МУК 4.1.2017-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств Диазинона в мышечной ткани, печени, почках и жире овец

(утв. Роспотребнадзором 17.10.2005)

17 октября 2005 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДИАЗИНОНА В МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ, ПЕЧЕНИ, ПОЧКАХ И ЖИРЕ ОВЕЦ

1. Подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

1. Вводная часть

Фирма-производитель: ООО «Ариста Восток».

Торговое название: Диазинон.

Название действующего вещества по ИСО: Диазинон.

Название по ИЮПАК: O-O-диэтил O-[6-метил-2-(1-метилэтил)-4-пиридинил] фосфоротиоат.

Эмпирическая формула: C H № O PS. 12 21 2 3

Структурная формула (не приводится).

Молекулярная масса: 304,3.

Химически чистый Диазинон представляет собой бесцветную жидкость.

Температура кипения 89 °С при давлении 13 Па. 1

Давление паров 1,2 мПа х 10 при 25 °С.

Растворимость в воде 60 мг/л при 20 °С.

Хорошо растворим в большинстве органических растворителей: ацетоне, эфире, спиртах, бензоле, толуоле, гексане, циклогексане, дихлорметане.

K log P = 3,3. ow

Константа диссоциации рКа = 2,6.

Разлагается под действием кислот и щелочей, в воде гидролизуется с ДТ 50 при 20 °С — 11,77 часов (pH 3,1), 185 дней (pH 7,4), 6 дней (pH 10,4).

При нагревании до 120 °С разрушается.

    Краткая   токсикологическая   характеристика:   Диазинон   относится  к
веществам, опасным  по  острой  оральной  (ЛД    для  крыс 1250, для  мышей

                                         50

80 — 135 мг/кг) и ингаляционной токсичности (СК , 4 часа, для крыс > 2330 50 мг/куб. м), и мало опасным веществам по дермальной токсичности (ЛД для 50 крыс > 2150 мг/кг). Кумулятивные свойства выражены слабо.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД для человека — 0,002 мг/кг/сут.

ПДК в воздухе рабочей зоны            - 0,2 мг/куб. м.
ПДК в атмосферном воздухе             - 0,0001 мг/куб. м (с.-с.).
ПДК в воде водоема                    - 0,004 мг/куб. дм (с.-т.).
ПДК в почве                           - 0,1 мг/кг (тр.).

МДУ (мг/кг): зерно хлебных злаков, кукуруза, картофель, капуста, хлопчатник (семена и масло), лук, брюква, турнепс, сахарная и столовая свекла — 0,1; табак, томаты, огурцы, мак масличный — 0,5; хмель сухой — 1,0; мясо (в пересчете на жир) — 0,01; морковь, молоко, молочные продукты, мясо птицы, яйца — не допускается.

Область применения препарата: Диазинон — инсектицид широкого спектра действия из группы эфиров тиофосфорной кислоты, ингибиторов ацетилхолинэстеразы, с хорошо выраженной контактной и кишечной активностью. Высокоэффективен против сосущих, минирующих и грызущих насекомых, повреждающих растения, а также подвижных стадий растительноядных клещей. Препараты на основе Диазинона широко применяются для борьбы с эндопаразитами животных.

2. Методика определения остаточных количеств Диазинона в мышечной ткани, печени, почках и жире овец

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода.

Методика основана на определении Диазинона методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после его экстракции из проб ацетонитрилом, переэкстракции в метиленхлорид и очистки на колонках с Флоризилом.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода.

Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 - 2.

2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование

2.2.1 Реактивы, материалы и растворы.

Диазинон, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,4%.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетон, ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, ТУ 6-09-3534-87.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Метилен хлористый (метиленхлорид), х.ч., ГОСТ 19433-88.

Флоризил для колоночной хроматографии, зернение 60/100 меш, фирмы Флюка.

2.2.2 Приборы, аппаратура, посуда.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73, или аналогичный.

Баня водяная, ТУ 46-22-603-75.

Банки с крышками для экстракции на 250 мл, полипропилен, кат. N 3120-0250, NALGENE.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е, или аналогичные.

Воронки делительные на 250 мл, ГОСТ 23336-82.

Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Испаритель ротационный, вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный.

Колбы мерные на 10, 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колонки пластиковые для адсорбционной хроматографии длиной 15 см, диаметр 1,5 см.

Колонка газохроматографическая капиллярная кварцевая НР-5 длиной 15 м с внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Концентраторы грушевидные на 100 и 250 мл НШ29 КГУ-100 (250), ГОСТ 10394-72.

