в 20 мл этилацетата. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 30 мл смеси этилацетат - метанол (1:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду и затем 20 мл этилацетата. ##### 2.5.7 Проверка хроматографического поведения феноксапропа-П на колонке с силикагелем В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора феноксапропа-П с концентрацией 10 мкг/мл, отдувают растворитель потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 2 - 3 мл этилацетата и наносят на подготовленную колонку. Промывают колонку 40 мл элюента N 1 (смесь этилацетат - метанол, 7:3) и затем 60 мл элюента N 2 (смесь этилацетат - метанол, 6:4) со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 5 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2,5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100116) и анализируют на содержание феноксапропа-П по [п. 2.7](#p100141). Фракции, содержащие феноксапроп-П, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 10 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по [п. 2.7](#p100141). Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента. Примечание: Профиль вымывания феноксапропа-П может меняться при использовании новых партий сорбента и растворителей. ### 2.6. Описание определения ##### 2.6.1 Экстракция феноксапропа-П 2.6.1.1. Зерно. Навеску размолотого зерна (10 г) помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл 80%-ного ацетонитрила и помещают в ультразвуковую баню на 5 минут. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Растительный материал повторно экстрагируют 50 мл 80%-ного ацетонитрила в ультразвуковой бане в течение 3 минут и суспензию фильтруют. Из объединенного экстракта муки отбирают аликвоту (около 70 мл) раствора, эквивалентную 5 г зерна. Дальнейшую очистку проводят по [пп. 2.6.2](#p100137) и [2.6.3](#p100139). 2.6.1.2. Корнеплоды, кочаны. К навеске (25 г) измельченного материала добавляют 125 мл 80%-ного ацетонитрила и гомогенизируют 3 минуты при 10000 об/мин., после чего суспензию помещают в ультразвуковую баню на 5 минут. К суспензии добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу на 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл 80%-ного ацетонитрила. Из объединенного экстракта отбирают пятую часть объема (около 35 мл) раствора, эквивалентную 5 г растительной ткани. Дальнейшую очистку проводят по пп. 2.6.2 и [2.6.3](#p100139). ##### 2.6.2 Очистка экстрактов Отобранные аликвоты растительных (из [пп. 2.6.1.1](#p100135) и [2.6.1.2](#p100136)) экстрактов упаривают до объема 5 - 10 мл на роторном испарителе при температуре 40 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку вместимостью 100 мл, приливают 15 мл бидистиллированной воды, 20 мл гексана и смесь встряхивают в течение 1 минуты. Органический слой отбрасывают. Водную фазу подкисляют 1 н HCl до pH 2, переносят в делительную воронку, прибавляют 20 мл диэтилового эфира и смесь встряхивают 1 минуту. Собирают органическую фазу и экстракцию водной фракции диэтиловым эфиром повторяют еще два раза (по 10 мл). Объединенную органическую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. ##### 2.6.3 Очистка на колонке с силикагелем Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по [п. 2.6.2](#p100137) экстрактов зерна, корнеплодов и кочанов, растворяют в 5 мл этилацетата и 3 мл полученного экстракта моркови и капусты или 1 мл экстракта зерна гороха вносят в подготовленную хроматографическую колонку [(п. 2.5.6)](#p100126). Колонку промывают 20 мл смеси этилацетат-метанол (7:3, по объему), которые отбрасывают. Метаболит элюируют 40 мл смеси этилацетат - метанол (6:4, по объему) и собирают элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток экстрактов кочанов и корнеплодов растворяют в 3 мл, а экстракта зерна в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100116) и анализируют на содержание феноксапропа-П по п. 2.7. ### 2.7. Условия хроматографирования Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Knauer (Германия) Колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, заполненная Диасфером 110-С18, зернением 5 мкм Температура колонки: комнатная Подвижная фаза: ацетонитрил - вода - ортофосфорная кислота (54:45,9:0,1, по объему) Скорость потока элюента: 0,7 мл/мин. Рабочая длина волны: 240 нм Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу Объем вводимой пробы - 20 мкл Время выхода метаболита: 9,5 мин. Линейный диапазон детектирования: 0,2 - 2,5 нг. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,1 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ. ### 2.8. Обработка результатов анализа Содержание феноксапропа-П рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле: H х A х V 1 X = ----------, H х m 0 где: X - содержание феноксапропа-П в пробе, мг/кг; H - высота пика образца, мм; 1 H - высота пика стандарта, мм; 0 A - концентрация стандартного раствора феноксапропа-П, мкг/мл; V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; m - масса анализируемой части образца, г (для зерна - 1 г, для корнеплодов и кочанов - 3 г). При расчете содержания феноксапропа-П в эквивалентах феноксапроп-П-этила полученное значение X умножают на 1,08. ## 3. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами. ## 4. КОНТРОЛЬ ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями [МИ 2335-95](https://bukva.ai/docs/mi-2335-95). ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа. ## 5. РАЗРАБОТЧИКИ ВНИИфитопатологии. ---