МУК 4.1.2014-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств Диметенамида в воде, почве, зерне, масле и зеленой массе кукурузы, семенах, жмыхе, масле, зеленой массе подсолнечника, семенах и масле сои, корнеплодах и ботве кормовой, сахарной и столовой свеклы методом газожидкостной хроматографии

(утв. Роспотребнадзором 17.10.2005)

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДИМЕТЕНАМИДА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ, МАСЛЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ КУКУРУЗЫ, СЕМЕНАХ, ЖМЫХЕ, МАСЛЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ ПОДСОЛНЕЧНИКА, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ СОИ, КОРНЕПЛОДАХ И БОТВЕ КОРМОВОЙ, САХАРНОЙ И СТОЛОВОЙ СВЕКЛЫ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1. Подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в воде, почве, зерне, масле и зеленой массе кукурузы, семенах, жмыхе, масле, зеленой массе подсолнечника, семенах и масле сои, корнеплодах и ботве кормовой, сахарной и столовой свеклы массовых концентраций диметенамида в диапазонах 0,001 — 0,02 мг/куб. дм (вода); 0,02 — 0,2 мг/кг (почва, зерно и зеленая масса кукурузы, растительные масла); 0,01 — 0,2 мг/кг (семена подсолнечника и сои, жмых и зеленая масса подсолнечника, корнеплоды и ботва свеклы).

Диметенамид-Р — действующее вещество препаратов ФРОНТЬЕР ОПТИМА. КЭ (720 г/л) и ФРОНТЬЕР Х2, КЭ (720 г/л), фирма-производитель «БАСФ» (Германия).

(RS)-2-хлор-N-(2,4-диметил-3-тиенил)-N-(2-метокси-1-метилэтил)ацетамид (IUPAC).

Диметенамид-Р — S-изомер диметенамида рацемического.

Структурная формула (не приводится).

    C  H  ClNO S.
     12 18    2

Мол. масса 275.8.

Вязкая желто-коричневая жидкость со слабым ароматическим запахом. Плотность 1,187 (при 25 °С). Температура кипения 127 °С (при 26,7 Па). Давление паров при 25 °С: 36,7 мПа. Растворимость в органических растворителях (при 25 °С): гептан — 282 г/кг; изооктан — 220 г/кг, диэтиловый эфир, керосин, этанол — более 50%. Растворимость в воде — 1,2 г/куб. дм.

Диметенамид стабилен при хранении при температуре 54 °С не менее 4-х недель, при 70 °С — не менее 2-х недель. В водном растворе при рН 5 — 9 (25 °С) стабилен в течение 30-ти дней.

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — 429 мг/кг (самцы), 531 50 мг/кг (самки); острая дермальная токсичность (LD ) для кроликов > 2000 50 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LK ) для крыс > 2200 мг/куб. м. 50

Область применения препарата

Диметенамид — довсходовый гербицид класса хлорацетамида, используемый для борьбы с однолетними злаковыми и некоторыми двудольными сорными растениями.

Препараты Фронтьер Оптима, КЭ (720 г/л) и Фронтьер Х2, КЭ (720 г/л) рекомендуются к применению на посевах свеклы сахарной, столовой, кормовой, кукурузы, сои, подсолнечника при однократной обработке почвы с нормой расхода 0,8 — 1,4 л/га.

Гигиенические нормативы: ПДК в воде водоемов — 0,1 мг/куб. дм; ОДК в почве — 0,1 мг/кг; МДУ в кукурузе, сое (семена, масло), свекле (сахарная, столовая, кормовая) — 0,02 мг/кг; подсолнечнике (семена, масло) — 0,04 мг/кг.

1. Метрологические характеристики метода

Метрологические характеристики метода представлены в таблице.

МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95
	Предел обнаружения, мг/кг, мг/куб. дм	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг, мг/куб. дм	Среднее значение определения, %	Доверительный интервал среднего результата, +/- %
Вода	0,001	0,001 — 0,02	98	11
Почва	0,02	0,02 — 0,2	96	12
Зерно кукурузы	0,02	0,02 — 0,2	95	13
Зеленая масса кукурузы	0,02	0,02 — 0,2	90	8
Семена подсолнечника	0,01	0,01 — 0,2	86	11
Жмых подсолнечника	0,01	0,01 — 0,2	88	10
Зеленая масса подсолнечника (корзинки, стебли)	0,01	0,01 — 0,2	89	8
Семена сои	0,01	0,01 — 0,2	85	12
Масло растительное (кукурузное, подсолнечное, соевое)	0,02	0,02 — 0,2	84	13
Корнеплоды свеклы (сахарной, столовой, кормовой)	0,01	0,01 — 0,2	88	11
Ботва свеклы	0,01	0,01 — 0,2	87	9

2. Метод измерений

Методика основана на определении вещества с помощью газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов (ДПР) или термоионным детектором (ТИД) после экстракции из анализируемой пробы воды гептаном, растительного материала ацетоном или смесью ацетон — вода, растительного масла и семян масличных — ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами (зерно и зеленая масса кукурузы, ботва и корнеплоды свеклы) и на колонке с силикагелем (зеленая масса, семена и жмых подсолнечника, семена сои, растительное масло) или оксидом алюминия (почва, зерно, зеленая масса кукурузы). Идентификацию действующего вещества осуществляют прямым хроматографированием очищенного экстракта или после его дериватизации с образованием трифторуксусного производного.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы: 0,2 — 0,5 нг (в зависимости от способа детектирования).

В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в технологии выращивания кукурузы, подсолнечника, сои, сахарной, столовой и кормовой свеклы.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Газовый хроматограф серии "Цвет", снабженный детектором    Номер Госреестра
постоянной скорости рекомбинации ионов с пределом          6904-97

                            -14

детектирования по Линдану 4 х 10    г/куб. см
Газовый хроматограф "Кристалл-2000М", снабженный           Номер Госреестра
термоионным детектором с пределом детектирования по        14516-95

                              -13

азоту в азобензоле не более 5 х 10 г/с

Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104

Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим ГОСТ 7328 пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г

Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2 ГОСТ 1770

Меры массы ГОСТ 7328

Микрошприц МШ-10, МШ-1 ГОСТ 20292

Пипетки градуированные 2-го класса точности ГОСТ 29227 вместимостью 0,1; 0,2; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 куб. см

Пробирки градуированные вместимостью 10 куб. см ГОСТ 1770

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, ГОСТ 1770 50, 100 и 200 куб. см

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Диметенамид с содержанием действующего вещества 99,9% (фирма «БАСФ»)

Алюминий оксид, активированный, нейтральный для колоночной хроматографии, 50 — 200 мкм («Акрос Органикс», Бельгия)

Ацетон, чда ГОСТ 2603

Ацетонитрил для хроматографии, хч ТУ 6-09-4326-76

Бензол, чда ГОСТ 5955

Вода бидистиллированная, деионизованная или перегнанная над KMnO 4

н-Гексан, хч                                               ТУ-6-09-3375
Гептан                                                     ТУ 6-09-4520-77

Метилен хлористый (дихлорметан), хч ГОСТ 12794

Натрий сернокислый, безводный, хч, предварительно ГОСТ 4166 прокаленный в муфельной печи при 500 °С в течение 2-х часов

Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233

Силикагель Л 100/250 меш

Трифторуксусный ангидрид, purum; >= 98,0% (GC), Fluka

Этиловый эфир уксусной кислоты, ч ГОСТ 22300

Эфир диэтиловый ГОСТ 6265

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Азот газообразный из баллона, осч

Аквадистиллятор ГОСТ 22340

Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с                       ТУ 64-1-2851-78
Баня водяная                                               ТУ 61-1-2850-76
Бумажные фильтры "красная лента" обеззоленные              ТУ 6-09-2678-77

Воронка Бюхнера ГОСТ 25336

Воронки делительные вместимостью 250 и 500 куб. см ГОСТ 25336

Воронки конусные диаметром 30 — 37 и 100 — 120 мм ГОСТ 25336

Гомогенизатор

Груша резиновая

Колба Бунзена ГОСТ 25336

Колбы плоскодонные вместимостью 100 и 250 куб. см ГОСТ 9737

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10, 100 и ГОСТ 9737 250 куб. см

Колонка хроматографическая высотой 400 мм, внутренним диаметром 15 мм

Колонка стеклянная для газового хроматографа длиной 1, 1,5 и 2 м, внутренним диаметром 3,5 и 3 мм

Мельница электрическая лабораторная                        ТУ 46-22-236-79
Насос водоструйный                                         ГОСТ 10696

Печь муфельная

Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 50

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный ТУ 25-11-917-74 вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария

Сито

Скальпель или нож

Стаканы химические вместимостью 100 и 400 куб. см ГОСТ 25336

Стекловата

Стеклянные палочки

Установка для перегонки растворителей

Холодильник ХПТ-1-400-14-32 ГОСТ 25336-82

Хроматон N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм) с 5% SE-30

Хроматон-супер (0,16 — 0,20 мм) с 5% SE-30

Хроматон N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм) с 5% OV-17

Хромосорб-750 (0,16 — 0,20 мм) с 3% OV-17

Хромосорб W-HP (0,16 — 0,20 мм) с 3% OV-101

Шкаф сушильный ТУ 64-1-1411-76Е

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
• выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов и растворов внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка колонок с оксидом алюминия и силикагелем для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1 Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над небольшим количеством KMnO и прокаленным 4 карбонатом калия.

7.1.2 Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.3 Очистка этилацетата

Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.

7.1.4 Очистка н-гексана и гептана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.2. Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (Хроматон N-AW-DMCS с 5% SE-30 или OV-17; Хроматон-супер с 5% SE-30; Хромосорб-750 с 3% OV-17; Хромосорб W-HP с 3% OV-101) засыпают в стеклянную колонку, предварительно промытую последовательно этиловым спиртом, ацетоном и гексаном, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота в режиме программирования температуры от 50 до 270 °С со скоростью нагрева 1 град./мин., затем в изотермическом режиме при температуре 270 °С в течение 8 — 10 часов.

7.3. Приготовление смеси растворителей для экстракции

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 800 куб. см ацетона и 200 куб. см дистиллированной воды, тщательно перемешивают.

7.4. Приготовление градуировочных растворов

7.4.1 Исходный раствор диметенамида для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г диметенамида, растворяют в 50 — 70 куб. см гексана, доводят гексаном до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 6-ти месяцев.

Растворы № 1 — 7 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.4.2 Раствор № 1 диметенамида для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10,0 куб. см исходного раствора с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.4.1), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают.

Раствор хранится в холодильнике в течение 6-ти месяцев.

7.4.3. Рабочие растворы № 2 — 7 диметенамида для градуировки (концентрация 0,1 — 2,5 мкг/куб. см)

В 6 мерных колб вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,0; 2,5; 5,0; 10,0 и 25,0 куб. см раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.4.2), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 7 с концентрацией диметенамида 0,1; 0,2; 0,25; 0,5; 1,0 и 2,5 мкг/куб. см соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике не более 2-х недель.

7.5. Приготовление растворов внесения для оценки полноты извлечения диметенамида из исследуемых образцов растительного материала

7.5.1 Исходный раствор диметенамида (концентрация 100 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помешают 0,01 г диметенамида, растворяют в 50 — 70 куб. см ацетона, доводят им же до метки, тщательно перемешивают.

7.5.2 Основной раствор диметенамида для внесения (концентрация 10 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10,0 куб. см исходного раствора с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.5.1), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают.

Раствор хранится в холодильнике не более 2-х недель.

Для внесения в образцы растительных масел используют раствор № 1 диметенамида в гексане (для градуировки), приготовленный по п. 7.4.2.

7.6. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации диметенамида в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки № 2, 3, 5, 6 или 4 — 7.

7.6.1 Определение методом прямого хроматографирования

В испаритель хроматографа вводят по 2 — 4 куб. мм каждого градуировочного раствора № 2, 3, 5, 6 и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.7.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

7.6.2 Определение с помощью трифторуксусного производного

В 4 круглодонные колбы вместимостью 10 куб. см помещают по 1 куб. см каждого градуировочного раствора № 4 — 7, растворитель упаривают или отдувают потоком теплого воздуха. К сухому остатку в колбах приливают 1 куб. см бензола и 1 куб. см трифторуксусного ангидрида. Колбы подсоединяют к обратным холодильникам и выдерживают при 60 °С в течение 1,5 часов. После охлаждения растворитель отгоняют досуха, остаток растворяют в 1 куб. см гексана.

В испаритель хроматографа вводят по 2 куб. мм каждого градуировочного раствора трифторуксусного производного, соответствующего концентрации диметенамида 0,25; 0,5; 1,0 и 2,5 мкг/куб. см, и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.7.1. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

7.7. Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта

Оксид алюминия предварительно высушивают в течение суток в сушильном шкафу при 110 °С. После охлаждения добавляют по весу 4% дистиллированной воды и встряхивают в закрытом сосуде на механическом встряхивателе в течение часа.

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 400 мм, внутренним диаметром 15 мм уплотняют тампоном из стекловаты и при постукивании по стенкам колонки стеклянной палочкой наполняют ее на высоту 130 мм подготовленным оксидом алюминия, сверху сорбента помещают слой безводного сульфата натрия высотой 20 мм. После этого колонка готова к работе.

7.8. Проверка хроматографического поведения диметенамида на колонке с оксидом алюминия

В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,5 куб. см раствора № 1 для градуировки с концентрацией диметенамида 10 мкг/куб. см (п. 7.4.1), растворитель отдувают потоком теплого воздуха, к остатку добавляют 10 куб. см ацетона, перемешивают и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Промывают колонку 120 куб. см этилацетата со скоростью 1 — 2 капли в сек. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см гексана, анализируют содержание диметенамида по п. 9.7.1.

Фракции, содержащие диметенамид, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.

7.9. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 400 мм, внутренним диаметром 15 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию: 6 г силикагеля в 20 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 20 мм. После этого колонка готова к работе.

7.10. Проверка хроматографического поведения диметенамида на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,5 куб. см раствора № 1 для градуировки с концентрацией диметенамида 10 мкг/куб. см (п. 7.4.1), растворитель отдувают потоком теплого воздуха, к остатку добавляют 5 куб. см смеси гексан — диэтиловый эфир (1:1 по объему), перемешивают и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.8. Промывают колонку 70 куб. см смеси гексан — диэтиловый эфир (1:1 по объему) со скоростью 1 — 2 капли в сек. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см гексана, анализируют содержание диметенамида по п. 9.7.2.

Фракции, содержащие диметенамид, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.

Примечание: Проверку хроматографического поведения диметенамида следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТами Р 51592-2000, 1743.01-83, 26950-89, 13586.3-83, Р 50436-92, 10852-86 и 17421-82.

Отобранные пробы воды анализируют в день отбора или хранят при 4 °С в течение 30-ти дней.

Отобранные пробы зерна кукурузы и зеленой массы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 10-ти дней. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °С.

Пробы семян сои и подсолнечника подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре не более 3-х месяцев.

Пробы масла (помещенные в стеклянные флаконы) хранят в холодильнике в течение месяца.

Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение 3-х месяцев.

Перед анализом образцы зерна, семян и зеленой массы, жмыха измельчают, воду фильтруют через неплотный бумажный фильтр, сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

9. Выполнение определения

9.1. Вода

Образец анализируемой воды объемом 500 куб. см помещают в делительную воронку вместимостью 1000 куб. см, добавляют 20 куб. см гептана, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний органический слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см, фильтруя его через 2-х см слой безводного сульфата натрия, помещенный в конусную химическую воронку диаметром 60 мм, снабженную бумажным фильтром «красная лента». Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды порциями гептана по 20 куб. см. Отстоявшийся слой гептана (верхняя фаза) фильтруют в колбу с ранее полученным экстрактом.

Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С, подвергают очистке в соответствии с п. 9.2.2.

9.2. Почва, зерно и зеленая масса кукурузы

9.2.1 Экстракция

Образец почвы, измельченного зерна или зеленой массы кукурузы массой 25 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, вносят 150 куб. см ацетона и помещают на встряхиватель на 1 час. Отстоявшийся раствор осторожно переливают в круглодонную колбу вместимостью 500 куб. см, фильтруя его через складчатый фильтр «красная лента». Операцию экстракции повторяют еще дважды порциями ацетона по 50 куб. см, встряхивая каждый раз по 30 мин. Отстоявшуюся надосадочную жидкость также фильтруют в круглодонную колбу, объединяя с первым экстрактом. Объединенный экстракт упаривают до объема 10 — 15 куб. см и подвергают очистке по п. 9.2.2.

9.2.2 Очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия

Сконцентрированный ацетоновый экстракт, полученный по п. 9.1 и 9.2.1, наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Колбу обмывают трижды порциями этилацетата по 5 куб. см, которые также наносят на колонку. Диметенамид элюируют с колонки 100 куб. см этилацетата (3:2 по объему) со скоростью 1 — 2 капли в сек., собирая элюат в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 45 °С, остаток в колбе дериватизируют по п. 9.2.3.

9.2.3 Дериватизация

К сухому остатку в колбе приливают 1 куб. см бензола и 1 куб. см трифторуксусного ангидрида. Колбы подсоединяют к обратным холодильникам и выдерживают при 60 °С в течение 1,5 часов. После охлаждения растворитель отгоняют досуха, остаток растворяют в 2 куб. см гексана и анализируют содержание диметенамида по п. 9.7.1.

9.3. Зеленая масса (корзинки, стебли) подсолнечника

9.3.1 Экстракция

Образец измельченного растительного материала массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, вносят 100 куб. см смеси ацетон — вода (80:20 по объему) и помещают на встряхиватель на 30 мин. Отстоявшийся раствор осторожно переливают в делительную воронку вместимостью 500 куб. см, фильтруя его через складчатый фильтр «красная лента». Операцию экстракции повторяют еще дважды порциями 80%-ного ацетона по 50 куб. см, встряхивая каждый раз по 30 мин. Отстоявшуюся надосадочную жидкость также фильтруют в делительную воронку, объединяя с первым экстрактом. Далее объединенный экстракт подвергают очистке по п. 9.3.2.

9.3.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К экстракту, полученному по п. 9.3.1 и помещенному в делительную воронку, приливают 50 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия, тщательно перемешивают. Вносят в делительную воронку 30 куб. см гексана, интенсивно ее встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см.

Водную фазу вновь переносят в делительную воронку. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 30 куб. см гексана. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха при температуре 40 °С и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.3.

9.3.3 Очистка экстракта на колонке с силикагелем

Остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.3.2, растворяют в 5-ти куб. см смеси гексан — диэтиловый эфир (1:1 по объему) и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.9. Колбу обмывают 3-мя куб. см смеси гексан — диэтиловый эфир (1:1), которые также наносят на колонку. Промывают колонку 50 куб. см смеси гексан — диэтиловый эфир. Первые 20 куб. см элюата отбрасывают, последующие 30 куб. см элюата собирают в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °С, остаток в колбе растворяют 2-х куб. см гексана и анализируют содержание диметенамида по п. 9.7.2.1.

9.4. Семена и жмых подсолнечника, семена сои

9.4.1 Экстракция

Образец измельченного растительного материала массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, вносят 100 куб. см ацетонитрила и помещают на встряхиватель на 1 час. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу вместимостью 250 куб. см. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см ацетонитрила и встряхивая каждый раз по 15 минут.

Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в делительную воронку вместимостью 500 куб. см, добавляют 35 куб. см гексана, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническую колбу. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильную фазу вновь переносят в делительную воронку и повторяют операцию промывки, используя 50 куб. см гексана. Ацетонитрильный раствор переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см, упаривают досуха при температуре 40 °С и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.3.

9.5. Растительное масло (кукурузы, сои, подсолнечника)

9.5.1 Экстракция

Образец масла массой 10 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, растворяют в 100 куб. см гексана, выдерживают 20 мин., затем переносят в делительную воронку вместимостью 500 куб. см, добавляют 100 куб. см ацетонитрила, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническую колбу. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильную фазу вновь переносят в делительную воронку, вносят 50 куб. см гексана, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническую колбу. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильную фазу вновь переносят в делительную воронку и операцию промывки повторяют, используя 50 куб. см гексана. Ацетонитрильный раствор переносят в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см, упаривают досуха при температуре 40 °С и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.3.

9.6. Корнеплоды и ботва свеклы

Образец измельченного растительного материала массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, вносят 80 куб. см смеси ацетон — вода (2:1 по объему) и помещают на встряхиватель на 1 час. Отстоявшийся раствор осторожно переливают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, фильтруя его через складчатый фильтр «красная лента». Операцию экстракции повторяют еще дважды порциями по 50 куб. см смеси ацетон — вода (2:1 по объему), встряхивая каждый раз по 15 мин. Отстоявшуюся надосадочную жидкость также фильтруют в коническую колбу, объединяя с первым экстрактом. Объединенный экстракт помещают в морозильную камеру на 1 час. Выпавший осадок отфильтровывают через фильтр «красная лента», раствор переносят в делительную воронку вместимостью 500 куб. см. Вносят в делительную воронку 60 куб. см гексана, интенсивно встряхивают ее в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний гексановый слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см.

Водно-ацетоновую фазу вновь переносят в делительную воронку. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 60 куб. см гексана. Объединенную гексановую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха при температуре 40 — 45 °С, остаток в колбе растворяют 2-х куб. см гексана и анализируют содержание диметенамида по п. 9.7.2.2.

9.7. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

9.7.1 Условия хроматографирования трифторацетильного производного диметенамида

9.7.1.1 Газовый хроматограф «Цвет-500», снабженный детектором постоянной скорости рекомбинации ионов

Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная Хромосорб-750 (0,16 — 0,20 мм) с 3% OV-17

Температура термостата колонки — 180 °С

детектора — 300 °С

испарителя — 200 °С

Скорость газа-носителя (азота) — 60 +/- 1 куб. см/мин. 10

Рабочая шкала электрометра — 64 х 10 Ом

Объем вводимой пробы — 2 куб. мм

Ориентировочное время удерживания производного диметенамида: 7 мин. 28 сек.

9.7.1.2 Газовый хроматограф «Цвет-500», снабженный детектором постоянной скорости рекомбинации ионов

Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная Хроматон N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм) с 5% SE-30

Температура термостата колонки — 220 °С

детектора — 300 °С

испарителя — 230 °С

Скорость газа-носителя (азота) — 60 +/- 1 куб. см/мин. 10

Рабочая шкала электрометра — 64 х 10 Ом

Объем вводимой пробы — 2 куб. мм

Ориентировочное время удерживания производного диметенамида: 9 мин. 12 сек.

Линейный диапазон детектирования: 0,5 — 5 нг.

9.7.1.3 Хроматограф газовый «Кристалл 2000 М» с термоионным детектором

Колонка стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная Хромосорб W-HP (0,16 — 0,20 мм) с 3% OV-101

Температура термостата колонки — 200 °С

детектора — 300 °С

испарителя — 200 °С

Скорость газа-носителя (азота) — 30 +/- 1 куб. см/мин.

водорода — 13,8 +/- 1 куб. см/мин.

воздуха — 180 куб. см/мин.

Объем вводимой пробы — 2 куб. мм

Ориентировочное время удерживания трифторуксусного производного диметенамида — 4 мин. 9 сек. — 4 мин. 48 сек.

Линейный диапазон детектирования: 0,5 — 5,0 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор производного с концентрацией диметенамида 2,5 мкг/куб. см, разбавляют гексаном.

9.7.2 Условия прямого хроматографирования

9.7.2.1 Газовый хроматограф «Цвет-500», снабженный детектором постоянной скорости рекомбинации ионов

Колонка стеклянная длиной 1,5 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная Хроматон N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм) с 5% OV-17

Температура термостата колонки — 240 °С

детектора — 300 °С

испарителя — 260 °С

Скорость газа-носителя (азота) — 60 +/- 1 куб. см/мин. 10

Рабочая шкала электрометра — 64 х 10 Ом

Объем вводимой пробы — 2 куб. мм

Ориентировочное время удерживания диметенамида: 2 мин. 50 сек.

Линейный диапазон детектирования: 0,2 — 5 нг.

9.7.2.2 Газовый хроматограф «Цвет-500», снабженный детектором постоянной скорости рекомбинации ионов

Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная Хроматон-супер (0,16 — 0,20 мм) с 5% SE-30

Температура термостата колонки — 160 °С

детектора — 300 °С

испарителя — 200 °С

Скорость газа-носителя (азота) — 45 +/- 1 куб. см/мин. 10

Рабочая шкала электрометра — 128 х 10 Ом

Объем вводимой пробы — 2 - 4 куб. мм

Ориентировочное время удерживания диметенамида: 2 мин. 7 сек.

Линейный диапазон детектирования: 0,4 — 10 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор диметенамида с концентрацией 2,5 мкг/куб. см, разбавляют гексаном.

10. Обработка результатов анализа

Содержание диметенамида в пробе (Х, мг/кг, куб. дм) рассчитывают по формуле:

                              А х Н   х W х V
                                   пр        ст

Х = -----------------,

                                Н   х V   х Р
                                 ст    пр

где:
А - концентрация диметенамида в градуировочном растворе, мкг/куб. см;
Н   - высота (площадь) пика исследуемой пробы;
 пр
Н   - высота (площадь) пика аналитического стандарта;
 ст
V    - объем раствора пробы, введенного в испаритель хроматографа, куб.
 пр

мм; V — объем градуировочного раствора, введенного в испаритель ст хроматографа, куб. мм; W — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см; Р — масса (объем) анализируемого образца, г (куб. см).

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

12. Разработчики

Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана).

---