Микрошприц на 10 мкл, ТУ Е-2.833.0.24.

Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.

Пипетки мерные на 1,0, 2,0 и 5,0 мл, ГОСТ 20292-74.

Стаканы химические на 100 мл, ГОСТ 25336-82Е.

Фильтры бумажные "Красная лента", ТУ 6-09-1678-86.

Хроматограф газовый "Кристалл 2000 М" с термоионным детектором с -13 пределом детектирования по азоту в азобензоле - 5 х 10 .

Цилиндры мерные емкостью 25, 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.

2.3. Подготовка к определению

2.3.1. Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматографии.

Колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе гелия при температуре на 20 °С ниже предельного значения для выбранной неподвижной фазы в течение 8 - 10 часов.

2.3.2 Приготовление стандартных растворов.

Взвешивают 50 мг Диазинона в мерной колбе на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор N 1, концентрация 1 мг/мл). Стандартный раствор N 1 можно хранить в холодильнике в течение 6 месяцев.

Методом последовательного разбавления готовят стандартные растворы Диазинона в ацетоне с концентрацией 0,025; 0,05; 0,1; 0,25; 0,5 мкг/мл для построения калибровочного графика и внесения в контрольный образец.

Подобным образом готовят раствор Диазинона в гексане с концентрацией 1,0 мкг/мл для проверки хроматографического поведения аналитического стандарта на колонке с Флоризилом.

2.3.3 Подготовка колонки с Флоризилом.

В пластмассовую колонку длиной 15 см, диаметром 1,5 см помещают на дно чистую стекловату и заполняют колонку 5 г Флоризила 60/100 меш, уплотняя его путем вибрации колонки. На слой Флоризила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см. За день до определения Флоризил в колонке промывают последовательно 20 мл ацетона и 10 мл гексана.

2.3.4 Проверка хроматографического поведения Диазинона на колонке.

В подготовленную колонку вносят 1 мл стандартного раствора Диазинона в гексане с концентрацией 1,0 мкг/мл (раздел 2.3.2) и 9 мл гексана. Колонку промывают последовательно 10 мл гексана и 10 мл смеси гексан: ацетон - 9:1. Смывы отбрасывают. После этого пропускают через колонку 3 - 4 порции смеси гексан:ацетон (1:1) по 5 мл каждая, собирая их в отдельные концентраторы. Собранные фракции выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы. Фракции, содержащие Диазинон, объединяют, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смыва с колонки и необходимый для очистки объем элюата.

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы биологического материала хранят в запаянных пластиковых пакетах в замороженном виде в холодильнике. Перед анализом пробы размораживают и измельчают на мясорубке.

2.5. Описание определения

2.5.1 Мышечная ткань, печень, почки.

Навеску измельченного материала - 10 г помещают в пластиковую банку с крышкой емкостью 250 мл и заливают 50 мл ацетонитрила. Встряхивают 10 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку емкостью 250 мл. Экстракцию повторяют еще раз, заливая пробу 50 мл ацетонитрила и встряхивая 10 минут. Экстракт отфильтровывают в ту же делительную воронку.

К фильтрату в воронке добавляют 20 мл гексана <*> и встряхивают содержимое воронки в течение 1 минуты. После разделения фаз нижнюю ацетонитрильную фазу сливают в стаканчик, гексан отбрасывают. Переносят экстракт из стаканчика в делительную воронку и промывают его еще раз 20 мл гексана. Ацетонитрильную фазу сливают в концентратор емкостью 250 мл через безводный сульфат натрия и упаривают до объема 5 - 10 мл при температуре не выше 35 °С.

    Остаток  в  концентраторе  разводят 80 мл 2,5% водного раствора Na SO ,
                                                                      2  4
обмывают  стенки  концентратора еще 20 мл этого же раствора и переносят его
содержимое  в  делительную воронку емкостью 250 мл. Добавляют в делительную
воронку  30 мл метиленхлорида и экстрагируют Диазинон, встряхивая воронку 1

• 2 минуты. После разделения слоев нижний слой метиленхлорида собирают в

чистый  концентратор,  пропуская через безводный сульфат натрия. Экстракцию
повторяют  еще  два  раза,  используя  каждый  раз  30 мл  метиленхлорида и
собирая  его  в  тот  же концентратор. Объединенные экстракты выпаривают на
ротационном  вакуумном  испарителе  досуха  при  температуре не выше 35 °С.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 10 мл гексана и проводят очистку пробы на колонке с Флоризилом.

2.5.1.1 Очистка на колонках с Флоризилом.

В подготовленную (как указано в разделе 2.3.3) колонку с Флоризилом переносят содержимое концентратора. Концентратор ополаскивают 10 мл гексана и пропускают гексан через колонку. Колонку промывают 10 мл смеси гексан:ацетон — 9:1. Смывы отбрасывают. Диазинон элюируют 15 мл смеси гексан:ацетон — 1:1, смыв собирают в чистый концентратор и выпаривают его содержимое досуха на ротационном вакуумном испарителе. Сухой остаток разводят в 2 мл ацетона (пробы печени — в 4 мл) и вводят в хроматограф 1 мкл пробы.

2.5.2 Жир.

Навеску жира 5 г помещают в пластиковую банку с крышкой емкостью 250 мл и заливают 50 мл гексана <*>. Встряхивают 10 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в концентратор емкостью 250 мл. Экстракцию повторяют еще раз, заливая пробу 50 мл гексана и встряхивая 10 минут. Экстракт отфильтровывают в тот же концентратор. Объединенный фильтрат упаривают до объема 5 — 10 мл при температуре не выше 35 °С.

Остаток пробы из концентратора помещают в делительную воронку емкостью 250 мл. Концентратор ополаскивают 50 мл ацетонитрила <*> и переносят ацетонитрил в делительную воронку. Проводят переэкстракцию Диазинона из гексана в ацетонитрил, встряхивая делительную воронку в течение 2 минут. После разделения слоев нижний слой ацетонитрила сливают в концентратор через безводный сульфат натрия. Повторяют экстракцию еще два раза, используя каждый раз по 50 мл ацетонитрила. Экстракты собирают в тот же концентратор. Объединенный экстракт упаривают до объема 5 — 10 мл при температуре не выше 35 °С.

<*> В анализе используют гексан, насыщенный ацетонитрилом, и ацетонитрил, насыщенный гексаном.

    Остаток  в концентраторе разводят 100 мл 2,5% раствора Na SO , обмывают
                                                             2  4
стенки  концентратора  и  переносят  его  содержимое  в делительную воронку
емкостью  250  мл.  Добавляют  в  делительную воронку 30 мл метиленхлорида,

экстрагируют Диазинон, как указано в разделе 2.5.1, и очищают пробу на колонке с Флоризилом, как указано в разделе 2.5.1.1.

Очищенную пробу растворяют в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы.

2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов

2.6.1 Условия хроматографирования.

Хроматограф «Кристалл 2000 м» с термоионным детектором (ТИД) с -13 пределом детектирования по азоту в азобензоле 5 х 10 г/куб. см.

Колонка капиллярная кварцевая НР-5 длиной 15 м с внутренним диаметром 0,32 мм; толщина пленки 0,25 мкм.

Режим работы.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура — 150 °С, выдержка 2 минуты; нагрев колонки по 25 градусов в минуту до температуры 230 °С, выдержка 5 минут; нагрев колонки по 25 градусов в минуту до температуры 260 °С.

Газовый режим — Splitless.

Газ-носитель — гелий (Г1). Тип регулятора расхода гелия — РРГ 11, линейная скорость — 20 см/сек., давление на входе 27,29 кПа.

Газ 2 (Г2) — гелий (продувка испарителя), расход 1,0 мл/мин., сброс 1:50, начало сброса — 5 сек., длительность сброса — 2 мин.

Газ 3 (Г3) — азот (поддув в детектор), расход во время анализа — 20 мл/мин.

Продувка детектора азотом после анализа при температуре 260 °С в течение 2 минут — 65 мл/мин.

Абсолютное время удерживания Диазинона — 4 мин. 45 сек. — 4 мин. 47 сек.

Температура испарителя — 250 °С, детектора — 350 °С.

Расход водорода — 16 мл/мин.; расход воздуха — 180 мл/мин.

Объем вводимой пробы — 1 мкл.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,025 — 0,5 нг.

2.6.2 Обработка результатов анализов.

Содержание Диазинона в пробах рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                            S  х А х V
                             1

Х = ------------ х Р, S х m х 100 0

где:
Х - содержание Диазинона в пробе, мг/кг;
S  - площадь пика образца, мВ;
 1
S  - площадь пика стандарта, мВ;
 0
А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования (мл);
m - масса или объем анализируемого образца, г или мл.
Р - содержание Диазинона в аналитическом стандарте.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать требования безопасности при работе в химических лабораториях в соответствии с «Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемиологического режима и личной гигиены при работе в лечебных и санитарно-эпидемиологических учреждениях системы МЗ СССР» (N 2455-81 от 20.10.81), а также требования, изложенные в документации на приборы.

4. Разработчики

Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов».